中药有效部位提取分离与检识测定
中药有效部位提取分离与检识测定
直接测定法
分光光度法
酸性染料
加试剂法 酸类 磺酸类 其他
化学分析法
要求样品中总生物碱成分含量较高。
分析前应选择适宜方法（如采用氧化铝色谱 法）对样品进行净化处理。
法 加试剂重量法（间接重量法）
容量法
酸碱滴定法 两相滴定法 酸性染料滴定法 络合滴定法 沉淀滴定法
特点 直接测定法：主要利用黄酮类化合物自身 颜色或紫外吸收进行测定。 加试剂测定法：主要利用黄酮类化合物与 金属盐类试剂的络合反应、黄酮类化合物 的还原反应等进行测定。
直接测定法
原理：利用黄酮类化合物自身的光吸收直接 测定（可见光、紫外光、荧光）。
备注： 一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂 中总黄酮类化合物的含量测定。
备注：常用盐酸-镁粉反应等。
原理3：利用二氢黄酮在碱性下异构成查耳酮 测定
备注：常用于二氢黄酮的测定。最大吸收 峰红移，有利于消除干扰。
测定——单体黄酮
中药制剂中黄酮单体成分的含量测定多用色 谱法。
薄层扫描法 高效液相色谱法 脉冲极谱法
三、皂苷有效部位
提取分离
理化性质 溶解性 颜色反应 泡沫反应 紫外可见吸收光谱
测定——总皂苷
常用方法有重量法和可见分光光度法（比色 法）等
特点 重量法： 一般少用。利用皂苷类成分的溶 解性进行提取、分离和纯化后得总皂苷， 恒重，称量。
可见分光光度法（比色法）：主要利用皂 苷类化合物与试剂反应显色后进行测定。
常用显色试剂
浓硫酸 高氯酸 醋酐-硫酸、硫酸-醋酸-冰醋酸、硫酸-冰醋酸 芳香醛-硫酸（高氯酸） 亚甲蓝 2,6-二丁基对甲酚
酸性染料比色法
原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定 量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。
中药药效物质的分离与鉴定
中药药效物质的分离与鉴定中药作为中国传统医学的瑰宝，拥有悠久的历史和独特的药效。
中药中的药效物质是中医药疗效的关键所在，对于科学地应用中药、保障中药质量和推动中药现代化具有重要意义。
因此，分离与鉴定中药药效物质成为必要的研究工作。
一、分离中药药效物质中药中的药效物质是一种或多种具有特定生物活性的化合物，通常存在于复杂的中药组分中。
为了从中药中提取和分离这些有益成分，需要采用多种技术和方法。
1. 总酸碱提取法总酸碱提取法是一种常用的初级提取技术。
它通过将中药粉碎后用酸碱溶液煮沸，然后过滤得到药液。
接下来，通过蒸馏或萃取等手段进一步提取与目标成分相关的具有药效的分子。
2. 薄层色谱法薄层色谱法是一种快速、简便且有效的分离技术。
它将目标物质分子溶于合适的溶剂中，再将溶液滴于涂有吸附剂的滤纸上，静置后溶剂会逐渐上升，然后观察滤纸在特定条件下成份的分离情况。
3. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和纯化技术。
通过将样品溶解于流动相中，然后通过色谱柱，利用样品中不同成分在色谱柱中强度分布差异的特性，来分离出目标物质。
二、鉴定中药药效物质分离得到中药药效物质后，需要对其进行鉴定，以确定其具体成分和性质。
鉴定的方法可以是物理性质检测、化学性质检测和生物活性检测。
1. 物理性质检测物理性质检测主要包括外观、溶解度和熔点等方面的测试。
这些检测可以提供一些基本的物理性质参数，为后续化学和生物活性检测提供基础数据。
2. 化学性质检测化学性质检测的方法较多，例如红外光谱法、核磁共振法、质谱法等。
其中，红外光谱法常用于鉴定中药中的有机化合物，核磁共振法常用于有机物的结构鉴定，质谱法可用于测定药效物质的相对分子质量。
