高架十字迷宫测试实验
小鼠高架十字迷宫实验原理
小鼠高架十字迷宫实验原理
高架十字迷宫（the elevated plus maze,EPM）是评价啮齿类动物焦虑反应的实验方法 , 相较伤害性刺激所致小鼠焦虑行为检测（如电刺激、噪声刺激、饮食剥夺和暴露在捕食者气味等）, 该实验具有操作简单的优点 , 能直观反映小鼠的条件应答。
EPM实验是在高架Y 型迷宫的基础上发展而来的。
EPM由开臂（open arms和闭臂（closed arms）各两条组成 , 呈十字形交叉 , 交义部分为中央区 , 距地面有一定高度。
其原理是由于面对新事物开臂小鼠会产生好奇心去探究 , 而它们有嗜暗的天性（闭臂）, 两者之间发生探究与回避的冲突行为，产生焦虑心理。
整个迷宫距离地面的高度相当于人类站在悬崖边，易导致动物产生恐惧不安的心理。
可以通过对比小鼠在开臂和闭臂内的滞留时间和路程来评价小鼠的焦虑行为。
EPM实验在药物开发和研究中得到广泛的应用：主要用于苯二氮卓类药物的抗焦虑作用研究及筛选具有抗焦虑作用的新药,也被用于研究精神性药物滥用的影响及激素的功能,应激对生殖、衰老、妊娠的影响等。
抗焦虑药主要选择性地抑制边缘系统的海马、杏仁核 ,产生抗焦虑作用。
小鼠高架十字迷宫实验原则
小鼠高架十字迷宫实验原则
由① ～④分别计算出：
①进入开放臂和封闭臂的总次数 (OE + CE )：表示大鼠的运动力(1ocomotor activity) ：
②进入开放臂次数比例 (OE％) ：即开放臂进入次数／(OE+CE )×100％；
③开放臂停留时间比例 (OT％) ，即开放臂停留时间／(OT+CT )×100％。
每只大鼠测试5min。
中间用湿布擦拭迷宫，清除粪便，继用干布擦净后再进行下一只大鼠的测试。
高架十字迷宫试验 ( EPM ) 既可以建立焦虑应激的模型也是国际上公认的经典测量焦虑反应的方法。
其原理是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧心理, 形成动物的矛盾冲突来考察大鼠的焦虑状态。
EPM 测试的项目中, 焦虑动物的 OE% 和 OT% 会明显降低, 经典抗焦虑药物则使两者升高, OE + CE 反映了动物的运动活性。
本研究发现模型组大鼠的 OE% 和 OT% 显著下降, 运动活性也降低。
HD反映了动物在非保护区内的探索行为, 代表动物对陌生环境的好奇探究或因恐惧而寻求逃避, 与焦虑程度有一定相关性, 本研究中空瓶应激后的大鼠HD行为减少; RR可用来观察药物有无镇静作用及镇静强度。
上述结果证实, 慢性应激后的大鼠明显处于焦虑状态, 说明慢性焦虑应激大鼠模型的制备成功, 且通过量化的标准客观反映出大鼠的焦虑程度。
高架十字迷宫测试实验
高架十字迷宫测试实验摘要本实验利用大鼠对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突来考察动物的焦虑状态。
方法是把大鼠放入高架十字迷宫中，记录开放臂进入次数、停留时间，闭合臂进入次数、停留时间，并计算开放臂停留时间比例，开放臂进入次数比例。
进入开放臂次数及停留时间与大鼠的焦虑情绪成负相关，进入开放臂次数越少，停留时间越短，说明老鼠的焦虑情绪越严重。
实验结果发现两只大鼠几乎没有进入开放臂，表明大鼠有着非常高的焦虑情绪。
关键词高架十字迷宫焦虑1前言高架十字迷宫（elevated plus-maze，EPM）是非条件反射模型，以动物自发的恐惧样反应为行为学基础。
它既可建立焦虑应激的模型，也是国际上公认的经典测量焦虑反应的方法。
由 Handley 等在 Montgonmery 的研究基础上发展而来，已被广泛应用于大鼠和小鼠等啮齿类动物焦虑行为学的研究。
