实验室常见微生物
BSL-1、BSL-2病原微生物实验室范围
附件1：BSL-1、BSL-2病原微生物实验室范围病原微生物实验室分级应根据卫生部印发的《人间传染的病原微生物名录》病原微生物危害程度，并结合同一病原微生物不同实验活动进行分类（见表1、表2）。
请各实验室根据卫生部《人间传染的病原微生物名录》及本实验室从事的实验活动进行实验室备案。
一、病毒二、细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体、真菌附件2：上海市BSL-1、BSL-2病原微生物实验室备案登记表附件3：BSL-1实验室基本要求附件4：BSL-2实验室基本要求附件5：附件6：实验室涉及病原微生物检验项目附件7：病原微生物实验室生物安全责任承诺书（样张）区（县）卫生局：本申请人申请病原微生物实验室备案，对于卫生行政部门告知的内容已清楚、全面了解，将认真履行告知的义务，接受卫生行政部门的监督管理，并郑重作出如下承诺：1、本单位所报备案申请材料中所提交的所有材料是准确的、真实的、有效的。
2、在实验室病原微生物检测工作中，自觉遵守《传染病防治法》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》及相关的规章、规范性文件和技术标准、规范的规定及病原微生物实验室管理的要求。
3、建立健全法定代表人责任制，实施病原微生物实验室安全制度，实行操作人员培训上岗制度4、根据核准的内容从事病原微生物检测工作，不擅自改变病原微生物检测项目范围。
本申请人保证：如违反了国家有关病原微生物实验室生物安全管理的法律、法规、规章、标准、规范、规范性文件的规定，本申请人将承担由此产生的法律责任。
承诺人（签章）张三承诺日期：年月日附件8：上海市病原微生物实验室备案凭证（样张）（BSL-2）编号：___字第号单位名称：单位地址：法定代表人（负责人）：实验室负责人涉及病原微生物操作项目:备注：BSL-2实验室不得从事高致病性病原微生物的活动发证机关（盖章）：年月日- 11 -。
微生物实验室的分类及要求
▪ 二、设施和设备要求： ▪ 1.实验室应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计
和设施。
▪ 2.实验室的墙壁、天花板和地面应平整、不渗水、 易清洁并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑， 不得铺设地毯。
▪ 3.实验台面能防水、耐腐蚀、耐热。实验台和橱柜 应牢固稳定，彼此之间保持一定距离，以便于清洁。
这类微生物通常对个体危害中等，群体危害程序较 轻，一般不会导致人和动物死亡，但也存在个例。
第3类病原微生物是最为常见的导致食品中毒的危 害微生物，也是食品实验室重点检测的目标，这类 微生物包括：沙门氏菌、单增李氏菌、空肠弯曲杆 菌、布鲁氏杆菌、葡萄球菌等。
第4类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人 类或者动物疾病的微生物。
微生物实验室的分类及要求
大家好
1
一、微生物实验室的生物安全等级
我国在《病原微生物实验室生物安全管理条例》第七条 中根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害 程度，将病原微生物分为4类：
第1类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾 病，对个体、群体危害严重，无有效的疫苗防治的微生物： 如霍乱、鼠疫、埃博拉病毒等。
BSL-1
BSL-1
▪ 2.细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺 旋体、真菌类实验室：
实验活动所需生物安全实验室级别
病原微生物危害程度 大量活菌操 样本检测 非感染性材料的操作
作
第二级
—— BSL-2
BSL-1
第三级
BSL-要求
▪ 一、选址布局：
二、微生物实验室的分类
1.病毒类实验室
实验活动所需生物安全实验室级别
微生物学实验室常用试剂与培养基
微生物学实验室常用试剂与培养基第一节常用试剂及其使用方法一、诊断用纸片⑴杆菌肽纸片（0.04U/片）：抑菌圈>10mm为敏感。
质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。
⑵ SMZ纸片（1.25μg/片、23.75μg/片）：出现抑菌圈即为敏感。
质控菌株：D群链球菌阳性， A群链球菌阴性。
⑶新生霉素纸片（5.0μg/片）：抑菌圈≥16mm为敏感。
质控菌株：表皮葡萄球菌阳性，腐生葡萄球菌阴性。
⑷O129纸片、奥普托欣（Optochin）纸片：参见第五节《生化试验培养基》。
二、诊断用血清1.沙门菌属诊断血清⑴ A-F群O多价诊断血清。
⑵特异O群因子诊断血清：常用的有O2，O4，O7，O9，O10诊断血清。
⑶特异H因子诊断血清常用的有Ha，Hb，Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi 因子诊断血清。
2.志贺菌属诊断血清志贺菌属4种多价血清：痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志贺菌多价血清及分型血清（1～6型），宋内志贺菌诊断血清，鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。