3. 生物活性检测生物活性检测是评估中药药效物质药理活性的关键步骤。
通过生物学实验，比如细胞实验和动物实验，来评估中药药效物质对生物体的影响和作用机制。
三、应用案例：黄芩中的黄酮类化合物分析以黄芩中的黄酮类化合物为例，介绍中药药效物质分离与鉴定的步骤。
第二章第二节中药有效成分提取分离和结构鉴定
第二章第二节中药有效成分提取分离和结构鉴定中药是我国独特的药物资源，在我国医学和药学领域有着重要的地位。
然而，中药中的有效成分往往是复杂的混合物，提取和分离中药有效成分并进行结构鉴定是研究中药药理学和药物化学的重要一环。
本文将对中药有效成分的提取、分离和结构鉴定方法进行综述。
中药有效成分的提取是指从中草药中分离出具有药理活性的化学物质。
中药有效成分的提取方法主要有浸提法、煎煮法、蒸馏法、萃取法和溶剂法等。
其中，浸提法是最常用的一种方法，其原理是将中草药放入溶剂中，经过一定时间浸泡，使溶剂中的有效成分与草药中的有效成分发生物化反应，最终将有效成分溶解在溶剂中。
常用的溶剂有水、醇类、醚类、酮类等。
中药有效成分的分离是指将提取液中的有效成分分离出来，常用的方法有薄层层析、凝胶层析、气相色谱、液相色谱等。
其中，薄层层析法是一种简单方便的分离方法，其原理是利用物质在固定相和流动相中的分配系数差异进行分离。
凝胶层析法是以凝胶为载体的一种层析方法，常用于分离较大分子量的化合物。
而气相色谱和液相色谱是一种高效的分离方法，可以对中药有效成分进行高效、快速的分离。
中药有效成分的结构鉴定是指通过一系列化学分析方法确定化合物的化学结构。
常用的结构鉴定方法有红外光谱、紫外光谱、核磁共振、质谱等。
红外光谱是通过测量溶液或固体中的物质对红外辐射的吸收或散射来确定化合物的功能团。
紫外光谱是通过测量物质对紫外光的吸收来确定化合物的共轭体系。
核磁共振是通过测量分子中原子核自旋的共振吸收来确定化合物的分子结构。
质谱是通过测量物质在电离后的质荷比得到的质谱峰来确定化合物的分子量和分子结构。
总之，中药有效成分的提取、分离和结构鉴定是中药研究中至关重要的步骤。
通过合适的提取、分离和鉴定方法，可以有效地分离出中药中的有效成分，并确定其化学结构，为中药的药理研究和药物化学研究提供重要的支持和依据。
在未来的研究中，我们可以借鉴现代科学技术的发展，采用高效、快速、准确的分析方法，进一步提高中药有效成分的提取和结构鉴定的效率和准确性，为中药的研究和开发做出更多的贡献。
药物的中药与中药药效物质的分离与鉴定
药物的中药与中药药效物质的分离与鉴定中药是中国传统文化的瑰宝，拥有悠久的历史和丰富的药理学知识。
中药中的药物成分对人体具有独特的药效，但是其中的药效物质分离与鉴定却是复杂而又关键的步骤。
本文将介绍药物的中药与中药药效物质的分离与鉴定的相关知识。
一、中药药效物质的分离方法为了准确地鉴定中药中的药效物质，首先，需要对中药进行物质分离。
物质分离一般采用液相色谱、气相色谱、高效液相色谱等技术。
1. 液相色谱法液相色谱法是一种常用的物质分离技术。
它基于物质在固定相与流动相之间的不同亲和性，通过不同分离机制，如大小排除、亲水疏水性等，将混合物中的物质逐一分离。
常用的液相色谱法有薄层色谱、柱色谱等。
2. 气相色谱法气相色谱法是一种基于物质在气相固定相中的相互作用力不同而进行分离的方法。
它适用于分析易挥发性或有机性物质。
通过调整气相固定相的性质，选择适当的分离条件，可以使混合物中的物质分离出来。
3. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种在液体中进行分离的方法。
它具有分离效率高、分离时间短的特点，广泛应用于药物分析与中药药效物质的分离。
