MASSON三色染色法
特殊染色
结缔组织染色法Mallory三色染色法：胶原和网状纤维蓝色，软骨、淀粉样变物质淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒红色，髓鞘和红细胞橘红色。
2.Masson三色染色法：胶原纤维绿色，肌纤维红色，红细胞橘红色。
鉴别胶原纤维和肌纤维最宜采用的方法。
3.三联染色法：胶原纤维红色，网状纤维黑色，弹性纤维绿色，肌肉和红细胞淡黄色。
二.胶原纤维染色1.Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法：胶原纤维鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞黄色，胞核蓝褐色。
与胶原纤维染色相比的缺点是：易褪色和对比度差。
2.天狼星红（Sirius Red）苦味酸染色法：胶原纤维红色，细胞核绿色，其他黄色。
在偏光显微镜下可见4种胶原纤维。
三.网状纤维染色：包括：Gomori和James。
Gomori银氨染色法：网状纤维黑色，胶原纤维红色。
鉴别诊断中的应用：1）癌和肉瘤的鉴别。
2)恶性淋巴瘤和组织细胞肉瘤。
3）血管内皮细胞瘤和外皮细胞瘤。
4）黏液纤维瘤和黏液肉瘤。
四.弹性纤维染色：效果最好的固定液是：甲醛生理盐水。
Gomori醛复红染色法：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色），背景不同程度的黄色。
1）配制后需在室温静置1-2日。
2）是碱性品红加入三聚乙醛和盐酸配制而成。
3）醛复红所谓的成熟是颜色为深紫色。
3)可使胃主细胞着色。
5）应放置在冰箱内保存。
五.显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法：维多利亚蓝+丽春红S：弹性纤维蓝绿色，胶原纤维红色，背景淡黄色。
六.横纹肌组织染色：Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、横纹肌等均蓝色；胶原、网状纤维、骨基质及骨黄色或玫瑰红色。
1）要在室温下成熟。
2）可使用高锰酸钾促使PATH成熟。
3）乙醇分化时要保存一定的红色。
4）染色后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。
七.糖类染色：过碘酸的作用是氧化。
过碘酸-Schiff（PAS）染色法：糖原及其他PAS反应阳性物质红色，细胞核蓝色。
Masson三色染色试剂盒说明书
Masson三色染色试剂盒说明书Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。
分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
淡绿分子量最大。
因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【用途】主要用于胶原纤维染色。
【产品特点】①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。
固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。
切片：所有类型。
【产品组成】编号名SBJ0126（7×50ml）SBJ0126（7×100ml）SBJ0126（7×500ml）Storage试剂（A）A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RTA2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。
试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】1、切片脱蜡至水。
2、试剂（A）染色5min～10min。
3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。
马松三色染色法
马松三色染色法马松三色染色法是一种用于显示组织中纤维的染色技术，特别适用于结缔组织的染色。
该方法使用三种染料：苏木精、酸性品红和丽春红，分别染色细胞核、肌纤维和胶原纤维。
首先，切片需要经过常规脱蜡至水的过程，以确保染色剂能够充分渗透到组织中。
然后，使用配制好的Weigert氏铁苏木素染色液对组织进行染色，以突出显示细胞核。
染色完成后，需要充分水洗，以去除未结合的染料。
接下来是酸性品红染色，用于标记肌纤维。
这个步骤需要在弱酸环境中进行分化处理，以将染色剂与组织中的碱性物质区分开来。
弱酸还能帮助酸性品红更好地渗透到组织中。
最后，使用丽春红品红染色液对胶原纤维进行染色。
在这个步骤中，需要使用弱酸工作液来洗去未结合的染料。
在整个染色过程中，组织固定起着非常重要的作用。
不同的固定液会影响染色时间，因此需要根据具体情况进行调整。
在完成染色后，需要进行常规脱水、透明和封固处理，以便在显微镜下观察。
马松三色染色法的优点在于它能够清晰地显示结缔组织中的胶原纤维和肌纤维，特别是在病理情况下，如器官硬化性疾病和瘢痕组织的鉴别诊断中，该方法能够提供有价值的信息。
此外，该方法具有较高的特异性和灵敏度，能够检测出病理变化中较小的差异。
然而，该方法也有一些局限性。
首先，该方法需要使用多种染料和化学试剂，这使得操作过程相对复杂。
其次，某些组织可能需要特定的处理步骤，例如脱蜡、脱水和固定等。
这需要技术人员具备一定的经验和技术水平。
尽管存在这些局限性，马松三色染色法仍是一种非常重要的病理学技术。
它可以提供关于组织结构和功能的重要信息，有助于病理医生做出准确的诊断和制定治疗方案。
Masson三色染色法--染色案例
Masson三色染色法
1.实验目的
MASSON染色观察病变的组织
2.实验材料
2.1石蜡切片
2.2仪器与试剂
2.2.1
（1）电热恒温干燥箱
（2）光学显微镜及拍照设备
（3）冰箱
（4）电子天平
（5）盖玻片
（6）染缸
2.2.2
（1）二甲苯
（2）无水乙醇
（3）Weigent氏苏木素液
（4）1％盐酸液
（5）立春红-品红溶液
（6）1％磷钼酸液
（7）1％淡绿液
（8）1％醋酸液
3.实验步骤：
操作方法：
(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；
(2)Weigent氏苏木素液染核5-10分钟；
(3)自来水洗；
(4)1%盐酸酒精分化数秒（在显微镜下控制染色，除核为黑色，片中其他均混为白色）；
(5)自来水洗；
(6)丽春红—品红溶液5-10分钟
(7)清水水溶液洗；
(8)1%磷钼酸分化直到各种成分被染清晰10分钟（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜红色）；
(9)清水洗
(10)1%淡绿液染2—5分钟（或用2%苯胺蓝水溶液替代）
(11)1％醋酸水溶液处理2MIN
(12)常规脱水、透明、封片。
结果：胶原纤维绿色（或蓝色），肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝黑色。
Human-肺癌-马松染色法
Human-肺-马松染色法
Human-软骨-马松染色法
Human-胰腺癌-马松染色法
武汉云克隆诊断试剂研究所。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
