药物化学课件
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较高 10ng/g
电子捕获 ECD 浓度型 选择型
含卤素和 其他亲电 子基团的 物质 最高 0.1ng/g
4、气相色谱-质谱联用仪器 GC/MS
分离和进样装置—— 接口—— 检测器
用途：未知组分的定性鉴别，是分析和确证微量或 痕量药物的有力工具。
功能强大的色谱工作站：自动进行数据采集、处理、 存储等常规操作，配备有化合物质谱图库和自动谱库 检索功能，能对未知化合物进行比对鉴别，按匹配率 给出可能的化合物的结构和名称。
将固定相铺于平板上，利用流动相的毛细现象推动组 分迁移，由于不同组分在两相间吸附作用或分配特性 的差异，而得以分离的色谱方法。
吸附薄层色谱 特点： 操作简单、分析快速、应用广泛 是药物分析中常用的微量分离分析技术
1、吸附薄层色谱法的分离过程
(1)准备薄层板
(2)点样
体积<20ul 样径<2-3mm 点间距离1.5-2.0cm 距底2.0cm
（1）总离子流（色谱）图 TIC
（2）质谱图
复方丹参滴丸
总离子流图
1、空白血清 2、含药血清 3、空白加药 4、药品溶液
药品中丹参素一级质谱图
含药血清中丹参素一级质谱图
四、高效液相色谱法 high performance liqid chromatography，HPLC
小粒径的固定相（3~10μm） 高压泵 高灵敏度检测器 特点： （1）与经典液相色谱法比较 高速、高效、高灵敏度、高自动化 （2）与气相色谱法比较 分析对象 流动相 使用温度 仪器设备费用昂贵
程序升温：在规定时间内使柱温以一定方式和速 度从低温升到高温，以适应样品中不同极性与沸 程的组分快速气化。通过程序升温能改善分离效 果，使各组分在最佳柱温下快速气化并分离，从 而缩短分析时间，改善峰形，提高检测灵敏度。
2、气相色谱柱
（1）填充柱 （2）毛细管柱
色谱仪的核心部件
填充柱
白色：玻璃柱 灰色： 不锈钢柱
（2）按固定相的外形分类
柱色谱 平板色谱
薄层色谱 纸色谱
化学键合相色谱
（3）按使用领域对色谱仪的分类
3、理论塔板的概念
理论塔板数 n 5.54( tR )2 16( tR )2
W1/ 2
W
理论塔板高度 H L
n
反映色谱过程的总体聚集趋势和扩散程度
描述色谱柱的性能
4、分离度
R
tR2 tR1
HF254+356等 • 薄层板 （1）自制薄层板 （2）市售薄层板
普通薄层板、高效薄层板（5-7μm） 制备板、分析板
3、展开剂 吸附薄层色谱是展开剂分子与组分分子争夺吸附剂表 面活性中心的过程。 • 石油醚<正己烷<苯<氯仿<二氯甲烷<乙醚<乙酸乙酯< 丙酮<乙醇<甲醇
极性和展开能力增加
4、应用
（1）鉴别
•对照品比较法： 位置与颜色
•供试品溶液与对照品等体积混合，应显示单一、紧密 的斑点
•有时需薄要层用色几谱种是不中同药的质展量开控剂制系中统鉴验别证的首选方法 •洗脱后鉴别法：结合别的分析方法
•CP（2010年版一部）新增TLC鉴别2494项（原化学 功能团检测的非专属，依原标准合格而按新版标准有 可能不合格），如：独一味，原测黄酮苷，现改用 TLC测山栀苷甲酯和乙酸山栀苷甲酯2个有效成分。
12（W1 W2）
• 分离度：是柱性能、分离选择性影响因素的总和，是
衡量色谱方法总分离效能的指标。
（1）R<1，两色谱峰部分重叠；
（2）R=1，两色谱峰明显分离，分离程度可达98%；
（3）R=1.5，分离程度可达99.7%；
• 用R=1.5作为相邻峰完全分离的标志
分析时间
二、薄层色谱法
thin layer chromatography TLC
内径为2～4 mm，长1～3m
毛细管柱
内径为0.1～0.5mm 柱长30～300m
3、检测器
热导 TCD 氢火焰离 子化 FID
类型
浓度型 质量型
通用型/选 通用型 择型
通用型
适用样品 各种物质 含碳有机
类型
物
灵敏度 低
最小检测 0.1μg/g 浓度
高 1ng/g
氮磷 NPD 质量型 选择型
含氮或含 磷化合物
1、色谱法的定义