高效液相色谱法根据样品的成分特点，选择不同的柱、流动相和检测器，可实现对中药中某一特定化合物的定量分析。
二、中药药效物质的鉴定方法鉴定中药中的药效物质是确保药物质量的重要环节，鉴定方法包括光谱分析、质谱分析、核磁共振分析等。
1. 光谱分析光谱分析是一种利用物质对电磁波的吸收、散射或荧光等现象来进行分析的方法。
常用的光谱分析方法有紫外-可见吸收光谱、红外光谱、质子核磁共振光谱等。
2. 质谱分析质谱分析是一种通过物质在质谱仪中被电离成离子，并根据离子的质量与相对丰度进行分析的方法。
质谱分析可用于确定物质的分子结构、分子量和分子组成等信息。
3. 核磁共振分析核磁共振分析是一种基于物质核自旋状态的方法。
通过外加磁场和射频脉冲，可以获得物质分子中核自旋能级的信息，从而确定物质的分子结构和分子组成。
中药有效成分提取分离和结构鉴定
中药有效成分提取分离和结构鉴定一、中药有效成分的提取分离中药植物中含有大量的化学成分，其中有些为有效的药理成分，有助于治疗疾病。
提取分离中药有效成分的主要方法有以下几种：1.传统煎煮法传统煎煮法是一种常见的中药提取方法，通过将中药材浸泡在水或其他溶剂中，随后加热煮沸，溶解其中的有效成分，并蒸馏收集提取液，最后通过蒸发浓缩得到药物。
2.挥发油提取法挥发油提取法主要用于提取芳香植物中的挥发性油脂成分。
该方法通常采用水蒸气蒸馏或溶剂提取，将挥发性成分分离提取出来，并通过减压蒸馏得到纯度较高的挥发油。
3.超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种有效的中药提取方法，通过超声波的作用，有效地破坏中药材细胞壁，提高有效成分的释放率。
超声波辅助提取法具有操作简单、提取效率高等特点。
4.薄层色谱法薄层色谱法是一种分离技术，通过将中药提取物溶液均匀涂抹在均匀的薄层色谱板上，再通过移液法加入特定的溶剂，溶剂在色谱板上上升过程中与色谱基质发生相互作用，从而实现有效成分的分离和定量测定。
二、中药有效成分的结构鉴定中药提取分离后，需要对提取得到的有效成分进行结构鉴定，主要是通过使用一系列分析手段和仪器仪表来确定其分子结构和化学性质。
1.红外光谱（IR）红外光谱是一种常用的分析技术，可用于分析中药提取物的分子结构。
通过观察样品在红外光谱区域的吸收峰，可以确定样品中的官能团、键的类型和结构特征。
2.质谱分析（MS）质谱分析是一种高灵敏度的分析技术，可用于分析中药提取物的分子质量和分子结构。
通过将样品离子化并通过质谱仪进行检测，可以确定中药有效成分的分子质量和碎片的结构。
3.核磁共振（NMR）核磁共振是一种基于原子核自旋相互作用的分析技术，可用于分析中药提取物的原子数量、原子类型和原子的化学环境等信息。
通过对中药样品进行核磁共振实验，可以得到数学上的谱图，通过谱图的分析，可以确定成分的结构。
4.液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）液相色谱-质谱联用技术是将液相色谱和质谱两种技术联用的一种分析方法，可用于分析中药提取物中的复杂混合物。
中药药效成分的分离和鉴定
中药药效成分的分离和鉴定中药作为我国传统的药物治疗方式，多年来一直发挥着重要的作用。
其中，中药药效成分的分离和鉴定是研究中药有效成分的关键步骤。
本文将介绍中药药效成分的分离和鉴定的方法和技术。
1. 中药药效成分的分离方法中药药效成分的分离是指将中药中的有效成分从其他成分中分离出来，以便进行鉴定和进一步的研究。
常用的中药分离方法包括萃取法、纤维素色谱法、液相色谱法等。
萃取法是最常用的中药提取方法，它利用溶剂将中药中的有效成分提取出来。
常用的溶剂有水、醇类、醚类等。
