硅胶柱技巧
详细柱层析技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
特别是在容易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体择要具体分析。
如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf 在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。
可以湿柱，也可以干柱。
不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。
也是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
关于湿法、干法上样。
湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
样品和硅胶的量有一种说法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。
溶剂的选择。
当然是最便宜，最安全，最环保的了。
所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。
文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。
乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。
二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。
甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。
其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。
由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。
经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。
当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。
这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。
在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。
关于操作问题。
1 装柱。
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。
书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。
当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！2 加样。
用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。
加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm 就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
3 淋洗剂的选择。
感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。
不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4 样品的收集。
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。
所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。
这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。
这时可以采用氧化铝作固定相。
另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，wuwu。
如果都用小试管那工作量又太大。
5 最后的处理。
柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本了，必要时进行重结晶。
补充自然沉降法制备常压色谱柱常压柱色谱，又称柱层析，是色谱法中最常见的一种。
它的突出优点是，分离效率比经典的化学分离方法高的多，与其他色谱法相比，不需要昂贵的仪器设备，更换流动相和吸附剂方便，消耗材料少，成本低，适合分离取样量从克到微克级范围很宽的各种样品，因此在化学实验室中至今仍被广泛应用。
为了保证色谱柱良好的分离效果，色谱柱应装填得尽可能紧密和均匀，在柱中没有气泡、裂缝或沟槽，也不发生柱的径向或轴向固定相的粒度不均匀分布。
传统常压色谱柱的填装分为干法装柱和湿法装柱（也称浆法装柱）两种，这两种方法均存在操作不易掌握、易出现气泡和裂缝，装柱时间长等不足之处。
本文提出的新的装柱方法介入干装法和湿装法之间，称之为自然沉降法。
自然沉降法通过对固定相和溶剂的选择，并辅以新的色谱柱，可对常压色谱柱进行简便、高效的填装。
用所述装柱技术制备的色谱柱对多种未知组成样品进行分离[1]，分离效果明显优于传统装柱法。
此外，该法装柱快速，易掌握，不会出现断层和气泡等常见问题，装柱成功率高，具有很好的实际应用价值。
柱层析技术要点极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。
1。
称量。
200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2。
搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3。
装柱。
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4。
压实。
沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5。
上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6。
过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7。
检测。
要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8。
送谱。
收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。
如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。
可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化2.将柱子必须装平整、均匀3.考虑有限柱填料的吸附量4.可考虑用剃度法分开并洗脱关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
