植物磷含量的测定(钼锑抗比色法)
土壤有效磷测定方法
称取429碳酸氢钠溶于约950mL水中，用10%氢氧化钠溶液调节pH至8.50佣酸度计测定），用水稀释至1L。贮存于聚乙烯或玻璃瓶中备用。如贮存期超过20d，使用时须重新校正pH值。
3.3 0.30%酒石酸锑钾溶液
称取0.30g酒石酸锑钾(kSbOC4-1406"1/2H20)溶于水中，稀释至100mL。
3.4钼锑贮备液
称取109钼酸铵[(NH4)6Mo7024.4H20]溶于300mL约60℃的水中，冷却。另取181mL浓硫酸（密度1.84），缓缓注入约800mL水中，搅匀，冷却。然后将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，搅匀，冷却。再加入100mL0.30%酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至2L，盛于棕色瓶中备用。
2主要仪器设备
①紫外可见分光光度计；②恒温振荡机或往返式振荡机；③带盖塑料瓶；④酸度计；⑤具塞；⑥比色管25mL;⑦150mL试剂三角瓶。
3相关试剂的制定
3.1 无磷活性炭粉
将活性炭粉先用1:1盐酸浸泡24h，然后移至平板，抽气过滤，用水淋洗4-5次，再用浸提剂浸泡24h，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用。
4.2标准曲线的绘制
分别吸取5ug/mL磷标准溶液0mL，0.50mL，lmL，1.50mL，2mL，2.50mL，3.00mL于25ml比色管中，加入浸提剂10mL，显色剂5mLJ慢慢摇动使C02逸出再以水稀释至刻度，充分摇动，逐尽C02，定容，既为含磷0.00，0.10,0.20,0.30,0.40，0.50，0.60ug/mL磷的标准系列溶液。在室温高于20%处放置30min后，进行比色，测量吸光度值和浓度值，绘制标准曲线或建立回归方程。
1 方法原理及适用范围
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定是一种常用的分析方法，钼锑抗比色法是其中一种常用的测定方法。
该方法基于钼酸钠在酸性条件下与磷酸盐形成复合物，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算样品中磷的含量。
该方法的具体步骤如下：
1. 样品制备：将植株样品取适量，经过研磨、筛选等处理后，按照规定的方法进行矿酸或硝酸-过氧化氢消化。
2. 样品处理：取消化后的样品，加入硝酸、氯化钾等试剂，使磷酸盐转化为磷酸根离子。
3. 钼锑试剂的制备：将钼酸钠、醋酸和硫酸混合，加入氯化锑钠，制备钼锑试剂。
4. 反应：将处理后的样品加入钼锑试剂中，经过适当时间的反应后，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物。
5. 吸光度测定：将反应产物在特定波长下进行比色测定，根据标准
曲线计算样品中磷的含量。
该方法的优点是简单、快速、精确，适用于大面积的植物磷素含量测定。
但是该方法也存在一些限制，例如样品中的其他化合物可能会影响测定结果，需要进行干扰消除等处理。
2种植物磷含量的检测方法比较研究
2种植物磷含量的检测方法比较研究李会娟【摘要】钼锑抗检测法和钒钼黄检测法2种比色法的比较研究结果表明，2种比色方法的检测结果完全一致，钼锑抗比色法适宜检测磷含量较低的样品，如小麦、玉米、花生秸秆及小麦、玉米籽粒；钒钼黄比色法适宜检测磷含量较高的样品，如花生籽粒。
%comparative study of 2 kind of colorimetric comparison method including molybdenum antimony resistance detecting method and vanadium molybdenum yellow detecting method showed that, the result of two colorimetric comparison method was consistent, molybdenum antimony resistance detecting method was suitable to detect the samples with low phosphorus content, such as wheat, corn ,peanuts, maize and wheat straw. Vanadium molybdenum yellow colorimetry method was suitable to detect the samples with higher phosphorus contain, such as peanut kernel.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】2页(P16-17)【关键词】植物磷含量;钼锑抗比色法;钒钼黄比色法;比较【作者】李会娟【作者单位】河南省南阳市农产品质量检测中心,河南南阳473000【正文语种】中文【中图分类】S132;Q946.912磷是生命体必需的大量元素，是蛋白质、核酸、辅酶、核苷酸、磷脂等一系列重要生物质的结构组分，在植物的许多主要功能中，担任储存和运输能量的功能、代谢的作用，对种子的形成不可或缺。
