实验报告 植物基因组的提取和检测
实验一植物基因组DNA提取
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μg/mL DNA
思考题:
1. 如何检测和保证DNA的质量？ 2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
植物基因组DNA的提取
பைடு நூலகம் 一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿： 异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离 心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 3. TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），
7.室温下12000rpm离心5 min。
8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充 分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。
9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在 12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul 的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。
10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，
实验六 植物组织基因组DNA的提取与分析(SDS法)
7
五、实验结果与分析
1 2 3 4
将凝胶图片打印出 来，需要说明： 1、小组点样孔号； 2、DNA质量分析。
图1 植物组织基因组DNA提取结果
8
六、注意事项
（1）叶片磨得越细越好。
（2）移液器的使用。
（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此， 除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一 步（研磨）的操作应迅速。
实验六 植物组织中DNA的提取与分析 （SDS法）
温馨提示：实验中-20℃冰浴时，请将样品放
入6309室冰箱冷冻层。
1
一、实验目的
（1）掌握植物组织中DNA提取的原理和方法。 （2）掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳检测方法
2
二、实验原理
高浓度的SDS在EDTA存在下裂解细胞，使染色体离析
，蛋白质变性，释放出核酸，PVP与多酚类物质结合形成复
加入600ul氯仿:异戊醇，、DNA电泳检测
（1）1%琼脂糖凝胶：称取0.3g琼脂糖，加入30mL 1×TAE
缓冲液，在微波炉中加热，反复加热、振荡 2-3 次，使琼 脂糖充分融化。待凝胶冷却至60℃左右，倒入插入梳子的
凝胶板中（避免产生气泡），让凝胶自然凝固。
4
四、实验步骤
1、DNA的提取
称取30mg植物幼苗放入研钵中 加入300ul抽提缓冲液+75ul无水乙醇 +20ulβ巯基乙醇，充分研磨 匀浆液全部转入1.5ml离 心管中 用200ul抽提缓冲液冲洗研钵 ，然后倒入离心管中 12000r/min离心10min 上层水相移入另一新离心管 加600ul预冷的异丙醇，混 匀后-20℃静止30min 12000r/min离心10min 弃上清，沉淀用600ul 70%乙醇漂洗 12000r/min离心10min 弃上清，加20μLTE溶解 沉淀，即得DNA溶液
植物基因组dna的提取实验报告
植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。
植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续的PCR扩增、基因克隆、基因组测序等实验打下基础。
本报告将详细介绍植物基因组DNA提取的实验步骤、方法和结果。
实验材料和仪器。
1. 实验材料，植物叶片样品、液氮、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、等离子体膜、异丙醇沉淀液、乙醇、夹板、离心管、PCR管等。
2. 实验仪器，搅拌器、冰箱、冷冻离心机、显微镜、紫外可见分光光度计等。
实验步骤。
1. 取少量植物叶片样品置于液氮中，研磨成细碎的粉末状。
