基因工程考试 质粒的分子生物学与质粒载体
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质粒及质粒载体复习题及答案一、填空题1、基因工程中有三种主要类型的载体：质粒DNA、病毒DNA、质粒和病毒DNA杂合体。
2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同。
SC DNA的泳动速度最快，OC DNA泳动速度最慢，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。
3.就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体也必须包括三个部分：复制子（含有复制起点）、选择标记（主要是抗性基因）、克隆位点（便于外源DNA插入）。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子质量。
4.如果两个质粒不能稳定地共存于一个寄主细胞中，则属于同一个不亲和群，这是因为它们的复制机制相同所致。
5.质粒拷贝数是指细胞中质粒的份数同染色体的比值，即质粒/染色体。
6.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫质粒消除（或治愈）。
7.PBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl ,它的四环素抗性基因来自于pSClOl ,它的氨节青霉素抗性基因来自于PSE2124 （R质粒）。
8.YAC的最大容载能力是1000~2000kb , BAC载体的最大容载能力是300kb 。
9.把那些没有可检测表型的质粒称为隐蔽性质粒。
10.pUC18质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过PBR322和M13两种质粒改造而来。
它的复制子来自pMBl , Amp抗性基因则是来自转座子。
11・Ti质粒是自然界存在的植物基因工程的天然载体。
12.既能在夙coll又能在S・cerevisiae中自我复制的载体DNA称为穿梭载体。
二、选项题（单选或多选）1.下面关于松弛型质粒（relaxed plasmid）性质的描述中，（C ）是不正确的。
的制约, 而有较多的拷贝数A.质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制B.可以在氯霉素作用下进行扩增C.通常具有较少的拷贝数D.同严紧型质粒整合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子2.基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有（B ）被视为用作基因工程载体的天然质粒载体。
质粒载体名词解释
质粒载体名词解释
质粒载体是分子生物学中非常重要的一种实验工具。
它们制造了一种由DNA链组成的小环状结构，这种结构可以被用来储存和传输遗传物质。
这类单个元件称为“质粒”，它们是一种可以携带遗传物质的载体，以便转移到其他生物体中。
质粒载体可以在生物体内或外部制备，最常见的质粒载体类型包括重组DNA质粒、脱氧核糖核酸质粒和反转录质粒。
重组DNA质粒可以携带大量的DNA，是植物转基因的常用载体。
脱氧核糖核酸质粒和反转录质粒则可以把复杂的基因表达转换成活性的蛋白质，在细胞分裂、凋亡等过程中扮演重要角色。
质粒载体一般由三个部分组成：表达载体、质粒引物和抗性基因。
表达载体是携带转录组分子的大分子，质粒引物用来引导特定的DNA 片段，而抗性基因是防止质粒中的DNA被非特异性酶切的基因。
质粒载体的应用非常广泛，它们可以用来传输特定的DNA片段，影响基因表达，从而改变植物的外观、抵抗传染病等。
此外，质粒载体也可以用来制备特异性的抗原，用于诊断和治疗许多疾病，其中包括癌症、HIV等。
由于质粒载体的巨大潜力，现在全球科学家正在努力开发出更好的质粒载体，以帮助实现从植物转基因到药物新研发的宏伟目标。
通过不断改进分子技术，期望借助质粒载体能够研发出更多有效的药物和抗疾病的新型疫苗，从而提高人类的健康水平。
总之，质粒载体是一种重要的分子生物学实验工具，它可以携带
遗传物质并转移到其他生物体中，这样就能够产生新的基因表达，从而改变植物的外观和抵抗力。
由于质粒载体的多种功能，它已经成为实现植物转基因和新药研发的核心技术，未来仍将继续发挥重要作用。
基因工程-载体
常用的质粒载体 pUC系列
University of California的J. Messing和J. Vieria于1978年，在pBR322的基础上改造 而成。属正选择载体。如pUC7、pUC8、pUC9、pUC10、pUC11、pUC18、pUC19。 1、元件来源 复制起点ori---pBR322的 ori Ampr 基因---pBR322的Ampr基因 大肠杆菌β-半乳糖基因（lacZ’基因） 多克隆位点（MCS）区段---位于lacZ’基因 中的靠近5`-端。 2、长度 约2.7kb
Apr转化子 Tcr转化子
影印到Tc平板上 影印到Ap平板上
Apr TcS为重组子 ApS Tcr为重组子
Apr Tcr为原载体
即为非重组子
Ampr
1)限 制 酶 切 2)DNA重 组
无 DNA插 入
Ampr Tcr
转化
Ampr Tcr
Tc
有 DNA插 入 外 源 DNA
Ampr Tcs Ampr Tcs
2、非接合型质粒（不能自我转移）：虽然带有自我复制所必需的遗传信息， 但失去了控制细菌配对和质粒接合转移的基因，因此不能从一个细胞转移到另一
个细胞。如R质粒（抗生素抗性质粒）和Col质粒（大肠杆菌素colicin ）。符合 基因工程的安全要求。
大肠杆菌素是大肠杆菌分泌的一类细菌素（bacteriocin），对于其他不能分泌特异性大肠 杆菌素免疫蛋白（Immunity protein）的细菌具有杀灭作用，现在一般认为有调节菌群数 量的作用。 大部分大肠杆菌素由质粒编码，其中最著名的没过于pColE1 。
