酶分析法
酶学分析技术范文
酶学分析技术范文酶学分析技术（Enzyme Assay Techniques）是一种用于测定生物样品中酶活性的方法。
酶是生物体内广泛存在的催化剂，可以加速化学反应的速率。
酶学分析技术在生物化学、医学、农业等领域都有重要的应用。
首先，酶学分析技术中最常用的方法之一是光度法。
光度法基于酶催化反应产生物质的颜色变化，并通过测量吸光度来确定酶活性的方法。
典型的酶学分析技术中，一种常用的测量指标是酶促反应后产生的NADH或NADPH的浓度。
通过比较反应前后的吸光度差异，可以计算出酶的催化速率。
其次，酶学分析技术中常用的另一种方法是荧光法。
荧光法基于酶催化反应后产生荧光分子的原理，通过测量荧光信号来确定酶活性的方法。
荧光法具有高灵敏度和高选择性的特点，适用于检测低浓度的酶活性。
常用的荧光剂包括荧光底物和荧光探针，可以通过酶催化反应后的荧光信号强度或颜色变化来确定酶活性。
此外，酶学分析技术中还有其他一些常用的方法，例如比色法、电化学法和质谱法等。
比色法通过测量反应物质的颜色变化来确定酶活性，常用的比色剂有碘化钠、邻联二硝基苯胺等。
电化学法基于酶催化反应过程中产生的电流变化来确定酶活性，常用的电极包括氧化还原电极、工作电极和对比电极等。
质谱法利用质谱仪分析酶催化反应产物的质荷比来确定酶活性，可以用于分析复杂的代谢途径和检测微量物质。
总的来说，酶学分析技术在生物科学研究和应用实验中有着广泛的应用。
通过研究酶的活性和底物/产物之间的关系，可以了解酶的催化机制和生理功能。
酶学分析技术不仅可以用于检测酶的活性、底物和产物的含量，还可以用于筛选和优化酶的性质，例如通过变异酶突变、构建重组酶等方法。
此外，酶学分析技术还可以用于药物研发、生物工程和环境监测等领域。
总结起来，酶学分析技术是一种用于测定生物样品中酶活性的重要方法。
其原理和实验步骤多种多样，常用的方法包括光度法、荧光法、比色法、电化学法和质谱法等。
酶学分析技术在生物科学研究和应用实验中具有广泛的应用，可以了解酶的催化机制、优化酶的性质，以及在药物研发、生物工程和环境监测等领域中的应用。
酶的结构和功能分析方法
酶的结构和功能分析方法酶是一种催化作用的蛋白质，广泛存在于细胞和生物体中，对于保障生物体代谢正常，具有不可或缺的作用。
酶的结构和功能是科学家们长期研究的课题，目前已经形成了一套完整的分析方法。
接下来，本文将为您详细介绍酶的结构和功能分析方法。
酶的结构分析方法酶的结构分析是了解其结构的重要手段，目前主要的酶结构分析技术有X射线晶体学和核磁共振技术。
1. X射线晶体学X射线晶体学是目前应用最广泛的酶结构分析技术，利用X射线对酶晶体进行衍射研究，可以分析出酶的三维结构信息。
这种技术对晶体的质量和组分要求甚高，需要较长时间的数据收集、计算及分析，但是得到的结果非常精确。
近几年来，软件自动化工具的发展，使得这一技术能够自动进行晶体处理和数据分析。
2. 核磁共振技术核磁共振技术是一种非常强大的分析技术，它可以分析出分子的三维结构、动力学以及反应机制等多种信息。
在酶的研究中，核磁共振技术主要用于分析小型分子和部分较小的蛋白质。
但是，核磁共振技术也存在着一些瓶颈，比如分子体积较大时，数据收集时间较长，难度也较大。
除以上两种技术之外，还有一些新技术在逐渐成型，比如电镜技术和光学显微镜技术等，它们都在一定程度上丰富和完善了酶的结构分析手段。
酶的功能分析方法酶的功能分析是了解其催化作用的手段，目前主要的酶功能分析方法有比较法和定量法等。
1. 比较法比较法是酶功能分析中最简单易行的方法。
该方法通过对含有同类酶催化底物的反应速率进行比较分析，了解不同酶之间的催化差异，具有操作简单、易于实验室使用的优点。
但是该方法需要多次重复实验，并对实验条件进行控制，以确保比较的可靠性。
2. 定量法定量法是另一种酶功能分析方法。
以酶催化的产物或底物的变化量作为酶活力的定量指标，从而了解酶的功能。
该方法具有精度高、可重复性好、灵敏度高的优点，也是目前常用的酶活力检测手段之一。
除以上两种方法之外，还有一些新型的酶功能分析手段正在被不断研究和发展。
酶法分析的基本原理与应用
酶法分析的基本原理与应用1. 酶法分析的基本原理酶法分析是一种通过酶的催化活性来测定样品中特定物质含量的方法。
它基于酶与底物之间的专一性结合和催化活性，利用底物的转化率与被测物质的含量成正比的原理进行分析。
其基本原理包括以下几个方面：•酶的选择性：酶具有高度的选择性，只能催化特定的底物转化为特定的产物。
