石蜡切片
石蜡切片的主要步骤
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
石蜡切片的实验报告
一、实验目的1. 掌握石蜡切片的制作过程，包括组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。
2. 了解石蜡切片技术在生物学研究中的应用。
3. 学会使用显微镜观察石蜡切片，识别不同组织结构。
二、实验原理石蜡切片技术是一种重要的生物学制片方法，用于观察组织、细胞等微观结构。
其基本原理是将组织固定后，通过一系列的脱水、透明、浸蜡等步骤，使组织在石蜡中充分浸渍，然后用切片机切成薄片，最后进行染色和观察。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：肝脏、肾脏、心肌、骨骼肌等3. 试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、郝普特氏粘片剂、中性树胶、1%番红、1%固绿、1%过碘酸、Schiff 试剂、0.5%偏重亚硫酸钠溶液、醋酸酐-吡啶混合液、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液等4. 器材：切片刀、切片机、恒温箱、温台、熔蜡炉、蜡杯、酒精灯、蜡铲、展片台、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖盘、培养皿、吸管、镊子、单面刀片、台木、毛笔、洒精灯、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、树胶瓶、显微镜、温度计、脸盆、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取新鲜组织，固定于4%多聚甲醛24小时以上。
2. 脱水：将固定后的组织依次放入75%、85%、90%、95%酒精中浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将组织放入二甲苯I、二甲苯II中浸泡5-10分钟。
4. 浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中浸泡1小时。
5. 包埋：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，待石蜡凝固后取出并修整蜡块。
6. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。
7. 展片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
8. 染色：将烤干的切片进行染色，如苏木精-伊红染色。
石蜡切片的注意事项
石蜡切片的注意事项石蜡切片是生物学实验中常见的技术，用于制备生物样本的切片，以便于显微镜观察。
然而，石蜡切片制备过程中需要注意一些事项，以确保制片质量和实验结果的准确性。
下面是石蜡切片的注意事项。
1. 样本固定：在制备石蜡切片前，必须对样本进行适当的固定。
固定可防止细胞和组织的变性和腐败，保持其形态和结构完整。
常用的固定剂包括福尔马林、酒精、乙醛等。
选择合适的固定剂要根据不同的样本类型和实验目的来确定。
2. 处理样本：在固定完成后，需要将样本进行后续处理，以便于切片。
处理过程中要注意不要过度处理，以免对样本造成伤害或变形。
处理过程包括脱水、浸渍和渗透。
3. 石蜡渗透：石蜡切片制备的重要步骤是将样本渗透到石蜡中。
渗透时间的长短取决于样本的大小和厚度。
渗透时间过长可能会导致样本变硬，难以切割；渗透时间过短则可能导致石蜡切片中有空隙或气泡。
因此，要根据实验需要和样本特点来确定合适的渗透时间。
4. 切片厚度：石蜡切片的厚度一般为3-10微米。
切片过厚会使得样本中细胞或组织的结构难以清晰显示，影响判断；切片过薄则可能会使得切片易碎，不易操作。
因此，在切片前应根据实验需求和样本特点确定适合的切片厚度。
5. 切片机的选择：切片机的质量和性能直接影响到石蜡切片的质量。
选择高质量的切片机以保证切片的平整度和均匀性。
另外，切片机的刀片也需要定期更换，以保持切片的质量。
6. 切片保存：制备好的石蜡切片应妥善保存，以防止切片的损伤。
