第十五期分子生物学常用技术与研究进展学习班
分子生物学的研究进展及未来展望
分子生物学的研究进展及未来展望分子生物学是研究生物体分子结构、组成和功能的学科，它涉及许多领域，包括生物化学、遗传学、生物物理学、生物工程等，并在基础研究、医学、农业、环境保护等方面发挥着重要的作用。
近年来，随着科技的不断发展和研究手段的不断改进，分子生物学领域也在不断突破和创新，许多重要的研究进展和发现正在改变我们对生命科学的认识。
一、基因编辑技术的突破基因编辑技术是近年来分子生物学领域最为关注和热门的研究之一。
它通过切割和修复DNA序列，能够实现人为地改变生物的基因组，从而创造出具有特定性状的新物种或新品种。
这种技术在医学、农业和环境保护等领域均具有广泛的应用前景。
最近几年，基因编辑技术取得了一系列的重要突破，例如CRISPR-Cas9技术的发展，使得基因编辑技术更加快速、精确和低成本。
此外，基于基因编辑技术的抗癌研究也正在取得巨大的进展，如利用基因编辑技术改变肿瘤细胞基因组，以抑制或消除癌细胞的生长和扩散。
二、人工合成生命体的实现人工合成生命体是一个极具挑战性的研究领域，其中的目标是利用分子生物学技术来开创具有完全不同于自然界的生命形式。
最近几年，人工合成生命体的实现已经成为了分子生物学领域的一大热点和关注点。
2010年，美国两个研究团队利用类似的技术合成了一种“全新”的病原体，其基因组完全来自合成的化学物质。
这个突破意味着我们已经具备了创造、设计和合成生命体的能力，为将来改变人类生命和生物世界带来了巨大的机遇和潜力。
三、蛋白质折叠和疾病研究蛋白质是生命中最为重要的分子之一，它们在细胞内扮演着极为重要的角色，控制着基本代谢过程、细胞信号转导、膜转运等生命活动。
然而，当蛋白质结构发生折叠异常时，就会引起一系列疾病，如肿瘤、神经退行性疾病、糖尿病等。
最近几年，对蛋白质结构和折叠机制的研究得到了显著的进展，特别是应用高分辨率X射线晶体学、核磁共振等技术手段，揭示了许多蛋白质复杂结构的三维结构和动力学过程，从而更好地理解了蛋白质折叠及其与疾病发生发展的关系。
细胞分子生物学研究中常用的技术和方法
细胞分子生物学研究中常用的技术和方法细胞分子生物学是指研究细胞内发生的生物分子互作及其调控的学科。
随着生命科学技术的不断发展和完善，许多技术和方法得以应用于细胞分子生物学的研究中。
本文将从多个方面介绍细胞分子生物学研究中常用的技术和方法。
一、基因克隆技术基因克隆技术是一种常用的细胞分子生物学研究方法。
它可以通过将感兴趣的DNA序列插入载体DNA上，构建含有特定目的基因的重组DNA，最终将重组DNA引入宿主细胞中来研究某一基因的生物学功能。
基因克隆技术的核心是重组DNA技术，其中最常用的重组DNA方法包括限制性内切酶切割、DNA连接、转化及放大等步骤。
特别是在近年来的分子克隆技术中，基因编辑技术的应用使得基因克隆技术更加得到精细化和精确化。
二、蛋白质结构分析技术蛋白质是生物体中极其重要的分子之一，其结构对蛋白质的生物学功能有着至关重要的作用。
蛋白质的功能在很大程度上取决于其三维结构，因此蛋白质结构的研究是细胞分子生物学的重要研究领域。
蛋白质结构分析技术包括X射线晶体学、核磁共振、电子显微镜等。
其中，X射线晶体学是目前分析蛋白质最为常用的方法之一，其原理是利用X射线的衍射来确认蛋白质的三维结构。
三、荧光素酶标记技术酶标记技术是研究酶在细胞中的分布和功能的重要方法，其中荧光素酶标记技术则成为近年来应用最广泛的方法之一。
荧光素酶由日本学者O. Shimomura于1962年首次发现，可以发出明亮的荧光，被广泛应用于生物学研究中。
目前，荧光素酶标记技术被用来研究蛋白质的定位和运动等生物学过程，其原理是将荧光素酶标记的免疫球蛋白等物质与荧光素底物结合，从而通过荧光显微镜来研究生物分子的动态变化。
四、蛋白质互作筛选技术蛋白质在细胞中的互作是细胞分子生物学研究的重要问题之一。
蛋白质互作筛选技术则可以用来鉴定蛋白质之间的相互作用关系。
目前常见的蛋白质互作筛选技术包括酵母双杂交法、共免疫共沉淀、荧光共聚焦显微镜等。
分子生物学技术的研究进展及应用
分子生物学技术的研究进展及应用随着科技的不断进步和发展，分子生物学技术成为了人类研究生命学科的一大利器。
分子生物学技术通过对生物分子及其相互作用的研究，为解释生命现象及其发生机制提供了新的思路和方法。
分子生物学技术的应用涵盖了基础科研和应用领域的各个方面，如医学、农业、环境科学等，为人类提供了更好的生活品质。
1. PCR技术PCR技术是目前分子生物学领域最具代表性的技术之一。
PCR技术可以在短时间内扩增生物样本中的DNA序列，从而将其放大到足够的数量进行研究和分析。
PCR技术操作简便，准确性高，可用于研究基因的发生、发展、多态性和演化等过程。
除了在生物学领域中的广泛应用，PCR技术还常用于医学诊断、药物筛选等方面。