通过选择适当的酶，可以实现对目标物质的特异性分析。
•底物浓度与酶催化率的线性关系：酶活性与底物浓度呈线性关系。
当底物浓度较低时，酶的催化率与底物浓度成正比；而当底物浓度较高时，酶的催化率可能会达到饱和状态。
•酶催化反应速率的测定：酶催化反应速率可以通过测定底物消失速度、产物生成速度或酶底物复合物的稳定性等指标来确定有关酶催化反应的动力学参数。
2. 酶法分析的应用酶法分析由于其高度的选择性、灵敏度和准确性，被广泛应用于许多生物医学、食品安全和环境监测领域。
以下是酶法分析的几个主要应用：2.1 生物医学领域酶法分析在生物医学领域中有着重要的应用。
它常被用于检测血液、尿液和其他生物体液中的生化指标，如葡萄糖、胆固醇、尿素等。
通过检测这些指标的变化，可以评估人体的健康状况和疾病风险。
2.2 食品安全领域酶法分析在食品安全领域中也有广泛的应用。
例如，通过检测食品中的转基因成分、防腐剂和重金属等有害物质，可以确保食品的质量和安全性。
同时，酶法分析还可以用于检测食品中的营养成分，以评估食品的营养价值。
2.3 环境监测领域在环境监测领域，酶法分析被广泛应用于水污染、空气污染和土壤污染等环境问题的监测。
通过测定水样、大气样和土壤中特定物质的含量，可以评估环境的质量和污染程度，并制定相应的环境保护措施。
2.4 药物研发与生产领域酶法分析在药物研发与生产领域中也有重要的应用。
它可以用来评估药物的纯度、活性和稳定性，以确保药物的质量和疗效。
同时，酶法分析还可以用于药物代谢及药代动力学的研究，以评估药物的吸收、分布、代谢和排泄等过程。
简议酶分析法
在一 定 的条 件 （ ｐ 值 和 温 度 ） 如 Ｈ ，测 定 反 应 的初 速率 ，而 反应 的初 速率 与被测 物质 的浓度成 一 定 比例关 系 ，因而 可通 过反应 的初 速率来 计算 ，或
用标 准 品对照 来计算 待测 物质 的量 。
方法 有 ，利用 待测 物质作 为酶促 反应 的底物 的 测定 法 ；利用 待测 物质作 为酶 促 反应 的辅 酶或抑 制
增 加或减 少 。包括 有紫外 一可见分光 光度 法 、荧光 分 析法 、酶偶 联测 定法 。 取 样测定 法 。将酶 和底 物混合 后 ，反应一 定 时
Ｍｅ ｉ ａ ｕ ｐ ｎ １ ２ Ｎｏ １ ｄ ｃ ｌＥｑ ｉ ｍｅ ｔＶｏ ． ４， ． ２
３ ２
问 ，然后 停止 反应 ，定 量测定 底 物减少 或产 物生 成
行酶 活力 的测定 。酶 活力测 定还 可用 于评价 产 品原 料 的质量好 坏 。 ３ 酶活力 测定 的方法 。 ．２
条 件 和测 定 方法 。
２ ．２ 特 征 。
选择性高。原则上 讲 ，一般 酶 只催 化一种 反 应 ，或者说只能催化某种特定的化合物或对特定的 化学键起作用。 灵敏度高。一般可测到 １ 一ｍ ｌＬ ０ ｏ 。如与荧光 ／ 法联用，可高达 １ ｍ ｌＬ ０ ｏ 左右。 ／ 反应速度快 ，条件温 和。大多数 酶促反 应在
酶 是高效 、高度专 一 的生物催 化剂 ，它 和生命 活 动 密 切相关 。酶 主要 应用 于 ：制造某 些产 品 、去除某 些 物质 、识别 某种 化合 物 、测 定某 种物 质 。酶分析 法 是其 中的重 要 内容 ，作 为 一项 公 认 的分 析技 术 ， 正 在临 床诊 断 、食 品加 工发酵 、药 品生 产等方 面 广
酶法分析的基本原理和应用
酶法分析的基本原理和应用1. 概述酶法分析是一种常用的生化分析方法，利用酶在特定条件下对物质的特异性催化作用进行定量测定。
它具有高灵敏度、高选择性和实时监测等优点，因此在医学、食品安全、环境监测等领域得到广泛的应用。
2. 基本原理酶法分析的基本原理是利用酶催化底物与受体结合生成产物的特性，通过测量产物的数量来间接测定样品中目标物质的含量。
其原理主要包括以下几个方面：2.1 酶的选择性不同酶对底物的特异性结合和催化能力不同，可以选择与目标物质发生特异性反应的酶作为分析方法的基础。
例如，葡萄糖氧化酶可以催化葡萄糖的氧化反应，可以用于测定葡萄糖的含量。
2.2 底物与酶的反应底物与酶结合后形成底物-酶复合物，酶催化底物发生特定的反应，生成产物。
产物的数量与底物的浓度成正比关系，可以通过测定产物的数量来间接测定底物的含量。
2.3 受体结合和信号转导酶催化底物生成产物后，产物会与受体结合，触发一系列的信号转导过程。
这些信号转导过程可以通过荧光、吸光度、电化学或其他方法进行检测和定量。
3. 应用领域酶法分析具有广泛的应用领域，以下是几个常见的应用领域：3.1 医学诊断酶法分析在医学诊断中起到关键的作用。