植物全磷的测定方法
二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、适用范围。
适合于含磷量较高的植物样品的测定(如籽粒样品)。
2、方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸,其吸光度与磷浓度成正比,可在波长400～490nm处用吸光光度法测定。
磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较短波长。
此法的优点是操作简便,可在室温下显色,黄色稳定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介质中都适用,对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格,干扰物少,在可见光范围内灵敏度较低,适测范围广(约为1～20mg/L P),故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。
3、试剂（1）钒钼酸铵溶液:25.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析纯]溶于400mL水中,必要时可适当加热,但温度不得超过60℃。
另将1.25g 偏钒酸铵(NH4VO3,分析纯)溶于300mL沸水中,冷却后加入250mL浓HNO3(分析纯)。
将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵(溶液中,不断搅匀,最后加水稀释至1L,贮于棕色瓶中。
（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶于水, 稀释至100ml。
（3）二硝基酚指示剂(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中。
（4）磷标准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水,加入5ml浓HNO3,于1L容器瓶中定容。
4、主要仪器设备。
分光光度计。
5、分析步骤准确吸取定容,过滤或澄清后的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示剂,滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色,加入10.00ml钒钼酸铵试剂,用水定容(V3)。
15min后,用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步骤显色),调节仪器零点。
植物磷含量的测定(钼锑抗比色法)
植物磷含量的测定（钼锑抗比色法）一、实验目的?1．掌握钼锑抗比色法测定磷的方法。
2．练习实际测量以及定容的操作。
3．练习分光光度计的使用。
二、实验原理?植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸光光度法测定。
?三、实验试剂（1）2mol/L?NaOH溶液?（2）0.2%二硝基酚指示剂?（3）0.5mol/L?H2SO4硫酸溶液:28mL（4）钼锑贮存溶液：量取153ml不断搅拌，冷却。
（100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随（50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。
分析纯)，100ml水，加5ml 浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。
吸取上述溶液10ml 于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。
四、实验步骤1、吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)于50ml容量瓶中,?用水稀释至约20ml,加1～2滴二硝基酚指示剂,滴加2mol/L?NaOH溶液中和至刚呈黄色,再加入1滴0.5mol/L?H2SO4溶液,使溶液的黄色刚刚褪去呈淡黄色,然后加入钼锑抗显色剂5.00ml,摇匀,用水定容(V3)。