3.致病性大肠埃希菌诊断血清肠致病性大肠埃希菌（EPEC）诊断血清，产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）诊断血清，肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）诊断血清，肠出血性大肠埃希菌（EHEC）诊断血清O157： H 7。
4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清6.链球菌分类诊断血清7.肺炎链球菌诊断血清8.耶尔森菌诊断血清三、常用染色液1.革兰染色液⑴结晶紫溶液A液：结晶紫20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸铵0.8g，蒸馏水80 ml。
染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
⑵碘液:碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。
将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。
最后补足水量。
也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
一级实验室涉及的病原微生物种类
一级实验室涉及的病原微生物种类一级实验室是指对某些高致病性、具有传染性且可能对人类和动物健康造成严重威胁的病原微生物进行研究和处理的实验室级别。
这些病原微生物包括了多种类型，下面将为大家详细列举和介绍一些常见的一级实验室涉及的病原微生物种类。
1. 鼠疫菌（Yersinia pestis）：鼠疫菌是引起鼠疫的致病菌，主要通过啮齿动物及跳蚤传播给人类。
它可以引发肺鼠疫、腺鼠疫和败血症等严重感染，具有较高的致死率。
2. 炭疽菌（Bacillus anthracis）：炭疽菌是引起炭疽病的致病菌，一种广泛分布于自然界的孢子菌。
炭疽病主要通过接触和吸入感染，症状严重且迅速恶化，可导致内脏和皮肤炭疽等疾病甚至死亡。
3. 结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）：结核分枝杆菌是引起结核病的致病菌，主要通过空气飞沫传播。
结核病会侵害肺部以及其他身体器官，严重影响人类的健康，所以一级实验室对其进行研究和处理具有重要意义。
4. 乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus）：乙型脑炎病毒是一种通过蚊子传播的病毒，主要引起炎症性脑膜脑炎。
该疾病在亚洲地区流行，严重威胁人们的生命健康。
5. 病毒性出血热：一级实验室也涉及多种病毒性出血热的病原微生物，如埃博拉病毒、拉沙病毒、香烟草花叶病毒等。
这些病原微生物引起的出血热具有极高的致死率，严重威胁人类的健康和生命。
总之，一级实验室涉及的病原微生物种类繁多，具有不同的传播途径和致病性，它们对人类和动物健康带来巨大威胁。
通过对这些病原微生物的研究和处理，能够深入了解它们的生物学特性，发展有效的预防、防控措施，为保护和维护公共卫生安全提供重要依据。
同时，一级实验室的建设和运行要严格按照相关规范和标准，确保实验环境的安全和病原微生物的控制，以最大限度地降低潜在危险对人类健康的风险。
病原微生物实验室生物安全培训
病原微生物实验室生物安全培训在当今的医学和科学研究领域，病原微生物实验室扮演着至关重要的角色。
然而，这些实验室中所处理的病原微生物可能对人类健康和环境造成严重威胁。
因此，病原微生物实验室生物安全培训成为了保障实验室工作人员安全、防止病原微生物泄漏以及确保实验研究顺利进行的关键环节。
一、病原微生物实验室生物安全的重要性病原微生物实验室是探索疾病机制、研发诊断方法和治疗策略的重要场所。
但同时，这里也是潜在的生物安全风险源。
实验室中的病原微生物如果不慎泄漏，可能引发传染病的爆发流行，对公众健康造成巨大危害。
例如，SARS 病毒、埃博拉病毒等的研究都需要在严格的生物安全条件下进行。
此外，实验室工作人员长期暴露在病原微生物环境中，如果缺乏必要的生物安全知识和防护措施，自身感染的风险也会大大增加。
这不仅会影响个人的身体健康，还可能导致实验室工作的中断，影响科研和医疗工作的进展。
二、病原微生物的分类及危害病原微生物根据其危害程度通常被分为四类。
一类病原微生物是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。
这类微生物通常具有极高的传染性和致病性，如天花病毒。
二类病原微生物是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
例如，艾滋病病毒、高致病性禽流感病毒等。
三类病原微生物是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。
常见的有流感病毒、乙型肝炎病毒等。
四类病原微生物是指通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。
不同类别的病原微生物具有不同的危害程度和传播方式。
了解它们的特点和危害，是进行生物安全防护的基础。
三、实验室生物安全防护等级为了有效防护病原微生物的危害，实验室根据所处理病原微生物的危险程度分为四个生物安全防护等级。
微生物实验室常见20种培养基配方大全
