肝素检验细则
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
食品级肝素钠 标准
食品级肝素钠标准一、化学结构食品级肝素钠是一种糖胺聚糖，其基本结构由葡糖胺和艾杜糖醛酸组成，具有强烈的抗凝血活性。
其分子式为C15H23NO6Na2，分子量为360.37。
二、纯度和含量食品级肝素钠应具有较高的纯度和含量。
其纯度应不低于95%，即每100mg 样品中至少含有95mg肝素钠。
三、物理性质1.外观：食品级肝素钠应为白色或类白色粉末，无异味。
2.颗粒度：应通过400目筛，筛余物不大于1%。
3.水分：应小于5%。
4.溶解性：在pH值为7.0的磷酸盐缓冲液中，肝素钠应完全溶解。
四、微生物学标准食品级肝素钠应符合国家相关微生物学标准，不得检出大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌。
五、原料要求1.原料来源：食品级肝素钠应来源于猪、牛等大型哺乳动物的肝脏。
2.原料质量：原料应无腐败、霉变等现象，符合国家相关规定。
六、生产工艺1.提取：采用物理或化学方法从动物肝脏中提取肝素钠。
2.纯化：通过离子交换、凝胶过滤等方法去除杂质，提高肝素钠的纯度。
3.干燥：采用真空干燥等方法去除水分，保持产品质量稳定。
七、包装和储存1.包装：食品级肝素钠应采用无毒、密封性好的包装材料进行包装，标明品名、规格、生产日期、保质期等信息。
2.储存：储存环境应干燥、通风、阴凉，避免阳光直射和高温。
保质期为两年。
八、安全性评估食品级肝素钠应经过安全性评估，证明其对人体无毒害作用，不产生不良反应。
安全性评估可以包括急性毒性试验、亚慢性毒性试验、慢性毒性试验等。
此外，食品级肝素钠还应经过过敏原测试，证明其对过敏体质者无致敏作用。
肝素
低分子量肝素的活性/抗凝血活性的比值为1.5～4.0，而普通的肝素为1，保持了肝素的抗血栓作用而降低了 出血的危险。具有半衰期长，生物利用度高等优点，正广泛应用于血栓栓塞性疾病的预防及治疗，其有效性和安 全性均优于普通肝素，量效关系明确，可用固定剂量无需实验室监测调整剂量，应用方便。有实验证明:来自水蛭 素的Hiru-log多肽比肝素抗凝安全。低分子量肝素可以降低鼠移植肾脏免疫活性。方法:异体移植受体皮下注射 低分子量肝素2mg/（kg·d），每周5天，持续24周。结果:低分子量肝素治疗后移植肾单核吞噬细胞，T细胞的浸 润减少，主要组织相容性抗原M HC-Ⅱ的表达降低。实验结果表明:低分子量肝素可以降低鼠移植肾脏免疫活性从 而减轻移植肾脏慢性排斥反应。
外观与性状：白色或类白色结晶粉末 密度：2.18 g/cm3 沸点：644.9ºC at 760mmHg 闪 点 ： 3 4 3 . 8 ºC 折射率：1.711 稳定性：吸湿性，可以在室温下保存至少12个月的钠盐。 储存条件：保存在阴凉、干燥、密封和避光的容器中。远离火源。保护容器/钢瓶免受物理伤害。
肝素（肝素）是一种粘多糖硫酸酯，其相对分子量为6000～20 000。低分子肝素是普通肝素经过物理分离法， 化学裂解法与合成法等使标准肝素解聚而成。主要用于防治血栓形成和栓塞，治疗各种原因的弥散性血管内凝血 （DIC）以及其他体内外抗凝血，如心肌梗死及肺、脑、外周血管栓塞，体外循环等。
海关编码： WGK Germany：2 安全说明：S24/25 RTECS号：MI0850000
方法一、酶解-树脂法酶解取100kg新鲜肠黏膜(总固体5%-7%),加苯酚200ml (0.2%),如气温低时可不加。在 搅拌下加入绞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%),用 300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液调节pH8.5-9,升温至40-45℃,保温23h。pH8,再加5kg粗食盐(5%)升温至90℃左右,用6mol/L HCl调节pH 6.5左右,停止搅拌,保温20min,以布袋过滤, 得酶解滤液。肠黏膜[胰浆,NaOH]→[pH8.5-9, 40-45℃,保温2-3h]肠黏膜液[NaCl, 6mol/L HCl]→[pH8; 90℃, pH6.5]滤液吸附、洗涤、洗脱取上述滤液冷至50℃以下,用6mol/L NaOH调节pH7,加入5kgD-254强碱性阴 离子交换树脂,搅拌5h左右,交换完毕,弃去液体,用自来水漂洗树脂至水清,用与树脂等体积的2mol/L NaCl,搅拌 洗涤15min,弃去洗涤液,再加2倍树脂体积的1.2mol/L NaCl洗涤2次。用约树脂体积一半的5mol/L NaCl洗脱1h, 收集洗脱液,然后用约树脂体积的1/3的3mol/L NaCl洗脱2次,合并洗脱液。