第一节 质粒载体
质粒（plasmid）：是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。 广泛存在于细菌、霉菌、蓝藻、酵母等细胞中。
基因工程常用的三种载体
基因工程常用的三种载体
基因工程常用的三种载体
基因工程是一种用于改变和改造生物体遗传基因的技术，它是利用分子生物学技术提高生物性状的一种新技术。
在基因工程中，需要使用一种材料将外源基因投入细胞中，这种材料就是载体。
基因工程中常用的载体有以下三种：
1. 质粒载体. 质粒载体是一种比较常见的基因工程载体，具有较强的稳定性，它是一种质粒DNA，也称为质粒DNA，不是单链DNA，它是由细菌质粒的DNA结合其它分子，形成质粒DNA的结构，具有可复制性能，可以在细菌或动物细胞中复制，具有较强的稳定性。
2. 杆状病毒载体. 杆状病毒载体是一种比较常见的基因工程载体，它由病毒的全基因组和其它分子形成，用来转移外源基因到细胞中，可以把外源基因转移到细胞核或任何其它的地方，可以实现基因工程的目的。
3. 化合物载体. 化合物载体是一种新型的载体，它是由多种不同的分子组成的，可以将外源基因转移到细胞核或其它位置，并且可以把这些基因在细胞中表达出来，从而实现基因工程的目的。
《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx
复习题1 （包括分子生物学基础知识）（请各位同学将所有题目翻译成英文后再做!）一、解释下列名词1.Gene manipulation2.Promotor3.Cloning:4.Subcloning二、填空题：将下列各题空缺部分的答案填在后面的方框内，两者用“；”隔开。
1.基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）, gene cloning的基本要点有（），（）和（）。
2.（）是遗传物质的基木单位，也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）3.基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。
4.启动子（Promo（or）是指（）。
通常一个Gene是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程屮，Promoter还是（）的结合位点。
5.原核生物的RNApolymerase主要由两部分组成：（）和（），其屮。
■因子并不参与RNA 的合成，它的作用主要是（）。
6.从（）到（）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其屮可包括一个或者多个Gene。
7.转录终止子主要有两种，一种是（），另一种是（）。
8.重叠基因（Overlapping gene）是指（）,间隔基因（Interrupted gene）是指（）三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。
四、简答题：1.简述基因克隆的两个基本特征？参考答案：基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是DNA）在不同宿主屮的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。
2.什么是gene cloning ?什么是亚克隆（subcloning） ?参考答案：基因克降：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带有目的基因的DNA片段。
基因工程载体--质粒
• F因子是雄性决定因子，F+细胞表面可以形 因子是雄性决定因子， 因子是雄性决定因子 成一种叫做性须（pilus）的结果，它促使 成一种叫做性须（ ） 的结果， 经性须进入F 细胞。 细胞则变为F 细胞。 F+经性须进入 -细胞。F-细胞则变为 +细胞。 F因子可以通过接合作用自我转移，也能够 因子可以通过接合作用自我转移， 因子可以通过接合作用自我转移 带动寄主染色体一道转移。 F因子的这种 带动寄主染色体一道转移。但F因子的这种 整合过程是可逆的。在一定条件下， 细 整合过程是可逆的。在一定条件下，Hfr细 胞又可重新变为F+或F-细胞。 胞又可重新变为 细胞。 • 基因工程多选用非接合型质粒，主要安全 基因工程多选用非接合型质粒， 角度考虑
大肠杆菌质粒分子的结构示意图
环形质粒分子 环形质粒分子
环形染色体DNA 环形染色体DNA
大肠杆菌细胞 抗菌素抗性基因
质粒DNA 质粒
控制质粒DNA转移的基因 控制质粒DNA转移的基因 质粒DNA
质粒主要包括几个组成部分
• • • • • 复制子（ 复制子（reilcator） ） 复制起始位点(replication origin site) 复制起始位点 多克隆位点（ 多克隆位点（Polylink）(MCS) ） 辅助序列(COS位点等 位点等) 辅助序列 位点等 选择标记(LacZ,抗性等 抗性等) 选择标记 抗性等
基 因 工 程 载体
南 京 农 业 大 学
陈 溥 言
概
述
基因工程是利用酶学方法将不同来源的 DNA或cDNA，在体外切割、修饰、连接插 或 ，在体外切割、修饰、 入到不同目的的基因工程载体中，进行扩 入到不同目的的基因工程载体中， 增和表达，研究基因结构和功能， 增和表达，研究基因结构和功能，基因和 蛋白质关系的一种分子生物学技术。 蛋白质关系的一种分子生物学技术。
2.1_基因工程载体-质粒载体_201209
死
抗菌素
活
b.蓝白斑试验（IPTG-Xgal 试验）
乳糖操纵子的天然诱导物是乳糖
乳糖类似物异丙基-β-D -硫代半乳糖苷 （IPTG） 有更强的诱导作用。 IPTG配合使用在基因工程可作蓝白斑筛选。
LacZ基因编码的乳糖苷酶 X-gal 蓝色吲哚产物
