果胶酶提取银耳多糖的研究
酶法提取金耳多糖的研究简报
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参 考 文 献
银耳多糖的制备及一般鉴定
银耳多糖的制备及一般鉴定【实验目的】1．学习真菌多糖类的分离、纯化原理。
2．学习多糖类物质的一般鉴定方法。
3. 掌握真菌多糖类粗提取的具体步骤及相应原理。
【实验原理】银耳是我国传统的一种珍贵药用真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效。
银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能、抗炎症和抗放射等作用。
提取与纯化动植物中存在的多糖或微生物胞内多糖，因其细胞或组织外大多有脂质包围，要使多糖释放出来，第一步就是去除表面脂质, 常用醇或醚回流脱脂。
第二步将脱脂后的残渣以水为主体的溶液提取多糖，这样提取得到的多糖提取液含有许多杂质。
杂质主要是无机盐，低分子量的有机物质及高分子量的蛋白质、木质素等。
第三步则要除去这些杂质，对于无机盐及低分子量的有机物质可用透析法、离子交换树脂或凝胶过滤法除去；对于大分子杂质可用酶消化(如蛋白酶．木质素酶) ，乙醇或丙酮等溶剂沉淀法或金属络合物法。
多糖提取液中除去蛋白质是一个很重要的步骤，常用方法有S e v a g e法、三氯乙酸法、酶解法、三氟三氯乙烷法等。
（1）S e v a g e法是除蛋白的经典方法，主要是利用蛋白质在氯仿中变性的特点，用氯仿:正丁醇=5:1或4:1的二元溶剂体系按1:5加入到多糖提取液中，混合物经剧烈振摇后离心，蛋白质与氯仿-正丁醇生成凝胶物而分离，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。
（2）三氯乙酸法利用三氯乙酸，在低温下搅拌加入到多糖提取液中，直到溶液不再继续混浊为止离心弃沉淀，即可达到脱蛋白的目的。
存在于溶液中的三氯乙酸经中和后，通过透析或超滤等方法除去。
（3）酶解法提取是根据植物细胞壁的构成，利用酶反应所具有高度专一性的特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分(纤维素、半纤维素和果胶质)水解或降解，破坏细胞壁结构，使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取目的，且有利于提高成分的提取率。
（4）三氟三氯乙烷法将三氯乙烷按1:1的比例加到多糖提取液中，在低温下搅拌约10min，离心得上层水层，水层继续用上述方法处理几次即得，此法效率较高，但因其易挥发，不宜大量应用。
银耳多糖提取工艺的研究
银耳多糖提取工艺的研究银耳多糖提取工艺研究摘要：银耳多糖是一种有着良好保健和滋补功效的天然多糖，它由多种多糖成分组成，如葡萄糖、半乳糖、聚糖等，是人体健康的重要来源。
银耳多糖提取工艺是提取和分离银耳中含有银耳多糖的主要过程，经由不同的提取方法可以从银耳中得到高纯粹的银耳多糖粉末。
本文从四个方面详细介绍了银耳多糖提取工艺的理论基础、主要提取方法、技术参数以及优点和缺点，以便为后续银耳多糖提取工艺改进提供参考。
关键词：银耳多糖；提取工艺；提取方法Abstract: Trametes versicolor polysaccharides are natural polysaccharides with good health care and tonic effects, which are composed of various polysaccharides, such as glucose, galactose, polysaccharides, etc., and are an important source of human health. The extraction process of Trametes versicolor polysaccharides is the main process to extract and separate Trametes versicolor polysaccharides from Trametes versicolor. The highly pure Trametes versicolor polysaccharides powder can be obtained from Trametes versicolor by different extraction methods. This paper introduces the theoretical basis, main extraction methods, technical parameters, advantages and disadvantages of Trametes versicolor polysaccharides extraction process in detail, in order to provide reference for the improvement of Trametes versicolor polysaccharides extraction process in the future.Keywords: Trametes versicolor polysaccharides; extraction process; extraction methods1、引言银耳多糖是一种良好的滋补和保健品，它是由多种多糖成分构成，其中葡萄糖、半乳糖、聚糖等是主要成分，具有强烈的收敛和胃黏膜防护作用，是常用的护肝、促进新陈代谢等健康保健产品的主要原料，是现在社会受到关注的重要天然产物之一。
