PikoReal使用培训-致病菌检测教学文稿
病原性真菌检验临床微生物学专业知识培训课件
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3）涂片染色： 革兰氏染色阴性 并成鱼群状排列的弧菌。
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2．快速诊断：
1） 免疫荧光菌球法：将标本接种于含有霍乱弧菌荧
光抗体的碱性蛋白胨水中，经37℃4～6h，如有霍乱 弧菌，在荧光显微镜下可见发荧光的菌如有不当之处，请联系网站或本人删除。
图注：霍乱弧菌的鞭 毛（↑）和它可溶解 的鞘膜（↑↑） 负染， ×3 100
图注：分裂中的 霍乱弧菌 冰冻蚀 刻，×70 000
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（二）培养特性 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
• 霍乱弧菌为需氧或兼性厌氧菌;
• 营养要求不高，耐碱不耐酸，在pH8.8～9.0的碱 性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这 一pH不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性 增殖霍乱弧菌的培养基;
• 在碱性平板上菌落直径为2mm，圆形，光滑， 透明。
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霍乱肠毒素本质是蛋白质，不耐热。对蛋 白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。
该毒素属外毒素，具有很强的抗原性。
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1个A亚单 毒性
霍位
单位
乱
肠
毒
素 5个B亚单 结合
位（4～6） 单位
具有激活腺苷酸环 A1肽链 化酶的酶活性
结合B亚单位； A2肽链
致病菌基本检测操作流程
致病菌基本检测操作流程英文回答：The basic procedure for detecting pathogenic bacteria involves several steps. First, a sample is collected from the suspected source, such as a patient's body fluid, food, or water. This sample can be collected using swabs, pipettes, or other appropriate tools.Next, the collected sample is cultured on specific growth media. This allows the bacteria to multiply and form visible colonies. Different types of media can be used depending on the specific bacteria being tested for. For example, MacConkey agar is commonly used to detect gram-negative bacteria, while blood agar can support the growth of a wide range of bacteria.After incubation, the colonies are examined for their morphology, such as size, shape, color, and texture. This visual inspection can provide initial clues about the typeof bacteria present. However, it is important to note that visual inspection alone is not sufficient for accurate identification.To further identify the bacteria, various biochemical tests are performed. These tests assess the presence or absence of specific enzymes, metabolic reactions, or other characteristics that are unique to certain bacteria. For example, the oxidase test can determine if a bacterium produces the enzyme oxidase, which is characteristic of many gram-negative bacteria.In addition to biochemical tests, molecular techniques such as polymerase chain reaction (PCR) can be used to detect specific DNA sequences that are associated with pathogenic bacteria. PCR can provide rapid and highly sensitive identification of bacteria, even at low concentrations.Once the bacteria have been identified, antimicrobial susceptibility testing may be performed to determine which antibiotics are effective against the pathogen. Thisinformation is crucial for guiding appropriate treatment options.It is important to note that the specific procedures and techniques used for pathogenic bacteria detection may vary depending on the laboratory and the resources available. However, the general principles of sample collection, culture, morphology examination, biochemical testing, molecular techniques, and antimicrobial susceptibility testing are commonly followed.中文回答：致病菌基本检测操作流程包括以下几个步骤。
无菌检查法培训PPT课件
表 1 批出厂产品最少检验数量
无 菌 检 查 法
1
无 菌 检 查 法
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表 2. 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量
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无 菌 检 查 法
2
表3. 固体制剂最少检验量及上市抽检样品的最少检验数
无 菌 检 查 法
五、实验材料的准备
培养基及稀释液 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
无 菌 检 查 法
无 菌 检 查 法
实验设备 过滤装置（无油真空泵、滤杯、滤头、滤瓶、微孔滤膜、夹子） 电子天平 压力蒸汽灭菌器 电热鼓风干燥箱 恒温培养箱 集菌仪
无 菌 检 查 法
5、供试品的准备
操作前，用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒，如果供试品容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材（如带有除菌过滤器的针头）向容器内导入无菌空气，再按无菌操作起开容器取出内容物。
无 菌 检 查 法
以上材料可以采用干热灭菌（只限于剪刀、镊子，灭菌时将剪刀和镊子装入专用灭菌器具内）或湿热灭菌。干热灭菌为160℃ 2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
无 菌 检 查 法
培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 无菌性检查：每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。
无 菌 检 查 法
202X
无Байду номын сангаас检查法培训
01.