masson染色步骤(临床医学研究中心总结)
试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。
如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。
4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。
5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。
（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。
（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。
（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。
建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-10min。
（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）9、弱酸溶液处理 2min。
10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。
然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。
使用中性树脂封片。
注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。
Masson三色法
Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
一种不易褪色的masson三色染色方法及其应用
一种不易褪色的masson三色染色方法及其应用
Masson三色染色法是一种染色方法，用于检测细胞中的蛋白
质和核酸，是一种不易褪色的染色法。
Masson三色染色法的原理是：将需要染色的细胞或组织切片，用三种不同的染料分别染色，分别指示蛋白质，核酸和细胞壁结构。
染料的种类有：碘酒素、亚硝酸盐和胭脂红。
碘酒素用于染色蛋白质，亚硝酸盐用于染色核酸，胭脂红用于染色细胞壁结构。
Masson三色染色法可以用于显示细胞结构，也可以用于检测
细胞中的蛋白质和核酸的分布情况。
它可以用于细胞结构的分析，也可以用于病理学的诊断。
此外，Masson三色染色法还
可以用于细胞培养，观察细胞的生长及其他变化。
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主讲：李磊 姜明兴
原理
Masson染色法是利用两种或三种阴离子 染料混合或先或后作用而完成鉴别染色的。 胶原纤维呈蓝色（被苯胺蓝所染）肌纤维 呈红色（被酸性品红和丽春红所染），这 与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性 有关。组织的渗透性，取决于组织的结构 密度，如细致观察，会发现组织和细胞成 分都是多孔的构造。
来源于间胚叶的肿瘤，如纤维瘤，横纹肌 瘤，神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生 一定的纤维，这些纤维在HE染色中都染成 红色而难以区别，通过上述方法，一般可 区分出该肿瘤组织是胶原纤维源性，还是 肌源性，或者是神经纤维源性。
如： 1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤 维板化程度 2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代 的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色， 胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤 维呈黄色。 3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。 4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。 5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。
注意事项：
（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化 时需要使用显微镜控制肌纤维清晰为止。 （2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来 作为对比观察染色的效果。
染色结果：
胶原纤维呈绿色（苯胺蓝染色为蓝色，如上图），肌纤维呈红 色，红细胞呈橘红色
应用意义
定性定量 胶原纤维在体内分布广泛。HE染色不 能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特 染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研 究用中具有实用价值.
因此：在Masson染色法中，酸 性品红和丽春红染肌纤维，而苯 胺蓝或亮丽染胶原纤维。
பைடு நூலகம்试剂配置】：
（1）Masson复合染色液
酸性品红1g ；丽春红2g；橘黄G 2g；0.25%醋酸300ml
（2）亮绿染色液
亮绿SF 0.1g ，0.2%醋酸100ml。
[染色步骤]：
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水 （2）Masson复合染色液5min （3）0.2%醋酸水溶液稍洗。 （4）5%磷钨酸5-10min （5）0.2%醋酸水溶液浸洗2次 （6）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次 （7）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
不同的组织和细胞成分，它们的空隙大小是 不同的，空隙的大小，决定了组织的渗透性， 如空隙小，组织结构致密，渗透性低；空隙 宽，组织结构疏松，渗透性高。 如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料 先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分 子的阴离子染料着染。由此说明红细胞对阴 离子染料的渗透性最小。肌纤维与胞质次之， 而胶原纤维具有最大的渗透性。 根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不 同的阴离子染料进行染色，便可把不同组织 成分显示出来。
染料分子的大小，主要由其分子量来体现。 一般来说小分子量者易于穿透结构致密， 渗透性低的组织，而大分子染料只能进入 结构疏松，渗透性高的组织。 常用胶原纤维染色而几种阴离子染料的分 子量由小到大分别是：
苦味酸（黄色），分子量229.11 橙黄G（橙黄色）分子量452 丽春红（红色）分子量480.42 酸性品红（红色）分子量585.53 苯胺蓝（蓝色）分子量737.72 亮绿（绿色）分子量792.72 甲基蓝（蓝色）分子量799