例如，测定血清中的肝功能指标酶（如谷丙转氨酶）可以评估肝功能的健康状况；测定血液中特定酶的活性可以用于早期诊断某些疾病。
3.2 食品安全酶法分析可以用于食品安全领域，检测食品中的重金属、农药残留、催化剂等有害物质的含量。
例如，测定牛奶中的抗生素残留可以保障食品的安全。
3.3 环境监测酶法分析可应用于环境监测，检测水体中的污染物、土壤中的重金属、空气中的有害气体等。
通过测定目标分子的含量，可以评估环境的污染程度。
3.4 生物工程酶法分析在生物工程中也有广泛的应用。
例如，测定酶的活性可以用于评估工程菌株的合成能力，优化反应条件，提高产物的产量和纯度。
4. 优缺点酶法分析作为一种生化分析方法，具有以下优点：•高灵敏度和高选择性，可以进行低浓度目标物质的检测。
酶分析法的原理及应用
酶分析法的原理及应用1. 概述酶分析法是一种常用的生物化学分析方法，通过利用酶对底物的特异性反应来定量分析样品中的物质含量。
本文将介绍酶分析法的原理及其在科学研究和生物医学领域中的应用。
2. 酶的特性与原理酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应速度，而不被消耗。
它们具有高度的专一性，只对特定的底物进行反应。
酶的反应速率与底物浓度呈正比关系，且受到温度和pH值等环境因素的影响。
通常，酶分析法的原理基于底物和酶的反应产生的物质的可测量性。
常见的酶分析方法包括酶反应动力学法、酶抑制法、酶联免疫吸附法等。
3. 酶分析方法的应用3.1 酶测定法在生物化学研究中的应用酶测定法在生物化学研究中具有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：•酶活性测定：通过测量酶催化底物转化产物的含量变化，可以确定酶催化反应的速率和活性。
•代谢物检测：许多代谢产物可以通过特定的酶催化反应转化成可测量的产物，从而快速检测和定量代谢产物的含量。
•蛋白质定量：一些酶能够特异性催化蛋白质的降解，通过测量酶反应产生的物质的含量变化，可以间接地确定蛋白质的含量。
3.2 酶分析法在生物医学领域中的应用酶分析法在生物医学研究和临床诊断中也具有重要的应用价值。
以下是一些常见的应用领域：•生物标志物的检测：许多疾病都伴随特定的生物标志物的变化，通过测量酶反应产物的含量变化，可以快速检测和诊断疾病。
•药物测定：酶反应可用于药物的定量分析，例如测定血液中药物的浓度，以指导药物治疗。
•免疫学研究：酶与抗体结合的酶联免疫测定法是一种常用的免疫学研究方法，可以检测特定抗体的存在和浓度。
4. 酶分析法的优缺点酶分析法具有以下优点：•高灵敏度：由于酶对底物的专一性反应，酶分析法能够检测到非常低浓度的底物。
•高选择性：酶对于特定底物的反应非常特异，可以避免其他杂质的干扰。
•快速和简便：酶分析法通常具有简单的操作步骤和快速的反应速率。
然而，酶分析法也存在一些缺点：•受环境条件影响：酶的反应速率受到温度和pH值等环境因素的影响，需要严格控制实验条件。
酶分析法
张晓静 2009.09
三、测定过程中应注意的问题
1、分析产物比分析底物准确度高。 2、反应初始阶段的速度才能反应酶的真正活力。 3、测得的反应速度必须和酶浓度之间有线性比例关系。
张晓静 2009.09
第二节 酶法分析
根据测定原理，酶法分析可分为终点法和反应速度法两大 类。
张晓静 2009.09
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
在使用离子选择电极法测定某些酶的酶活力时,
用氧电极可以测定一些耗氧的酶反应。如葡萄糖
氧化酶的活力就可用这个方法很方便地测定。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
5.其他方法
除上述方法外，还有一些测定酶活力的方
法，例如旋光法、量气法、量热法和层析法
等，但这些方法使用范围有限，灵敏度较差,
2.荧光法
荧光法主要是根据底物或产物荧光性质的差别来进行测 定。由于荧光方法的灵敏度往往比分光光度法要高若干个 数量级，而且荧光强度和激光的光源有关，因此在酶学研 究中越来越多地被采用，特别是一些快速反应的测定方法。
该法缺点：易受其他物质干扰，有些物质如蛋白质能吸 收和发射荧光，这种干扰在紫外区尤为显著，故用荧光法 测定酶活力时，应尽可能选择可见光范围的荧光进行测定。
一、酶活力 二、酶活力的测定