2. 将研磨好的植物叶片样品加入细胞裂解缓冲液，混合均匀后浸泡于65°C水浴中。
3. 加入蛋白酶K，继续65°C水浴裂解。
4. 加入等体积的异丙醇，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。
5. 加入等体积的等离子体膜，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。
6. 加入等体积的异丙醇沉淀液，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。
7. 将混合液转移至PCR管中，加入等体积的乙醇，轻轻摇晃离心管，使溶液混合均匀后放置于室温。
8. 离心沉淀后，弃上清液，加入70%乙醇洗涤。
9. 将洗涤后的DNA溶解于TE缓冲液中，用紫外可见分光光度计检测DNA浓度和纯度。
实验结果。
通过上述步骤，成功提取了植物基因组DNA，并进行了浓度和纯度的检测。
实验结果显示，提取的DNA浓度为120 ng/μl，纯度（A260/A280）为1.8，符合后续实验的要求。
结论。
本实验通过简单、快速、高效的方法成功提取了植物基因组DNA，为后续的分子生物学实验提供了可靠的基础。
通过本实验，我们对植物基因组DNA的提取过程有了更深入的了解，为今后的科研工作积累了宝贵的经验。
总结。
植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本实验通过简单、快速、高效的方法成功提取了植物基因组DNA，并进行了浓度和纯度的检测。
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物基因组研究已经成为生物学的一个重要分支，特别是在农业生产和生态环境保护方面。
在这个研究领域中，植物DNA提取是基础且必不可少的一步。
本文将详细介绍植物DNA提取实验的过程、步骤和注意事项。
一、实验材料和仪器本实验所需材料和仪器如下：植物样品、溶解缓冲液、提取缓冲液、酒精、异丙醇、洗涤盐溶液、碱性蛋白酶、液氮、离心机、温水浴、电泳仪、比色皿等。
二、实验步骤1. 样品准备首先，选取新鲜植物样品，清洗并研磨成粉末。
为了提高DNA的纯度，应尽量避免样品中的杂质和污染。
2. DNA提取将研磨后的样品加入提取缓冲液中，并加入适量的洗涤盐和碱性蛋白酶，混匀后加入异丙醇，离心分离DNA。
将得到的上清液加入溶解缓冲液中，使用离心机将DNA沉淀至底部。
上清液中的DNA可以通过多次酒精沉淀提高回收率。
3. DNA纯化将得到的DNA溶于TE缓冲液中，使用电泳方法确定DNA含量和质量。
DNA的含量和质量可以通过紫外线吸收光谱测定和琼脂糖凝胶电泳检测。
4. DNA保存DNA保存有两种方式：一种是在-80℃低温下保存，这种方式比较适合需要长期保存的植物DNA；另一种是将DNA溶液保存在干燥的、无污染的环境中，这种方式比较适合短期保存的植物DNA。
三、注意事项1. 在样品制备和提取过程中，应尽量避免污染和杂质的混入，否则会影响DNA的纯度和质量。
2. 在DNA提取和纯化的过程中，应注意洗涤缓冲液、异丙醇等试剂的使用时间和浓度，以免影响DNA的回收率和纯度。
3. 在电泳检测中，应根据植物物种的不同选择适合的电泳参数，以确保DNA检测的准确性和可靠性。
四、结语DNA提取是植物基因组研究的基础，它是了解植物遗传信息和探究植物繁殖机制的必要步骤。
本实验详细介绍了植物DNA提取的方法和注意事项，希望可以为植物基因组研究者提供帮助。
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告实验目的：1、了解植物组织中DNA的提取和鉴定方法；2、学习DNA凝胶电泳和显色的实验操作；3、掌握实验数据处理和分析方法。
实验原理：DNA提取：DNA提取是从生物体组织中分离出DNA分子的过程。
植物组织的DNA提取主要采用CTAB法，其基本步骤如下：1. 将植物样本冷冻在液氮或在-80℃的冰箱中保存。
2. 取出植物组织并磨碎，用盐水淋洗去表面的杂质。
3. 加入抑制物质，如PVP（聚乙烯吡咯烷酮）和β-多聚糖。
4. 加入CTAB提取缓冲液，破解细胞壁并溶解细胞质。
5. 加入丙酮使DNA沉淀。
6. 安排离心管，离心沉淀。
7. 用乙醇洗涤、重悬DNA。
DNA鉴定：鉴定常用的方法包括电泳、吸光度法、荧光PCR 等。
本实验采用琼脂糖凝胶电泳法，基本步骤如下：1. 制备琼脂糖凝胶。
2. 调制电泳缓冲液。
3. 加载DNA样品。
4. 进行电泳。
5. 显色染色。
实验材料：1、植物样本（如玉米叶片、小麦胚芽等）2、CTAB提取缓冲液（含CTAB，EDTA，NaCl，Tris-HCl等）3、琼脂糖4、电泳缓冲液5、DNA标准品6、DNA分子量标记实验步骤：1. 取少量植物样本，将其用盐水淋洗，除去表面污垢和杂质。