2. 基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的基因分析方法，可以同时识别和量化数百至数万个基因。
它基于表达谱学，通过对不同阶段基因表达的比较，实现基因的鉴定与分析。
基因芯片技术的应用范围非常广泛，包括癌症、心血管疾病、神经退行性疾病、肝病、肾病等多种疾病的基因诊断和治疗。
3. 基因编辑技术基因编辑技术是近年来兴起的一项分子生物学技术。
它可以修改细胞的基因序列，使其具有某种特定的性质或功能。
目前基因编辑技术最重要的平台是CRISPR/Cas9。
CRISPR/Cas9是一种靶向基因编辑工具，可以对任何基因进行编辑，而且精度较高。
基因编辑技术的应用涵盖了很多领域，如基因治疗、重要作物品种改进、疾病研究等。
4. 基因组学和蛋白质组学基因组学和蛋白质组学为解码生命信息提供了强大的工具。
基因组学研究的是组成基因组的DNA分子，而蛋白质组学研究的是蛋白质。
它们在各自领域里扮演着重要的角色。
例如，基因组学研究可以揭示生物的遗传信息，蛋白质组学则可以更深入地了解生物的功能和进化。
5. 二代测序技术二代测序技术是分子生物学领域的一项重要技术。
它可以快速地进行DNA测序，从而加速对生物结构和功能的理解和研究。
分子生物学常用技术
切除所有结合与不 结合蛋白质的DNA 带，并用六氢吡啶 切割甲基化的G残 基
缺失的DNA带表 结合带 非结合带 明相应G残基的重 要意义，它得到 结合蛋白质的保 护
甲基化干扰实验
4、体内足迹实验
完整的细胞 × G G
DMS
裸露的DNA G G
× G
me
G
分离DNA并用 六氢吡啶切割
Me Me
G
G
PCR扩增 凝胶分析
1× 29× 1×
*This cycle is normally included in a PCR assay in order to allow any “unfinished” product from previous amplification to achieve its full length
PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引 物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反 应参数是94℃变性1min， 60 ℃退火1min， 72 ℃ 延伸1.5min。如此周而复始，重复进行，直至扩增 产物的数量满足实验需求为止。
Reaction Condition for a Typical PCR Assay
2、诺赛恩RNA印迹技术（Northern blotting）
1979年，J.C.Alwine等人发展而来，是将RNA分子从电泳凝 胶转移到硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，进行 核酸杂交的一种实验方法。由于这种方法与萨瑟恩DNA印迹杂交 技术十分类似，所以叫做诺赛恩RNA印迹技术（Northern blotting）。 而将蛋白质从电泳凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上，然后 同放射性同位素125I标记的特定蛋白质之抗体进行反应，这种技 术叫做韦斯顿蛋白质杂交技术（Western blotting）。
分子生物学常用实验技术(精)
分子生物学常用实验技术第一章质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第二章 DNA酶切及凝胶电泳第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第四章 RNA的提取和 cDNA 合成第五章重组质粒的连接、转化及筛选第六章基因组 DNA 的提取第七章 RFLP和 RAPD 技术第八章聚合酶链式反应 (PCR扩增和扩增产物克隆第九章分子杂交技术第十章测序技术第一章质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第一节概述把一个有用的目的 DNA 片段通过重组 DNA 技术 , 送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体 (Vector。
细菌质粒是重组 DNA 技术中常用的载体。
质粒 (Plasmid是一种染色体外的稳定遗传因子 , 大小从 1-200kb 不等 , 为双链、闭环的 DNA 分子 , 并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力 , 能在子代细胞中保持恒定的拷贝数 , 并表达所携带的遗传信息。
质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细胞则不能存活 , 而宿主即使没有它们也可以正常存活。
质粒的存在使宿主具有一些额外的特性 , 如对抗生素的抗性等。