无
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03.
检
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PikoReal使用培训致病菌检测教学课件(一)
PikoReal使用培训致病菌检测教学课件(一)PikoReal是一种致病菌检测的技术系统，它通过基因分子生物学技术可以快速、准确地检测出病原体是否存在。
然而，对于使用者来说，对这项技术的掌握及应用是十分必要的。
因此，PikoReal使用培训致病菌检测教学课件的研发和使用非常必要。
一、概述PikoReal的技术原理PikoReal使用的是聚合酶链式反应技术，通过在样本中寻找目的序列，快速扩增该序列，最终以荧光信号检测是否有目的性的序列存在。
而这个过程需要的核酸的数量只有很少的一部分，相比于传统检测方法，PikoReal技术具有更高的敏感性和准确性。
二、讲解PikoReal的样品准备样品准备是PikoReal检测的重要环节，因为它关系到检测的准确性和灵敏度。
课程要重点讲解采集样品的方法、样品的稀释、核酸的提取、和准备PCR反应体系等等。
三、讲解PikoReal实验的PCR条件PCR反应条件也是影响检测准确性和灵敏度的因素之一。
有些物种的检测需要不同的反应体系，因此需要讲解PCR反应体系的优化，比如：温度控制、时间控制等等。
四、讲解PikoReal的数据分析PikoReal可以通过软件自动处理产生的数据，但需要人工验证。
PikoReal数据分析主要讲解如何正确的选择样品和参考基因，如何分析样本扩增曲线和Melt Curve合适阈值选择等等。
五、课件的详细操作演示及课后练习在讲解完理论之后，可以通过详细操作演示来帮助学员更好地掌握实验操作流程和技巧，更好的掌握PikoReal的操作技能。
而课后练习可以帮助学员查漏补缺，夯实操作基础。
PikoReal使用培训致病菌检测教学课件可以提高学员对于PikoReal技术的认识和掌握，增强对于实验操作的技能素质，使得其在工作中能够更加准确地检测出致病菌，为健康的预防和治疗提供有力的支持。
致病菌的检验--革兰氏阳性无芽孢杆菌 ppt课件
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三、生化特性
1、糖类发酵：糖发酵能力极弱，仅葡、果、乳，＋； 2、接触酶：－； 3、H2S：＋； 4、不分解尿素； 5、明胶穿刺：呈试管刷状生长，不液化；
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四、抵抗力
无芽胞菌中抵抗力最强的一种，对腐败和干燥环境 有
较强的抵抗力：
腌肉中可生存5~6个月；
深埋尸体中生存7~10个月；
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六、致病性
1、本菌细胞内寄生，不被宿主细胞吞噬而破坏。产生
的李斯特溶血素O（listeriolysin O, LLO）与其能在巨
噬细胞内生长有关。
2、可自然感染多种家畜：猪、马、牛、绵羊；
3、病畜神经症状，成年牛、羊往往表现为“转圈病” ；
4、妊畜流产、血液中单核细胞增多。
5、鸡可全身感染，心肌坏死。
3 对消毒剂的抵抗力不强，常用消毒药5-10min能杀死 本菌：2.5%石炭酸、70%乙醇、2.5%氢氧化钠、 2.5%福尔马林均可有效杀灭。
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五、血清型
具有O抗原（阿拉伯数字表示）及H抗原 （小写英文 字母表示）, 16个血清型，常见1a、2a、4b型。与多 种细菌存在共同抗原，故血清学诊断意义不大。
第13章 革兰氏阳性无芽孢杆菌
李氏杆菌属 丹毒丝菌属
ppt课件
1
第1节 李氏杆菌属（Listeria）
最初，李氏杆菌属仅有产单核细胞李氏杆菌一个种，
之后相继确认了伊氏李氏杆菌(L.ivanovii)、无害李氏杆
菌(L.innocua)、威斯尔氏李氏杆菌(L.Welshimeri)和西
里杰氏李氏杆菌(L.seeligeri)等5个种。该属代表种是产
致病菌测试操作规程
致病菌测试操作规程致病菌测试操作规程一、实验目的：本实验的目的是了解致病菌的特性以及对其进行测试和鉴定，为防控疾病提供科学依据。
二、实验材料和仪器：1. 致病菌样本：包括已知菌株和待测菌株。
2. 导管和培养皿：用于处理和培养致病菌的样本。
3. 恒温培养箱：用于提供恒定的温度环境。
4. 培养基和试剂：包括选择性培养基和鉴定试剂。
三、实验步骤：1. 准备工作a. 将所需的培养基和试剂准备好，并确保其质量良好。
b. 确保工作台面和实验室环境的清洁和无菌。
c. 穿戴实验服、手套和口罩等个人防护装备。
2. 菌株的接种和培养a. 取一小部分已知菌株放入试管中，加入适量的培养基，并混匀。
