大肠杆菌O157：H7检测方法的新进展
大肠杆菌检测方法的研究及进展
大肠杆菌检测方法的研究及进展大肠杆菌是一类常见的细菌，广泛存在于环境中，同时也是人体及其他动物的正常肠道菌群成员。
大肠杆菌在人体及动物的肠道内起着重要的生理功能，如帮助消化吸收营养物质、防止病原菌感染等。
然而，有些大肠杆菌菌株也可以是致病菌，对人体健康造成威胁，如大肠杆菌O157:H7等。
因此，对大肠杆菌的检测方法的研究十分重要。
目前，大肠杆菌的检测方法主要分为传统的培养方法和现代的分子生物学方法。
传统的培养方法是指将样品进行预处理后，接种到适当的培养基上，通过培养和观察菌落形态，以及进行生化和免疫学测试等来检测大肠杆菌。
这种方法简单、经济，且有一定的准确性，是目前常用的大肠杆菌检测方法之一、但该方法需要较长的培养时间，一般需要24-48小时才能得到结果，不能满足对迅速检测的需求。
为了更快速、准确地检测大肠杆菌，分子生物学方法开始被广泛研究和应用。
这些方法主要包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光PCR、核酸杂交等。
PCR技术是一种特异、敏感的方法，通过扩增大肠杆菌的特定基因序列，可以在短时间内得到结果。
实时荧光PCR技术在PCR基础上增加了检测信号的实时监测功能，进一步提高了检测的准确性和灵敏度。
核酸杂交技术是基于DNA或RNA互补配对原理，通过将目标大肠杆菌的特异序列与探针结合来检测菌株的存在。
与传统培养方法相比，分子生物学方法拥有检测时间短、准确性高、灵敏度强、自动化程度高等优势，被广泛应用于大肠杆菌的检测。
尤其是实时荧光PCR技术在食品安全领域有良好的应用前景，可以快速检测食品中的大肠杆菌污染，并为食品加工企业提供准确的检测结果。
此外，近年来还涌现出一些新型的大肠杆菌检测技术。
例如，基于质谱分析的快速检测技术可以通过检测大肠杆菌代谢产物来实现快速准确的检测。
另外，纳米材料和纳米结构也被引入到大肠杆菌的检测中，通过与大肠杆菌的特异性相互作用来实现灵敏检测。
这些新型技术的出现将进一步提高大肠杆菌的检测效率和准确性。
大肠埃希氏菌O157H7方法学验证报告
大肠埃希氏菌O157H7方法学验证报告实验目的本实验的目的是验证大肠埃希氏菌O157：H7的存在与定量，并确定是否符合相关卫生标准。
实验设计本实验采用了标准菌落计数法和定量PCR法来定量大肠埃希氏菌O157：H7的数量。
实验组包括大肠埃希氏菌O157：H7菌液的不同浓度，作为对照组的菌液中没有大肠埃希氏菌O157：H7实验步骤1.培养基的准备：在制备LB固体培养基后，用无菌铁锹将培养基倒入无菌平板上，倒置放置，待凝固。
2.大肠埃希氏菌O157：H7菌液的准备：取一定量的大肠埃希氏菌O157：H7菌株液体培养物，接种入LB液体培养基中，放置在摇床上振荡培养。
3.菌液的稀释：将大肠埃希氏菌O157：H7菌液稀释成不同浓度，分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-44.菌液的接种：在已凝固的培养基表面均匀涂布不同浓度的大肠埃希氏菌O157：H7菌液，同时在一个区域以相同方式接种无菌菌液作为对照组。
5.培养：将接种好的培养基板置于恒温恒湿培养箱中，以37℃培养24小时。
6.菌落计数：观察培养基表面的菌落情况，使用菌落计数器进行菌落计数。
7.定量PCR：取培养基上菌落较多的区域，提取DNA，并进行PCR反应。
通过所得的PCR产物浓度，定量大肠埃希氏菌O157：H7的数量。
结果和讨论通过菌落计数法的结果，我们可以得到大肠埃希氏菌O157：H7在不同浓度时的菌落数。
根据定量PCR的结果，我们得到大肠埃希氏菌O157：H7的基因拷贝数，并与标准曲线进行比较。
根据对照组的结果，我们可以确定实验的准确性和可靠性。
