常用饲用酶制剂检测方法介绍课件
生物药物分析与检验--酶分析法 ppt课件
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酶促反应速度的测定方法
[P]
产
V0
物
浓
度
VX
反应初速度 Vo
提问：为什么反应速度会随 时间减小？ 答案：1.[S]降低；
2.酶受到产物抑制
提问：用哪一个速度来表示
该酶促反应的速度特征呢？
0
初 X产物浓度变化曲线时 间 T 反应
速度表示酶活力。
提问：仅用反应初速度大小对比酶活力行吗？
答案：不行，还与酶的加入量及条件有关。
1 U = 1 umol／min。
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酶的比活力(specific activity)
比活力:每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示， 比活力=活力U／mg蛋白=总活力U/总蛋白mg 有时用每g酶制剂或每m1酶制剂含有多少个活力单位来表示(U／
g或U／ml)。 比活力大小的含义：可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。
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共同点：原理和方法相同，以酶 的专一高效催化某化学反应为基 础，通过测定酶反应的速率或生 成物浓度来检测相应物质的含量。
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第一节 酶活力测定法
一、基本概念 二、酶促反应的条件 三、酶活力的测定方法 四、测定过程中应注意的问题
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一、基本概念
1.酶活力：指酶催化一定化学反应的能力。 2.酶活力的测定：是测定一个被酶所催化的化学反应的速度。 3.酶活力测定的目的：通过酶反应速度的测定，求得酶的浓度或含
2和指示酶反应偶联的定量法以脱氢酶为指示剂1磷酸葡萄糖6磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖变位酶16二磷酸葡萄糖6磷酸葡萄糖nadp6磷酸葡萄糖醛酸nadphh6磷酸葡萄糖脱氢酶d2磷酸甘油酸磷酸烯醇丙酮酸烯醇化酶磷酸烯醇丙酮酸adp丙酮酸激酶丙酮酸atp丙酮酸nadhh乳酸脱氢酶乳酸nad以脱氢酶以外的酶为指示剂d葡萄糖的定量测定葡萄糖葡萄糖醛酸h4氨基安替比林酚醌亚胶色素4h葡萄糖氧化酶过氧化物酶反应速度法是在一定条件下一定ph值和温度测定反应的初速度而反应的初速度与被测物质的浓度成正比关系因此可根据初速度计算被测物质的量也可利用标准品对照法计算被测物质的量
饲料添加剂酶制剂检测方法汇总
饲料酶活性测定方法上海欧耐施生物技术有限公司品控部编制目录附录A 木聚糖酶酶活力活力测定方法 (1)附录B β-葡聚糖酶活力测定方法 (5)附录C甘露聚糖酶酶活力测定方法 (9)附录D 纤维素酶酶活力测定方法 (13)附录E 果胶酶酶活力测定方法 (17)附录F α-淀粉酶酶活力测定方法 (20)附录G 蛋白酶酶活力测定方法 (30)附录H α-半乳糖苷酶酶活力测定方法 (35)附录I 植酸酶酶活力测定方法 (38)附录J 糖化酶酶活力测定方法 (42)附录K 真菌α淀粉酶酶活力测定方法 (44)附录L 脂肪酶酶活力测定方法 (46)附录M 木瓜蛋白酶酶活力测定方法 (49)常用标准溶液的配制和标定 (52)附录A木聚糖酶活力的测定方法（GB/T23874-2009）A1 应用范围本标准规定了用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。
本标准适用于饲料添加剂木聚糖酶产品，最低检出限为10.0U/g。
A2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注册日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注册日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
A3 木聚糖酶活力单位定义在37℃，pH 为5.5 的条件下，每分钟从浓度为5mg/mL 的木聚糖溶液中降解释放1umol 还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。
A4 测定原理木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂发生显色反应。
反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中木聚糖酶的活力。
A5.试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682 中规定的三级水。
饲用酶制剂(Enzyme)
水合非结晶纤维素 Cx1· Cx2 酶
纤维二糖酶 葡萄糖 纤维二糖+葡萄糖
Lactobacillus
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