硅胶层析柱方法
硅胶层析柱方法说实话硅胶层析柱这事儿，我一开始也是瞎摸索。
我就知道硅胶层析柱是用来分离混合物的，可具体怎么做，真是一头雾水。
我开始的时候，就知道要装柱。
这装柱啊，就像是盖房子打地基，基础打不好，后面全白搭。
我当时把硅胶一股脑地就往柱子里倒，也没太注意均匀不均匀的事儿。
结果呢，等我开始上样分离的时候，根本就分不好，这就是个教训。
后来我就学到了，装柱的时候得讲究。
硅胶得慢慢加进去，一边加还得一边用东西轻轻敲打柱子，就像你装修房子时小心翼翼地砌墙一样，让硅胶均匀地铺在柱子里，不能有断层啥的。
我试过用玻璃棒敲，效果还不错。
可千万不能敲太狠了，不然硅胶都被震得太实了，样品在柱子里走得特别慢，也不利于分离。
说完装柱，再说上样。
上样的浓度我就折腾了好久。
我一开始上样浓度特别高，想着这样是不是分离得快些。
结果呢，样品在柱子里都黏糊糊的，走得歪歪扭扭的，一点都不整齐。
就好比一群人排队走，如果前面人堆得太密集，后面人就没法好好走了，全乱套了。
后来我把样品的浓度调整合适了，分离效果才好起来。
还有那个洗脱剂，我老是搞不定流速。
流速太快吧，样品可能就分不开，都一下子冲出来了。
流速太慢呢，又浪费时间。
我也不知道到底多少算合适。
不过据我的经验，刚开始洗脱的时候，可以先慢一点，看看样品的分离情况，如果分离得还不错，再稍微加快一点速度试试。
我都是用那种滴液漏斗慢慢控制流速的，虽然不是特别精准，但总比一开始一股脑让它流要强多了。
收集洗脱液的时候我也闹过笑话。
开始的时候，我不管三七二十一，只要流出来就收，也没记清楚哪个时间段出来的可能是什么样的成分。
后来我就学聪明了，我按照流速大概估算一下时间，然后分成好几个小瓶子收集，并且做好标记。
这样最后分析成分的时候就方便多了。
我这硅胶层析柱的操作啊，也还在不断摸索当中，这些都是我的一些尝试过程和经验教训，希望能给你点帮助。
像我做的时候还得特别注意温度，不同温度对分离效果是有影响的，只是这个影响到底有多大，我还不是特别确定，但总还是要尽量保持实验环境温度相对稳定为好。
我的过硅胶柱的经验
一、裝柱裝柱子（添硅膠）時，常用的有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優劣。
不論干法還是濕法，硅膠（稱為固定相更為廣義）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右（長度沒有絕對之說，根據自身情況而定，制備的大柱可以長達一米），太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。
濕法裝柱是先把硅膠用適當的溶劑拌勻后，再填入柱子中，然后再加壓（土方法可以用養魚的氧氣泵加壓或是用氮氣，當然不加壓也可以）用淋洗劑"走柱子"，本法最大的優點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。
（我一般都用濕法裝柱）干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側（濕法也要敲的，效果好點），至硅膠界面不再下降為GAGGAGAGGAFFFFAFAF止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結實（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。
接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。
通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。
干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于"走柱子"時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到）（梯度洗脫時，濕法裝柱也會出現該情況，比較不好處理，可以緩慢改變溶劑，且置于通風處），容易產生氣泡，這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醚（用乙醚最最明顯），二氯甲烷更為明顯。
雖然產生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當然也就談不上分離了。
解決的辦法是：第一、硅膠一定要壓結實；第二、一定要用較多的溶劑"走柱子"，一定要到柱子的下端不再發燙，恢復到室溫后再撤去壓力。
??GAGGAGAGGAFFFFAFAF也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂(我一般垫张滤纸，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。
实验室硅胶柱操作规范
实验室硅胶柱操作规范1、操作步骤1.1 硅胶准备柱硅胶一般选用200-300目，拌样硅胶一般选用100-140目。
拌样硅胶用量为样品量的1-8倍，柱硅胶用量为样品量的8-100倍，对于极难分离的样品，还可以使用硅胶H作为柱硅胶。
1.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱，一个铁架台，烧杯，锥形瓶，径口直径较大的玻璃漏斗，一支玻璃棒，硅胶管，螺旋夹，夹子等。
1.3 装柱1.3.1 将硅胶管与色谱柱下端相连(若色谱柱带活塞则不用)，往硅胶管上加上螺旋夹，取与色谱柱口径相应的棉花，厚薄适中(太厚流速慢，太薄易漏硅胶)，置入色谱柱底部，将色谱柱固定于铁架台上。
1.3.2 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相；或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。
②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。
装完柱后需等硅胶沉降压实后再上样，通常需要半天到一天时间。
1.3.3试样的加入①湿法：将试样溶于层析时使用的流动相中，过滤，待填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，再沿色谱管壁缓缓加入滤液。
注意勿使吸附剂翻起。
②干法：选择适当溶剂使样品刚好完全溶解，过滤后取100-140目硅胶适量，将样品溶液缓慢加入到拌样硅胶中，边加入边搅拌，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状（一般需放入通风橱中挥干过夜）；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。
如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
上完样后可在拌样硅胶上面加入少量100-140目的保护硅胶，在保护硅胶之上还可以加入脱脂棉以防止加流动相时破坏硅胶保护层。
快速硅胶柱使用小技巧
+ 初始溶剂比例=（薄层跑板的比例÷4） + 最终溶剂比例=（薄层跑板的比例×2） +第一部分：初始比例，走 1 柱体积 +第二部分：从初始比例线性渐增至最终比例，走 11 个柱体积 +第三部分：最终比例，走 2 个柱体积。