高架十字迷宫实验就是由于动物对新环境的探究和对高悬开放臂的恐惧而形成的矛盾冲突状态，从而反映出动物的焦虑情绪，所以高架十字迷宫既可以建立非条件反射焦虑动物模型，也可以作为测量动物焦虑反应的方法。
大、小鼠的焦虑行为学研究普遍采用此方法。
据报道，状态焦虑和特质焦虑是动物的两种焦虑行为，在高架迷宫实验中，实验动物向下探究次数和在闭臂内后腿直立的次数这两组数据的稳定性较差，提示这两个数据是用来评价实验动物状态焦虑的指标，而实验动物进入高架迷宫开放臂的次数与时间，分别占进入两臂次数总和与在两臂停留时间总和的百分比复测性度较高，所表现的是实验动物趋近-规避冲突的行为结果，为评价动物特质焦虑表现的主要指标，与动物焦虑的程度直接相关，一般这两个指标之间也是具有高度相关性，如果动物在开放臂探索时间和次数的比例减少，则说明动物的焦虑程度高。
大鼠面对新环境（开放臂）会产生好奇心去探究，因大鼠有嗜暗的天性（封闭臂），两者之间发生“探究-回避”的冲突的行为，产生焦虑心理。
进入开放臂时间百分比和进入开放臂次数百分比反映了动物的焦虑状态；进入开放臂和封闭臂总次数反映动物的运动能力，向下探究次数反映了动物在非保护区内的探索行为，与焦虑程度有一定相关性。
小鼠高架十字迷宫实验方法
小鼠高架十字迷宫实验方法
1、将小鼠放置于鼠笼中，让其适应环境10分钟；
2、将迷宫放置于实验室中央，调整光线和温度，保证实验环境稳定；
3、用纸巾和清水擦拭迷宫，保证干净卫生；
4、将小鼠放置于起点，启动计时器；
5、记录小鼠行进路线、时间，并注意观察小鼠行为；
6、当小鼠走出迷宫或达到终点时，停止计时器，记录实验数据；
7、重复以上步骤，直至完成所有实验。
三、实验注意事项：
1、实验室环境应保持稳定，避免影响实验结果；
2、小鼠应适应环境10分钟以上，避免影响实验结果；
3、记录小鼠行为时要仔细观察，尽可能详细地记录数据；
4、实验结束后，将小鼠放回鼠笼，注意保持其饮食和睡眠。
- 1 -。
小鼠焦虑模型
采用高架十字迷宫实验建立小鼠焦虑模型[1]：迷宫测试前将每只小鼠放入塑料盒中，自由行走5min后，将其放置于高架十字迷宫中央处，高架十字迷宫由两个开臂（长50.8 cm，宽10.0 cm）与两个闭臂（长50.8 cm，宽10.0 cm，高0.6 cm），和一个连接四肢臂的成“+”型的中央平台（10cm×10cm）)和开放臂边缘高1cm的矮挡板组成，中央台距离地面50 cm。
使小鼠头部正对其中一个开放臂，用计算机跟踪记录小鼠在高架上的活动，统计在5 min内进入开臂次数（open arm entry，OE）、闭臂次数（close armentry，CE）及在开臂与闭臂内的运动时间。
抗焦虑作用指标的测定以进入开臂次数与总入臂次数的百分率（the percentage of entries to theopen arms，OE%）及在开臂内运动时间与入臂的总时间百分率（the percentage of time spentin the openarms，OT%）代表。
动物行为学观察：进入开放臂次数、开放臂停留时间、进入闭合臂次数、闭合臂停留时间。
进入开放臂次数及停留时间与小鼠的焦虑情绪成负相关，进入开放臂次数越少，停留时间越短，说明小鼠的焦虑情绪越严重。
旷场实验：采用旷场实验来评价小鼠自主活动和焦虑水平。
实验前 60 min让小鼠适应环境。
实验开始时将小鼠从笼中取出置于带有遮光罩帘的旷场实验装置（500 mm×500mm×415 mm）中央开始活动。
通过旷场设备上方的摄像机及与其相连的监视器记录5min内小鼠在旷场中的活动情况，可通过监视器记录小鼠活动轨迹，整理数据并计算相关指标：小鼠进入旷场中央的次数及停留的时间（动物越集中于旷场的四周活动，代表小鼠越焦虑）。