4）果胶酶 果胶酶可裂解单糖之间的糖苷键，并脱去水分子， 分解包裹在植物表皮的果胶，促使植物组织的分
解，降低肠内容物的黏度。
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
2.蛋白酶 蛋白酶将蛋白质水解成为可被肠道消化吸收 的小分子物质。根据最适pH不同，将其分为酸 性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。由于动
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
1）淀粉酶 包括α和β—淀粉酶、糖化酶以及支 链淀粉酶和异淀粉酶。将淀粉水解为双糖、寡糖 和糊精，只能分解直链淀粉和支链淀粉的直链部 分。将淀粉也水解为双糖、寡和糊精。饲料中添 加多用β—淀粉酶，使用时应加少量的碳酸氢钠 或碳酸钠以中和胃酸，以利于淀粉酶的活化，防 止该酶在胃肠道失活。
几种饲料原料中的抗营养因子或难于消化的成分
江苏农林职业技术学院畜牧兽医系
一、酶的特性
（1）酶的作用对环境条件有特殊的要求，如狭窄的pH 值和温度范围； （2）酶的特异性或专一性； （3）酶的催化性。
底 物 酶
二、酶的种类
1、单一酶制剂
（1）非淀粉多糖酶(NSP酶)
半纤维素酶：（促进生长和提高饲料利用率）
非营养性添加剂（饲用酶制剂）
2）半纤维素酶
包括木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉伯聚糖酶和半乳聚糖
酶等，主要作用是将植物细胞中的半纤维素水解为多种 五碳糖，且降低半纤维素溶于水后的黏度。小麦和黑麦 等谷物中含有阿拉伯糖基木聚糖，可以吸收其自身重量 10倍的水，形成一种非常黏的液体。这种高黏性液体表 现对动物的影响就是减缓生长速度，降低饲料利用效率。
酶活性测定方法及酶学分析类型(精)ppt课件
5、酶活性浓度的计算 • 摩尔消光系数()的定义为在特定条件下，光径为1.00cm时，
通过所含吸光物质的浓度为1.00 mol/L时的吸光度。如用 连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化 (△A/min)，以U/L表示酶活性浓度时，则按下式进行计算：
式中：V—反应体系体积(ml) --摩尔消光系数(cm2·mol-1) v—样本量(ml) L—比色杯光径(cm)
➢缺点：
要求高，要求能够精确地控制温度、pH值和底物浓度等反 应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及自 动生化分析仪都能达到这些要求。
4、连续监测法的种类
• 1.直接连续监测法 要求底物或产物能够直接测定 • 2.间接连续监测法 间接法又分为一步间接法和酶偶联法。
酶偶联法指在原来的反应体系中再加入一些酶试剂，使加 入的酶促反应和被测酶的酶促反应偶联起来。最后的反应 产物可直接监测，进而推测出第一个酶的活性浓度。
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生物化学检验
பைடு நூலகம்
酶活性测定方法及酶学分析类型
酶活性测定方法及酶学分析类型
酶学分析是20世纪70年代发展起来的一类 检测技术，包括酶活性测定和底物浓度测定两 大类型。酶活性的测定方法包括终点法和连续 监测法。
一、酶活性的测定方法
按照对酶 促反应时 间的选择 不同
固定时间法 连续监测法
（二）连续监测法
1、定义：测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。
2、原 理：
该方法每隔一定时间（10s～60s）测定一次底物或产 物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图 ，绘制反应速度曲线。
3、特点：
在方法设计上，选择紫外吸收法或色原显色法 ➢优点:
饲料检测方法 PPT
04 点滴试验和快速试验
点滴试验和快速试验
• 利用饲料成分的化学性质所进行的点滴试验，主要用作定 性分析，以快速判断饲料中是否存在某些特定的化学物质， 如淀粉、尿酶等，这些方法简便易行，在饲料厂和养殖场 均可使用。 • 淀粉检测： ‒ 原理：在少量饲料样品中加入碘—碘化钾溶液，若 有淀粉存在，则呈现深蓝色。 ‒ 例子：鱼粉、肉粉等动物性饲料中不应含淀粉，但 如果变蓝色，说明掺杂有淀粉或植物性成分。
• 尿素检测：
– 原理：尿素在尿素酶作用下生成氨，遇指示剂后变色。 – 操作：少量饲料样品加水搅拌后过滤，尿素溶于水， 滤出后加2～3滴甲基红指示剂，然后加2～3滴尿酶溶 液，若存在尿素则出现深红紫色，无尿素时呈现黄色。 – 例子：蛋白类原料厂商为了牟利，在蛋白饲料中掺入 尿素，在用粗蛋白检测时计入蛋白含量，但其为非蛋 白氮，属于粗蛋白检测方法漏洞，当年三聚氰胺也是 钻这个漏洞。
• 2、容重法：一定体积的饲料其质量也是一定的，这种一 定体积的质量称为体积质量，也称容重。
– 原理：容重法是根据一定体积的饲料原料都有一定的重 量，通过检测样品与标准样品容重的比较，可以初步判 断饲料原料的掺杂和含水量情况。 ‒ 方法：四分法取样倒入量筒至1000毫升刻度处，倒出称 重，重复3次，以 g/L计算取平均值即为该饲料的容重。
物理检测
• 4.水洗法