微生物实验室常见20种培养基配方大全1.肉汤培养基成分：牛肉膏或牛肉汤500克，葡萄糖10克，胰蛋白胨10克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于各种需有机氮源的细菌的培养。
2.十倍腌盐水成分：NaCl300克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于耐盐真菌和嗜盐细菌的培养。
3.果胶培养基成分：果胶5克，葡萄糖5克，NaNO32克，K2HPO40.2克，MgSO4·7H2O0.1克，CaCO30.02克，FeSO4·7H2O0.01克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于果胶酶产生菌的培养。
4.大肠杆菌选择性培养基成分：土豆提取物4克，蛋白胨2克，乳糖10克，NaCl10克，胆盐0.75克，碱性蓝2克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于分离大肠杆菌的选择性培养。
5.卡波培养基成分：石蜡300克，肉浸膏100克，大豆酪蛋白胨20克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于致病真菌的培养。
6. Nutrient Broth培养基成分：肉膏1克，酵母提取物2克，葡萄糖2克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于细菌和真菌的常规培养。
7. Luria-Bertani（LB）培养基成分：酵母提取物5克，酪蛋白胨10克，NaCl10克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于E. coli等细菌的培养。
8. Sabouraud葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖40克，醇20克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于真菌的培养。
9. MacConkey琼脂培养基成分：鱼精膏20克，胆盐胆红素15克，玛琪琼脂25克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于肠道杆菌的培养、分离。
10.马加提琼脂培养基成分：马加提琼脂50克，蒸馏水1000毫升。
用途：适用于细菌、酵母和霉菌的常规培养。
11.酵母醇葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖20克，醇30克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。
2.1微生物的实验室培养
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个 椭圆形的休眠体，叫做芽孢。 特点：对恶劣的环境，如干旱、高温等，有很强 的抵抗力。 在生物体的一定部位产 生一种特殊的生殖细胞叫孢 子。孢子的特点是能直接长 成新个体。
无菌技术： 分类 定义 方法
灭菌法
物理法：热力、辐射、微波、 杀灭一切微生物 等离子体 化学法：醛类、烷化剂
无机盐功能 构成微生物细胞的组成成分 调解微生物细胞的渗透压， PH值和氧化还原电 位 有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源 构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、 Ca、K是多种酶的激活剂
（4）特殊营养：
微生物生长不可缺少的微量有机物质，维生素、碱基等 （生长因子）。（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）
病毒: 微生物
一般指肉眼看 不见的生物
无细胞结构 原核细胞
原核生物: 细菌、蓝藻 原生生物：单细胞的动植物
如草履虫、单细胞藻类等
真菌: 如酵母菌
真核细胞
一、培养基
微生物生存的环境和营养物质 在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要 1、培养基的种类 的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。 液体培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种 例如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、 指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种 半固体培养基 据物理性质分 放线菌的生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又 类的微生物。例如，在培养基中加入伊红和美 如，在培养基中加入高浓度的食盐可以抑制多 固体培养基 常用于工业生产 蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在 种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生 大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产 长。 常用于观察微生物的 天然培养基 物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并 运动、鉴定菌种 据化学成分分 用于微生物的分离、计数 带有金属光泽。 合成培养基 常用于工业生产 选择培养基 据用途分 鉴别培养基常用于分类、鉴定