• 溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于 与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、 排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相 中滞留时间不同，从而使各组分得到分离。
2、色谱法分类
（1）按两相状态分类 气固色谱
气相色谱（GC） 气液色谱
液固色谱 液相色谱（L来自百度文库）
液液色谱
超临界流体色谱（SFC）
（2）杂质限量检查
•杂质对照品比较法
•供试品溶液的自身稀释对照法（常用）
•如：氢化可的松中“其他甾体”的检查
供试液：3mg/ml
2165
对照液：60μg/ml（供试液稀释50倍）
判断：
供试品溶液的杂质斑点数≯3个
供试品溶液的杂质斑点颜色≯对照液主斑点颜色
（3）定量分析 薄层色谱扫描仪、洗脱后定量法 例：六味地黄丸中山茱萸的含量测定 CP（2000年版）薄层扫描法 CP（2005年版以后）HPLC
第二章 常用分析化学方法
第二章 常用分析化学方法
• 第一节 化学分析 • 第二节 光谱分析 • 第三节 色谱分析
第三节 色谱分析法
一、色谱法基本概念 二、薄层色谱法 三、气相色谱法 四、高效液相色谱法 五、色谱系统适用性试验 六、色谱定性与定量分析方法 七、中药色谱指纹图谱
一、色谱法基本概念
1、色谱法的定义 2、色谱法分类 3、理论塔板概念 4、分离度
1、高效液相色谱仪
•梯度洗脱
不锈钢
长5～30cm 内径2～5mm 固定相3~10μm
(3) 展开
(4) 斑点定位
(5)计算比移值
展开剂
Rf
li l0
0.2~0.8
三用紫外分析仪 点样灯，254nm和365nm紫外灯
2、吸附剂与薄层板 • 硅胶（5~50μm） （1）具微酸性，适分离酸性、中性物质。 （2）含水量越高，活性越低。 （3）硅胶H、硅胶G、硅胶HF254、硅胶GF254、硅胶
2000年 约80个 2005年 约10个 2010年无
三、气相色谱法
特点：分析速度快、分离度好，灵敏度高、精密度高。 高效能的色谱柱
高灵敏度的检测器 现代分析仪器的代表
微处理机 GC－MS、GC－FTIR、GC－AES 适用于：能气化的物质 缺点：不适于挥发性小、热稳定性差的药物。
10亿美元，3%～4% 软件35%，65%
电子捕获 ECD 浓度型 选择型
含卤素和 其他亲电 子基团的 物质 最高 0.1ng/g
4、气相色谱-质谱联用仪器 GC/MS
分离和进样装置—— 接口—— 检测器
用途：未知组分的定性鉴别，是分析和确证微量或 痕量药物的有力工具。
功能强大的色谱工作站：自动进行数据采集、处理、 存储等常规操作，配备有化合物质谱图库和自动谱库 检索功能，能对未知化合物进行比对鉴别，按匹配率 给出可能的化合物的结构和名称。
将固定相铺于平板上，利用流动相的毛细现象推动组 分迁移，由于不同组分在两相间吸附作用或分配特性 的差异，而得以分离的色谱方法。
吸附薄层色谱 特点： 操作简单、分析快速、应用广泛 是药物分析中常用的微量分离分析技术
1、吸附薄层色谱法的分离过程
(1)准备薄层板
(2)点样
体积<20ul 样径<2-3mm 点间距离1.5-2.0cm 距底2.0cm
（1）总离子流（色谱）图 TIC
（2）质谱图
复方丹参滴丸
总离子流图
1、空白血清 2、含药血清 3、空白加药 4、药品溶液
药品中丹参素一级质谱图
含药血清中丹参素一级质谱图
四、高效液相色谱法 high performance liqid chromatography，HPLC
小粒径的固定相（3~10μm） 高压泵 高灵敏度检测器 特点： （1）与经典液相色谱法比较 高速、高效、高灵敏度、高自动化 （2）与气相色谱法比较 分析对象 流动相 使用温度 仪器设备费用昂贵
程序升温：在规定时间内使柱温以一定方式和速 度从低温升到高温，以适应样品中不同极性与沸 程的组分快速气化。通过程序升温能改善分离效 果，使各组分在最佳柱温下快速气化并分离，从 而缩短分析时间，改善峰形，提高检测灵敏度。
2、气相色谱柱
（1）填充柱 （2）毛细管柱
色谱仪的核心部件
填充柱
白色：玻璃柱 灰色： 不锈钢柱
（2）按固定相的外形分类
柱色谱 平板色谱
薄层色谱 纸色谱
化学键合相色谱
（3）按使用领域对色谱仪的分类
3、理论塔板的概念
理论塔板数 n 5.54( tR )2 16( tR )2