用于检测焦虑的主要因子：γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸、5-HT（5羟色胺）、胆囊收缩素（CCK）、神经肽Y（NPY）、P物质（SP）此外CREB[2]、ERK[3]、AKT以及CDKL5[4]（单胺氧化酶）也用于焦虑的研究。
高架十字迷宫测试实验
高架十字迷宫测试实验摘要本实验利用大鼠对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突来考察动物的焦虑状态。
方法是把大鼠放入高架十字迷宫中，记录开放臂进入次数、停留时间，闭合臂进入次数、停留时间，并计算开放臂停留时间比例，开放臂进入次数比例。
进入开放臂次数及停留时间与大鼠的焦虑情绪成负相关，进入开放臂次数越少，停留时间越短，说明老鼠的焦虑情绪越严重。
实验结果发现两只大鼠几乎没有进入开放臂，表明大鼠有着非常高的焦虑情绪。
关键词高架十字迷宫焦虑1前言高架十字迷宫（elevated plus-maze，EPM）是非条件反射模型，以动物自发的恐惧样反应为行为学基础。
它既可建立焦虑应激的模型，也是国际上公认的经典测量焦虑反应的方法。
由Handley 等在Montgonmery 的研究基础上发展而来，已被广泛应用于大鼠和小鼠等啮齿类动物焦虑行为学的研究。
高架十字迷宫实验就是由于动物对新环境的探究和对高悬开放臂的恐惧而形成的矛盾冲突状态，从而反映出动物的焦虑情绪，所以高架十字迷宫既可以建立非条件反射焦虑动物模型，也可以作为测量动物焦虑反应的方法。
大、小鼠的焦虑行为学研究普遍采用此方法。
据报道，状态焦虑和特质焦虑是动物的两种焦虑行为，在高架迷宫实验中，实验动物向下探究次数和在闭臂内后腿直立的次数这两组数据的稳定性较差，提示这两个数据是用来评价实验动物状态焦虑的指标，而实验动物进入高架迷宫开放臂的次数与时间，分别占进入两臂次数总和与在两臂停留时间总和的百分比复测性度较高，所表现的是实验动物趋近-规避冲突的行为结果，为评价动物特质焦虑表现的主要指标，与动物焦虑的程度直接相关，一般这两个指标之间也是具有高度相关性，如果动物在开放臂探索时间和次数的比例减少，则说明动物的焦虑程度高。
大鼠面对新环境（开放臂）会产生好奇心去探究，因大鼠有嗜暗的天性（封闭臂），两者之间发生“探究-回避”的冲突的行为，产生焦虑心理。
进入开放臂时间百分比和进入开放臂次数百分比反映了动物的焦虑状态；进入开放臂和封闭臂总次数反映动物的运动能力，向下探究次数反映了动物在非保护区内的探索行为，与焦虑程度有一定相关性。
小鼠O迷宫实验原理
小鼠O迷宫实验原理
O迷宫可用于测试大小鼠的焦虑和探索相关行为。
高架O迷宫与高架十字迷宫十分相似, 但是缺少一个中心区域。
这样可以避免解释中心区域逗留时间。
此外，高架O迷宫还能够测量在开放区域和闭合区域所花时间的差异。
高架O迷宫同高架十字迷宫一样，也是进行焦虑情绪研究的经典试验，不同之处在于高架O迷宫的开放臂与封闭臂组成了无间隙圆环形，避免了高架十字迷宫的中心区即不属于封闭臂也不属于开放臂的现象。
高架O迷宫有时优于高架迷宫实验，因为比起高架迷宫的十字机械臂，O型迷宫提供实验动物一个较为平缓的移动空间。
在高架十字迷宫里，动物主动进入开臂作为行为转变的标志，而在高架O迷宫里，动物只是简单的在迷宫里行走，这样的行为转变更为自发的发生，更接近真实的实验结果。
焦虑症模型
一、大鼠高架十字迷宫测试实验原理：大鼠高架十字迷宫实验是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成动物的矛盾冲突状态，评价药物的抗焦虑或致焦虑作用。