在室温高于15℃的条件下放置30min后,用1cm光径比色槽在波长700nm处测定吸光度,以空白溶液为参比调节仪器零点。
?2、校准曲线或直线回归方程:?准确吸取ρ(P)=?5mg/L标准工作溶液0,?1,?2,?4,?6,?8?ml,分别放入50mL容量瓶中,加水至20ml,同上步骤显色并定容,?即得0,0.1,?0.2,?0.4,?0.6,?0.8?mg/L?P标准系列溶液,?与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。
五、结果计算?Wp =610m(V1/V2)V3c⨯⨯⨯×1000?式中:??Wp?——植物磷的质量分数,g/kg;?????c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度,?mg/L;? V1——消煮液定容体积,?ml;?V2——吸取测定的消煮液体积,?ml;?V3——显色液体积,?ml;?m——称样量,g;?六、注意事项1、室温低于15℃时，可在30～402、植物磷含量0.5g/kg为低量，3、。
植物样全磷测定方法
植物样全磷测定—钼锑抗比色法1、方法原理植物中的磷以有机态为主，用H2SO4-H2O2氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO2和H2O,使磷素转化为磷酸盐，然后用钼锑抗比色法测定。
2、仪器设备（1）分光光度计（2）消煮管（3）半微量定氮蒸馏器（4）半微量滴定管3、试剂（1）H2O2[30%,分析纯]（2）浓硫酸[1.84g/cm3]（3）钼锑贮存溶液：浓硫酸153mL缓慢倒入约400mL蒸馏水中，同时搅拌。
放置冷却。
另称10g钼酸铵溶于60摄氏度的300mL蒸馏水中，冷却。
将配好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。
随后加入酒石酸锑钾（5g/L）100mL。
避光贮存。
（4）钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100mL钼锑贮存液中。
随配随用，有效期一天。
（5）二硝基酚指示剂：0.2g二硝基酚溶于100mL水中（6）磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（105摄氏度烘干2h）溶于200mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，转入1L容量瓶中定容。
此为磷标准贮存液（100mg/L）,可以长期贮存。
（7）磷标准液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即磷标准溶液（5mg/L）不宜久存。
4、操作步骤（1）H2SO4-H2O2消煮称取烘干磨碎植物样品0.15g置于消煮管中，加入8mL浓硫酸，浸泡一晚上。
于360摄氏度消煮1h，稍冷后加入10滴H2O2，消煮20min，稍冷，重复加入H2O2，直至溶液无色或清亮。
将消煮液洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀，静置。
（2）吸取上一步消煮液10ml于50ml容量瓶中，加水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠（2mol/L）和硫酸（0.5mol/L）调节pH至溶液刚成微黄色。
然后加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容。
放置30min后，在分光光度计用波长700nm比色，以空白溶液为参比液，读取吸收值，在工作曲线上查找出显色液的P值。
钼锑抗比色法测定磷细菌发酵液中有效磷含量测定值的影响因素分析
安徽农业科学 ， ｕｎｌ ｆ ｎｕ Ａ ｎ． ｃ． ０ ，６ １）４２ —４２ Ｊ ｒａｏ Ａ ｈｉ ｇ Ｓｉ ０ ８３ （２ ：８２ ８３ ｏ ２
责任编辑
罗芸
责任校对
李洪
钼 锑抗 比色法测定 磷细 菌发 酵液 中有效 磷 含量 测定值 的影 响 因素 分析
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张祥胜 长 大 生 科 学 ，北 州４０） （江 学 命 学 院湖 荆 ３２ ４５
摘要 ［ 目的］ 探讨影 响钼锑 抗比 色法进行磷 细菌发酵液 中有效磷含 量测定的 因素 。 方法］以 巨大 芽胞杆 菌为出发 菌株 ， 用摇瓶发 酵 ［ 采 法培养有机磷 细菌， 用钼锑抗比 色法测 定上 清液 中有效磷含量 ， 究超 声波处理 ， 酵体积 、 研 发 活性碳 、 液 ｐ 和发酵液 离心等 因素 反应 Ｈ值 对钼锑抗 比色法测 定有效磷 含量 的影响 。［ 结果］ 反应 液最大吸收波长在 ７ ，左右 ； ２ １１ ０３ １ １ 发酵体积 、 加入 活性碳 与否 、 反应液的 ｐ Ｈ值等 对 测定结果影响 不大， 筛选时可 大大提 高效率 ； 声波处理 ２ ｉ 效 果明显 ； 用 ５ ｌ 在 超 ０ ｒｎ ａ 在 ０ｍ 容量瓶 进行 定容 时， 取样 体积 以 ２ ５ ｌ 宜； ．ｍ 为 对 发酵液进行 离心 效果 更好 些 ， 在 必要 的情 况 下 ， 但 可静置 后取 上 清测 定。 ［ 结论 ］该研 究 为建 立有机 磷 细 菌诱 变 筛选 体 系提供 理 论