通过调整提取剂和样品质量的比例以及提取时间，可以获得较高纯度的中药药效成分。
纤维素色谱法是一种基于不同化学性质的物质在纤维素柱上的吸附和解吸过程进行分离的方法。
通过改变流动相的性质，可以调节成分的相对迁移速度，实现中药药效成分的分离。
液相色谱法是目前分离中药药效成分最常用的方法之一。
它利用不同成分在液相中的相互作用力差异进行分离。
常用的液相色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法（UPLC），它们具有分辨率高、灵敏度高等特点，可以对中药药效成分进行准确的分离和鉴定。
2. 中药药效成分的鉴定方法中药药效成分的鉴定是指通过一系列的化学分析和结构鉴定方法确定中药中的有效成分。
常用的中药鉴定方法包括红外光谱法、核磁共振波谱法、质谱法等。
红外光谱法是一种根据材料对红外光的吸收特征进行物质结构鉴定的方法。
通过对比样品的红外光谱图和已知物质的红外光谱图，可以确定中药中的有效成分。
核磁共振波谱法（NMR）是一种通过测量核自旋在磁场中的能量差异进行物质结构鉴定的方法。
它可以给出物质的分子结构、键合情况等信息，对中药药效成分的鉴定非常有帮助。
质谱法是一种根据物质的分子质量和分子离子的裂解信息进行结构鉴定的方法。
通过质谱仪的测量，可以得到物质的质谱图，并通过对比已知物质的质谱图，鉴定中药中的有效成分。
3. 中药药效成分分离和鉴定的应用中药药效成分的分离和鉴定在中药研究和开发中具有重要意义。
中药有效成分的分离与鉴定
中药有效成分的分离与鉴定中药是一种传统的治疗方式，它已经存在了数千年。
其中的有效成分能够治疗各种常见病和慢性病，这也是为什么现代医学将其作为药物的原料之一。
不过，中药传统上以混合植物为主，它对人体的疗效和药效非常难以掌握。
为了解决这个问题，在制造中药时，需要进行有效成分的提取。
有效成分的提取主要分为两个步骤，分离和鉴定。
中药有效成分分离分离是当今中药提取的主要技术之一。
分离有效成分的原理是，有效成分与其他成分有不同的物理化学性质，如溶解度、极性、熔点等等。
这些差异使我们可以使用各种方法手段，将有效成分从其他成分中单独约束出来。
当然，这过程中需要考虑到各种化学物质的成分和浓度，有效成分的稳定性、活性以及与中药其他成分的相互作用等等。
分离技术主要有以下几种：1. 萃取法在药物化学研究中，萃取法是最基本的分离技术之一。
这种方法使用介质安置成分混合物的非极性部分，将活性成分从混合物中提取出来。
2. 薄层色谱法薄层色谱是一种比较常见的分离技术。
该技术分为正相色谱和反相色谱。
正相色谱不同化学成分的的极性不同，导致在特定环境下出现不同的物理相。
吸附层面易绷紧对多种极性化学成分强制进程的吸附/脱附。
反向相色谱将水和醇相作为萃取介质，通过物质的流动将成分分为不同的分数，最终将有效成分从中分离出来。
3. 毒液铬柱法毒液铬柱法是一种裂解脂质和蛋白质的方法。
在该方法中，用铬液溶液溶解样品，将样品淀粉分离出来，从而分离出有效成分。
4. 超声波萃取法超声波萃取法已经成为中药分离中的常见技术。
这种方法使用超声波理化作用，将有效成分从混合物中分离出来。
中药有效成分的鉴定中药有效成分的鉴定是分离之后的第二个步骤。
这个步骤的目的是检查提取到的分离物质是否正确。
中药分离后，通常会使用质谱和熔点测定等方法进一步鉴定有效成分。
1. 质/谱联用技术质/谱联用技术是一种高级的分析技术。
该技术结合质谱和色谱技术，在保证成分不降解和变性的同时，提高了检测的灵敏度和选择性，更加准确地确定成分的分子量、分子式和结构。
中药化学实验指导—实验三 陈皮中橙皮苷的提取分离与检识