实验装置: 实验装置由平台底座和大鼠迷宫反应平台构成，平台底座可以将迷宫反应平台抬升至距地面50cm，迷宫反应平台由对称的两组闭合臂和幵放臂组成，闭合臂(长50cm×宽l0cm×高40cm)，开放臂(50cm×宽10cm×高1cm)。
实验过程：将受试动物快速从饲养笼中取出放入高架十字迷宫反应平台中央区，观察并录像5分钟，同时记录大鼠进入幵放臂的次数和停留时间，进入闭合臂的次数和停留时间，计算大鼠进入开臂次数和在开臂滞留时间分别占总次数（进入开臂和闭臂次数之和）和总时间（在开臂和闭臂滞留时间之和）的百分比，以此作为评价焦虑的指标。
二、旷场实验测试实验原理：旷场实验由于操作简便、设备简单，在行为研究中使用非常普遍，多用来评价动物的自主活动等综合行为。
实验装置：规格为长80cm×宽80cm×高40crn的木质敞口箱，内壁被漆黑，底面被分成5×5的方格。
实验过程：将受试动物快速从饲养笼中取出放入敞箱中央格，观察并录像5分钟，同时记录正中格停留时间，穿过中央格的次数，直立次数(前腿离幵敞箱底面抬起和搭在敞箱周壁上的总次数)，理毛次数，排便粒数，行走格子的总数。
三、大鼠V ogel饮水冲突实验实验原理：该冲突模型程序简单，口渴（禁水）大鼠为了饮水而遭受电击，形成冲突状态。
实验装置：测试盒体积为20cm×26cm×14cm，顶部有插入水瓶的金属饮嘴，底部为不锈钢电网，外联一电刺激器和焦虑记录仪。
实验过程：实验在日光灯照下分两个阶段进行。
第一阶段，非惩罚饮水训练：将大鼠禁水24h后单个置于操作箱，让其充分探究，直到发现瓶嘴并开始舔水，计数器自动记录大鼠3min 的舔水次数，淘汰舔水少于300次的大鼠。
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高架十字迷宫测试实验
摘要本实验利用大鼠对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突来考察动物的焦虑状态。
方法是把大鼠放入高架十字迷宫中，记录开放臂进入次数、停留时间，闭合臂进入次数、停留时间,并计算开放臂停留时间比例,开放臂进入次数比例。
进入开放臂次数及停留时间与大鼠的焦虑情绪成负相关,进入开放臂次数越少,停留时间越短，说明老鼠的焦虑情绪越严重。
实验结果发现两只大鼠几乎没有进入开放臂，表明大鼠有着非常高的焦虑情绪。
关键词高架十字迷宫焦虑
1前言
高架十字迷宫(elevatedｐluｓ-maｚe，EPＭ)是非条件反射模型，以动物自发的恐惧样反应为行为学基础。
它既可建立焦虑应激的模型,也是国际上公认的经典测量焦虑反应的方法。
由Ｈandley等在Montgonｍery 的研究基础上发展而来,已被广泛应用于大鼠和小鼠等啮齿类动物焦虑行为学的研究。
高架十字迷宫实验就是由于动物对新环境的探究和对高悬开放臂的恐惧而形成的矛盾冲突状态,从而反映出动物的焦虑情绪,所以高架十字迷宫既可以建立非条件反射焦虑动物模型，也可以作为测量动物焦虑反应的方法。
大、小鼠的焦虑行为学研究普遍采用此方法。
据报道，状态焦虑和特质焦虑是动物的两种焦虑行为,在高架迷宫实验中，实验动物向下探究次数和在闭臂内后腿直立的次数这两组数据的稳定性较差，提示这两个数据是用来评价实验动物状态焦虑的指标,而实验动物进入高架迷宫开放臂的次数与时间，分别占进入两臂次数总和与在两臂停留时间总和的百分比复测性度较高，所表现的是实验动物趋近-规避冲突的行为结果，为评价动物特质焦虑表现的主要指标，与动物焦虑的程度直接相关，一般这两个指标之间也是具有高度相关性,如果动物在开放臂探索时间和次数的比例减少，则说明动物的焦虑程度高。