本实验验证了大肠埃希氏菌O157：H7的存在与数量，并且发现大肠埃希氏菌O157：H7的菌落数与基因拷贝数具有相关性。
这些结果表明，我们可以通过菌落计数法和定量PCR法来定量大肠埃希氏菌O157：H7的数量，从而判断食品是否受到污染，是否符合相关卫生标准。
在实验过程中，我们还发现了一些问题和改进的方向。
肠出血性大肠杆菌O157：H7实验室诊断技术进展
序列 ， 建立 Ｌ ＡＭ Ｐ核 酸扩 增基 因技术 ， 对２ １ 株Ｏ １ ５ ７ ： Ｈ ７和 非Ｏ １ ５ ７ ： Ｈ ７菌 株 进行 特 异性 检 测 ， 并与 Ｐ Ｃ Ｒ方 法 进 行 比 较， 结果 Ｌ ＡＭ Ｐ 法 检测 肠 出血性 大 肠 杆菌 Ｏ １ ５ ７ ： Ｈ ７的灵 敏 度、 特异度、 准确性分别为 ９ ６ ． ７ ２ ％、 ８ ５ ． ７ １ ％、 ９ ３ ． ２ ６ ％ 。与
Ｓ ｈ ｅ ｎ等 采用纳米免疫磁珠及胶体金技术 ， 结合石英 晶体 微天平免疫传感技术 ， 建立一种新型的基于纳米免疫磁珠 胶体金催 化增 长 的石 英 晶体 微 天 平 免 疫 传 感 器 检 测
定量地检 测样 本 中 的抗 体 或抗 原。宋宏 新 等 以鸡 抗
５ ３ ２
Ｅ ． ｃ ｏ ｌ ｉ Ｏ １ ５ ７ ： Ｈ ７的检测 技术 ， 该 方 法 在 磷 酸 盐 缓 冲 液 和 牛 奶 中检 出限分 别为 ２ ３ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍ Ｌ 和３ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍ Ｌ 。纳 米 技术 是
３ 聚合酶链反应技术
聚合酶链 反应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 是 一 种 体 外扩 增 Ｄ Ｎ Ａ技 术 。当
存在模板 Ｄ Ｎ Ａ 、 底物、 上下游引物和耐热 Ｄ Ｎ Ａ聚合酶时， 经
过多次 “ 变性 一 复性 一 延伸 反应 ” 的循 环过 程 ， 模板 Ｄ Ｎ Ａ就 可得 到大量 扩增 。 目 前， 对Ｅ ． ｃ ｏ ｌ ｉ Ｏ １ ５ ７ ： Ｈ ７的全 基 因组 测 序 已经基本 完成 ， 但 其致 病机 制 尚未 完 全 阐 明 ， 已公认 的与 其 致病性 有关 的主要 基 因 有志 贺 样毒 素基 因 （ ｓ ｌ ｔ ） 、 大 毒 力 质 粒 ｐ Ｏ １ ５ ７ 和 Ｌ Ｅ Ｅ 毒 力 岛 等 。 可 以 根 据 Ｅ ． ｃ ｏ ｌ ｉ Ｏ １ ５ ７ ： Ｉ － ｔ ７ 特 异性 基 因序列设 计引 物 ， 进行 Ｐ Ｃ Ｒ检 钡 ４ 。 目前 ， 常 用 的靶基 因主 要有 ｓ ｔ ｘ ｌ 、 ｓ ｔ ｘ ２ 、 ｅ ａ ｅ Ａ 、 ｒ ｆ ｂ Ｅ 、 ｈ ｌ ｙ 、 ｕ ｉ ｄ Ａ、 ｌ ｆ ｉ Ｃ等 。Ｅ ． ｃ ｏ ｌ ｉ Ｏ １ ５ ７ ： Ｈ ７ Ｐ Ｃ Ｒ检测 方法 常用 的有 常规 Ｐ Ｃ Ｒ 、
大肠埃希氏菌O157研究进展
大肠埃希氏菌O157：H7检测方法研究进展摘要：大肠埃希氏菌O157∶H7 是肠出血性大肠杆菌的主要病原血清型, 可引起腹泻、出血性肠炎, 极易继发溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜两种严重的并发症, 死亡率高，因此快速准确地检测这种病原菌对预防和控制由其引起腹泻有着十分重要的作用。
本文介绍了大肠埃希氏菌O157∶H7 实验室检测方法的研究进展，主要包括微生物学检验方法中的细菌分离培养和快速酶触反应法、免疫学检测法、ISO-GRID检测系统、免疫捕获LAMP法、PCR法、DNA探针技术等分子生物学方法。