2. 装入离心管并加入CTAB提取缓冲液，放在60℃水浴中孵育20分钟。
3. 加入冷丙酮沉淀DNA，离心5分钟。
4. 加入70%乙醇，洗涤DNA，离心5分钟。
5. 将DNA重悬于1 x TE缓冲液中，放在冰箱中储存。
6. 取一定体积的DNA样品，加入适量电泳缓冲液稀释。
7. 制备含DNA分子量标记的DNA样品，混合后加入琼脂糖凝胶槽中。
8. 加载DNA样品，与分子量标记一起进行琼脂糖凝胶电泳。
9. 进行电泳10-20分钟，直至DNA分子离子迁移完毕。
10. 取出琼脂糖凝胶，进行染色与分析。
实验结果：通过电泳可见DNA样品的带状图谱，观察带状图谱的大小、稠密程度、条带间距和条带的清晰度等特征，进而分析DNA样品的品质和纯度。
生化药物提取实验报告
标题：植物基因组DNA提取实验报告一、实验目的和要求1. 学习并掌握植物基因组DNA的提取原理和方法；2. 了解DNA的纯度与含量测定方法；3. 通过实验，提高动手操作能力和分析问题的能力。
二、实验内容和原理本实验采用酚-氯仿法提取植物基因组DNA，利用DNA与蛋白质等其他成分在不同溶剂中的溶解度差异进行分离纯化。
酚-氯仿法是一种常用的DNA提取方法，具有操作简便、提取效率高等优点。
三、实验材料与试剂1. 植物材料：新鲜植物叶片；2. 试剂：酚、氯仿、异丙醇、氯化钠、TE缓冲液、SDS、RNA酶、DNA标准品等。
四、实验器材与仪器1. 器材：玻璃棒、移液器、离心机、微波炉、紫外分光光度计等；2. 仪器：高速离心机、电泳仪、凝胶成像系统等。
五、操作方法和实验步骤1. 准备提取液：取适量植物材料，加入适量提取液（含SDS、RNA酶），研磨充分；2. 加入酚-氯仿，充分混匀，室温下静置10分钟；3. 4℃、12000r/min离心10分钟，取上清液；4. 加入等体积的异丙醇，混匀，室温下静置2小时；5. 4℃、12000r/min离心10分钟，弃上清液；6. 用70%乙醇洗涤沉淀，4℃、12000r/min离心5分钟；7. 弃上清液，空气干燥沉淀；8. 加入适量TE缓冲液溶解DNA，测定DNA浓度和纯度。
六、实验数据记录和处理1. 记录提取过程中各步骤的观察结果；2. 计算DNA浓度和纯度；3. 对实验数据进行统计分析。
七、实验结果与分析1. 观察结果：在提取过程中，观察到植物材料被充分研磨，酚-氯仿层与水层分离明显；2. DNA浓度：根据紫外分光光度计测定结果，DNA浓度为100ng/μl；3. DNA纯度：根据A260/A280比值，DNA纯度为1.8。
八、讨论、心得1. 本实验成功提取了植物基因组DNA，表明酚-氯仿法是一种有效的DNA提取方法；2. 实验过程中，要注意操作规范，避免DNA降解；3. 在后续实验中，可进一步研究DNA的应用，如基因克隆、基因表达等。
植物基因组的提取实验一
加入95%乙醇后，随着搅拌，溶液由澄清变浑浊， 有白色絮状物出现，并随着搅拌逐渐缠绕在玻璃 榜上。
实验结果
电泳结果如下图所示，条带不够清晰并有拖尾现 象。
结果分析
在加入氯仿/异戊醇后，溶液由绿色变为白绿色，这是 因为氯仿是非极性分子，水是极性分子，当溶液与氯 仿混合时，蛋白质分子之间的水分子被氯仿挤去，使 蛋白质失去水合状态而变性。由于溶液中有变性蛋白 质析出，因而由绿色变为白绿色。溶液中的绿色颗粒 是研磨时未完全破碎的植物组织。
氯仿/异戊醇
95%乙醇
TE溶解
测定吸光度和琼脂糖凝胶电泳
实验流程
电泳加样量如下表所示。
样品
DNA样品 DNA样品
Marker
DNA样品 DNA样品
样品量 /μL 染液量 /μL
5
7.5
10
10
12.5
1
1.5
2
2
2.5
实验结果
第一次加入氯仿/异戊醇后，溶液由绿色变为白绿 色，溶液中有绿色颗粒状固体。
试剂作用
Tris-HCl(pH8.0)提供的pH环境可防止核酸被酸水 解。 EDTA螯合Mg2+和Mn2+可抑制DNase的活性。
试剂作用
巯基乙醇能防止酚类氧化，使酚类容易除去。 NaAc和乙醇用于沉淀DNA。1/10体积的NaAc和 两倍样品体积的乙醇可有效沉淀DNA 。 RNase用于选择性的降解RNA。
植物基因组提取 实验汇报
汇报内容
实验原理 实验流程 实验结果 结果分析 实验总结
实验原理
植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞与动 物及细菌细胞的不同：
植物基因检测实验报告
一、实验目的1. 掌握植物基因提取的基本原理和方法。
2. 了解植物基因检测的原理和操作步骤。
3. 通过实验，学会运用PCR技术检测植物基因。