滤液[D-254树脂, NaOH]→[pH7, 5h] 吸附[NaCl]→[2mol/L→1.2mol/L, →5mol/L, →3mol/L]洗脱液沉淀、脱水、干燥将洗脱液用滤纸浆助滤,过 滤1次,澄清滤液以体积计加入用活性炭处理过的0.9倍的95%乙醇,冷处沉淀8-12h。虹吸上清液弃去,按100kg黏 膜加300ml的比例向沉淀中补加蒸馏水,再加入4倍量95%乙醇,冷处放置6h,收集沉淀,用无水乙醇脱水1次,丙酮脱 水2次,置P2O5干燥器中真空干燥,得肝素钠粗品。洗脱液 →沉淀物[无水乙醇;丙酮]→[P2O5]肝素钠粗品脱色、 沉淀、干燥用20g/L(2%)氯化钠溶液配成100 g/L(10%)的肝素钠溶液,以40g/L(4%)高锰酸钾溶液进行氧化脱色, 每亿单位估计加入0.65mol高锰酸钾。先将药液调至pH8,预热80℃,在搅拌下加入高锰酸钾,保温2.5h,以滑石粉 作助滤剂,过滤,收集滤液。将滤液调节pH6.4,用0.
肝素实验报告
实验名称：肝素抗凝活性检测一、实验目的1. 了解肝素的抗凝机制；2. 掌握肝素抗凝活性的检测方法；3. 学会使用凝血酶时间法检测肝素抗凝活性。
二、实验原理肝素是一种硫酸化的粘多糖，具有强大的抗凝血作用。
肝素通过增强抗凝血酶III （ATIII）的活性，从而抑制凝血酶的生成，达到抗凝的目的。
肝素抗凝活性的检测通常采用凝血酶时间法，通过测量加入肝素后凝血酶生成所需的时间来评估肝素的抗凝活性。
三、实验材料1. 肝素钠盐；2. 硫酸钾溶液；3. 0.9%氯化钠溶液；4. 红细胞悬液；5. 凝血酶；6. 移液器；7. 计时器；8. 试管；9. 玻璃棒。
四、实验步骤1. 配制肝素溶液：取肝素钠盐适量，加入硫酸钾溶液溶解，制成1mg/ml的肝素溶液；2. 配制红细胞悬液：取0.9%氯化钠溶液，加入红细胞，配制成浓度为5%的红细胞悬液；3. 准备试管：取试管若干，每支试管加入0.5ml红细胞悬液；4. 加入肝素：向每支试管中加入不同浓度的肝素溶液，对照组加入等量的0.9%氯化钠溶液；5. 加入凝血酶：向每支试管中加入等量的凝血酶；6. 记录凝固时间：将试管放入37℃水浴中，观察并记录每支试管出现凝固现象所需的时间；7. 数据处理：计算肝素溶液的半数有效浓度（EC50）。
五、实验结果1. 肝素溶液的浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml；2. 各组试管的凝固时间分别为：10.5、9.2、7.8、6.5、5.2、4.0分钟；3. 肝素溶液的EC50为0.4mg/ml。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，肝素具有明显的抗凝活性，其EC50为0.4mg/ml，说明肝素在较低浓度下即可发挥显著的抗凝作用；2. 肝素抗凝活性的检测方法简便、易行，适用于临床和科研工作；3. 在实际应用中，应严格控制肝素的用量，以免引起出血等不良反应。
七、实验总结本实验通过检测肝素抗凝活性，了解了肝素的抗凝机制，掌握了肝素抗凝活性的检测方法。
肝素检测细则
肝素盐检测细则一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。
F=标品微升数*预估效价/样品微升数1.1试剂：1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤）28IU/mg肝素钠标准品30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。
40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。
58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。
1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量：取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。
2.1待测品配制：M=20/样品预估效价（g）称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。
2.2测定：标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
二．PH值精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。
肝素血浆检验报告
肝素血浆检验报告一、概述肝素血浆检验是一种常用的临床检验方法，用于评估患者的凝血功能状态。
本报告旨在介绍肝素血浆检验的原理、指标解读以及临床意义。
二、原理肝素血浆检验是基于肝素的溶血试验原理。
肝素是一种天然的抗凝剂，可通过抑制凝血酶的活性来阻止血液凝结。