b. 将试管放入恒温培养箱中，在适当的温度下进行培养。
c. 观察培养情况，确保菌株生长正常。
3. 待测菌株的处理和培养a. 从待测的样本中取适量的菌液，将其加入培养皿中。
b. 加入适量的选择性培养基，并混匀。
c. 将培养皿放入恒温培养箱中，在适当的温度下进行培养。
d. 观察培养情况，记录菌株的生长情况。
4. 鉴定试验a. 根据已知菌株的特性，选择合适的鉴定试剂进行检测。
b. 依次将鉴定试剂滴加到培养皿中，观察颜色变化和反应情况。
c. 根据鉴定试剂的反应结果，确定待测菌株的种类。
5. 结果分析a. 根据鉴定试验的结果，判断待测菌株是否为致病菌。
b. 如果待测菌株被鉴定为致病菌，需进一步进行感染实验和流行病学调查等工作。
四、安全提示：1. 实验时需佩戴个人防护装备，包括实验服、手套和口罩等。
2. 注意实验室的清洁和无菌操作，避免交叉感染。
3. 实验后，将实验器材进行消毒处理，确保实验室环境的安全。
五、实验注意事项：1. 实验前需仔细阅读实验材料和仪器的使用说明。
2. 操作过程中需注意细节，遵守实验规程。
3. 如有实验中出现异常情况，应及时向实验指导人员报告。
4. 实验结束后，需及时清理实验台面，并将操作材料妥善处理。
六、实验结果记录：实验进行过程中，需详细记录每一步骤的操作情况和实验结果，包括菌株的培养情况、鉴定试剂的反应结果等。
主稿空气微生物检测培训教材 ppt课件
• 1、采样设备、器材、试剂与培养基准备
• 2、现场调研、现场记录
• 3、采样人员无菌操作与个人防护 • 4、采样点的选择 • 5、采样无菌操作 • 6、气溶胶样品的采集（六级采样器） • 7、水样品的采集 • 8、尘样品的采集 • 9、样品采集后的现场整理 • 10、样品采集过程中，人员的一般安全防护
（集中空调通风系统送风）
3、细菌总数
≦100cfu/cm2
真菌总数
≦100cfu/cm2
致病微生物
（集中空调通风系统风管内表面）
集中空调通风系统送风嗜肺军团菌的检测（——液体采样法）
主稿空气微生物检测培训教材
• 控制由于空调通风系统造成生物致病因 子经空气播散；预防危害人体健康，疾 病传播的公共卫生问题发生；规范现场 与实验室操作，为监督执法、预警预报 提供准确的数据。
主稿空气微生物检测培训教材
• 肠道指示生物为例（N条）： 肠道独有，代表性强 数量多 存活时间比致病菌稍长 对消毒剂的耐受性比致病菌稍高 对人危害无或很小 检测方便，程序简单
主稿空气微生物检测培训教材
大肠杆菌作为水污染与否的卫生指示生物 应用多年，行之有效，各界公认，基本符合指 示生物的多项要求。对于室内空气而言，指示 生物则难以被选出。大肠杆菌作为粪便污染的 指示生物，与肠道传染病的病原体不仅同原， 还存在诸多共性，有代表性。空气则无法找到 这么一个指示生物。所以对空气质量的认同， 我们选择了指示生物与致病生物监测两个途径。
• 微生物气溶胶粒子大小，从 0.002~30µm。
主稿空气微生物检测培训教材
• 凡是在室内空气环境存在的致病性生物 因子，都有可能通过空调系统播散，以 致可能由于污染环境给人带来危险或潜 在的危害。室内空气环境存在的致病性 生物因子主要有如下几类室内空气环境 存在的致病性生物因子：
微生物检验技术培训PPT课件
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二、无菌检查
2. 直接接种法
• 直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试 品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培 养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
• 除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的支 /瓶数相等；生物制品无菌检查时硫乙醇酸盐流体培养基 和胰酪大豆胨液体培养基接种的支/瓶数为2：1。
• 除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供 试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐 流体培养基每管装量不少于15ml，胰酪大豆胨液体培养 基每管装量不少于10ml。供试品检查时，培养基的用量 和高度同方法适用性试验。
24h~48
【10版：改良马丁（琼脂）培养 20~25℃
基】
h 【10版：
上制黑述成曲培每霉养1m物l含用菌pH数7.小0于沙或版无1氏：用菌00葡改适氯c萄良宜化fu糖马方钠的琼丁法-菌蛋脂琼制悬白斜脂成液胨面斜孢。缓培面子冲养 培悬液基养液或基【0】1.90%无2℃菌3 】-氯2化8钠5溶d~液7d