举个例子：80g 的柱子在如下条件中可分离多少样品？ 薄层数据：Rf1=0.19，Rf2=0.33 则 N=（0.33-0.19）÷0.01=14 按公式计算，J=80×0.2%×14=2.24g，则，该样品依照此薄层数据，80g 柱子最 大进样量为 2.24g。
再来一个例子算算看。 薄层数据：Rf1=0.25，Rf2=0.21，120g 的柱子能分多少样品？ N=（0.25-0.21）÷0.01=4 进样量 J=120×0.2%×4=0.96g 不难看出，ΔRf 差值越小，进样量就越少。我们应根据目标物与杂质的分离度（ΔRf 的差值） 来选择使用何种规格的柱子。 该进样公式可优化为：J=Z×0.2×ΔRf， 即：进样量=硅胶量（实际克数）×0.2×Rf 的差值 二、 用什么方法分离？
如图所示 例如：跑板的溶剂系统是石油醚：乙酸乙酯=4：1，即乙酸乙酯的含量是 20%， 那么走线性梯度的初始溶剂比例为 20%÷4=5%乙酸乙酯，走 1 个柱体积；然后 从 5%逐渐递增到 20%×2，即 40%，这个渐增的过程共计 11 个柱体积；最后以 40%的比例走两个柱体积，结束，共计 14 个柱体积！
注意：这个方法对泵的精度要求很高，溶剂调节比例的准确度在 1%以内。如 biotage 公司的 isolera one；isco 公司的 RF200 均可达到要求。如果您用的是国 产的设备，或者精度比较差的设备（如 isolera prime、RF75 等），请将此方法的 最终溶剂比例调节为：薄层跑板的比例×1.5，其他条件不变。 以上方法已被数百次论证，确实可提高分离度，并可将溶剂的损耗降到最低。 特别需要说明的是：根据薄层板数据建立的这个方法的前提条件是：爬板溶剂比例应能 将目标物的 Rf 值落在 0.01-0.4 之间！！
硅胶柱层析的操作方法及注意事项
硅胶柱层析的操作方法及注意事项硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，具有操作简便、结果准确等优点，在化学、生物、医药等领域得到广泛应用。
下面我们来介绍硅胶柱层析的操作方法及注意事项。
1.准备样品及配制溶剂：一般需要将待测物质与适当的溶剂混合，使其溶解度较大，且不产生化学反应。
根据分析目的选用不同的溶剂，以保证分离效果。
2.准备硅胶柱：硅胶柱由无色透明的硅胶胶体组成，直径一般为1-2.5厘米，长约10-40厘米。
硅胶柱层析的分离效果，与柱高、柱径、胶体的大小和分布、溶液的流速等因素有关。
在选择硅胶柱时，应该根据实际需要选用合适的柱径和柱高。
3.测试流速：测试不同流速对分离效果的影响。
测试方法为将流速调节为不同值，测定每个流速下所采集的溶液吸收曲线，最终确定出最佳的流速。
4.样品处理：样品从洗脱液中洗脱出来之后，可以使用各种不同的方法进行处理。
例如可以用过滤膜、离心、深度过滤等方法，来去除样品中的离子、颗粒等。
5.动态洗脱：先在洗脱液用水稀释3-5倍，使液面齐平。
关掉泵阀使得管路只循环搅拌。
将占底部10%的甲醇浸入硅胶柱底部粉末颗粒中，然后打开泵阀。
保持洗脱液的温度和相对湿度稳定，然后逐渐开始动态洗脱。
6.收集洗脱液：可以采用分批收集和连续收集两种方法，最终将洗脱液图谱编制。
1.操作前，务必检查所有设备设施是否完好，液体循环是否通畅，以及所有参数（如气温、流速、洗脱液配比等）是否调整合适。
2.在操作时，不能超量进样，以免产生超过硅胶柱承受能力的负荷。
3.在操作中，应注意洗脱溶液的挥发和流动，以避免水分汽化，在操作过程中，应该密封管路和溶液，防止冷凝积聚。
4.硅胶柱层析法有一定的危险性，提供人员应该具备一定的化学实验经验，同时要持续关注硅胶柱的干燥程度，确定每步操作的效果，以保证精度和安全性。
5.在分析过程中，应注意各种简化重复操作，减少操作依赖，以提高生产效率。
总之，硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，其操作相对简便，可以大量产生准确的结果，因此在化学、生物、医药等领域都有广泛的应用。
硅胶柱层析的操作方法及注意事项
硅胶柱层析一、硅胶柱层析的原理利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。
二、硅胶柱层析的操作方法及注意事项1、装柱操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。
有干法装柱和湿法装柱两种方法（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。
也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。
柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。
（2）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。
然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。
然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。
根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。
匀浆法：搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
2、上样将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。
如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。
上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。
3、洗脱洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。
我的过硅胶柱的经验
一、装柱装柱子（添硅胶）时，常用得有两种方法：即湿法装柱与干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还就是湿法，硅胶（称为固定相更为广义）得上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）得高度一般为15cm左右（长度没有绝对之说，根据自身情况而定，制备得大柱可以长达一米），太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱就是先把硅胶用适当得溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼得氧气泵加压或就是用氮气，当然不加压也可以）用淋洗剂"走柱子"，本法最大得优点就是一般柱子装得比较结实，没有气泡。
（我一般都用湿法装柱）干法装柱则就是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧（湿法也要敲得，效果好点），至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装得很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。