微生物实验室
微生物实验室
微生物实验室是一种专门用于研究微物种（微生物）的
实验室。
其主要研究对象包括细菌、真菌、病毒等微生物。
微生物实验室的主要工作包括微生物检测、微生物培养、微生物鉴定和抗菌药物敏感性试验等。
1.微生物检测
微生物检测是微生物实验室的核心工作，其目的是为了
确认样品是否被感染了微生物，并对其进行进一步的研究。
微生物检测的方法有多种，包括微生物学、免疫学、分子生物学等。
其中，微生物学检测是最常用的方法之一，其主要包括观察法、涂片法、染色法、培养法等。
2.微生物培养
微生物的培养是微生物实验室的另一项主要工作。
在微
生物实验室中，为了培养出不同的微生物，人们需要使用不同的培养基。
常用的培养基包括普通营养琼脂、牛肠蓝晶白琼脂、甘酸盐琼脂、马铃薯蔗糖琼脂等。
在培养的过程中，需要注意无菌操作，以保证培养物的纯度。
3.微生物鉴定
微生物鉴定是在微生物实验室进行的工作，其目的是为
了确定所检测到的微生物的种类。
微生物鉴定依靠的是一系列的生物学、生化学和免疫学特性。
常用的鉴定方法包括生物学特性鉴定法、生化特性鉴定法和免疫学鉴定法等。
4.抗菌药物敏感性试验
抗菌药物敏感性试验是微生物实验室进行的另一项重要
工作。
其主要目的是为了确定某一微生物对某种抗菌药物的敏感性。
常用的抗菌药物敏感性试验方法包括扩散法、微孔稀释法、板上扩散法等。
总之，微生物实验室是一个集微生物检测、微生物培养、微生物鉴定和抗菌药物敏感性试验于一体的综合实验室，其在医学、环境、农业等多个领域具有广泛的应用价值。
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• 4）过氧化氢酶试验 取上述平板上生长的 菌落，置洁净玻片上，滴加3%过氧化氢试 液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢 酶试验阳性，否则为阴性。
• 结果判断：若哥伦比亚琼脂培养基平板上 有厌氧杆菌生长（有或无芽孢），且过氧 化氢酶反应阴性的，应进一步进行适宜的 鉴定试验，确证是否为梭菌；如果哥伦比 亚琼脂培养基平板上没有厌氧杆菌生长， 或虽有相符或疑似的菌落生长但鉴定结果 为阴性，或过氧化氢酶反应阳性，判供试 品未检出梭菌。
• 4、2015版药典 • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30〜 35℃培养18〜24小时。 • 2）RV沙门增菌液体培养基中，30〜35℃培 养18〜24小时。 • 3）取少量R V沙门菌增菌液体培养物划线 接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 平板上，30〜35℃ ：培养18〜48小时。
• 4）用接种针挑选疑似菌落于三糖铁琼脂培 养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种， 培养18〜24小时。或采用其他适宜方法进 一步鉴定。
• 结果判断：若溴化十六烷基三甲铵琼脂培 养基平板上有菌落生长，且氧化酶试验阳 性，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证 是否为铜绿假单胞菌。如果平板上没有菌 落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴 性，或氧化酶试验阴性，判供试品未检出 铜绿假单胞菌。
第三章 葡萄球菌属
• 金黄色葡萄球菌： • 革兰氏阳性球菌的代表，细胞壁含90%的肽 聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构 比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着 后不被酒精脱色故而呈现紫色。 • 金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的 渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄 球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了， 于是发现了青霉素。
• 2、致病性 • 可以侵犯粘膜、皮肤以及其他器官。主要 在机体抵抗力减弱的时候入侵，比如长期 大量应用激素，或者免疫缺陷疾病（艾 滋）。 • 3、鉴别检查（2015版药典） • 1）取相当于lg 或lml供试品的供试液，接 种至适宜体积(经方法适用性试验确定）的 沙氏葡萄糖液体培养基中，混匀，30〜 35℃培养3〜5天。
• 二 黑曲霉 • 是曲霉属真菌中的一个常见种。广泛分布 于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中。 可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、 果胶酶。 • 1、生物学特性 • 多细胞。
• • • • •