张晓静 2009.09
一、酶活力
1.概念
酶活力是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力的 大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反 应速率来表示，两者呈线性关系。酶反应速率越大， 酶活力越高，反之越低。
酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或 产物的增加量来表示。在实际酶活性测定中一般以测 定产物的增加量为准。
第四章 酶法分析
优点：
不需要特殊复杂的设备和仪器 灵敏度高 重复性好 对健康无害
应用前景
食品卫生 环境污染生化 指标 临床医学
“瘦肉精”快速检测新技术 ——竞争酶标免疫法
“瘦肉精”（学名盐酸克伦特罗）为一种人工合成的 作用于β —肾上腺受体的兴奋剂，常用来防治哮喘、肺气 肿等肺部疾病，当其应用剂量达到治疗量的5—10倍时， 可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此将其俗称为“瘦 肉精”。
应用时应考虑两个问题，即工具酶的用 量与反应的平衡点。
终点法要操作中应注意：
(1)被测的底物浓度必须十分小，并控制反 应于1级反应水平。因为这样可以使反应迅速 达到平衡点防止过多的产物生成，避免逆反 应；减少工具酶的用员。 (2)其它因素应尽量处于最适水平，双底物 反应的另一底物应具有足够高的浓度。 (3)酶的用量要高，以保证反应较快地达到 终点。
底物？ pH？ 温度？ 样品？
二、测定中应注意的问题 1.初速度
底物浓度对酶速的影响
浓度选择： a） [s]>=100Km； b） 有时不宜采用高底物浓度（有 毒性、价高、溶解度小、抑制 酶反应等)则根据具体条件，通 过实验选一适当浓度。
作用于待测酶产物的其它酶；
（如腈水合酶与酰胺酶） 其它因素。
三、酶标免疫分析法
Enzyme Immunoassay (EIA)
在70年代初，从放射免疫分析发展起 来的一种称为“酶标免疫”的分析方法， 它是将免疫学的专一性和酶的高效催化能 力有机地结合在一起，建立的一种高度特 异、灵敏的分析方法。
放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)是用放射 性同位素标记抗原Ag*，该抗原与未标记抗原Ag竞 争结合抗体(Ab)结合位点时的能力相同，所以反应 生成的Ag*-Ab复合物与Ag的量呈负相关。Ag*-Ab的 生成量可通过测定其放射活性得到，然后根据已知 浓度抗原的标准曲线就可以计算出样品中抗原浓度， 这种分析方法称为放射免疫分析。
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二、酶活力的测定
①底物：根据酶的专一性，选择适宜的底物，并配制成 一定浓度的底物溶液。要求所使用的底物均匀一致，达 到一定的纯度。有些底物溶液要求新鲜配制，有些则可 预先配制后臵冰箱保存备用。 ②反应条件：据资料或试验结果，确定酶促反应的温度、 pH等条件。温度可选在室温(25℃)、体温(37℃)、酶促 反应最适温度或其他选用的温度，一般在恒温装臵内进 行。pH应是酶促反应的最适pH，采用一定浓度和一定 pH的缓冲溶液来保持。反应条件一经确定，在反应过程 中应尽量保持恒定不变。有些酶促反应要求激活剂等其 他条件，应适量添加。
张晓静 2009.09
3、终点法种类
单酶反应定量法 和指示酶反应偶联的定量法
张晓静 2009.09
4、采用终点法应注意的问题
酶底物的专一性 反应的平衡性 反应液中的酶量 反应产物抑制
张晓静 2009.09
二、反应速度法
反应速度法又称连续检测法，是指在多个时间点连续监测 产物（或底物）在线性范围内的生成量（或消耗量）即零 级反应速率测定酶活性的方法。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
1.分光光度法
分光光度法主要利用底物和产物在紫外光或可见光
部分的光吸收度的不同，选择一适当的波长，测定反
应过程中反应进行的情况。其优点是简便、节省时间
和样品，可检测到nmol/L水平的变化。该方法可以连 续地读出反应过程中光吸收的变化，已成为酶活力测
定中一种重要的方法之一。几乎所有的氧化还原酶都
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