20D 实验三 陈皮中橙皮苷的提取分离与检识（一）目的要求学习橙皮苷的提取精制和检识，通过实验要求：1．掌握橙皮苷的结构特点和理化性质及一般提取方法。
2．了解橙皮苷的检识方法。
（二）主要化学成分的结构及性质陈皮为芸香科植物福橘Citrus tangerina Hort.et Tanaka 、朱橘Citrus erythrosa Tanaka 的果皮。
含挥发油和黄酮类成分橙皮苷、川陈皮素等。
橙皮苷(hesperidin) 又称陈皮苷、橘皮苷。
分子式C 28H 34O 15，为细树枝状针形结晶，mp.258～262℃，［α］ -76℃（C=2,吡啶）。
易溶于稀碱及吡啶，微溶于甲醇及热冰醋酸，几乎不溶于丙酮、苯及氯仿，在60℃溶于二甲基甲酰胺及甲酰胺。
O O H O H O CH 3O橙皮苷（三）实验原理本实验是根据陈皮中的主要成分是挥发油和橙皮苷，先用石油醚溶除挥发油，再用甲醇提取及用活性炭精制得到橙皮苷。
也可利用橙皮苷易溶于稀碱水的性质，进行碱溶酸沉法提取，用甲酰胺精制得橙皮苷。
（四）实验内容1．提取、精制方法Ⅰ：见书方法Ⅱ：见书2．检识（1）Molish 反应 取橙皮苷少许置于试管中，加乙醇1ml ，在水浴中加热溶解，加α-萘酚乙醇溶液2～3滴振摇，倾斜试管45°，沿管壁徐徐滴加1ml 浓硫酸，静置，观察二层溶液界面变化，应呈现紫红色环。
（2）盐酸-镁粉反应取橙皮苷少许置于试管中，加乙醇2ml，在水浴中加热溶解，加入镁粉约50mg振摇后，滴加浓盐酸3～4滴，产生剧烈反应，溶液逐渐由黄色变为红色。
（3）锆-枸橼酸反应取橙皮苷少许置于试管中，加甲醇2ml，在水浴中加热溶解，加2％二氯氧锆甲醇试剂3～4滴，呈鲜黄色。
再加2％枸橼酸甲醇试剂3～4滴，黄色变浅。
（4）三氯化铝反应取橙皮苷少许置于试管中，加甲醇2ml，在水浴中加热溶解，加1％三氯化铝甲醇试剂2～3滴，呈鲜黄色。
（5）四氢硼钠反应取橙皮苷少许置于试管中，加2ml甲醇溶解，加入等量的2％四氢硼钠的甲醇液，一分钟后，再加浓盐酸或浓硫酸数滴，生成紫色～紫红色。
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测定——单体生物碱
薄层扫描法
特点
检测时，可利用本身的光吸收或喷洒显色
试剂（常用改良碘化铋钾试剂）。 备注 制剂成分复杂，或生物碱含量较低时，需 要净化样品。 显色要均匀。
高效液相色谱法
特点
多用反相色谱法：C18为固定相； 乙腈
（甲醇）-水（缓冲溶液）为流动相。
需注意固定相中硅胶表面游离硅醇基对测
量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。
特点：在弱酸或中性条件下，生物碱与苦味
酸定量生成苦味酸盐沉淀，该沉淀可溶于氯 仿等有机溶剂，或在碱性下解离释放出生物 碱和苦味酸。
苦味酸盐比色法
操作方法之一：
滤取生物碱苦味酸盐沉淀，加碱使其
解离，以有机溶剂萃取游离出的生物 碱，用含有苦味酸的碱性水溶液比色 测定，再换算出生物碱的含量。
变化，应控制测定时间。
酸性染料比色法
原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定
量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。
特点：在一定pH下生物碱以阳离子与酸性染
料阴离子定量结合成有色离子对。此离子对 可定量转溶于有机溶剂，测定有机溶剂的吸 收度或经碱化后释放出的染料的吸收度。
酸性染料比色法
备注：
加试剂测定法
原理1：利用黄酮类化合物与金属盐类试剂
的络合反应显色测定。
备注： 常用试剂有AlCl3、Al(NO3) 3、ZrOCl2 及MgAc2等。如常用醋酸钾-三氯化铝、 亚硝酸钠-硝酸铝显色测定。 显色试剂中加入碱可使最大吸收峰红 移。