关键词：大肠埃希氏菌O157∶H7、检测方法、研究进展大肠埃希氏菌（E.Coli简称大肠杆菌）于1885年由德国科学家T。
Escherich 从健康婴儿粪便中分离并命名[1]。
根据毒力基因、致病性、致病机理、临床症状、流行病学特点和血清分型等，国际上将致泻性大肠埃希氏菌分为6类，即：肠致病性大肠埃希氏菌（EPEC）、肠产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）、肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）和肠集聚性大肠埃希氏菌（EAEC）以及近来发现的肠产志贺样毒素且具有侵袭力的大肠埃希氏菌（ESIES）[2;3;4]。
大肠杆菌O157∶H7 是肠出血性大肠杆菌的主要病原血清型, 可引起腹泻、出血性肠炎, 极易继发溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜两种严重的并发症, 死亡率高[5]。
于1982 年在美国被首次发现，此后在世界各地散发或地方流行，1996 年在日本大阪地区发生流行，患者逾万，死亡11 人，1999—2000 年在中国江苏、安徽等地发生了多起食源性感染O157:H7 事件，导致l77 人死亡[6;7]。
世界卫生组织已将O157:H7 列为新的食源性病原菌。
一、大肠埃希氏菌O157:H7病原学特点EHEC O157:H7 属于肠杆菌科埃希氏菌属，具有一般大肠杆菌的形态特征的同时又有区别于一般大肠杆菌的特征[8]：1、为革兰氏阴性、无芽孢直杆菌，大多数菌株以周生鞭毛运动；2、在普通营养琼脂培养基上为光滑型菌落，有光泽，湿润，灰白色；3、最适生长温度为33-42℃，37℃繁殖迅速，44-45℃生长不良，45.5℃停止生长；4、不耐热，在75℃一分钟即可被杀灭；对氯敏感，在有效氯含量0.4 ppm 以上的水体中难以存活；5、具有较强的耐酸性，pH2.5-3.0，37℃可耐受5小时；6、温度低于5 ℃的环境中生存，在-20 ℃可存活9 个月；7、可产生大量的Vero毒素（VT），也称作类志贺氏毒素（SLT），是EHEC的主要致病因子，SLT抗力很高，经80 ℃处理30 min 仍具有活性；8、发酵多种碳水化合物，但不发酵或迟缓发酵山梨醇，也不能产生葡萄糖酸苷酶。
肠出血性大肠杆菌O157：H7检测技术新进展
２０１５年７月 第２１卷 Ｎｏ．３１９１ 肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７检测技术新进展邱金花 （天津市宝坻区疾病预防控制中心 ３０１８００）【中图分类号】Ｒ３７５．２【文献标识码】Ｂ【文章编号】１００６－６５８６（２０１５）０７－０１９１－０１【摘要】 肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）又称产志贺样毒素（ＶＴ）大肠埃希氏菌，主要经粪口途径传播，其引起的感染性腹泻是目前世界范围内重要的公共卫生问题之一。
ＥＨＥＣ的血清型大于５０种，其中肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７是ＥＨＥＣ的一个最具代表性的血清型，可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合症（ＨＵＳ）、血栓性血小板减少性紫癜（ＴＴＰ）等。
临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复出血性腹泻，伴发热、呕吐等，严重者可发展为急性肾功能衰竭。
在北美许多地区，Ｏ１５７：Ｈ７占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的最常见的病原菌。