-半乳糖苷酶Xgal显色反应： -半乳糖苷酶能把无色的化合物 Xgal分解成半乳糖和一个深蓝色的 物质5-溴-4-氯靛蓝。 Xgal 半乳糖 5-溴-4-氯靛蓝
– 非接合型质粒 不能在天然条件下独立地发生接合作用 如Col、R的其它成员
• 值得注意的是，某些非接合型质粒（ColE1）在 接合型质粒的存在和协助下，也能发生DNA转移， 这个过程由 bom 和mob 基因决定
（ 5）质粒DNA的构型：
SC型 共价闭合环形DNA（cccDNA） OC型 开环DNA（ocDNA） L 型 线性DNA（cDNA）
根据宿主细胞所含的拷贝数多少， 可将质粒分成：
• 严紧型
低拷贝数的质粒，每个宿主细 胞中仅含有1-2份的拷贝，称这类 质粒为“严紧型”复制控制的质 粒(stringent plasmid)； 高拷贝数的质粒，每个宿主细 胞中可高达10-200份拷贝，这类 质粒被称为“松弛型”复制控制 的质粒(relaxed plasmid)。
• 松弛型
（4）可转移性
在天然条件下，大多质粒可通过 细菌接合作用从一种宿主细胞内转移 到另外一种宿主内。
大肠杆菌接合（conjunction）
如：F质粒（性质粒、或F因子）
质粒迁移
• 革兰氏阴性菌的质粒可分成两大类：
– 接合型质粒 能在天然条件下自发地从一个细胞转移到 另一个细胞（接合作用），如F、Col、R质粒等
分子生物学与基因工程试卷库(5)
分子生物学与基因工程试题库（5）一、选择题（单选或多选）（每题2分，共计20分）1. 根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中，( )是cDNA文库(a) YAC文库(b) MAC文库(c) 扣减文库(d) BAC文库2. 下面关于用T4多核苷酸激酶标记5’端制备探针的描述中( )是不正确的。
(a)既能标记DNA，又能标记RNA(b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA(c)只能标记突出的5’端不能标记其他类型末端(d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在3. 双链DNA中的碱基对有：( )(a)A-U (b)G-T (c)C-G (d)T-A (e)C-A4. 氨酰tRNA的作用由( )决定(a)其氨基酸(b)其反密码子(c)其固定的碱基区(d)氨基酸与反密码子的距离，越近越好(e)氨酰tRNA合成酶的活性5. 真核生物复制子有下列特征，它们： ( )(a)比原核生物复制子短得多，因为有末端序列的存在(b)比原核生物复制子长得多，因为有较大的基因组 -(c)通常是双向复制且能融合(d)全部立即启动，以确保染色体在S期完成复制(e)不是全部立即启动，在任何给定的时间只有大约15％是有活性的6. 单个碱基改变是DNA损伤的一种形式，它们： ( )(a)影响转录但不影响复制，在此过程中一个ATG起始密码可能被修改(b)影响DNA序列但不影响DNA的整个结构(c)将继续引起结构变化但不影响复制循环(d)可能由错配复制或酶的DNA修饰(如脱氨基)所引起(e)可以由UV照射(如嘧啶二聚体)或加成化合物形成(如烷基化)所引起7. 一种突变细菌从群落形态学(即表型)不能与其野生型相区别，这一突变可能是：( )(a) 一个点突变(b) 一个无义突变或错义突变(c) 密码子第三个碱基的替换(d) (a)和(b)(e) (a)和(c)8. 裂解细菌的噬菌体具有以下类型： ( )(a)只有ssRNA (b)只有dsRNA (c)只有ssDNA(d)只有dsDNA (e)以上全有9. σ因子的结合依靠( )(a)对启动子共有序列的长度和间隔的识别(b)与核心酶的相互作用(c)弥补启动子与共有序列部分偏差的反式作用因子的存在(d)转录单位的长度(e)翻译起始密码子的距离10. 复制转座： ( )(a)复制转座子，即在老位点上留有一个拷贝(b)移动元件转到一个新的位点，在原位点上不留元件(c)要求有转座酶(d)要求解离酶(e)涉及保守的复制，在这个过程中转座子序列不发生改变二、判断题（每题1分，共计10分）1．现在最常用的pUC载体是pUCl8，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复制。
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第二章 DNA重组克隆的单元操作练习题质粒的分子生物学与质粒载体（练习题）一、填空题1. 基因工程中有3 种主要类型的载体：、、。
2. 由于不同构型的DNA 插入EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA 的泳动速度，OC DNA 泳动速度，L DNA 居中，通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。
3. 质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点开始的。
然而，质粒的复制可以是向的、或是向的。
在杂种质粒中，每个复制子斑点都可以有效地加以使用。
但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。
并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下的复制起点可能被关闭。
4. 就克隆一个基因(DNA 片段) 来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：、、。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
5. 如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于群，这是因为它们的所致。
6. 质粒拷贝数是指细胞中。
7. 复制子由三部分组成：(1) (2) (3) 。
8. 酵母的2μm 质粒有，可以配对形成哑铃结构。