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二、无菌检查
4.供试品的无菌检查
•结果判断
• 阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生 长。否则，试验无效。
• 若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生 长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管 显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定， 除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物 非供试品所含。
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浮游菌 cfu/m3
沉降菌 （）
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非特异性荧光染料 – SYBR- Green
SYBR-Green I
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非特异性荧光染料 – SYBR- Green
融解曲线分析（Tm）
Tm
Tm：50%的DNA产物解链时的温度
相同模板在同一台PCR仪上相同条件下 重复96次扩增的扩增曲线图
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荧光定量PCR —— 基本原理 —— 荧光染料和探针 —— 应用介绍
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荧光定量PCR —— 基本原理
光源
模板，引物,dNTP, 缓 冲液,DNA聚合酶和 荧光探针或荧光染料
热循环仪
加入荧光染料 的PCR体系
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探测器
可以实时检测出每轮循环 的PCR产物量
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PikoREAL 的硬件系统:
光源: 5x LED
• 寿命长，终身无需更换，为qPCR实验提供持续，稳定的激发信号 • 无需使用ROX染料进行光强校正
探测器：CCD 相机
• 能同时快速收集整板多重荧光信号数据 • 高灵敏度
PCR模块：96孔半导体PCR
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功能：
绝对定量
相对定量
熔解曲线分析
基因型分析
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PCR的基本原理
• 在PCR反应过程中，升温，降温交替进行，循环往复 —— 热循环 • 提供热循环环境的仪器 —— 热循环仪（PCR仪）
Melt
Melt
Temperature
Copy
Copy
Anneal Cycle 1
Time
Anneal Cycle 2
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PCR的基本原理
PCR 反应体系
• 模板（DNA or RNA）
体外的DNA 复制
PCR 反应
体外RNA 逆转录为CDNA
RT- PCR 反应
通过PCR或RT-PCR反应，就可累计大量的 特异性目的片段，用于下游的检测和研究
5
PCR的基本原理
6
PrimExetMresneBsltionndg 759284C
PCR的基本原理
Polymerase Chain Reaction（PCR） ——聚合酶链式反应
PikoReal使用培训-致病菌检测
1
PCR和定量PCR —— 基本知识介绍
生命的遗传物质DNA（少数物种为RNA），对于不同 的物种来说，其碱基排列顺序是独一无二的 检测不同生物中特异的DNA片段，就可以清楚的区分不 同的生物。
3
中心法则
4
碱基配对原则
Polymerase Chain Reaction（PCR） ——聚合酶链式反应
一种DNA片段只有一个特定的Tm，所以通过溶解曲线分析，可以检 验扩增的产物是否是目的片段
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非特异性荧光染料 – SYBR- Green
应用列举：酵母菌检测
根据Tm值判断是否是酵母菌
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特异性荧光探针 – Taqman probes
Sequence Specific Probes: Taqman probes