近几年，我国已陆续有十几个省份在食品、家禽、家畜、昆虫、腹泻病患者中检出该致病菌，存在着疫情爆发、流行的潜在威胁，因此快速、敏感、特异的检测方法对于临床诊断和保障食品安全显得尤为重要。
【关键词】 肠出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７；食源性疾病；检测方法 自１９８２年美国首次分离该菌以来，世界各地不断有Ｅ．ｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７所致疾病散发和暴发的报告。
该菌广泛分布于自然界，其引起的疾病与食用未烘烤的饼干面团、生菜有关，在猪、牛粪便及猪肉、牛肉中分离率极高，对公众健康构成严重威胁。
因此，快速、有效的检测方法是必不可少的。
传统的Ｅ．ｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７微生物学方法以细菌培养、分离及生化和血清学鉴定为主。
近年来出现的新型免疫学方法、分子生物学方法以及自动免疫检测方法对Ｅ．ｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７诊断具有较高的敏感性和特异性。
本文就Ｅ．ｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７检测技术的最新研究进展综述如下：１．免疫学方法１．１胶体金技术免疫胶体金法是以胶体金作为标记物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，该方法主要用于研制快速诊断试剂。
肠出血性大肠杆菌O157：H7检测方法研究进展
原 反应 ． 测生 物 素一 检 亲和 素＿ Ｙ 结 合 物 ， 光发 射 强度 减弱 。 Ｃ５ 荧
２５ 胶 体 金 免 疫 技 术 ．
可 分 为 斑 点 免 疫 层 析 法 ｒＩ Ａ Ｄ Ｃ １和 斑 点 金 免 疫 渗 滤 法
（Ｉ Ｆ ）Ｊ 。 ＤＧ Ａｉ￣ ｇ
Ｄ Ｃ 利 用 的 是免 疫 色 层技 术 在 检 测 卡 上 ． 胶 体 金 标 记 ＩＡ 将
菌等 也 不 发 酵 山 梨 醇 。 经加 入 鼠李 糖 和 头 孢 克 肟 改 进 ． 为 ＣＲ 成 —
直 接免 疫 荧 光 抗 体 染 色 应 用 荧 光 标 记 抗 体 染 色 直 接 检 测 粪 便 样品的 Ｅ Ｅ 检测时间不足 ２ ． 特异性欠佳 。 Ｈ Ｃ． ｈ但 固相 荧 光毛 细 管 免疫 分 析 ． 样 品 中含 有 Ｅ Ｅ １ ７Ｈ 。 若 Ｈ Ｃ Ｏ ５ ： ７ 则 与标 记 的抗 体先 结 合 ．已结 合 的抗体 就 不再 与 毛 细管 内包 被 的抗
Ｓ Ｃ． 高 了分 离 的敏 感 性 。 Ｈ ＭＡ 提 将 ７抗 血 清 加 入 Ｓ Ｃ半 固体 ． ＭＡ
作为 一 种 单 管 筛 选 培 养 基 ． 一 步 检 测 Ｅ Ｃ １ ７ 。用 山梨 可 ＨＥ Ｏ ５ ： Ｈ７
醇 培 养 基 不 能 分 离非 Ｏ１ ７血 清 型 的 Ｅ Ｅ 更 不 能 分 离 发 酵 山 ５ Ｈ Ｃ． 梨 醇 的 Ｏ ５ ： ７变 异 菌 株 。虽 然 分 离 培 养 法 简 单 、 观 、 用 １７ Ｈ 直 费 低． 但其 敏 感 性 、 特异 性 不 很 理 想 。
２４ 免 疫 荧 光 法 ．
确 的检 测 方 法 是 临 床 快 速 诊 断 的重 要 内容
肠出血性大肠杆菌O157H7感染性腹泻监测方案
肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻监测方案(试行)一、背景肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病。