实验一银耳多糖的制备及分析
实验一银耳多糖的制备及分析实验目的：1. 学习真菌多糖类的分离、纯化原理。
2. 掌握多糖类物质的提取及一般鉴定方法。
实验原理：银耳（Tremella fuciformis）是我国一种传统的珍贵的真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效。
银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能、抗炎症和抗放射等作用。
多糖（polysaccharides）的纯化方法很多，但必须根据目的物质的性质及条件选择合适的纯化方法。
而且往往用一种方法不易得到理想的结果，因此必要时应考虑合用几种方法。
1、乙醇沉淀法：乙醇沉淀法是制备黏多糖的最常用手段。
乙醇的加入，改变了溶液的极性，导致糖溶解度下降。
供乙醇沉淀的多糖溶液，其含多糖的浓度以1%----2%为佳。
加完酒精，搅拌数小时，以保证多糖完全沉淀。
沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水，真空干燥即可得疏松粉末状产品。
2、分级沉淀法：不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的黏多糖。
3、季铵盐络合法：黏多糖与一些阳离子表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和十六烷基氯化吡啶（CPC）等能形成季铵盐络合物。
这些络合物在低离子强度的水溶液中不溶解，在离子强度大时，这种络合物可以解离，溶解，释放。
本实验采用银耳子实体，经沸水抽提、氯仿—正丁醇法除蛋白质和乙醇沉淀分离可制得银耳多糖粗品，再用CTAB（溴化十六烷基三甲铵）络合法进一步精制可得银耳多糖精品。
然后进行定性和定量测定及杂质含量测定。
实验器材：1、器材（1）布氏漏斗 1 只（2）500ml抽滤瓶 1 只（3）250ml分液漏斗 1 只（4）100ml量筒 2 只（5）10ml量筒 1 只(6) 离心机 1 只（7）烧杯 2 只（8）水浴锅 1 只2、试剂（1）银耳实体：10g（2）2%CTAB:取2gCTAB溶于100ml蒸馏水中，摇匀备用（3）2mol/L 氢氧化钠溶液，6.2mol/L氯化钠溶液（4）氯仿—正丁醇溶液（4：1）（5）95%乙醇（6）甲苯胺（7）乙醚（8）无水乙醇（9）浓硫酸（10）a—萘酚（11）斐林试剂：A液：将34.5g硫酸铜（Cuso4.5H2O）溶于500ml水中B液：将125g氢氧化钠和137g酒石酸钾钠溶于500ml水中，临用时，将A B两液等量混匀。
银耳多糖提取实验报告
一、实验目的1. 学习银耳多糖的提取方法；2. 掌握银耳多糖的纯化技术；3. 分析银耳多糖的溶液性质。
二、实验原理银耳多糖是一种具有多种生物活性的大分子物质，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化衰老、降血糖血脂、抗凝血血栓、抗溃疡、促进蛋白质合成、抗病毒、促进神经细胞生长及改善记忆力等多方面的活性。
银耳多糖的提取主要是利用银耳中的多糖类物质，通过物理或化学方法将其从银耳中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：椴木银耳、2%的氢氧化钠、1%活性碳、5%的苯酚溶液、标准葡萄糖溶液、硫酸、乙醇、丙酮、乙醚、DEAE-C52、Sevage试剂、0.5mol·L-1盐酸、2mol·L-1 NaCl溶液。
2. 仪器：双重蒸馏水蒸馏器、超级恒温水浴、旋转蒸发仪RE52型、紫外可见分光光度计752N、低速大容量多管离心机LXJ-B型、透析袋、铝锅、搅拌器、天平、精密电子天平、电炉等。
四、实验方法1. 银耳多糖的提取（1）将椴木银耳洗净，浸泡于水中，使其充分吸水膨胀；（2）将膨胀后的银耳煮沸30分钟，以破坏细胞结构，释放出银耳多糖；（3）将煮沸后的银耳过滤，收集滤液；（4）向滤液中加入2%的氢氧化钠，调节pH值至7.0；（5）加入1%活性碳，搅拌30分钟，以去除杂质；（6）过滤，收集滤液；（7）向滤液中加入5%的苯酚溶液，以沉淀银耳多糖；（8）将沉淀物离心，收集沉淀物；（9）将沉淀物用乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂洗涤，去除杂质；（10）将洗涤后的沉淀物在60℃下烘干，得到银耳多糖。
2. 银耳多糖的纯化（1）将银耳多糖溶解于水中，配成一定浓度的溶液；（2）将溶液通过DEAE-C52层析柱，以去除杂质；（3）收集层析柱流出液，加入Sevage试剂，以去除杂质；（4）将流出液离心，收集沉淀物；（5）将沉淀物用乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂洗涤，去除杂质；（6）将洗涤后的沉淀物在60℃下烘干，得到纯化的银耳多糖。