加试剂测定法
原理2：利用扫描法
特点：
大多数需要显色后测定。
备注：
显色剂喷洒要均匀，注意控制显色温度
与时间。 注意显色后斑点呈色的稳定性考察。
高效液相色谱法
特点：
多用反相色谱，固定相选择 C18键合相硅胶，流 动相选择乙腈-水、甲醇-水（可加适量酸）等。
备注：
少数有紫外吸收的皂苷（如甘草酸）可用紫外检 测器。
总黄酮含量测定常采用分光光度法，包括直
接测定法和加试剂测定法两种。
特点
直接测定法：主要利用黄酮类化合物自身
颜色或紫外吸收进行测定。
加试剂测定法：主要利用黄酮类化合物与
金属盐类试剂的络合反应、黄酮类化合物 的还原反应等进行测定。
直接测定法
原理：利用黄酮类化合物自身的光吸收直接
测定（可见光、紫外光、荧光）。 备注： 一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂 中总黄酮类化合物的含量测定。
长基本无吸收，因此，一般供试品溶液均要 经过适当分离净化方可进行测定。
分离净化的方法可采用化学法和色谱法等。
直接测定法
原理：不经过化学反应、利用生物碱自身的
光吸收直接测定（可见光、紫外光、荧光）。
特点：不加试剂。 备注：一般用于药味较少、干扰不大的中药
制剂中总生物碱的含量测定，注意其他有色 物质及有紫外吸收、荧光吸收物质的干扰。
雷氏盐比色法
备注：
硫氰酸铬铵的克分子吸收系数为：
106.5（单盐）或213.0（双盐） 计算公式：W=A /ε×M×V W：生物碱雷氏盐重量mg A：吸收度 ε：克分子吸收系数 V：溶液mL数 M：生物碱雷氏盐分子量
雷氏盐比色法
注：
注意生物碱雷氏盐沉淀是单盐形式还是双
盐形式。对含2个以上N原子的生物碱，存 在形式与生物碱中N原子的碱性大小和酸 性溶剂的酸性强弱有关。
测定——总皂苷
常用方法有重量法和可见分光光度法（比色
法）等 特点 重量法： 一般少用。利用皂苷类成分的溶 解性进行提取、分离和纯化后得总皂苷， 恒重，称量。 可见分光光度法（比色法）：主要利用皂 苷类化合物与试剂反应显色后进行测定。
常用显色试剂
浓硫酸 高氯酸 醋酐-硫酸、硫酸-醋酸-冰醋酸、硫酸-冰醋酸 芳香醛-硫酸（高氯酸） 亚甲蓝 2,6-二丁基对甲酚
化学分析法
要求样品中总生物碱成分含量较高。 分析前应选择适宜方法（如采用氧化铝色谱
法）对样品进行净化处理。
主要采用重量法和容量法。
重量法
直接重量法 加试剂重量法（间接重量法）
容量法
酸碱滴定法 两相滴定法 酸性染料滴定法 络合滴定法 沉淀滴定法
分光光度法——单波长分光光度法
单波长光谱法测定时要求干扰成分在测定波
提取分离
分离纯化
酸溶碱沉
有机溶剂萃取
生物碱沉淀试剂沉淀
离子交换树脂交换
大孔吸附树脂吸附
检识测定
检 识
显色反应（少用） 定性鉴别 沉淀法 薄层色谱法 色谱法 纸色谱法（少用） 高效液相色谱法
测定——总生物碱
直接重量法 重量法 加试剂法 酸碱滴定法 化学法 容量法 两相滴定法（酸性染料滴定法） 络合滴定法 方法 直接测定法 分光光度法 酸性染料 加试剂法 酸类 磺酸类 其他
多用蒸发光散射检测器检测，重现性、灵敏度均 较好。
雷氏盐比色法
注：
测定时，可将沉淀溶于丙酮（或甲醇）直
接比色测定，换算生物碱的含量；也可精 密加入过量雷氏盐试剂，滤除生成的生物 碱雷氏盐沉淀，测定滤液中残存的过量雷 氏盐，间接计算生物碱含量。
雷氏盐比色法
注：
雷氏盐水溶液不稳定，宜用时新鲜配制。
沉淀反应宜在低温下进行。
雷氏盐丙酮溶液的吸光度值随时间会发生
雷氏盐比色法
原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定