2.酶活力的测定方法
测定反应液中物质的变化量，可采用光学检测 法、化学检测法等生化检测技术。
一种酶可能有多种测定方法，要根据实际情况 选用。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
1.分光光度法
酶 活 力 的 测 定 方 法
2.荧光法 3.同位素测定法 4.电化学方法 5.其他方法
张晓静 2009.09
测定酶活力大小时，通常要求底物浓度足够大， 测定底物浓度的变化在起始浓度的5％以内的速率， 这样可以保证所测定的速率是最初速率。此结果能 比较可靠地反映酶的含量。
张晓静 2009.09
一、酶活力
3.酶的比活力
酶的比活力代表酶的纯度，通常用下式表示：
酶比活力=[ 酶活力单位数(U) / 蛋白质量(mg) ]
可以用此法测定。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
由于分光光度法有其独特的优点，因此可以把一些
原来没有光吸收变化的酶反应通过与一些能引起光吸
收变化的酶反应偶联，使第一个酶反应的产物转变成
为第二个酶的具有光吸收变化的产物来进行测量。这 种方法称为酶偶联测定法。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
世界各地实际应用的酶活力单位的定义各不相同。 同一种酶往往有几种不同的单位。
例如，1IU＝lμmol/min；1Kat = 1mol/s
张晓静 2009.09
一、酶活力
酶活力的测定要在最适条件下进行，即最适温度、 最适pH、最适底物浓度和最适缓冲液离子强度等， 只有在最适条件下测定才能真实反映酶活力大小。
只是应用于个别酶活力的测定。
张晓静 2009.09
三、测定过程中应注意的问题
1、分析产物比分析底物准确度高。 2、反应初始阶段的速度才能反应酶的真正活力。 3、测得的反应速度必须和酶浓度之间有线性比例关系。
张晓静 2009.09
第二节 酶法分析
根据测定原理，酶法分析可分为终点法和反应速度法两大 类。
条件下，酶与其作用底物反应一段时间，然后 再测定反应液中底物或产物变化的量。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
选择底物 配制底物溶液 ① 底物 ② 反应条件 酶活力 的测定步骤
准确计时并终止反应
确定酶促反应条件： pH、温度等
③ 反应时间
④ 底物或产物 变化量
运用各种检测技术， 快速、简便、准确的 测定变化量
有时也采用每克(g)酶制剂或每毫升(mL)酶制剂含 有多少个活力单位来表示。 比活力的大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化 能力。比活力是酶学研究及生产中经常使用的指标。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
要求酶活力的测定方法：快速、简便、准确。 1.酶活力的测定步骤
酶活力测定均包括两个阶段：首先要在一定的
二、酶活力的测定
优点：反应灵敏度极高，可直接用于酶活力的测定， 也可用于体内酶活性测定。特别是适用于低浓度的酶 和底物的测定。
缺点：操作繁琐，样品需分离，反应过程无法连续 跟踪，且同位素对人体有损伤作用。辐射猝灭会引起 测定误差，如3H发射的射线很弱，甚至会被纸吸收。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
张晓静 2009.09
1、终点法的条件
必须有专一地作用于被测物质的酶，并能得到它的制品； 能够确定使这种酶反应就近进行完全的条件； 反应中底物的减少、产物的增加、辅酶物质的改变等可以 借助某种简便的方法进行测定。
张晓静 2009.09
2、终点法的测定方法
分光光度法（光吸收、荧光） 华勃式呼吸仪检验法（气体产生与吸收） 滴定法（pH值变化） 同位素跟踪测定法
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
在使用离子选择电极法测定某些酶的酶活力时,
用氧电极可以测定一些耗氧的酶反应。如葡萄糖
氧化酶的活力就可用这个方法很方便地测定。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
5.其他方法
除上述方法外，还有一些测定酶活力的方
法，例如旋光法、量气法、量热法和层析法
等，但这些方法使用范围有限，灵敏度较差,