切片保存时应放置在干燥的容器中，避免阳光直射和湿度过高。
同时，应对切片进行编号和标记，以便于后续的实验和分析。
总之，制备石蜡切片需要严格控制一系列步骤，包括样本固定、处理、渗透、切片厚度和切片机的选择等。
注意这些事项可以提高石蜡切片的质量，确保实验结果的准确性。
同时，石蜡切片的保存也需要注意，以防止切片的损伤和失效。
石蜡切片的注意事项
石蜡切片的注意事项以石蜡切片的注意事项为标题，我们来了解一下石蜡切片的制备过程和注意事项。
石蜡切片是一种常用的组织学切片，它是通过将组织样本浸泡在石蜡中，然后用切片机将其切成薄片，最后染色并封片制成的。
石蜡切片制备过程中需要注意以下几点：1. 组织样本的处理组织样本的处理是制备石蜡切片的第一步，它直接影响到切片的质量。
在处理组织样本时，需要注意以下几点：（1）组织样本的大小应该适中，不宜过大或过小。
过大的组织样本难以切割，而过小的组织样本则会影响切片的质量。
（2）组织样本的处理时间应该适当，不宜过长或过短。
处理时间过长会导致组织样本变硬，难以切割，而处理时间过短则会导致组织样本变软，难以切割。
（3）组织样本的处理温度应该适宜，不宜过高或过低。
处理温度过高会导致组织样本变硬，难以切割，而处理温度过低则会导致组织样本变软，难以切割。
2. 石蜡的处理石蜡是制备石蜡切片的重要材料，它的质量直接影响到切片的质量。
在处理石蜡时，需要注意以下几点：（1）石蜡的熔点应该适宜，不宜过高或过低。
熔点过高会导致石蜡变硬，难以切割，而熔点过低则会导致石蜡变软，难以切割。
（2）石蜡的纯度应该高，不宜含有杂质。
杂质会影响石蜡的熔点和切片的质量。
（3）石蜡的处理时间应该适当，不宜过长或过短。
处理时间过长会导致石蜡变硬，难以切割，而处理时间过短则会导致石蜡变软，难以切割。
3. 切片机的使用切片机是制备石蜡切片的关键设备，它的使用直接影响到切片的质量。
在使用切片机时，需要注意以下几点：（1）切片机的刀片应该锋利，不宜钝化。
钝化的刀片会导致切片不平整，影响切片的质量。
（2）切片机的切割速度应该适宜，不宜过快或过慢。
切割速度过快会导致切片不平整，而切割速度过慢则会导致切片变形。
（3）切片机的切割厚度应该适宜，不宜过厚或过薄。
切割厚度过厚会导致切片不透明，而切割厚度过薄则会导致切片易碎。
4. 切片后的处理切片后的处理是制备石蜡切片的最后一步，它直接影响到切片的质量。
《病理检验技术》课件——石蜡包埋组织切片
石蜡包埋组织切片
7.若天气太冷，切片时组织蜡片容易碎裂，对着组织蜡块面 呵一口气后进行切片，可改善组织蜡片容易碎裂的情况，但 所切出的第一、二张组织蜡片厚度会比原来设定的切片厚度 稍厚一些，因此，前一、二张切出的组织蜡片不要。
石蜡包埋组织切片
6.调节切片刀的切片角度：切片机刀座上都有标 示切片刀切片角度的刻度，切片前需调节切片刀 至合适的切片角度，才能切好片。通常切片机上 刀座刻度范围为0°～10°，一般设定切片刀的 角度在8°左右为宜。但真正的切片角度是余隙 角。 所谓余隙角是指切片刀下刀锋倾斜面与组织蜡块 面的夹角。余隙角避免了切片时切片刀往返过程 中刀与组织蜡块面之间的摩擦。最理想的余隙角 是2°～4°，太大或太小都不能切好片。
3.如用金属框包埋组织蜡块，必须把四边修整平行，否 则在切片时会切出弯曲的组织蜡片带。
4.切片用毛笔应选用松软毛的水彩画笔，清扫切片刀上 的蜡屑时应顺着刀背往刀锋扫，避免刀锋切割笔毛，损 坏刀锋。
石蜡包埋组织切片
5.切片时转动切片手轮或推拉切片刀的动作要轻， 用力均匀。若用力太猛和速度太快，将会引起切片 压缩，也易导致轮转式切片机齿轮的磨损。
病理检验技术
石蜡包埋组织切片
石蜡包埋组织切片
组织石蜡切片 石蜡包埋组织切片
石蜡包埋组织切片
送检组织经过固定、 脱水、透明、浸蜡和 石蜡包埋制成组织蜡 块后即可马上进行切 片，称石蜡包埋组织 切片，简称石蜡切片。
石蜡包埋组织切片
一、石蜡切片操作过程
1.组织蜡块排序、冷冻：按病理号排序，先切在 前；蜡块组织面朝下放在一盘平整的冰块或冷冻 台上冷冻（-4～0℃）几分种后开始切片。
石蜡切片的实验报告
石蜡切片的实验报告石蜡切片的实验报告石蜡切片是生物学和医学领域中常用的技术手段，它可以将组织样本固定在切片上，以便于观察和分析。
本次实验旨在探究石蜡切片技术的原理、步骤和应用。