量生成有色物质，可转溶于有机溶剂。
雷氏盐比色法
特点：
生物碱雷氏盐丙酮溶液所呈现的颜色是其
中硫氰酸铬铵部分，故吸收值与样品或溶 液无关。 根据测得的吸收值即可计算出样品的量， 不需要标准品对照及绘制标准曲线。 测定波长520~526nm（丙酮）或427nm （甲醇）。
苦味酸盐比色法
操作方法之二：
在pH4～5的缓冲溶液中加氯仿提取生物
碱苦味酸盐，氯仿液在360nm直接比色
测定。
苦味酸盐比色法
操作方法之三：
在pH为7的缓冲溶液中使生物碱与苦味
酸成盐，用氯仿提取改盐，再用pH为11 的缓冲溶液使其解离，苦味酸转溶于碱 水液中，比色测定，再换算出生物碱的 含量。
溶解性
颜色反应
泡沫反应
紫外可见吸收光谱
颜色反应
醋酐-浓硫酸反应 三氯醋酸反应 五氯化锑反应 芳香醛-浓硫酸（或高氯酸）反应
紫外-可见吸收光谱
皂苷类化合物大多无共轭系统，在近紫外区
无明显吸收，但与浓硫酸作用后在220～ 600nm范围可产生吸收。
提取分离
提取
醇（水）提取
碱水提取
亲脂性有机溶剂提取（酸水解）
提取分离
分离纯化
碱溶酸沉
正丁醇萃取
乙醚或丙酮沉淀
胆甾醇沉淀
大孔吸附树脂吸附
检识——化学检识
由于干扰杂质较多，样品本身颜色较深，专
属性不强，灵敏度不高，少用。
色谱检识
固定相：硅胶、氧化铝 显色剂：
10%硫酸乙醇液 5%磷钼酸乙醇液 三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液 氯磺酸-乙酸（1∶2） 碘蒸气 三氯乙酸 醋酐-浓硫酸
pH低，生物碱呈阳离子，而酸性染料为游
离状态；pH高，酸性染料呈阴离子，而生 物碱为游离状态。均不能形成离子对。
对离子对溶解度好且应无水，常用氯仿、
二氯甲烷等。
酸性染料比色法
备注：
常用的酸性染料有溴酚蓝、溴麝香草酚蓝、
溴甲酚绿、溴甲酚紫、甲基橙等。
苦味酸盐比色法
原理：利用生物碱在一定pH条件下与试剂定
异羟肟酸铁比色法
原理：羧基与羟胺反应生成异羟肟酸，再与
Fe3+生成紫红色配合物异羟肟酸铁
特点：含有酯键结构的生物碱，在碱性介质
中加热，酯键水解，产生游离羧基。
备注：适用于含有酯键的生物碱，但应注意
供试品溶液中必须不存在其他酯类或羧酸类 成分。
分光光度法——计算分光光度法
不经分离或化学反应直接用光谱学方法 排除共存组分干扰的计算分光光度法，如示 差分光光度法、双波长分光光度法、三波长 分光光度法、导数分光光度法和正交函数分 光光度法等，亦可应用于中药中总生物碱类 成分的含量测定，但由于中药组成成分过于 复杂，方法重现性较差。
得到游离生物碱的色谱峰。
备注
适用于有挥发性及对热稳定的生物碱测
定。
二、黄酮有效部位
提取分离
理化性质
溶解性
酸性
显色反应
紫外光谱特征
提取分离
提取
醇提取
水提取
碱水或碱性稀醇提取
提取分离
分离纯化
碱溶酸沉
有机溶剂萃取
聚酰胺柱色谱
大孔吸附树脂柱色谱
检识测定
化学鉴别法 检识 色谱鉴别法
定的影响。
离子交换色谱也可用于生物碱类成分的定
量分析，以阳离子交换树脂为固定相。
高效液相色谱法
特点
流动相的pH对分离有一定影响。流动相可
以用中性、碱性（加三乙胺）、酸性（加 磷酸、磷酸缓冲盐）或酸碱系统。
多用紫外检测器，也可用电化学检测器、
化学发光检测器等。
气相色谱法
特点
无论分析游离生物碱还是生物碱盐，均
定
备注：常用盐酸-镁粉反应等。
原理3：利用二氢黄酮在碱性下异构成查耳酮
测定
备注：常用于二氢黄酮的测定。最大吸收
峰红移，有利于消除干扰。
测定——单体黄酮
中药制剂中黄酮单体成分的含量测定多用色
谱法。
薄层扫描法 高效液相色谱法 脉冲极谱法
三、皂苷有效部位
提取分离
理化性质