它除引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)等严重的并发征，后者病情凶险，病死率高。
自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻暴发和流行。
我国自1997年在一定范围内开展监测工作以来，已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到肠出血性大肠杆菌O157:H7，特别是1999年我国部分地区发生了肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻的暴发，表明肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻已逐渐成为威胁人群健康的重要公共卫生问题。
为此，2000年，卫生部发布了《全国肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻监测方案（试行）》，为进一步加强我国重点地区的监测工作，特制订此方案。
二、监测目的1、及时掌握该病在我国的发病情况；2、动态观察O157:H7大肠杆菌的分布特征及流行趋势。
三、病例定义1、疑似病例（1）有鲜血便、低烧或不发烧、痉挛性腹痛的腹泻病例；（2）腹泻若干天后继发少尿或无尿等表现的急性肾功能衰竭病例；（3）腹泻病人粪便标本O157抗原免疫胶体金检测阳性者。
符合以上条件之一者，即为疑似病例；2、确诊病例疑似病例或其他腹泻病患者，具有以下条件之一者即为确诊病例：（1）从粪便标本中检出产生志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157：H7；或经蛋白印记试验证实血清标本有与肠出血性大肠杆菌溶血素、或志贺毒素分子量一致的特异性抗体；（2）在流行区内，经省级专家组确认，与确诊病例流行病学密切相关，并排除其它疾病的疑似病例，为临床符合病例；（3）腹泻病例的粪便中分离出不产生志贺毒素1或志贺毒素2及其变种的肠出血性大肠杆菌O157:H7，亦为确诊病例（不产毒）。
大肠杆菌O157:H7实验室诊断方法研究进展
大肠杆菌O157：H7实验室诊断方法研究进展陈苏红;孙国祥;王升启【期刊名称】《浙江预防医学》【年(卷),期】2005(017)012【摘要】肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7是近年来新发现的危害严重的肠道致病菌,主要通过食源传播,污染的牛肉、牛奶、鸡肉、蔬菜、水果饮料等均可成为传播媒介。
肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻已成为威胁人群健康的全球性的公共卫生问题，O157：H7的快速、特异检测对于该病的早期发现及疫情有效控制至关重要。
生物技术的发展为大肠杆菌O157：H7的实验室诊断提供了许多有效的手段和方法，本文就这些方法的最新研究进展进行综述。
1常规鉴定方法菌株的分离和筛选常规使用山梨醇麦康凯琼脂（SMAC），在正常条件下，O157：H7不能发酵山梨醇，在SMAG琼脂上为无色菌落，而其他大肠杆菌则呈粉红色菌落。
分离培养法简单、直观、费用低，虽经不断改进，但敏感性、特异性仍不理想。