银耳多糖制备实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握银耳多糖的提取和分离纯化方法。
2. 了解银耳多糖的理化性质和生物活性。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理银耳多糖（Tremella fuciformis polysaccharide，TFP）是一种具有多种生物活性的天然高分子化合物，主要存在于银耳子实体中。
银耳多糖具有提高免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗肿瘤等生理活性，在食品、医药、化妆品等领域具有广泛的应用前景。
本实验采用水提醇沉法提取银耳多糖，该方法操作简便、成本低、提取效率较高。
首先，将银耳子实体粉碎，用热水提取其中的多糖成分；然后，通过加入乙醇使多糖沉淀，再进行离心分离和洗涤，最后得到银耳多糖粗品。
三、实验材料与仪器1. 实验材料- 银耳子实体：市售优质银耳- 试剂：95%乙醇、蒸馏水、氢氧化钠、氯化钠、苯酚、硫酸、活性炭等- 仪器：粉碎机、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、离心机、分析天平、紫外可见分光光度计等2. 实验步骤（1）银耳子实体粉碎：将银耳子实体洗净、干燥、粉碎，过60目筛，备用。
（2）提取：取粉碎后的银耳子实体10g，加入100mL蒸馏水，于80℃恒温水浴锅中提取2小时。
（3）醇沉：将提取液冷却至室温，加入95%乙醇，使溶液中乙醇浓度达到70%，静置过夜。
（4）离心分离：将醇沉后的溶液以3000r/min离心15分钟，取沉淀。
（5）洗涤：用95%乙醇和蒸馏水分别洗涤沉淀3次，每次30分钟。
（6）干燥：将洗涤后的沉淀置于50℃真空干燥箱中干燥，得到银耳多糖粗品。
（7）银耳多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定银耳多糖含量。
四、实验结果与分析1. 银耳多糖提取率根据苯酚-硫酸法测定，银耳多糖提取率为4.5%。
2. 银耳多糖的理化性质（1）外观：银耳多糖粗品为白色粉末，无异味。
（2）溶解性：银耳多糖在水中溶解度较好，在乙醇、丙酮等有机溶剂中不溶。
（3）分子量：通过凝胶渗透色谱（GPC）测定，银耳多糖分子量约为10万。
酶解法提取银耳多糖的工艺及稳定性研究
银耳 多糖是 银耳 中的功能 性成 分 ，具 有活 性作
本 文对水 提法 、 碱提 法 、 酶解 法 ３ 种 提取 多糖 的 方法 进行 比较 ， 得 出最佳提 取方 法是 酶解 法 ， 并 对 影
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银耳多糖资源化学与应用
银耳多糖资源化学与应用摘要：本文介绍了银耳多糖的资源状况、结构特性、生物活性、提取纯化及检测研究进展，总结了银耳多糖的开发与利用现状，为今后银耳多糖的有效开发与深加工利用提供重要参考。
关键字：银耳多糖；生物活性；开发利用银耳又称白木耳、雪耳，被称为“菌中之冠”。
自古以来，银耳作为一种珍贵的食用菌和重要药材，被誉为“延年益寿之珍品”。
银耳含有丰富的多糖、蛋白质、矿物质、维生素等营养及功能成分，其中银耳多糖的含量约占银耳干重的60~70%，研究发现银耳多糖具有降血脂、降血糖、抗溃疡、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力、改善记忆力等功效[1-2]。
近年来，银耳多糖还被广泛应用于食品、保健品、化妆品及医药等领域。
本文对银耳多糖的资源状况、结构特性、生物活性、提取分离及检测研究进展进行了介绍，为银耳多糖的有效开发与深加工利用提供重要参考。
1 银耳的资源状况银耳是中温型菌类，主要生长于温带和亚热带地区。
我国是银耳的重要产区，其中以福建古田、四川通江的产量最大，另外在我国浙江、江西、台湾、内蒙古、西藏等地区均有分布。
我国于1958年在福建古田首创瓶栽法开始种银耳，1978年首创袋栽法开始推广种植，1983年开始利用棉籽壳大规模种植银耳。
随着制种和栽培技术的发展，银耳产量大幅度提高。
目前我国银耳主要采用层架式代料栽培，该方法原料易得、生长周期短、产量高、空间利用率高、管理方便，且所得银耳中氨基酸含量略高于段木栽培[3]。
我国是银耳生产及出口大国，银耳资源十分丰富，但有关银耳制种及栽培、银耳成分及价值、银耳加工及利用等方面都有待更进一步的深入研究。
2 结构特性与生物活性2.1 银耳多糖的结构特性银耳多糖是以α-(1→3)-D-甘露糖为主链的杂多糖，主链的2,4,6位上连接有葡萄糖、木糖、岩藻糖及普通糖醛酸等残基组成的侧链。
银耳多糖在子实体、孢子、发酵液和细胞壁中都有存在，其组成单糖有葡萄糖、甘露糖、果糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖和葡萄糖醛酸。