W1/ 2
W
理论塔板高度 H L
n
反映色谱过程的总体聚集趋势和扩散程度
描述色谱柱的性能
4、分离度
R
tR2 tR1
HF254+356等 • 薄层板 （1）自制薄层板 （2）市售薄层板
普通薄层板、高效薄层板（5-7μm） 制备板、分析板
3、展开剂 吸附薄层色谱是展开剂分子与组分分子争夺吸附剂表 面活性中心的过程。 • 石油醚<正己烷<苯<氯仿<二氯甲烷<乙醚<乙酸乙酯< 丙酮<乙醇<甲醇
极性和展开能力增加
4、应用
（1）鉴别
•对照品比较法： 位置与颜色
•供试品溶液与对照品等体积混合，应显示单一、紧密 的斑点
•有时需薄要层用色几谱种是不中同药的质展量开控剂制系中统鉴验别证的首选方法 •洗脱后鉴别法：结合别的分析方法
•CP（2010年版一部）新增TLC鉴别2494项（原化学 功能团检测的非专属，依原标准合格而按新版标准有 可能不合格），如：独一味，原测黄酮苷，现改用 TLC测山栀苷甲酯和乙酸山栀苷甲酯2个有效成分。
12（W1 W2）
• 分离度：是柱性能、分离选择性影响因素的总和，是
衡量色谱方法总分离效能的指标。
（1）R<1，两色谱峰部分重叠；
（2）R=1，两色谱峰明显分离，分离程度可达98%；
（3）R=1.5，分离程度可达99.7%；
• 用R=1.5作为相邻峰完全分离的标志
分析时间
二、薄层色谱法
thin layer chromatography TLC
内径为2～4 mm，长1～3m
毛细管柱
内径为0.1～0.5mm 柱长30～300m
3、检测器
热导 TCD 氢火焰离 子化 FID
类型
浓度型 质量型
通用型/选 通用型 择型
通用型
适用样品 各种物质 含碳有机
类型
物
灵敏度 低
最小检测 0.1μg/g 浓度
高 1ng/g
氮磷 NPD 质量型 选择型
含氮或含 磷化合物
1、色谱法的定义
• 溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于 与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、 排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相 中滞留时间不同，从而使各组分得到分离。
2、色谱法分类
（1）按两相状态分类 气固色谱
气相色谱（GC） 气液色谱
液固色谱 液相色谱（L来自百度文库）
液液色谱
超临界流体色谱（SFC）
（2）杂质限量检查
•杂质对照品比较法
•供试品溶液的自身稀释对照法（常用）
•如：氢化可的松中“其他甾体”的检查
供试液：3mg/ml
2165
对照液：60μg/ml（供试液稀释50倍）
判断：
供试品溶液的杂质斑点数≯3个
供试品溶液的杂质斑点颜色≯对照液主斑点颜色
（3）定量分析 薄层色谱扫描仪、洗脱后定量法 例：六味地黄丸中山茱萸的含量测定 CP（2000年版）薄层扫描法 CP（2005年版以后）HPLC
第二章 常用分析化学方法
第二章 常用分析化学方法
• 第一节 化学分析 • 第二节 光谱分析 • 第三节 色谱分析
第三节 色谱分析法
一、色谱法基本概念 二、薄层色谱法 三、气相色谱法 四、高效液相色谱法 五、色谱系统适用性试验 六、色谱定性与定量分析方法 七、中药色谱指纹图谱
一、色谱法基本概念
1、色谱法的定义 2、色谱法分类 3、理论塔板概念 4、分离度
1、高效液相色谱仪
•梯度洗脱
不锈钢
长5～30cm 内径2～5mm 固定相3~10μm
(3) 展开
(4) 斑点定位
(5)计算比移值
展开剂
Rf
li l0
0.2~0.8
三用紫外分析仪 点样灯，254nm和365nm紫外灯
2、吸附剂与薄层板 • 硅胶（5~50μm） （1）具微酸性，适分离酸性、中性物质。 （2）含水量越高，活性越低。 （3）硅胶H、硅胶G、硅胶HF254、硅胶GF254、硅胶
2000年 约80个 2005年 约10个 2010年无
三、气相色谱法
特点：分析速度快、分离度好，灵敏度高、精密度高。 高效能的色谱柱
高灵敏度的检测器 现代分析仪器的代表
微处理机 GC－MS、GC－FTIR、GC－AES 适用于：能气化的物质 缺点：不适于挥发性小、热稳定性差的药物。
10亿美元，3%～4% 软件35%，65%