2、致病性 不是常见的致病菌。 3、培养 1）菌液制备 取黑曲霉的新鲜培养物加人3〜5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋 白胨缓冲液或0.9%无菌氣化钠溶液，将孢 子洗脱。
• 一 白色念珠菌 • 属于假丝酵母菌属，也称为白假丝酵母， 是单细胞真菌类，但是细胞在增殖的过程 中连在一起，形成念珠状，故称为念珠菌。 • 1、生物学特性 • 菌体圆形或卵圆形，2×4μm，以出芽方式 进行繁殖，孢子伸长成芽管，不与母体脱 离，形成较长的假菌丝。 • 革兰氏染色阳性，但着色不均匀。
• 2）取上述预培养物划线接种于沙氏葡萄糖 琼脂培养基平板上，30〜35℃培养24〜4 8 小时。 • 3）挑取疑似菌落接种至念珠菌显色培养基 平板上，培养24〜48小时(必要时延长至7 2小时），或采用其他适宜方法进一步鉴定。 • 白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养基上生 长的菌落呈乳白色，偶见淡黄色，表面光 滑有浓酵母气味，培养时间稍久则菌落增 大，颜色变深、质地变硬或有皱褶。
二、沙门菌 • 沙门菌属是一类寄生在人类和动物肠道中， 生化反应和抗原结构相关的革兰氏阴性杆 菌。分为肠道沙门菌和邦戈沙门菌两个种。
• 1、生物学特性 • 大小0.6-1.0×2-4μm，多数周身鞭毛，一 般无荚膜，均无芽孢。 • 不发酵乳糖或蔗糖，对葡萄糖、麦芽糖和 甘露糖发酵，伤寒沙门菌不产气。 • 2、致病性：内毒素引起宿主体温升高，白 细胞数下降等；肠毒素引起的腹泻。
• 4、2015版药典 • 1)取相当于lg 或lml供试品的供试液2份， 其中1份置8℃保温10分钟后迅速冷却。 • 2）将上述2份供试液分别接种至适宜体积 (经方法适用性试验确定）的梭菌增菌培养 基中，置厌氧条件下30〜35℃培养48小时。 • 3）取上述每一培养物少量，分别涂抹接种 于哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条 • 件下30〜35℃培养48〜72小时。
第二章 假单胞菌属
• 铜绿假单胞菌 • 俗称绿脓杆菌，由于在生长过程中产生绿 色水溶性色素，感染后使脓汁或敷料出现 绿色而得名。 • 1、生物学特性 • 大小为0.5-1.0×1.5-3.0μm，直或微弯的 杆菌，无芽胞，有荚膜，需氧，革兰氏染 色阴性。
• 2、致病性：经常引起手术切口、烧伤组织 感染，表现为局部化脓性炎症。 • 3、鉴别检查 • 氧化酶试验：将洁净滤纸片置于平皿内， 用无菌玻棒取上述平板上生长的菌落涂于 滤纸片上，滴加新配制的1%二盐酸N ,N-二 甲基对苯二胺试液，在30秒内若培养物呈 粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳 性，否则为阴性。
• 2）取上述培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼 脂培养基平板上，30〜35℃培养18〜72小时。 • 结果判断：甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上有 黄色菌落或外周有黄色环的白色菌落生长，应 进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否 为金黄色葡萄球菌；若平板上没有与上述形态 特征相符或疑似的菌落生长，或虽有相符或疑 似的菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未 检出金黄色葡萄球菌。
• 甲基红试验：细菌（如大肠埃希菌）发酵 葡萄糖产酸，使培养基PH下降至4.2或更低， 则为甲基红阳性。 • VP试验：由Voges和Proskauer两位学者创 建，故有此学名。 • 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分 解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧 成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被 空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+） 反应。 大肠埃希菌v-p试验阴性。
• 4、2015版药典 • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，混匀。30〜 35℃：培养18〜24小时。 • 2）上述培养物划线接种于溴化十六烷基三 甲铵琼脂培养基平板上，30〜35℃培养18 〜72小时。 • 3）取上述平板上生长的菌落进行氧化酶试 验，或采用其他适宜方法进一步鉴定。 • PS：2010版药典要进行绿脓菌素试验。
实验室常见微生物
李继辉
第一章 肠杆菌科
• 一、大肠埃希菌 • 俗称大肠杆菌，属于埃希菌属。在婴儿出 生后数小时即进入肠道，并终身伴随。当 宿主免疫力下降或菌侵入肠外组织或器官 （如尿道）时，可引起肠外感染。某些特 殊菌种能导致腹泻。 • 常作为粪便污染的检测指标。 • 革兰氏染色阴性。
• 1、生物学特性 • 大小：0.4-0.7×1-3μm。周身鞭毛。兼性 厌氧。