【总页数】3页(P52-54)【作者】陈苏红;孙国祥;王升启【作者单位】军事医学科学院放射与辐射学研究所,北京,100850;杭州致远医学检验所;军事医学科学院放射与辐射学研究所,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】R378.2+1【相关文献】1.农产品中大肠杆菌O157∶H7的来源及分布研究进展 [J], 山珊;赖卫华;陈明慧;崔希2.肠出血性大肠杆菌O157:H7实验室诊断技术进展 [J], 廖必英3.免疫传感器在大肠杆菌O157：H7检测中的研究进展 [J], 徐金雷;陈熔熔;张晏;尹争志4.大肠埃希菌O157:H7实验室诊断方法研究进展 [J], 陈苏红;杨宁敏;王升启;5.肠出血性大肠杆菌O157:H7的实验室诊断 [J], 李景学;崔树玉;刘齐家因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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大肠杆菌O157：H7检测方法的新进展
大肠杆菌O157：H7是肠出血性大肠埃希菌(EHEC)血清型中极为重要的一组。
美国是发
生O157:H7型肠出血性大肠杆菌引发的食物中毒的第一个国家，此后，在加拿大、德国、英国、日本等多国由此种菌引发的食物中毒不断发生，由此菌产生的感染问题日益严重，因此
对该菌的控制已成为世界性问题。
寻求对EHEC快速、准确的检测方法是解决此问题的关键，因此大肠杆菌O157:H7检测方法的研究逐渐受到重视。
1 细菌学分离法
细菌学分离法原理是采用培养基—山梨醇麦康凯琼脂，根据O157:H7绝大多数菌株不发
酵山梨醇的特性进行分离。
但是由于还有部分血清型的大肠杆菌O157和某些革兰氏阴性菌
也存在不发酵山梨醇的特性，因此需要对此方法进行改良。
其一，经加入鼠李糖和头孢克肟
改进成为CRSMAC，可提高分离的敏感性；其二，作为一种单管筛选培养基，将H7抗血清加入SMAC半固体，检测EHECO157:H7。
此方法检测EHECO157:H7的优点是简单、直观、成本低，但是由于发酵山梨醇的O157:H7变异菌株和非O157血清型的 EHEC不能用山梨醇培养基分离，因此其最大缺点是敏感性和特异性都很差。
2 免疫学方法
采用免疫学方法检测大肠杆菌O157：H7的方法较多，主要检测菌体抗原O157和鞭毛
抗原H7，常见的有如下五种方法：
2.1 血清凝集方法
血清凝集实验用来观察可疑菌与O157抗血清是否特异性凝集，目前为达到简便快速以
及增强特异性的效果，采用凝集试验与分离培养方法结合进行的方式较多。
此类方法因O157抗血清常与小肠结肠炎耶尔氏菌06血清型、厄班血清型、马耳他及其他血清型大肠杆菌
O157等存在交叉反应，所以检测非O157血清型的EHEC不能应用此法。
2.2酶联免疫法(ELISA)
随着酶联免疫技术在微生物检验中的广泛应用，对于大肠杆菌O157：H7的检测，酶联
免疫法逐渐成为常用方法之一，其原理是通过连接在磁珠上的抗体及碱性磷酸酶标记抗体实
现待测细菌的双抗体夹心检测。
在采用O157多抗的双抗夹心ELISA法与SMAC法的对比分析
中显示ELISA法敏感度更高，并且ELISA法与沙门氏菌、志贺氏菌及弯曲菌均无交叉反应。
因此酶联免疫法(ELISA)提高了大肠杆菌O157：H7检测的敏感性和特异性。
2.3 免疫荧光法
免疫荧光法包括直接免疫荧光抗体染色和固相荧光毛细管免疫分析，前者应用荧光标记
抗体染色直接检测EHEC，虽然检测耗用时间较短，但是特异性较差；后者若样品中含有EHEC O157:H7，则与标记的抗体先结合，在检测生物素－亲和素-CY5结合物时，荧光发射强
度减弱。
2.4 免疫磁珠分离法
采免疫磁珠分离法检测大肠杆菌O157：H7，是以O157抗体包被磁珠，在捕获待检菌后，以磁场作用将磁珠分离，此法浓缩并纯化了待检菌液，从而大幅度提高了检测的灵敏度。
目
前已经发展使用纳米免疫磁珠技术，该技术是以抗体包被纳米磁珠的为载体，通过抗体与反
应介质中特异性抗原结合，形成抗原－抗体复合物，此复合物在外加磁场的作用下发生定向
移动，从而达到分离目的[1]。