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目录摘要 (1)关键词 (1)Abstract (1)Key words (1)1 前言 (2)2 仪器、设备和试剂 (2)2.1 材料、与设备 (2)2.2试剂及溶液的配制 (2)3.方法及试验步骤 (2)3.1葡萄糖含量标准曲线的制作 (2)3.2 银耳多糖的提取方法 (3)3.3 银耳多糖含量的测定 (4)4 结果与分析 (4)4.1 银耳多糖含量测定结果 (4)4.2 酶解法提取银耳多糖结果分析 (5)5小结与讨论 (6)参考文献 (7)果胶酶提取银耳多糖的研究摘要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。
本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。
关键词：果胶酶；银耳多糖；酶解On Pectinase extract of Tremella polysaccharidesAbstract:Tremella polysaccharide extraction of hot water extraction method, the acid-base extraction and enzymatic extraction, enzymatic extraction with extraction time is short, under mild conditions. This test selected the study of enzymatic hydrolysis time and extraction time to explore the Tremella polysaccharides yield under different conditions, the results showed that the optimal conditions of the solution extract of Tremella polysaccharides: white fungus and water ratio 1g: 50ml join the pectinase concentration of 1%, the hydrolysis time was 45min, extraction time 60min.Key words: Pectinase; the Tremella polysaccharide; enzymatic1 前言银耳俗称白木耳，是一种高等真菌，属于有隔担子菌亚纲银耳科。
银耳作为药食两用的食用菌已久负盛名。
传统汉方医学认为，它具有润肺生津、滋阴养胃、益气和血和补脑强心等功效。
现代生物医学研究表明，银耳中多糖物质具有提高机体免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成，还可增强机体耐缺氧能力，清除自由基，抑制肿瘤等作用。
我国银耳资源丰富，为开发应用银耳多糖提供了有利条件。
近年来，有关银耳多糖的研究越来越多，但这些研究多为银耳多糖的化学特性和药理作用方面的研究，少有关于银耳中提取银耳多糖的研究。
目前银耳多糖的提取方法多为热水浸提法或酸碱法提取，但热水浸提法耗时过长，且收率较底，费时费力，因此不适合大规模的工业生产，而酸碱法提取虽然提取时间较短，却会破坏银耳多糖立体旋光活性结构，降低甚至失去银耳多糖的生物活性，使提取到的银耳多糖药用效果大大下降。
因此，建立高效、经济的银耳多糖提取方法是具有积极意义的。
本试验主要研究使用果胶酶酶解银耳，热水提取的技术来提取银耳多糖的方法。
且如今生物工程工艺发展迅速，各种生物制品价格也不断下降，这为用酶解法提取银耳多糖提供了方向和可行性。
用酶解法提取银耳多糖不仅能大大缩短单纯用热水法提取的时间，也不会像酸碱法那样破坏银耳多糖的生物活性。
因此找出最适的酶解银耳提取银耳多糖的条件是具有实用和良好的现实意义的。
2 仪器、设备和试剂2.1 材料、与设备101型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）YP202N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）HH系列恒温水浴锅（苏州金坛中大仪器厂）电子万用炉（北京市永光明医疗仪器厂）TDZ5-WS型台式低俗离心机（长沙湘麓离心机仪器有限公司）722E型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）2.2试剂及溶液的配制银耳(市售)葡萄糖(分析纯):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中，定容至1000ml;果胶酶：按100ml:1g加入果胶酶苯酚（分析纯）：精确量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中，定容至100ml;浓硫酸(发烟硫酸)3.方法及试验步骤3.1葡萄糖含量标准曲线的制作取5支洁净的试管，分别标记为1、2、3、4、5号管，依次加入标准糖溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和水1.0mL、0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL，再分别加入苯酚试剂1mL，浓硫酸5mL，混匀，室温放置30min，冷却后，在490nm 波长处测定吸光值，绘制含糖量标准曲线。