F 质粒 (又称F 因子或性质粒、 R 质粒 (抗药性因子和 Col 质粒 (产大肠杆菌素因子等都是常见的天然质粒。
质粒在细胞内的复制一般有两种类型 :紧密控制型 (Stringent control和松驰控制型 (Relaxed control 。
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制 , 当染色体不复制时 , 它也不能复制 , 通常每个细胞内只含有 1个或几个质粒分子 , 如 F 因子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制 , 在每个细胞中有许多拷贝 , 一般在 20个以上 , 如 Col E1质粒。
在使用蛋白质合成抑制剂 -氯霉素时 , 细胞内蛋白质合成、染色体 DNA 复制和细胞分裂均受到抑制 , 紧密型质粒复制停止 , 而松驰型质粒继续复制 , 质粒拷贝数可由原来 20多个扩增至 1000-3000个 , 此时质粒 DNA 占总DNA 的含量可由原来的 2%增加至 40-50%。
分子生物学的研究进展和应用
分子生物学的研究进展和应用分子生物学是一门研究生命体系内分子结构、功能、相互关系及其影响的学科。
随着现代科学技术的不断升级与更加深入的研究，分子生物学实现了巨大的进展和突破，并在医学、生物制药、环境保护、食品工业等多个领域得到广泛应用。
1. DNA测序技术的发展DNA测序技术是分子生物学的核心技术之一。
20世纪70年代，萨琳松世以PCR技术快速扩增DNA而被誉为“分子生物学革命的开端”，而DNA测序技术的诞生则给分子生物学发展带来了巨大的推动力。
20世纪90年代初，人类基因组计划的开展，加速了测序技术的发展。
现代的DNA测序技术不仅速度更快，精度更高，而且实现起来更加便捷。
在医学领域中，测序技术被应用于疾病基因测序、肿瘤基因测序、胎儿基因测序等领域，帮助医生更好地诊断和治疗疾病。
2. RNA干扰技术的应用RNA干扰技术是一种用于研究基因功能的技术。
它是利用小分子RNA在细胞内特异性、序列特异性的靶向降解特定mRNA的方法。
在细胞培养系统中，RNA干扰技术可被用于验证某个基因是否参与某个生物过程的调控，或用于研究基因组中每个基因所持续的功能。
在生物医疗、生物工程等领域中，RNA干扰技术被用于疾病基因筛查、药物作用靶点筛查、疫苗研发等多个领域，并发挥着越来越重要的作用。
3. CRISPR/Cas9技术的应用CRISPR/Cas9技术是近年来分子生物学领域的一项重大突破。
它是一种可编程的DNA分子靶向识别与切割技术。
由于该技术具有操作简便、高效、特异性强等特点，使其成为了研究人员进行基因编辑、基因组修饰等领域研究的重要工具。
CRISPR/Cas9技术在规避人类遗传性疾病、改造微生物生产部件、制备人工人类组织、生产新型农作物等领域均有广泛应用。
这种新颖的技术为科学家们提供了一个有效的工具，使科学家们能够更好地探索生物多样性、提高生物工程应用的效率和安全性。
4. 分子影像学技术的应用分子影像学是一种利用显微镜和计算机等技术对生物分子内部及分子分布的定量观察和分析的技术。
分子生物学常用检测技术
变性、复性、退火和淬火
基因
分子生物学常用技术
PCR（聚合酶链式反应） 核酸分子杂交 基因芯片技术(biochip) DNA 测序（DNA sequencing ） DNA重组技术(DNA recombination)
一、聚合酶链反应 （Polymerase Chain Reaction ，PCR）
1、药物筛选和新药开发 2、疾病诊断 3、环境保护 4、司法 5、现代农业
四、测序技术
CTTGATCTTCAGGTAGGCCTGAATCCT
（一）一代测序技术
（二）二代测序技术
Illumina公司的Solexa和Hiseq应该说是目前全球使用量最大的第二代测序机器，这两个系列的技术核心原理是相同的。 Illumina/Solexa Genome Analyzer测序的基本原理是边合成边测序。 在Sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP，当DNA聚合酶合成互补链时，每添加一种dNTP就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测DNA的序列信息。
PCR的临床应用
对病原微生物核酸进行快速检测 弥补免疫检测的缺陷 缩短诊断的窗口期（如HBV,HIV） 用于药物疗效监测和评估 用于肿瘤基因表达方面的研究 用于遗传病的诊断
样本采集要求
二、核酸分子杂交
根据核酸变性和复性的原理，不同来源的变性单链核酸分子在合适的条件下，通过碱基互补形成双链杂交体的过程称为核酸分子杂交（molecular hybridization）。
R
Q
2. Strand displacement
Q
3. Cleavage
R