此方法可在1小时同内完成菌体的分离和检测，并且检测限可达到10cfu／ml
2．5 胶体金免疫技术
胶体金免疫法是以胶体金作为标记物应用于抗原抗体的免疫标记技术，分为斑点免疫层
析法(DICA)和斑点金免疫渗滤法(DIGFA)两种。
其中DICA利用的是免疫色层技术，在检测卡上，将胶体金标记的兔抗O157抗体和兔抗羊IgG抗体分别固定在膜上下，作为测试带和质控带。
具有简便、快速定性作用[2]。
免疫层析法(DICA) 经常与免疫磁珠分离法结合，多用于EHEC
O157∶H7的初筛；而斑点金免疫渗滤法(DIGFA)是预先在硝酸纤维素膜的中央滴加纯化的抗
O157∶H7抗体，待吸附干燥后，依次滴入待检菌液、胶体金标记 O157∶H7抗体及洗涤液，以膜中央呈红色斑点者为阳性[3]。
免疫胶体金法不需要特殊设备和试剂，且具有快速简便、
稳定性、特异性及敏感性强、结果判断直观等特点，与ELISA相比较，灵敏度高，但特异度
稍差。
3 分子生物学检测方法
应用分子生物学检测大肠杆菌O157：H7主要采用DNA探针和PCR等方法。
检测目前
已经比较清楚的EHECO157:H7的毒力基因，如志贺样毒素基因slts、对上皮细胞粘附和抹平
力基因eae、溶血素基因hly等。
3.1DNA探针方法
目前hly、sltl(VT1)、slt2(VT2) 、eae和毒性质粒等可进行特异性杂交检测的基因探针已
经制备，其中以CVD419质粒上314kb的Hind、酶切片段制备探针特异性较好。
Huck筛选出
O157大质粒上210kb的Sma1酶切片段VPM1标记作为探针，与所有ETEC和非大肠杆菌
O157菌株均不杂交。
3.2 PCR方法
大肠杆菌O157:H7检测中，PCR法是用来检测致病基因的最常用方法。
随着PCR法从单
一PCR发展为多重PCR 后，在采用多重PCR法的实验中，PCR方法扩增eae、ehxA、stx1、
stx2和saa基因，发现有几种或全部为致病基因。
近年来，由于荧光定量PCR法的发展，大
肠杆菌 O157:H7的检测也开始采用这种技术，并且在实验中发现，荧光定量PCR法与ELISA
及胶体金免疫法相比，其灵敏度、特异度和约登指数均高于其他两种方法。
3.3脉冲场凝胶电泳(PEGE)
脉冲场凝胶电泳主要用于基因组DNA的分析，PFGE标准化流程已由美国国家公共卫生
实验室制定完成，在多次不同的O157:H7暴发流行中应用。
目前已证明，PFGE在O157:H7
的分子流行病学调查中是一种可靠的分型方法。
但该法的缺点是结果不易分析，没有国际统
一的标准，不易于在实验室之间进行比较，且仪器价格昂贵。
4 其他检测技术
4.1基因芯片技术
基因芯片技术是近年来分子生物学及医学诊断技术的重要进展，它具有高通量、微型化
和自动化等特点，现已在O157:H7的诊断中得到了应用。
该方法与普通凝胶电泳法相比，灵
敏度增加了约30倍，可以检测小于1个细胞的基因组DNA的量的PCR扩增产物(1fg)[4]。
4.2 生物传感技术
问生物传感技术的应用主要解决研制O157:H7快速检测试剂操作步骤繁多的题，问生物
传感技术的应用主要解决研制O157:H7快速检测试剂操作步骤繁多的题，其中25g样品的检
测灵敏度为9.0×103cfu/g，10g样品的灵敏度达到5.2×102cfu/g，在样品处理的25分钟内，
没有假阳性结果出现，因此该方法灵敏度高，并且重复性较好，特异性也较为理想。
５小结
上述方法是在大肠杆菌O157：H7检测中的常用方法，但由于各种方法都存在缺陷和一定的局限性，因此在应用中受到限制，还需要随着未来相关检测技的不断发展，寻求更为优良的检测方法为临床的诊疗服务。
参考文献：
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