在肝素血浆检验中，加入一定量的肝素到患者的血浆中，观察血浆是否出现溶血现象来评估肝素的抗凝效果。
三、指标解读1. 检测范围肝素血浆检验是评估肝素抗凝效果的一种方法，用于检测肝素在血浆中的抗凝浓度。
根据血浆中肝素的浓度，可以判断患者的凝血功能状态。
2. 正常范围正常情况下，血浆中的肝素浓度应在一定范围内，具体数值因实验方法和设备而定。
一般来说，肝素浓度在0.3-0.7 IU/mL之间被认为是正常的。
3. 异常结果及其可能原因肝素血浆检验的异常结果可能与以下因素有关：•肝素用量不足：如果患者使用的肝素剂量低于推荐剂量，肝素浓度可能低于正常范围。
•肝素用量过量：过量使用肝素可能导致肝素浓度超过正常范围。
•肝素滥用：乱用肝素或长时间使用肝素，可能导致肝素浓度异常。
•肝素代谢异常：某些疾病状态或药物使用可能影响肝素的正常代谢，导致肝素浓度异常。
4. 应用价值肝素血浆检验是评估患者凝血功能状态和肝素抗凝效果的重要方法。
通过检测血浆中的肝素浓度，可以帮助医生调整肝素剂量，确保肝素的抗凝效果达到理想水平。
对于需要长期使用肝素的患者，定期进行肝素血浆检验可以帮助监测肝素的浓度，及时调整治疗方案。
四、结论肝素血浆检验是一种简单有效的评估肝素抗凝效果的方法。
通过检测血浆中的肝素浓度，可以帮助医生了解患者的凝血功能状态，调整肝素剂量，确保肝素的抗凝效果达到理想水平。
对于长期使用肝素的患者，定期进行肝素血浆检验非常重要，以监测肝素的浓度变化，及时调整治疗方案。
肝素-化学验证报告
一次性使用人体静脉血样采集容器中添加剂浓度的测定方法第3部分:肝素验证报告单位名称：山东省医疗器械产品质量检验中心（盖章）日期：2014.9.一、概述一次性使用人体静脉血样采集容器（简称：采血管）与一次性使用无菌静脉血样采集针配套使用，采集静脉血样进行临床检验。
含有不同添加剂或附加物的采血管用途有所不同，肝素广泛在肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。
肝素可加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。
肝素是红细胞渗透性试验理想的抗凝剂。
目前测定肝素效价的方法有生物测定法和化学分光光度法，多用于测定肝素钠注射液，本标准采用亚甲蓝分光光度法测定采血管中肝素的效价，利用肝素与亚甲蓝溶液发生褪色反应，且吸光度的降低与溶液中肝素的浓度呈正比来测定肝素的效价。
二、验证方案方法学验证、肝素钠和肝素锂的等同性实验。
三、样品描述本次标准验证样品信息见表1。
表1 标准验证样品信息四、验证结果（数据、图、表）1、方法学验证1.1吸收波长的选择及亚甲蓝溶液浓度的确定配制不同浓度的亚甲蓝溶液，在200-800nm范围内进行扫描，最大吸收波长为664nm。
当溶液中亚甲蓝最终浓度为4mg/L时吸光度值约为0.8比较合适。
1.2反应时间及稳定性考察精密量取10 IU/mL 的肝素钠标准溶液，置25mL容量瓶中，加入0.1g/L 亚甲蓝溶液1mL，加水稀释至刻度，摇匀，立即置可见- 紫外分光光度计中进行时间扫描2h，记录图谱，结果表明反应在1h 后稳定，2h内基本无变化。
因而选择反应时间为1h。
1.3线性范围实验配制浓度范围0.05-0.25IU/mL的肝素钠系列标准溶液，在664nm 处，以水为参比，测定每种浓度溶液的吸光度，以浓度C(IU/mL) 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，计算回归方程y = -1.529 x + 0.844，相关系数r = 0.999，结果表明肝素钠浓度在0~0.25IU/mL 范围内，吸光度与浓度呈正比，且相关性良好。
肝素钠含量检测操作规程
肝素钠含量检测操作规程肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序5.1仪器、用具与试剂5.1.1恒温水浴锅5.1.2试管架5.1.310ml具塞试管5.1.4100ul或250ul微量进样器5.1.510ml刻度吸管5.1.62ml刻度吸管5.1.71ml可调式加液器5.1.820ml带塞样瓶5.1.90.9%氯化钠溶液5.1.100.25%氯化钙溶液5.1.11经过标定的绵羊血浆5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液5.1.13计时器5.2操作步骤5.2.1取样5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
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肝素钠检验项目附细则
一、效价测定
操作步骤：
1. 标准品制备：精密称量肝素钠标
准品数量(mg)×197u/mg=总单位
数×0.93=美国羊血浆法总单位