大鼠面对新环境(开放臂）会产生好奇心去探究，因大鼠有嗜暗的天性(封闭臂）,两者之间发生“探究－回避”的冲突的行为,产生焦虑心理。
进入开放臂时间百分比和进入开放臂次数百分比反映了动物的焦虑状态；进入开放臂和封闭臂总次数反映动物的运动能力，向下探究次数反映了动物在非保护区内的探索行为, 与焦虑程度有一定相关性。
高架十字迷宫实验在行为学以及抗焦虑药物研究中应用也越来越多。
2方法
2.1实验原理
利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突来考察动物的焦虑状态。
高架十字迷宫具有一对开臂和闭臂，大鼠由于嗜暗性会倾向于在闭臂中活动，但出于探究性又会在开臂中活动，在面对新奇刺激时,动物同时产生探究的冲动和恐惧，这就造成了探究和回避的冲突行为,从而产生焦虑心理。
进入开放臂次数及停留时间与大鼠的焦虑情绪成负相关，进入开放臂次数越少，停留时间越短，说明老鼠的焦虑情绪越严重。
2.2实验材料与仪器
实验动物：两只SD大鼠
７０%酒精、毛巾
高架十字迷宫：由两条相对开放臂（50cm长×l０cm宽）和两条相对闭合臂(５0cm长×ｌ0cｍ宽×40cｍ高)及中央区(１0cm×l0cｍ)连接而成，离地高７0cm
ＵSB采集卡、视频线、摄像机、秒表、计数器
2．3实验程序
实验步骤：
1、抚摸大鼠，适应环境
2、将大鼠从中央区面向闭合臂放入迷宫，记录5分钟内的活动情况。
观察指标包括：开放臂进入次数、停留时间，
闭合臂进入次数、停留时间。
计算开放臂停留时间比例，开放臂进入次数比例
3、实验完成后将大鼠放回笼内，喷洒酒精清洁迷宫。
注意事项：
1、实验前充分触摸大鼠，动物必须对实验者和实验环境完全适应没有恐惧感
２、如果动物掉落在地，最好将此动物剔除
3、注意控制实验中其他干扰因素
３结果
表1 两只大鼠5分钟内进入开闭臂的次数与停留时间
大鼠1 大鼠2
开放臂进入次数0 ０
闭合臂进入次数12 １
开放臂停留时间0 0
闭合臂停留时间３’3２"15 ４'34"37
从表中可以两只大鼠进入开放臂否认次数均为0,两只大鼠也没有在开放臂停留；大鼠1进入闭合臂的次数比大鼠２要多,而大鼠2停留在闭合臂的时间则比大鼠1要长。
4讨论
从表1可以看出,大鼠１和大鼠２两只大鼠均有较高程度的焦虑情绪。
本实验利用大鼠面对新环境（开放臂)会产生好奇心去探究，因大鼠有嗜暗的天性(闭合臂)，两者之间发生“探究-回避”的冲突的行为，从而产生焦虑心理。
与大鼠2相比，大鼠1进入闭合臂的次数明显要多,说明大鼠1的活动频繁，对新环境的好奇心高,在非保护区(开放臂)探索活动多。
大鼠１在进入高架十字迷宫这个新环境时,产生好奇,频繁的对开放臂进行探索，但由于对高悬开放臂的恐惧而不敢进入开放臂,因此好奇与恐惧的矛盾形成较高的焦虑情绪。
从表中看出大鼠2停留在闭合臂的时间比大鼠1要长，表明大鼠2的焦虑程度比大鼠1的焦虑程度高。
大鼠2更容易产生焦虑的情绪，而且好奇心理没有大鼠1高。
在实验期间,大鼠1活动频繁，对开放臂环境多次进行探索,而大鼠２则活动较少,长时间停留在一段的闭合臂，探索活动仅有3、4次；两只大鼠在实验时，均出现出现活动缓慢、减少、贴壁、蹲伏等现象，并且有大小便。
两只大鼠差异明显的原因可能有:一方面两只老鼠存在个体差异,因此会有焦虑程度和好奇性有着差异。
另一方面，在大鼠1实验完后,清洁迷宫不够彻底,残留大鼠1的尿液味道和酒精味,一定程度上会影响大鼠2的活动。
5结论
两只大鼠均有着较高的焦虑情绪,其中大鼠2的焦虑程度高于大鼠1的焦虑程度。
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