一、石蜡切片技术的原理石蜡切片技术是一种常用的组织学研究方法，它的原理基于石蜡的透明性和稳定性。
石蜡是一种具有较高熔点的蜡状物质，具有良好的剪切性和切片稳定性。
在进行石蜡切片前，需要将组织样本进行固定、脱水和浸渍处理，使其具备适合切片的性质。
然后，将固定好的组织样本浸入石蜡中，石蜡渗透进入组织细胞中，将其包裹在石蜡中形成固定的切片。
最后，使用显微镜对切片进行观察和分析。
二、石蜡切片的步骤1. 组织样本的固定：将组织样本取出后，迅速进行固定处理。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛等，可以使组织样本保持原有的形态结构。
2. 脱水处理：将固定好的组织样本进行脱水处理，以去除组织中的水分。
脱水过程中，需要逐渐使用浓度递增的酒精进行浸泡，使组织逐渐脱水至无水状态。
3. 浸渍处理：将脱水后的组织样本浸泡在石蜡溶液中，使其充分浸渍。
浸渍时间根据组织样本的大小和类型而定，一般需要数小时至数天。
4. 石蜡包埋：将浸渍好的组织样本放入石蜡模具中，加热使石蜡融化，将组织样本包裹在石蜡中。
包埋过程中需要控制温度和时间，以确保石蜡充分渗透到组织中。
5. 石蜡切片：使用石蜡切片机将包埋好的组织样本切割成薄片。
切片时需要调整切片机的切割速度和刀片的角度，以获得理想的切片质量。
6. 切片染色：将切好的石蜡切片进行染色处理，以增强组织结构的对比度和可见性。
常用的染色方法有血液学染色、组织学染色等。
7. 显微镜观察：将染色好的石蜡切片放置在显微镜下进行观察和分析。
通过显微镜的放大功能，可以清晰地观察到组织样本的细胞结构和组织构成。
三、石蜡切片技术的应用石蜡切片技术在生物学和医学领域中有广泛的应用。
首先，它可以用于病理学研究，帮助医生诊断和治疗疾病。
通过观察石蜡切片下的组织结构，医生可以了解病变的类型、程度和分布情况，从而制定相应的治疗方案。
石蜡的切片实验报告
一、实验目的1. 熟悉石蜡切片的制作过程。
2. 掌握石蜡切片的染色技术。
3. 了解石蜡切片在组织学研究和病理诊断中的应用。
二、实验原理石蜡切片技术是一种常用的组织学制片方法，其原理是将组织标本进行脱水、浸渍、浸蜡等处理，使其在石蜡中充分浸渍，然后用微型切片机将其切成薄片，最终制成组织学切片。
石蜡切片具有切片厚薄均匀、染色效果好、保存时间长等优点，是组织学研究和病理诊断的重要工具。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验器材：石蜡切片机、显微镜、载玻片、盖玻片、染色缸、酒精灯、剪刀、镊子等3. 实验试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液等四、实验步骤1. 取材：取小白鼠肝脏组织，用剪刀剪成小块。
2. 固定：将剪好的组织块放入卡诺氏固定液中固定24小时。
3. 脱水：将固定好的组织块依次放入70%、80%、90%、95%、100%酒精溶液中，每级酒精溶液浸泡1小时，使组织逐渐脱水。
4. 透明：将脱水的组织块依次放入三个二甲苯溶液中，每缸浸泡1小时，使组织逐渐透明。
5. 浸蜡：将透明的组织块依次放入三个石蜡溶液中，每缸浸泡1小时，使组织完全浸渍在石蜡中。
6. 包埋：将浸好蜡的组织块放入熔蜡中，待石蜡凝固后取出，用剪刀修整蜡块。
7. 切片：将修整好的蜡块固定在石蜡切片机上，调整切片厚度为4微米，制成石蜡切片。
8. 展片：将切好的石蜡切片展平在载玻片上。
9. 脱蜡：将展平的石蜡切片依次放入二甲苯、无水乙醇中，使切片脱蜡。
10. 染色：将脱蜡后的切片放入苏木精染液中染色5-10分钟，然后放入1%盐酸酒精溶液中分化，最后放入伊红染液中复染30秒。
11. 封片：将染好的切片放入封片液中封片。
五、实验结果制作完成的石蜡切片在显微镜下观察，可见到肝脏组织的细胞结构，如细胞核、细胞质、血管等。
六、实验讨论1. 石蜡切片技术是组织学研究和病理诊断的重要工具，具有切片厚薄均匀、染色效果好、保存时间长等优点。
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3.脱水。
乙醇是常用的脱水剂，用乙醇脱水的过程中，以低浓度逐渐过渡到高浓度乙醇（70%、80%、95%、无水乙醇），来除去材料块中的水分。