4.电化学方法
电化学方法包括：pH测定法和离子选择电极法等。 pH测定法最常用的是玻璃电极，配合一高灵敏度的
pH计，跟踪反应过程中H+变化的情况，用pH的变化
来测定酶的反应速率。也可以用恒定pH测定法，在酶 反应过程中，所引起的H+的变化用不断加入碱或酸来 保持其pH恒定，用加入的碱或酸的速率来表示反应速 率。用此法可以测定许多酯酶的活力。
张晓静 2009.09
1、利用作底物的测定法
在一定pH及温度下测定反应初速度。反应时除被测物（底 物）外，其他影响反应速度的物质均为过剩，则反应初速 度与被测物的浓度成正比关系。
张晓静 2009.09
2、利用辅酶或抑制剂作用测定
如被测物质可作为某种酶专一的辅酶（或抑制剂），则这 种物质的浓度和将其作为辅酶（或抑制剂）的酶的反应速 度之间有关联，因此通过测定该酶的反应速度就能进行这 种物质的定量。
第二章
酶分析法
第一节 酶活力测定法 第二节 酶法分析
酶分析法的两种类型
酶活力测定：以酶为分析对象，也就是根据需 要对样品进行酶含量或活力的测定。 酶法分析：以酶作为分析工具或分析试剂，用 以测定样品中用一般化学方法难以检测的物质， 这些物质可以是酶的底物，也可以是酶的抑制 剂或酶的辅助因子。
酶活力测定法
张晓静 2009.09
3、特殊的反应速度测定法
将与待测物质相关的两种酶反应偶联起来，构成待测物质 能够再生的循环系统，然后再将可作为指示剂的第三种酶 反应在适当的条件下与之偶联，那么指示剂酶反应的速度 和待测物质量之间有一定的比例关系。
张晓静 2009.09
思考题
1、阐述酶分析法两种类型的异同点。 2、阐述酶活力测定中应注意的主要问题。 3、简述终点法的原理、条件和种类。
张晓静 2009.09
二、酶活力的测定
③反应时间：在一定条件下，将一定量的酶液与底物溶 液混合均匀，适时记下反应开始的时间。反应到一定时 间及时终止反应。终止酶促反应的方法要根据酶的特性、 反应底物或产物的性质以及检测方法等加以选择。常用： 加热、添加酶变性剂、加入酸液或碱液、冰浴等。 ④底物或产物的变化量：反应到一定时间，取出适量的 反应液，运用各种生化检测技术，测定产物增加量或底 物的减少量。为了准确地反应酶促反应的结果，应尽量 采用快速、简便、准确的方法测出结果。
2.荧光法
荧光法主要是根据底物或产物荧光性质的差别来进行测 定。由于荧光方法的灵敏度往往比分光光度法要高若干个 数量级，而且荧光强度和激光的光源有关，因此在酶学研 究中越来越多地被采用，特别是一些快速反应的测定方法。
该法缺点：易受其他物质干扰，有些物质如蛋白质能吸 收和发射荧光，这种干扰在紫外区尤为显著，故用荧光法 测定酶活力时，应尽可能选择可见光范围的荧光进行测定。
一、酶活力 二、酶活力的测定
张晓静 2009.09
一、酶活力
1.概念
酶活力是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力的 大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反 应速率来表示，两者呈线性关系。酶反应速率越大， 酶活力越高，反之越低。
酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或 产物的增加量来表示。在实际酶活性测定中一般以测 定产物的增加量为准。
张晓静 2009.09
一、终点测定法
指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全， 使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说 应称平衡法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡， 由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已 转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度 的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。 终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感， 只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可.