9. 一个带有质粒的细菌在有EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫。
10. pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。
11. 粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过恢复该基因的性状。
12. ColEl 质粒复制的起始需要三种酶，即、和。
13. YAC 的最大容载能力是，BAC 载体的最大容载能力是。
14. pSCl01 是一种复制的质粒。
15. 把那些没有可检测表型的质粒称为。
16. 转座子主要由下列部分组成：(1) (2) (3) 。
17. pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC 系列的载体是通过和两种质粒改造而来。
它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。
二、判断题1．迄今发现的质粒DNA 都是环状的。
2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
3．有a、b、c 三个质粒，因为a 和b 能够共存于一个细胞，a 和c 也可共存于同一个细胞，所以b 和c 一定能够共存于同一个细胞。
4. 插入元件(1S)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。
5. 如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。
6. 一个带有反向重复序列的双链DNA 经变性后，复性时其单链可形成发夹环。
7. 能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
8．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。
9．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。
10．CsCl-EB 密度梯度离心法纯化SC DNA 原理是根据EB 可以较多地插入到SC DNA 中，因而沉降速度较快。
11．质粒ColEl 同pSCl01 共整合后，得到重组质粒pSCl34，具有两个复制起点，这两个起点在任何细胞中都是可以使用的。
12．pBR322 可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。
13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。
14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。
15．ColEl 是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。
16．某一染色体DNA 经内切酶Sal I 切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA 片段，将这些片段分别在T4 DNA 连接酶的作用下自身连接成环，然后导入受体细胞，都可以进行独立地复制。
17．如果细菌的某种表型特征在UV 处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。
18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
三、选择题(单选或多选)1．线性质粒复制的引物来自于【】A细胞中合成的小分子RNAB自身末端的端粒序列C外加的寡聚DNAD自身断裂的小分子DNA2．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，【】是不正确的A质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数B可以在氯霉素作用下进行扩增C通常带有抗药性标记D同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子3．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有【】被视为用作基因工程载体的天然质粒载体ApBR322 BpSCl01CpUBll0 DpUCl84．下列哪种克隆载体对外源DNA 的容载量最大?【】A 质粒；B 黏粒；C 酵母人工染色体(YAC)；D λ噬菌体；E cDNA 表达载体5．反向重复序列：【】A 可以回折形成发夹结构；B 可以是某些蛋白的结合位点C 参与转座子的转座；D 以上说法都不对6．松弛型质粒：【】A 在寄主细胞中拷贝数较多；B 可用氯霉素扩增C 一般没有选择标记；D 上述A、B两项正确7．ColEl 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：【】A 是松弛复制型；B 具有四环素抗性C 能被氯霉素扩增；D 能产生肠杆菌素8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：【】A OC DNA>SC DNA>L DNA；B SC DNA>L DNA>OC DNAC L DNA>OC DNA>SC DNA ；D SC DNA>OC DNA>L DNA9．pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：【】A ColEl ；B；Ri 质粒；C pSCl01；D pUCl810．关于质粒的相容性，下面哪一种说法不正确? 