磁珠分选步骤
Pan T磁珠分选标准操作规程
1. 目的为规范磁珠分选T淋巴细胞，获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。
2. 范围适用于T细胞分选生产的操作过程。
3. 职责3.1 生产部负责操作和清场。
3.2 质量管理部QA负责监督。
4. 仪器、试剂和耗材4.1 仪器：生物安全柜；移液枪；离心机；细胞计数仪；QuadroMACS Starting kit(LS) 4.2 试剂：Pan T Cell Isolation Kit（Miltenyi）；PBS；RPMI1640；台盼蓝；AB血清；4.3 耗材：15/50mL离心管；25mL移液管；10mL移液管；5. 标准操作程序5.1 打开生物安全柜，紫外灯照射灭菌30min，通风10min后待用。
5.2 缓冲液配制：PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA，用前去气泡；缓冲液放4度冰箱预冷。
全程保持低温。
5.3安装：将支撑架和分离器用酒精消毒后，放入生物安全柜。
将分离器平行贴到支撑架的垂直面上，移动分离器调整高度。
取出LS柱，安装到分离器的磁力槽中。
5.4 用细胞计数仪计数，计算细胞数目。
5.5 离心1000rpm，8min收集细胞，完全去掉上清。
5.6 按照每107细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。
5.7 每107细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。
5.8 混匀，4℃冰箱孵育5min。
5.9 每107细胞加30ul 缓冲液。
5.10每107细胞加20ul Pan T Cell Microbead。
5.11 混匀，4℃冰箱孵育10min。
5.12 加400 ul 缓冲液，混匀（至少500ul上柱）。
5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。
5.14 把细胞悬液加入到柱子中。
收集流出的T细胞。
5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子，收集流出的T细胞。
与5.14的合并。
5.16 从分离器上取下柱子，安放到合适的收集管中。
5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中，立即将活塞插入柱子，用力将液体压出，即为非T细胞。
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞原理
磁珠分选细胞是一种基于磁珠与细胞表面标记物相互作用的技术，用于对混合细胞群进行分离和纯化。
其原理主要包括细胞表面标记物选择、磁珠标记和磁力分选三个步骤。
在细胞表面标记物选择步骤中，研究人员会根据所需的细胞类型特异性表面标记物，选取相应的抗体、抗原或配体等标记物。
这些标记物能够特异性地与目标细胞的表面蛋白、糖基或其他分子结合。
磁珠标记步骤是将磁性珠子表面修饰上与选择的细胞表面标记物相对应的配体。
一般来说，这些配体可以是与标记物相互作用的抗体、配体或其他分子。
磁珠表面的配体与目标细胞的表面标记物结合后，形成磁珠-细胞复合物。
磁力分选是将磁珠-细胞复合物与外部磁场相互作用，利用磁
力将目标细胞从混合细胞群中分离出来。
外部磁场可以通过磁力分选仪或其他磁场控制装置来产生。
在磁力作用下，磁珠-
细胞复合物会被聚集在一定位置，而非标记的细胞则被排除在外。
通过改变磁场的强度、方向和时间等参数，可以实现对目标细胞的精确控制和分离。
总之，磁珠分选细胞利用磁珠与细胞表面标记物的相互作用，通过磁力分选实现对目标细胞的分离和纯化。
这一技术在生物医学研究、临床诊断和细胞治疗等领域具有广泛的应用前景。
磁珠分选说明书
磁珠分选说明书磁珠分选是一种利用磁性原理进行分选的方法，通常用于分离微小颗粒或细胞等。
下面是一份磁珠分选的简单说明书：一、原理磁珠分选基于磁性原理，通过磁场作用将磁珠与目标颗粒或细胞结合，再利用磁力的差异将磁珠与目标物分离，从而实现分选。
二、操作步骤1. 准备所需试剂和磁珠：根据实验需求准备相应的缓冲液、抗体或特异性配体，以及磁珠。
确保磁珠经过充分混匀。
2. 磁珠与目标物的结合：将磁珠与目标物（如抗体、核酸或其他配体）混合，使其充分结合。
通常需要在适当的缓冲液中进行孵育。
3. 磁力分选：将结合了目标物的磁珠转移到磁场中进行分离。
通常需要将磁珠与目标物混合物加入到特制的分离柱或管中，然后施加磁场。
4. 洗涤：为了去除未结合的目标物和其他杂质，进行洗涤操作。
将磁珠从磁场中取出，用缓冲液冲洗。
5. 洗脱和收集：最后，通过改变磁场或加入特定的洗脱液，将目标物从磁珠上洗脱下来并收集。
三、注意事项1. 确保所有操作在适当的缓冲液中进行，以维持磁珠和目标物的稳定性。
2. 根据实验需求选择合适的磁珠和特异性配体，以确保最佳的结合效果。
3. 注意磁力分选时的操作，避免磁珠吸附到容器壁或其他杂质上。
4. 在进行洗涤和洗脱时，要确保操作步骤准确，避免损失目标物。
5. 保持操作环境的清洁，避免污染。
四、应用领域磁珠分选广泛应用于生物医学研究、药物筛选、基因测序等领域，尤其在单细胞分析、蛋白质组学和核酸研究中发挥着重要作用。
以上是一份简单的磁珠分选说明书，具体操作步骤和细节可能因实验需求和试剂而有所不同。
在进行实验前，建议仔细阅读相关文献和试剂说明书，并遵循实验室安全规范。
磁珠分选步骤
磁性标记和分选步骤：1.制备无菌Buffers,冰上放置。
细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。