二、实验原理植物基因检测是利用分子生物学技术，对植物基因进行定性或定量分析的方法。
实验中，首先提取植物基因组DNA，然后通过PCR技术扩增目标基因，最后对扩增产物进行检测。
本实验采用CTAB法提取植物基因组DNA，并利用PCR技术检测目标基因。
三、实验材料1. 植物样品：小麦、水稻、玉米等。
2. 试剂：CTAB裂解液、NaCl溶液、Tris-HCl缓冲液、蛋白酶K、SDS、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶、琼脂糖凝胶、电泳缓冲液等。
3. 仪器：高速离心机、PCR仪、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验步骤1. 植物基因组DNA提取（1）取适量植物样品，加入CTAB裂解液，研磨充分。
（2）加入NaCl溶液，混匀。
（3）加入蛋白酶K和SDS，混匀。
（4）65℃水浴1小时，期间每隔10分钟混匀一次。
（5）加入等体积的酚/氯仿，混匀。
（6）12,000 rpm离心15分钟，取上清液。
（7）加入等体积的氯仿，混匀。
（8）12,000 rpm离心15分钟，取上清液。
（9）加入1/10体积的3 mol/L的NaAc溶液和2.5倍体积的无水乙醇，混匀。
（10）-20℃沉淀2小时。
（11）12,000 rpm离心15分钟，弃上清液。
（12）用75%乙醇洗涤沉淀。
（13）12,000 rpm离心5分钟，弃上清液。
（14）将沉淀溶于适量的TE缓冲液中。
2. PCR扩增（1）设计特异性引物，针对目标基因。
（2）配制PCR反应体系，包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶等。
（3）95℃预变性5分钟。
（4）95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环。
（5）72℃延伸10分钟。
3. PCR产物检测（1）取PCR产物，加入适量的琼脂糖凝胶电泳缓冲液。
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四川大学实验报告
题目：的提取与检测植物基因组DNA一、实验目的
1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；
2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二、实验原理
1.在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞；
2.SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来；
3.苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；
4.上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶；
5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三、实验材料
1.设备
移液器，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心管
2.材料
植物幼嫩叶片
3.试剂
（1）细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.25%
SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）
（2）氯仿:异戊醇（24:1）
（3）其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液
四、方法和步骤
0C水浴（金属浴）中加热备用；μ500L细胞提取液于651、取2、研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自来水清洗，蒸馏水冲洗干），去除叶脉，剪成细条状，置于研钵中研磨成粉末状（越细越好）；
0C预热的细胞提取液中，迅速摇匀，65500、取0.1g粉末（大约两勺半）转移至
μL3水浴（金属浴）中保温30min，10min左右温和颠倒混匀一次；
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四川大学实验报告题目：的提取与检测植物基因组DNA4、从水浴（金属浴）中取出离心管，加等体积(约500μL)氯仿/异戊醇
（24:1），室温下10000rpm×10min；