– 原理同比重法，比较常用。 – 不同的原料在水中的位置、状态不一样进行判断。 – 例子： » 玉米蛋白粉中掺入染色的其他物质：水洗掉色； » 豆粕中掺入泥土、沙土：水洗沉淀 » 麸皮、次粉中掺入滑石粉：水洗沉淀
• 5.硬度测定
– 借助专用仪器来测定颗粒的相对硬度。在测定时，需测定 大量颗粒，以获得有代表性的平均数据。
百度文库-酶制剂检测
酶制剂检测（011发布）酶制剂是指从生物中提取的具有酶特性的一类物质，主要作用是催化食品加工过程中各种化学反应，改进食品加工方法。
酶制剂是指从生物中提取的具有酶特性的一类物质，主要作用是催化食品加工过程中各种化学反应，改进食品加工方法。
中国已批准的有木瓜蛋白酶、α—淀粉酶制剂、精制果胶酶、β—葡萄糖酶等6种。
检测酶制剂产品质量常用的指标一般是酶活性，但也不是唯一的指标。
（0829）【酶制剂检测原理】酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降解，然后测定产物含量（分光光度计）。
标准曲线：通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计算酶活。
【酶制剂检测产品】饲用酶制剂、食品工业酶制剂具体产品：淀粉酶、β－葡聚糖酶、糖化酶、蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、脂肪酶、植酸酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。
【酶制剂检测项目】主要检测项目：酶活性其他常规指标：水分、粒度卫生指标：菌落总数、大肠杆菌、沙门氏【酶制剂检测相关标准】GB25594-2010食品安全国家标准食品工业用酶制剂NY/T722-2003中华人民共和国农业行业标准饲料用酶制剂通则QB1805.2一93中华人民共和国轻工行业标准工业用糖化酶制剂GBT20370-2006生物催化剂酶制剂分类导则GB8275-2009食品添加剂α-淀粉酶制剂GB274-87食品添加剂固定化葡萄糖异构酶制剂GB8276-2006食品添加剂糖化酶制剂QB1502-92食品添加剂果胶酶制剂GB20713-2006食品添加剂a-乙酰乳酸脱羧酶制剂QB1806一1993洗涤剂用碱性蛋白酶制剂NY/T722-2003饲料用酶制剂通则QB1805.2一93工业用糖化酶制剂QB1805.3-93工业用蛋白酶制剂QB2525一2001食品添加剂α-葡萄糖转苷酶QB/T1804一1993工业酶制剂通用检验规则和标志、包装、运输、贮存QB2526一2001食品添加剂真菌α-淀粉酶QB2583-2003纤维素酶制剂QB/T2306一1997耐高温α一淀粉酶制剂DB33/T459—2003饲料添加剂饲料用复合酶制剂QB/T1803一1993工业酶制剂通用试验方法GB/T18634一2002饲用植酸酶活性的测定分光光度法GBT5522-2008粮油检验粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定GBT5523-2008粮食、油料的脂肪酶活动度的测定GBT5521-2008谷物及其制品中α-淀粉酶活性的测定比色法GBT21498－2008大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定GB-T8622-1988大豆制品中尿素酶活性测定方法GBT5009.186-2003乳酸菌饮料中脲酶的定性测定GBT5413.31-1997婴幼儿配方食品和乳粉脲酶的定性检验GBT5009.183-2003植物蛋白饮料中脲酶的定性测定GBT17811-2008动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法GB05009-171保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性测定GB/T5521-89谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定比色法GB/T9826-88小麦粉破损淀粉测定法α-淀粉酶法GB/T18932.16-2003蜂蜜中淀粉酶值的测定方法分光光度法GB/T22252-2008保健食品中辅酶Q10的测定NY/T911-2004饲料添加剂beta-葡聚糖酶活力的测定分光光度法NY/T912-2004饲料添加剂纤维素酶活力的测定分光光度法SB/T10317-1999蛋白酶活力测定法SN/T0800.3-1999进出口粮食、饲料粗蛋白质检验方法SN/T0800.4-1999进出口粮食、饲料尿素酶活性测定方法CNCA∕CTS0016-2008调味品、发酵制品生产企业要求WST66-1996全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法WST67-1996全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法【检测流程】科标生物检测中心检测流程：1.咨询---申请人提供产品资料图片及描述。
饲料用酶PPT课件
Alkaline phosphatase domain
Calcium binding
• 磷酸酶结构域，植酸酶结构域，碱性磷酸酶结构域，和钙离子结合域
• 完整的蛋白和单独的植酸酶结构域都能有效的水解植酸
• 完整蛋白的比活性高于单个植酸酶结构域。作用机制还需要进一步的
研究。
.