1×BD IMag™ buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag™ Buffer ，用无菌蒸馏水或加有0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。
2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。
然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除细胞簇和组织碎片。
用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。
3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。
4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体2.4G2（BD Mouse Fc Block⇔ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞添加0.25μg，然后冰浴15min.5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell EnrichmentCocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min.6.用10x过量体积的1X BD IMag™ buffer洗涤标记细胞，300 ⋅ g离心7分钟并小心吸去所有上清液。
7.彻底涡旋BD IMag™ Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。
8.混匀，然后6˚C - 12˚C冷藏30min.9.用1X BD IMag™buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。
10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。
CD90磁珠分选protocol
CD90磁珠分选protocol
1.吸去培养基，PBS吹洗一遍
2.加入1-2ml胰酶，消化5-10分钟后加入2ml培养液中和后吸至15ml离心管
3.300g，5min，弃上清
4.加入500μl MACS buffer,重悬后离心，300g，10min，弃上清
5.加入500μl MACS buffer,重悬，吸取20μl计数，其余的悬液300g，10min
离心后弃上清，每107细胞加入20μl beads，80μl MACS buffer，混匀
6.计数选择对角线的四个方格，总数除以4乘以2，单位为104个
7.放入冰箱（2-8℃）15min，每隔5min震荡混匀一次
8.加入500μl MACS buffer，过磁柱，加入500μl buffer 于15ml离心管内洗2
遍
9.15ml离心管里的为CD90-OF（总体积1.5ml），留在磁柱上的为CD90+细胞，
加入1ml buffer冲洗至15ml离心管。
10.每管悬液离心后弃上清，加入4ml 培养液后，铺至2个10cm培养皿；。
磁珠分选流程
磁珠分选流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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磁珠分选
1、取材：将两只C57\BL6成鼠处死，剖开腹腔，取脾，用HBSS（含10％FCS）研磨（注射器），300目滤布过滤用10mlHBSS（10％FCS）清洗细胞一次，离心200g×10min4℃加入4mlACK，室温作用10min，漩涡震荡，加入8mlPBS（细胞培养用）终止，离心，200g×10min，4℃2ml1×MagCellect Plus Buffer重悬，细胞计数，使用1×MagCellect Plus Buffer调整细胞浓度至100×10（6）\ml2、细胞分选步骤：配制2.5mlMagCellect Plus Buffer（250μl，10×MagCellect Plus Buffer＋2.25ml无菌去离子水）以重悬50×10（6）个细胞（4℃保存至多24h）制备小鼠淋巴细胞悬液，细胞分选前必须用冷的1×MagCellect Plus Buffer调整浓度至100×10（6）／ml）将50×10（6）个细胞（0.5ml）转移至5mlEP管中，加入50μl ×MagCellect Mouse NK Cell Biotinylated Antibody Cocktail轻轻混匀，避免产生气泡，4℃冰箱孵育15min向细胞悬液中加入100μl MvtaagCellect Streptavidin Ferrofluid轻轻混匀，4℃冰箱孵育15min孵育结束后加入1.35ml1×MagCellect Plus Buffer使体积到2ml，轻轻充分混匀，确保所有反应被重悬将反应管放入磁铁中，室温孵育6min，磁珠标记的细胞将会被吸附到磁铁上（非须细胞），细胞悬液剩余的目标细胞为NK细胞当反应管置于磁铁中时，轻轻取出细胞悬液，转移至另一个EP 管中，将磁铁中含有磁珠标记的EP管取出，弃掉重复6-7步骤一次，将细胞悬液转移至一新5mlEP管中，细胞计数，此为小鼠NK细胞。
免疫磁珠分选步骤
免疫磁珠分选步骤1.样品准备：首先需要收集并准备需要分选的样品，可以是细胞悬液、组织片断或血液等。
样品需要经过前处理，如细胞离心、组织切片等，以获得适合进行免疫磁珠分选的样品。
2.抗体偶联磁珠：在准备好的样品中加入特异性抗体偶联的磁珠。