食品检验
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PCR技术的优点与缺点
缺点：
•扩增与检测分开进行→ 繁琐 •使用荧光染料EB检测DNA → 有毒 •不同实验室之间结果没有可比性 •通量太低
扩增
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检测
PCR技术的优点与缺点
缺点：
很难准确得到样本内模板DNA或RNA的量 终点的产物量不一定能如实反应和起始模板量的对应关系
PCR反应进入平台期， 合成新链的原料开始不 足，酶的活力也下降， 导致新增DNA的量增长 缓慢，最后停止增长。
• 反应体系：5 - 50ul （常用）
9
PCR的基本原理
PCR实验流程图: A
模板，引物,dNTP, 缓 冲液,DNA聚合酶
上样
PCR反应
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PCR的基本原理
PCR实验流程图: B
PCR产物电泳，EB染色
+
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PCR的基本原理
PCR实验流程图: C 凝胶成像系统成像，定终产物浓度 – 半定量
5’பைடு நூலகம்
3’
5’
3’
3’
5’
Excitation Excitation
RR
Q
Q
3’
5’
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特异性荧光探针 – Taqman probes
常用的标记探针的染料： 第一通道：FAM 第二通道：HEX 第三通道：Rox 第四通道：CY5
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特异性荧光探针 – Taqman probes
致病微生物：
沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 单核细胞增生李斯特氏杆菌 肠毒素大肠杆菌 阪崎肠杆菌 弯曲杆菌（禽类） 肉毒梭菌 志贺氏菌 小肠结肠炎耶尔森菌、 霍乱弧菌 副溶血弧菌 创伤弧菌等
• DNA：从 animal, plant, bacteria, yeast, virus中抽提 • RNA：抽提后逆转录为cDNA(也在PCR仪上完成）
• 引物（一对或多对）
• 脱氧核糖核苷酸 (dNTP原料) • 热稳定的DNA聚合酶 • Buffer （缓冲液提供适合的酶作用环境）
PCR kit
均能把3-5天的检测时间缩短到一天之内
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单重和多重荧光定量PCR
•单通道（单色）：一个PCR管里只做一个基因定量（多用SybrGreen） •双通道（两色）：一个PCR管里做两个基因的定量
常用
•多通道（多色）：一个PCR管里做三个以上基因定量
FAM HEX
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PikoReal 功能简介
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研发生产中心：位于芬兰Espoo
两种产物
多种产物
两对特定引物扩增的片段
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非特异性引物扩增出一系列片段
PCR应用
• PCR是当今应用最广泛的生物技术之一
• 几乎所有的分子生物学实验室，药物研发中心，临床诊断实验室都在 使用PCR技术，而且还有新的应用方向不断开发出来
几个重要的应用领域:
•
科学研究
•
•
医学研究及诊断
•
•
法医鉴定
•
•
HRM法
双探针法
选配模块 32
五通道四色：
激发波长 (nm) 475–500 515–535 570–590 600–640 475–500
发射波长 (nm) 520–550 557–590 615–650 666–740 520–590
预校正的染料 FAM, SYBR Green HEX, Yakima Yellow ROX, Texas Red
区别： 普通PCR：可以粗略定出反应结束时终产物的量- 半定量 荧光定量PCR仪：可以精确测量出初始模板量
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荧光定量PCR —— 荧光染料和探针
• 非特异性的荧光染料 SYBR Green I
• 特异性的荧光探针 TaqMan
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非特异性荧光染料 – SYBR- Green
SYBR-Green I 5’