5.将上清液转移到另一1.5mL离心管中（使用的枪头用剪刀剪成大口），加等2/3体积的异丙醇，轻轻混匀，静置1min,使核酸沉淀下来，12000r/min× 5min，
倒掉上清液；
6、加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，静置
5min,12000r/min× 2min,去除上清液，再加入1ml洗涤缓冲液，轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，放置5min;
7、12000r/min× 10min后，倒去上清液，用小滤纸条将管壁上多余的水分吸掉，室温静置干燥；
8、干燥后，加入20μLTE缓冲液，溶解DNA，做好标记；
9、取5μL溶液，0.7%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小和质量。
MarkerDNA为DL15000。
五、注意事项
（一）提取DNA的过程：
1.DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件；
2.抑制内外源Dnase的活力。
Dnase就像一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a.低温操作；b.调节pH,使偏碱2+）Mg,加螯合剂（EDTA）除去酶的辅助因子（pH8.0);c.（抽提液中加表明活性剂；d.使酶活性丧失；
3.防止物理因素降解。
如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，极易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动；
4.植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提取有干扰作用。
因此，一般进可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料，这是因为幼嫩的新生组织次生代谢物较少，DNA含量高，切易于破碎，植物材料最好是新鲜的。
（二）琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA：
1.EB为诱变剂、致癌物，接触凝胶必须戴手套操作；
2.将溶液加入样品槽时，勿划破或戳破加样孔，勿带入气泡；
3.紫外线对眼睛有害，将胶块置于紫外灯下观察时，带上防护镜或眼睛，或隔着玻璃或有机玻璃观察。
六、实验结果与分析
1.植物基因组DNA提取结果：
页 2 第
Marker:TM DL1500150010007505002501000 250
普通灯光下的观察结果1 实验结果分析：图、个为715000bp、10000bp泳道的I.Marker带： MMarker与预期结果相符合，出现条带，但是出现拖带现象；、、7500bp、5000bp2500bp、1000bp250bp个条带，均出现拖带现象，其中第二条带和第II.泳道1号3：植物基因组DNA跑出了三条带拖带较严重；第一条带位于点样孔下方，亮度较小，可能是提取过程中出现的杂质；表明提取的较成功；DNA是提取的植物基因组，亮度较小，15000bp第二条带位于附近， 250bp第三条带位于的下方，亮度大，是提取过程中的杂质；
页 3第紫外灯下的观察结果2 图
四川大学实验报告题目：的提取与检测植物基因组DNA七、讨论
1.实验方法比较：
由于植物中的次生代谢产物-多酚类化合物可介导DNA降解，而多糖的污染也是影响植物核酸纯度最常见的问题，这些多糖能抑制限制酶、连接酶及DNA
聚合酶等分子生物学酶类的生物活性。
传统的CTAB-DNA提取法步骤多，较繁琐，DNA产率低，而且由于酚很难完全去除，容易影响以后的酶切等工作的效率。
SDS 法操作简单，温和，也可提取到较高分子量DNA，但所得产物含糖类杂志较多，这将直接影响DNA的限制性核酸内切酶酶切效果。
由于植物细胞匀浆含有多种酶类（尤其是氧化酶类）对DNA的抽提产生不利影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂（如巯基乙醇）以降低这些酶类的活性。
2.植物研磨操作，一定是研磨，不是用力捶！提取基因组过程有很多操作需要温和的进行，考虑一下它们的目的。
答：温和操作是防止基因组DNA的断裂。
3.在植物提取DNA实验和第一次质粒提取中为什么用到的电泳胶浓度不一样？答：因为提取的目的DNA大小不一样，跑胶适合的浓度就不一样。
植物基因组DNA分子量大适合用浓度较低的胶。
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