4. Polymerisation completed
分子生物学常用实验技术概述
分子生物学常用实验技术概述分子生物学是研究生物大分子（如DNA、RNA和蛋白质等）组成、结构和功能的科学领域。
在分子生物学的研究中，常用各种实验技术来解析生物大分子的结构和功能，为科学研究和应用提供依据。
下面将概述一些常用的分子生物学实验技术。
1.PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种能在体外快速扩增DNA序列的技术，可以从一个DNA模板扩增出百万倍的DNA片段。
PCR包括三个步骤：变性、退火和延伸。
通过PCR，可以在短时间内扩增大量特定的DNA 片段，并常应用于基因分析、疾病诊断以及基因工程等领域。
2.转基因技术：转基因技术是将外源基因导入到目标生物体细胞中，使其表达外源蛋白或产生新的表型。
转基因技术通常包括四个步骤：基因分离、基因克隆、基因传递和基因表达。
转基因技术在农业、医学和生物科学研究中具有广泛的应用。
3.蛋白质电泳：蛋白质电泳是根据蛋白质的电荷和大小差异将其分离的一种方法。
常用的蛋白质电泳方法包括SDS-和二维电泳。
蛋白质电泳可用于纯化蛋白质、分析蛋白质组成以及检测蛋白质的修饰。
4.蛋白质质谱：蛋白质质谱是一种分析蛋白质的结构和功能的方法。
常用的蛋白质质谱技术包括MALDI-TOF质谱和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）。
蛋白质质谱可用于鉴定未知蛋白质、确定蛋白质的氨基酸序列以及检测蛋白质的修饰等。
5.分子克隆：分子克隆是将外源DNA或RNA序列插入到载体DNA中，并通过细胞转染等方法将其导入到目标细胞中进行表达的过程。
分子克隆常用的方法包括限制性内切酶切割、连接反应、质粒构建和转染等步骤。
分子克隆技术可用于分析、表达和研究目标基因。
6. Northern blotting：Northern blotting是一种检测RNA的方法，常用于检测特定的mRNA分子。
在Northern blotting中，通过RNA的电泳分离、转移、固定以及杂交等步骤，可以检测目标RNA的存在和表达水平。
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第十五期分子生物学常用技术与研究进展学习班
分子生物学实验技术是当今生命科学领域应用最广泛和最重要的手段之一，为推广分子生物学实验技术，满足临床医技人员、教学科研人员、在读研究生及其它有需要人员的要求，北京市理化分析测试中心已举办了十四期“分子生物学常用技术与研究进展学习班”，并得到了全体学员的一致好评。
应广大学员的强烈要求，理化中心将于2016年11月19日至11月22日在北京开办本年度唯一一期分子生物学常用技术学习班，欢迎各位学员前来参加。
本期学习班包括理论讲座与实验操作两部分内容，力求使每位学员在4天时间内都能学有所值、学有所用。
一、培训单位：
主办单位：北京市理化分析测试中心
协办单位：华斯泰生物医学科技有限公司
二、培训日程：
三、培训安排
时间：2016年11月19日-22日
地点：北京市海淀区永丰产业基地丰贤中路7号孵化楼B座四层
报到：北京康复瑞假日酒店西山店2016年11月18日14:00-18:00
四、住宿安排
1、交通、住宿、午餐及晚餐费用自理。
如需会务组预定午餐，请各位学员在回执表内注明（午餐均为快餐，发票均为手撕发票）。
2、酒店预订：会务组协助提供协议酒店，但培训人员需自行预定，预定时请说明“百欧美生公司预定”即可享受协议价。
协议酒店：北京康福瑞假日酒店西山店（北京市海淀区北青路与永丰路交叉口往南800米路东），房间优惠价：单人间298元/天/间，双人标准间380元/天/间，均含早餐，电话：。
五、注册方式
1、报名时间
报名从即日起至2016年11月14日截止。
为了保证教学质量，本次培训班限额40人，招满为止。
2、注册费
共计3200元/人，同一单位两人以上参会优惠至3000元/人。
3、缴费方式（电子汇款）
账户名称：北京市理化分析测试中心
账户号：
开户行：工商行紫竹院支行
汇款用途处务必请标明：学员姓名+分子培训班
4、联系人
姓名：马老师联系电话：
E-mail：网站：
报名者请填写以下回执，并于2016年11月14日前E-mail至联系人邮箱。
如有其它需要，请在备注中说明。
《分子生物学常用技术与研究进展学习班》回执
（多人参加，可复制此表）
请用“■”代替“□”姓名民族性别年龄职称
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否□
康福瑞假日酒店西山店合住
是□
否□
发票抬头项目名称
备注
报名回执填妥后统一发送至邮箱，如两个工作日未收到回复请联系（马老师）确认。
报到地点：北京康福瑞假日酒店西山店
交通：地铁13号线西二旗站B口出站，换乘570路公交车至赵庄村站，距离酒店约620米。