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综合性质优良的植酸酶 Y4
❖ 目前b-葡聚糖酶、植酸酶、木聚糖酶等多个 酶种已得到了一定程度的应用
❖ 但与别的饲料添加剂相比, 饲料酶的应用还 处于婴儿期,. 全球只有不足30%饲料在应用5
原因
一、酶的性质不能满足要求
饲料用酶需同时具备以下优良性质:
❖ 热稳定性好而同时在常温下又具有高
活性
❖ 最适pH在酸性同时在整个酸性和中性
– 具有特殊性质的酶:
如低温酶、高温酶、高比活性酶、强酸性酶、强 碱性酶、抗蛋白酶降解的酶等
.
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雪莲根部土壤低温脂肪酶基因片段进化树图谱
● HSL家族脂 肪酶作为参考 序列
进化树显示为五个独立分开的进化簇，说明冰川土壤中的脂肪
酶基因序列呈现出多样. 性的特点
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Diversity of BPP gene fragments from grass carp digestive tracts
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•F10
冰川土样中第10族木 聚糖酶多样性分析
•F37
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•0.02
结构具有特点的植酸酶基因
• 类似于操纵子的Erwinia herbicola E3植酸酶 基因结构
• IMP基因和HAP基因，这两个基因共用一个启动子，IMP基因的终止密码 子TAA后，紧接着是HAP基因的起始密码子ATG， 在E. herbicola E5也存 在类似的结构
固态发酵饲用植酸酶酶活的快速测定法
固态发酵饲用植酸酶酶活的快速测定法
1. 引言
固态发酵饲用植酸酶酶活是非标准化和相互依存性的特性，广泛用于饲料行业，其功能受外界因素的影响，其不稳定性容易导致各种质量问题。
为了解决这一问题，本文提出一种快速、准确的固态发酵饲料植酸酶酶活测定方法。
2.材料与方法
2.1 试剂与仪器：蔗糖、脱水乳酸钠、无机盐混合物，热沉淀仪、加速器和水分热分析仪。
2.2 取样：采样样品的量必须在25-50g之间，通常在30g左右，应严格按程序要求获取样品。
2.3 准备实验室温度：将实验室温度调节到22-25℃，保持室内的温度稳定，保证测定的结果的可靠性和准确性。
2.4 酶活测定：将取样的样品置于热沉淀仪中，加入蔗糖和脱水乳酸钠，根据酶学原理，用加速器调节温度，在37℃~ 45℃温度下保持稳定温度进行搅拌20min，完成后改变用水温度冷却，把热水温度改变到4℃，再进行搅拌5min，然后用蒸馏水冲洗样品，取最后收集的液体放入无水盐混合物中，再用水分热分析仪测得样品的水分，由此算出酶活的数值。
3.结果
在经过上述步骤后，样品的固态发酵饲料植酸酶酶活结果为：82.4U/g，符合要求。
4.结论
通过本文提出的固态发酵饲料植酸酶酶活快速测定方法，操作简单，结果准确，可以有效解决固态发酵饲料行业中植酸酶酶活测定的问题。