数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际
加入的蒸馏水毫升数。
精确加入
蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：
2.1 样品的制备：精确称量待测
肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水
浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品2
1V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：
所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb
二、比旋度测定
当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对
称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使
偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为
旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时
针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆
时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，
且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度
下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：
1．仪器
旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
并经过检定的旋光计。
旋光计的检定：可用标准石英旋光管进行校正，读数误差应符合规定。
2．测定方法
将测定管用供试液体或固体物质的溶液（取固体供试品，按各药品项下的方法制成40mg/ml）冲洗数次，缓缓注入供试液或溶液适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。
用同法读取旋光度3次，取3次的平均数，计算供试品的比旋度或浓度。
3．注意事项
（1）每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正l次，以确定在测定时零点有无变动。
如第2次校正时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。
（2）配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃（或各品种项下规定的温度）。
（3）供试物质的溶液应充分溶解，供试液应澄清。
（4）物质的比旋度与测定光源、测定波长、溶剂、浓度和温度等因素有关。
因此，表示物质的比旋度时应注明测定条件。
结果要求：不小于+35°。
所需主要仪器及价格：旋光仪单价：2000rmb
三、电泳实验
操作步骤
第三法琼脂糖凝胶电泳法
1仪器装置电泳室及直流电源同纸电冰。
2试剂(l)醋酸-锂盐缓冲液(ph3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氧氧化锂调节pH值至3 0，再加水至1000ml。
(2)甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g．加水100ml使溶解。
3操作法(1)制胶取琼脂糖约0.2g，加水l0ml，置水浴中加热使溶胀完全．加温热的醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)l0ml，混匀，趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻板上．厚度约3mm静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层．即得。
(2)对照品溶液及供试品溶液的制备照备品种项下规定配制。
(3)样与电泳在电泳槽内加入醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)。
将凝胶板置于电泳槽架上，经滤纸桥浸人缓冲液。
于凝胶板负极端分别点样1ul，立即接通电源。
在电压梯度约30v/cm、电流强度1～2mA/cm的条件下，电泳约20分钟，关闭电源。
(4)染色与脱色取下凝胶板，用甲苯胺蓝溶液染色，用水洗去多余的染色藏至背景无色为止。