这些磁珠通常是通过共价结合或吸附等方法将抗体固定在磁珠表面。
抗体的选择通常是根据目标细胞表面的特定抗原来确定的。
3.细胞偶联和分离：将抗体偶联的磁珠与样品进行充分混合，使磁珠与目标细胞表面的特定抗原发生特异性结合。
这一步骤通常在低温下进行，以增加抗体与抗原之间的结合效率。
在结合完成后，通过外加磁力或离心等方法将磁珠与目标细胞分离。
4.磁力分选：在细胞与磁珠分离后，将样品置于磁力分选器中。
磁感应部分会产生强磁场吸引磁珠，使磁珠沉积在磁架上，从而将目标细胞与磁珠分离出来。
通过调整磁力分选器的磁力强度和施加时间，可以选择性地分离出特定的细胞群体。
5.洗涤和分离：经过磁力分选后，需要对磁珠和分离出的细胞进行洗涤，以去除非特异性结合的细胞和其他杂质。
洗涤通常使用缓冲液，如PBS等。
洗涤步骤可以重复多次，以提高样品的纯度。
6. 目标细胞的收集和后续处理：经过洗涤后，分离出的目标细胞可用于进一步的实验或临床分析。
可以使用细胞培养、PCR、Westernblotting等方法对目标细胞进行进一步的研究和分析。
总之，免疫磁珠分选是一种基于抗体介导的细胞分选技术，通过特异性抗体与目标细胞表面抗原的结合，利用磁力分选技术分离目标细胞。
其步骤主要包括样品准备、抗体偶联磁珠、细胞偶联和分离、磁力分选、洗涤和分离等。
这一技术在细胞生物学研究、免疫学研究和临床诊断等领域具有重要的应用价值。
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磁性标记和分选步骤：
1.制备无菌Buffers,冰上放置。
细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。
1×BD IMag™ buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag™ Buffer ，用无菌蒸馏水或加有
0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。
2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。
然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除
细胞簇和组织碎片。
用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。
3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x
106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。
4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体
2.4G2（BD Mouse Fc Block⇔ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞
添加0.25μg，然后冰浴15min.
5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell Enrichment
Cocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min.
6.用10x过量体积的1X BD IMag™ buffer洗涤标记细胞，300 ⋅ g离心7分钟并小心吸去
所有上清液。
7.彻底涡旋BD IMag™ Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。
8.混匀，然后6˚C - 12˚C冷藏30min.
9.用1X BD IMag™buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。
10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。
把这个
positive-fraction 管放到BD IMagnet™(水平位置)8min。
对于较大体积，可把细胞转移到17 x 100 mm圆底试管，添加的最大的体积不超过
3.0ml。
把这个positive-fraction 管放到BD IMagnet™(垂直位置)8min。
11.当管在BD IMagnet™上时，用无菌巴斯德吸管轻轻的吸取上清至一个新的无菌管内。
12.从BD IMagnet™取出positive-fraction 管，添加1X BD IMag™ buffer到与步骤8相同的
体积。
上下吹打10-15次，重悬positive fraction well，并重置于BD IMagnet™上6-8min.
对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet™上8min。
13.用一个新的巴斯德吸管轻轻吸上清和步骤10中的enriched fraction。
混合。
14.把含有结合enriched fraction的管再置于BD IMagnet™6-8min。
对17 x 100 mm 管，重置于BD IMagnet™上8min。
15.轻轻吸出上清并置于一个新的无菌管内。
两次enriched fraction不含有bound antibodies
和磁性粒子。
细胞可用后续应用。
16.留在原管内的正选细胞可用适当的缓冲液或培养基重悬以备后续应用，包括流式细胞系
检测。
17.未分离的细胞悬浮液样品和正选富集positive and enriched fractions的样品，应用流式细
胞仪评估细胞分离效率。