【】A 不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞B 质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群C 如果a、b 两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同D 属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同11．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?【】A 在不同的宿主中具有不同的复制机制B 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点C 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶D 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率12．能够用来克隆32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是【】A charomid；B plasmid；C cosmid ；D phagemid13．第一个作为重组DNA 载体的质粒是( )A pBR322 ；B ColEl；C pSCl01；D pUCl814．T1 质粒：【】A 可从农杆菌转到植物细胞中B 作为双链DNA 被转移C 在植物中导致肿瘤D 介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素E 需要细菌的vir 基因帮助转移F 在植物细胞中作为染色体外质粒15.载体的功能是【】I 运送外源基因高效进入受体细胞II 为外源基因提供复制能力III 为外源基因提供整合能力ＡI ；ＢI + II ；ＣI + III；ＤII + III ；ＥI + II + III16.下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是【】Ａ质粒是共价环状的双链 DNA 分子；Ｂ天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列Ｃ质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制；Ｄ松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增Ｅ质粒并非其宿主细胞生长所必需17. 多聚接头（ Polylinker ）指的是【】Ａ含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段Ｂ含有多种复制起始区的人工 DNA 片段；Ｃ含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段Ｄ含有多种启动基因的人工 DNA 片段；Ｅ含有多种特定密码子的人工 DNA 片段18.λ -DNA 体外包装的上下限是天然λ-DNA 长度的【】Ａ 25 - 50 % Ｂ 50 - 100 %Ｃ 75 - 100 % Ｄ 75 - 105 % Ｅ 100 - 125 %19.考斯质粒（cosmid）是一种【】Ａ天然质粒载体；Ｂ由λ-DNA 的cos 区与一质粒重组而成的载体Ｃ能裂解受体细胞的烈性载体Ｄ具有溶原性质的载体Ｅ能在受体细胞内复制并包装的载体20. 下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是【】Ａ Cosmid > λ-DNA > Plasmid ；Ｂλ-DNA > Cosmid > PlasmidＣ Plasmid > λ-DNA > Cosmid ；Ｄ Cosmid > Plasmid > λ-DNAＥλ-DNA > Plasmid > Cosmid21.目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是【】Ａ质粒 DNA ；Ｂ噬菌体 DNA ；Ｃ病毒 DNA ；Ｄ线粒体 DNA；Ｅ叶绿体 DNA四、简答题1．YAC 载体具有什么样的功能性DNA'序列?为什么在克隆大片段时，YAC 具有优性？2．列举质粒载体必须具备的4 个基本特性。
3．什么叫穿梭载体?4．说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。
5．虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。
请举一例说明之。
6．为什么来自Hfr×F－的重组体几乎总是F－?7．解释为什么不同的Hfr 菌株具有不同的转移起点和方向?8．怎样从一个E．coli 的Hfr 菌株中分离到一个F'gal＋的菌株?9．你已经分离了一个新的F’因子，怎样用最简便的方法知道最初的F 因子的部分DNA 已经被切除，并被一个外源DNA(也就是细菌DNA)所替代?10．你能用哪一种基因转移的方法确定(1)E．coli 染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置；(2)一个新分离的突变在基因内的位置。
11．用加有注释的图表说明F 质粒是怎样从一个F+细胞转移到F-细胞。
并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。
五、问答题1. 什么是复制子(replicon)?2. 什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么?3. 什么是质粒的带动转移?4. 说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
5. ColEl 衍生质粒拷贝数调节的机理是什么?6. R1 质粒拷贝数受到怎样的调节控制?7. 质粒如何维持在细胞中的稳定?8. 引起质粒不相容性的主要原因是什么?9. 由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。