接着就是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂就是采用TLC分析得到得展开剂得比例再稀释一倍后得溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大得缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂与硅胶之间得吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况，比较不好处理，可以缓慢改变溶剂，且置于通风处），容易产生气泡，这一点在使用低沸点得淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显），二氯甲烷更为明显。
虽然产生得气泡在加压得情况下不易察觉，但就是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作得时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
解决得办法就是：第一、硅胶一定要压结实；第二、一定要用较多得溶剂"走柱子"，一定要到柱子得下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶得最上层填上一小层石英砂(我一般垫张滤纸，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶剂得时候，使得样品层不再整齐。
我的过硅胶柱的经验
一、装柱装柱子(添硅胶）时，常用的有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（称为固定相更为广义)的上表面一定要平整,并且硅胶（固定相)的高度一般为15cm左右(长度没有绝对之说，根据自身情况而定,制备的大柱可以长达一米）,太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气,当然不加压也可以）用淋洗剂”走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
（我一般都用湿法装柱)干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧(湿法也要敲的，效果好点），至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。
接着是用淋洗剂"走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂.通常上面加压,下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于”走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况,比较不好处理,可以缓慢改变溶剂，且置于通风处)，容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显)，二氯甲烷更为明显.虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
解决的办法是：第一、硅胶一定要压结实；第二、一定要用较多的溶剂”走柱子"，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂（我一般垫张滤纸,撒上石英砂，再放些棉花），防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。
但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。
硅胶柱填装讲解学习
硅胶柱填装讲解学习硅胶的预处理我们以浓盐酸浸泡硅胶14小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后，将起进行减压抽滤，后不断加蒸馏水冲洗。
在1小时之后，抽滤的水呈中性，但仍然含有氯离子。
经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子。
晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小时。
活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀。
在装柱时，宜使用口径较大的玻璃漏斗置于层析柱上部，注入1/2高的石油醚，打开下部活塞，然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗，这样可以防止层析柱中形成断层(这一步是实验的关键步骤)。
装柱装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
解决的办法是：第一、硅胶一定要不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。
反相硅胶柱的操作方法
反相硅胶柱的操作方法反相硅胶柱是一种常用的色谱填料，广泛应用于分析化学和生物化学领域。
下面我将详细介绍一下反相硅胶柱的操作方法。
1. 初始准备首先，确保反相硅胶柱处于干燥状态，无需再进行烘干或其他处理。
同时，准备好所需的溶液、样品和色谱设备，包括注射器、泵浦、检测器等。
2. 装填适当的溶剂在操作反相硅胶柱之前，首先要装填适当的溶剂。
一般来说，可以选择优质的有机溶剂，如甲醇、乙腈等。
将溶剂加入洗涤瓶或泵浦的溶剂瓶中，并通过管道将溶剂引入柱子。
3. 负压灌注柱子在装填完溶剂后，需要进行负压灌注柱子。
将柱子平放或稍微倾斜，用泵浦或其他适当的装置将溶剂缓慢地从底部加入柱子中，直至柱子中充满溶剂。
这样可以去除残留的空气，避免在分析过程中产生气泡。
4. 样品准备在进行分析之前，需要进行样品的准备工作。
将待分析的样品溶解在适当的溶剂中，并过滤以去除杂质。
确保样品质量和含量均匀稳定，避免影响后续的色谱分析。
5. 柱温控制反相硅胶柱的操作过程中需要控制适当的温度。
一般情况下，室温即可满足大多数分析的需求。
然而，对于某些高温或低温条件下的分析，可以使用温控装置对柱子进行加热或冷却。
6. 样品进样将样品装入适当的进样器（如注射器）中，并将进样器与柱子连接。
在注射器上设置适当的体积，将样品静置一段时间，以确保样品适当进入柱子中。
7. 溶剂梯度选择和流动速度控制选择适当的溶剂梯度和流动速度对反相硅胶柱的分离效果至关重要。
根据样品性质和实验目的，选择合适的溶剂梯度，并通过调节泵浦的流速来控制流动速度。
一般来说，初始的溶剂梯度和流速可以较低，随着分离的进行，逐渐增加溶剂浓度和流速，以提高分离的效果。
8. 记录检测结果在色谱分析的过程中，使用适当的检测器来检测分离出的化合物。
根据不同的检测器，可以记录和分析不同的检测参数，如吸光度、荧光强度等。
将检测结果记录下来，以备后续分析和比较。
9. 维护和保养在操作反相硅胶柱时，还需要定期进行维护和保养。