脱水时间跟材料块的大小而定（70% 1.5h，85% 1.5h，95% 2h(可以过夜)，100% 1.5h ，100% 1.5h）
4.透明。
透明剂为二甲苯。
透明剂的作用是置换乙醇，让材料透明，有利于石蜡向材料内部的渗透。
从1/2无水乙醇+1/2二甲苯（1.5h,若脱水不彻底，会出现乳白色浑浊）→二甲苯(1.5h)→二甲苯(1.5h)
5.低温浸蜡。
目的是慢慢除去材料中的二甲苯，而代之以石蜡。
将已透明的材料和二甲苯（约5ml）一起倒入包埋用的小烧杯中，把事先切碎的石蜡放入小烧杯中，使二甲苯正好浸没石蜡，盖上盖子，放入40℃的恒温箱中14h。
6.高温浸蜡。
将小烧杯中的石蜡和二甲苯混合液全部倒干净，注意不要把材料倒掉，马上倒入提前溶解好的熔点为54-56℃的纯石蜡，不要盖盖子，再把恒温箱的温度调到58℃，时间为4h-5h。
在两小时时换一次石蜡。
7.包埋。
即用纯石蜡将渗透好的材料封埋成蜡块，便于切片。
将溶解好的54-56℃的石蜡倒入事先准备好的蜡船中，用镊子将材料放入蜡船中，每隔1.5-2.0cm放一个材料，用镊子将材料扶正，动作要迅速，不能产生气泡。
然后放入装有冷水的脸盆中，使蜡迅速凝固。
待石蜡完全凝固后，取出蜡船阴干。
8.切片。
切片是用石蜡切片机把蜡块连同材料切成薄片。
具体步骤：
①蜡块的修正与粘附。
将材料用解剖刀修成宝塔形，材料在中央。
将宝塔粘附到载物块上，并用石蜡烫牢。
②安装切片刀和调节切片厚度。
装上切片刀，使刀身与材料切面平行（若不平行再将材料重新修平行），并略向内倾斜（约15°）调节切片的厚度为14微米。
③切片室4手摇切片机摇柄，左手持毛笔接蜡带，摇转速度要均匀，以没分钟40-50片为宜。
9.粘片。
肉眼观察或镜检，将看上去完整的切片进行粘片。
方法：
取干净的载玻片，滴三滴粘片剂（明胶1g+水100ml+碳酸2g+甘油15ml）与载玻片中央，加一滴蒸馏水，用手涂匀，用镊子将切片平铺在载玻片上，将多余的粘片剂用吸水纸吸干，然后将载玻片放在展片台（35℃）上，约1-1.5h，至蜡片全部展开为止。
然后将片子放在干净，通风的地方干燥3-4天。
10.脱蜡染色。
步骤：
①脱蜡。
即染色前用二甲苯将石蜡溶去。
将切片放入染色缸中，加入二甲苯，将染色缸放入45℃的恒温箱中45分钟，每15分钟换一次二甲苯。
②复水。
将切片依次经过1/2二甲苯+1/2无水乙醇→无水乙醇→无水乙醇→95%乙醇→80%乙醇→70%乙醇，各级5-10分钟，
③番红-固绿重染。
番红用71%乙醇溶解（0.5g+100ml70%乙醇），固绿用95%乙醇溶解（0.1g固绿+100ml95%乙醇）。
将切片放入番红染液中3-4h，然后取出切片，依次经过 70%（20s）
→85%(20s)→95%(20s)→固绿(20s)→95%(将固绿冲洗干净，3-4s)→无水乙醇(5-10min)→无水乙醇
(5-10min)→1/2二甲苯+1/2无水乙醇(5-10min)→二甲苯(5-10min)→二甲苯(5-10min)
11.封片。
光学树胶（光学中性树胶+二甲苯比例为1：1）。
将切片从二甲苯中取出后迅速滴一滴光学树胶，盖上盖玻片，（注意不要产生气泡，树胶也不要太多。
）放在干净，通风处，自然干燥。
12.贴标签。
最后在做好的切片的左边贴上标签，注明材料的名称，日期和制作者。
注意事项1.无水乙醇有硬化组织的作用，所以在无水乙醇中不宜浸得过久。
=zD7
2. 透明时，材料在二甲苯中不要放的太久，二甲苯易使材料变硬变脆。
3 所采用的石蜡熔点不宜太高，否则材料块会高度收缩变形，且高温浸蜡时间不要过长。
4.如果包埋处理失败，包埋块全部呈乳白色，并凹凸不平时，应该把它再度投入恒温箱内第3杯石蜡中，待其熔化后重新移入新的石蜡溶液中包埋。
5.展片时温度不要太高，时间不要太久，否则石蜡会溶解粘到载玻片上，不利于脱蜡。
6.蜡块要修齐，四个面要平行，否则会卷曲或弯曲。
7.固绿着色深，因此固绿染色时间不要太久。
分析和讨论5
在制作切片标本的许多操作步骤中，脱水、透明最为重要。
脱水总是逐渐进行的，必须彻底，务使组织内部一点残余的水分都不留。
如果脱水不彻底，石蜡渗透不佳，就无法制出满意的切片。
透明的目的是使材料块中的乙醇完全提出，并能顺利地渗入石蜡、透明剂（如二甲苯等），这是关键的一步。
此外固定的方法不当也同样达不到观察的目的，因此在操作时必须加倍小心。