• 3、鉴别检查 • 三糖铁（TSI）琼脂试验： • 可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产 气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。 • 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因 量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化， 加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱 性产物，故使斜面后来又变红，底部由于 是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
第五章 真菌
• 真菌（fungus）是一种真核细胞型微生物。 有典型的细胞核和完善的细胞器。不含叶 绿素、无根、茎、叶的分化。 • 真菌可分为单细胞和多细胞两类。 • 单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称酵母菌 （yeast）。 • 多细胞真菌大多长出菌丝和孢子，交织成 团，称丝状菌，又称霉菌（mold）。
• 结果判断：若沙氏葡萄糖琼脂培养基平板 上有疑似菌落生长，且疑似菌在念珠菌显 色培养基平板上生长的菌落呈阳性反应， • 应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否 为白色念珠菌；若沙氏葡萄糖琼脂培养基 平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但 • 鉴定结果为阴性，或疑似菌在念珠菌显色 培养基平板上生长的菌落呈阴性反应，判 供试品未检出白色念珠菌。
第六章 枯草芽孢杆菌
• 枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属的一种。单 个细胞0.7-0.8×2-3微米，着色均匀。无 荚膜，周身鞭毛，能运动。 • 革兰氏阳性菌，芽孢0.6-0.9×1.0-1.5微 米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏， 芽孢形成后菌体不膨大。（与梭菌区别） • 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色， 在液体培养基中生长时，常形成皱醭。 • 需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉， 分解色氨酸形成吲哚。
• 2、鉴别检查 • 能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气。 • 吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐（IMVIC）试 验结果为“++--”。 • MUG(4-甲基伞形酮葡糖苷酸）：4-甲基伞 形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。 • 吲哚（靛基质）试验：指有些细菌如大肠 埃希菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲 哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基 苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则 为吲哚试验阳性。
• 结果判断：若木糖赖氨酸脱氧胆酸的斜面为红色、底层为黄色， • 或斜面黄色、底层黄色或黑色，应进一步进行 适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果平 板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结 • 果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红 色、底层未见黄色（或斜面黄色、底层未见黄 色或黑色，判供试品未检出沙门菌。
• 枸橼酸盐利用试验：是以枸橼酸钠为唯一 碳源、PH值7.0的培养基上，产气杆菌分解 枸橼酸钠产生碳酸盐，使培养基由中性变 为碱性，培养基中指示剂溴麝香草酚蓝 (BTB)由浅绿色变为深蓝色，此为枸橼酸盐 利用试验阳性。大肠杆菌因不能利用枸橼 酸盐，此试验为阴性反应。
• 3、2015版药典： • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35 ℃培养 18〜24小时； • 2）麦康凯液体培养基中，42〜44 ℃培养24〜 48小时； • 3）物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上， 30〜35 ℃培养18〜72小时。 • 结果判断：若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落 生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验， 确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基 平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定 结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。