糖含量测定标准曲线制作管号 1 2 3 4 5标准糖溶液0 0.2 0.4 0.6 0.8/mL蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2苯酚试剂/mL 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0浓硫酸/mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0糖含量标准曲线A值测定结果管号 1 2 3 4 5 糖含量/mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 A值0 0.228 0.425 0.663 0.980糖含量标准曲线得到糖含量标准曲线为y = 1.1975x - 0.0198 （糖含量为横坐标，A值为纵坐标）方程的R2为0.992，具有较高拟合度，可以作为糖含量的标准曲线。
3.2 银耳多糖的提取方法取市售银耳适量，洗净，70℃烘干后，破碎成粉末状，称取粉末0.5g（2%），果胶酶0.25g （1%），同时加入蒸馏水25mL，迅速置于45℃水浴锅中酶解，3个样品为一组，第一组酶解30min，第二组酶解45min，第三组酶解60min。
酶解后迅速升温至98℃将酶灭活，然后每组样品分别于98℃水浴中保温浸提30min,45min,60min，浸提完成后置于冷水中冷却至室温，然后于4500rpm离心分离10min，最后取上清液待用。
处理条件编号表3.3 银耳多糖含量的测定银耳浸提液离心后，分别取上清液1ml,加水19ml,即稀释20倍，取银耳浸提稀释液1mL 于一洁净试管中，再加入苯酚试液1.0mL，浓硫酸5mL，混匀，室温放置30min，冷却后，于490nm处测定吸光度。
4 结果与分析4.1 银耳多糖含量测定结果测定结果与提取液实际糖含量结果银耳多糖含量A490管号A值稀释液糖含量/mg 提取液实际糖含量/mg1 0.350 0.31 154.42 0.405 0.35 177.43 0.464 0.40 202.04 0.377 0.33 165.75 0.455 0.40 198.26 0.523 0.45 226.67 0.385 0.34 169.08 0.460 0.40 200.39 0.530 0.46 229.6银耳多糖含量结果变化图由上图可知，固定酶解时间时，提高提取时间可显著提高提取效果，改变酶解时间时，提取效果有提高，但不大，且从45min增加到60min增加不显著。
但总体提取效果与目前银耳中提取银耳多糖的主要工艺相比，提取效果得到了较大的提升，且比热水直接提取法所用的时间明显缩短，故用酶解法从银耳中提取银耳多糖是一种优于传统提取工艺的提取方法。
4.2 酶解法提取银耳多糖结果分析由表可知，用酶解法提取银耳多糖，不同的酶解时间和热水浸提时间对银耳多糖的提取率有明显的差异。
酶解时间从30到45min提取效果有增加，但从45到60min提取效果几乎不在增加，因此可以判断在45min左右时银耳已酶解充分，为节约时间，增加银耳多糖总提取效率，将酶解时间定为45min比较合适。
与酶解时间相比，增加提取时间对提取效果的增加大于酶解时间的影响，且随提取时间增加显著提升，但在提取60min时的提取量已接近银耳中银耳多糖的理论含量，因此可以判断再增加提取时间提取量的增加也不显著，且会大大增加总提取工艺时间，影响提取工艺效率，对工业化生产银耳多糖不利，而且长时间高温提取，也会对银耳多糖活性产生影响，因此，综合考虑，将提取时间定为60min比较合适。
综上所诉，酶解45min，热水浸提60min的银耳多糖提取工艺不仅有较理想的提取率，还可以尽可能的缩短提取时间，减少人力和时间的浪费，有利于大规模生产银耳多糖工业的发展。
酶解时间和热水浸提时间对多糖提取率的影响5小结与讨论本试验采用果胶酶酶解银耳的方法提取银耳多糖。
试验讨论了不同酶解时间与不同提取时间对提取效果的影响，最终确定最佳提取工艺为：在45℃下，用1%果胶酶酶解，水与银耳比例为100ml:1g,酶解时间为45min，然后于98℃热水浴中浸提60min。
用此法提取银耳多糖，提取率可达40% ，远远高于传统的银耳多糖提取工艺。
相比传统工艺，果胶酶提取银耳多糖不仅有较高的提取率，还可以明显缩短提取的时间，更有利于银耳多糖提取大规模工业化的发展。
随着社会的发展，银耳多糖的生物功效越来越受到人们的重视，其需求也在日益增加，故酶解法提取银耳多糖的工艺有着社会和经济的双重效益。
银耳多糖的生物活性在长时间高温环境和酸碱性条件下容易受到破坏，酶解法提取环境温和，且提取时间较短，能较好的保留银耳多糖的生物活性。
虽然我国银耳产量高，但银耳仍然是有限的，酶解法能很好的保留银耳多糖的生物活性，且提取效率很高，故该工艺条件对银耳资源的充分利用有明显的优势。
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