磷钼蓝比色法测定植物组织中磷的含量
磷钼蓝⽐⾊法测定植物组织中磷的含量检测原理在⼀定的酸度和钼酸铵浓度下，溶液中的磷与钼酸铵作⽤⽣成黄⾊的磷钼酸，其反应如下：(NH4)2MoO4+2HCl→H2MoO4+2NH4ClH3PO4+12H2MoO4→H3［P(Mo3O10)4］+12H2O⽣成的磷钼酸，在⼀定量的氯化亚锡作⽤下，使部分钼(六价钼)被还原，形成蓝⾊的复杂化合物—磷钼蓝。
在⼀定含磷浓度范围内，溶液蓝⾊的深浅与磷含量成正⽐。
根据蓝⾊的深浅与标准⾊阶相⽐较，即可求出磷的含量。
测定步骤制备标准⾊阶和供试液中磷含量的测定，可同时在⽐⾊盘中，按下表顺序进⾏。
磷测定步骤操作步骤⽤量单位标准⾊阶浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）0.5124812制备显⾊⽤准系列取混合标准液浓度2mg/L滴124000416mg/L滴000123滴3203211．加2.1%钼酸铵盐酸液滴11111112．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀3．加0.1%氯化亚锡溶液滴11111114．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀5．⽐⾊读数5～15分钟内与标准⾊阶⽐较记下读数6．计算结果⽆机磷(mg/L)=读数*稀释倍数注意事项0.1%氯化亚锡在临⽤前由2%氯化亚锡⽢油贮备液稀释制备当天有效，每次少配。
3—2.5植物组织中钾的测定(四苯硼钠⽐浊法)溶液中的钾离⼦与四苯硼钠Na［B(C6H5)4］作⽤，⽣成难溶的四苯硼钾⽩⾊沉淀，使溶液呈现浑浊、其反应如下：K++Na[B(C6H5)4]→K[B(C6H5)4]↓+Na+在⼀定含钾浓度范围内，其混浊度与钾含量成正⽐，根据混浊程度与标准钾的浊度相⽐较，即可求出钾的含量。
测定步骤制备标准⽐浊系列与供试液中钾的测定，可同时在⼩试管(19×70毫⽶)中，按下表顺序进⾏。
有效钾测定步骤操作步骤⽤量单位标准浊度系列浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）510204060801．制备⽐浊⽤标准系列取混合标准液浓度20mg/L滴2480004160mg/L滴000234加蒸馏⽔滴6406542．加3％EDTA碱性溶液滴1111111 3．加37％甲醛滴1111111 4．搅匀逐管搅匀5．加2％四苯硼钠溶液滴22222226．搅匀逐管搅匀7．⽐浊读数5～15分钟内与标准浊度系列⽐浊8．计算结果有效钾(mg/L)=读数值*稀释倍数注意事项试液中产⽣⼲扰作⽤的离⼦，主要有铵离⼦及其它⼀些三价、⼆价⾦属离⼦(如钙、镁、铁、铝等)须加⼊EDTA⼆钠盐及甲醛来掩蔽，以消除⼲扰。
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植物磷含量的测定（钼锑抗比色法）
一、实验目的
1．掌握钼锑抗比色法测定磷的方法。
2．练习实际测量以及定容的操作。
3．练习分光光度计的使用。
二、实验原理
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸光光度法测定。
三、实验试剂
（1）2mol/L NaOH溶液
（2）0.2%二硝基酚指示剂
（3）0.5mol/L H2SO4硫酸溶液:28mL浓H2SO4加水稀释至1L。
（4）钼锑贮存溶液：量取153ml浓硫酸(分析纯，密度1.84g/ml)，缓缓加入到400ml蒸馏水中，不断搅拌，冷却。
另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O，分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中，冷却。
然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。
再加入0.5％酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O，分析纯]溶液100ml，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此贮备液含钼酸铵1％，硫酸2.75mol/L。
（5）钼锑抗显色剂：称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。
（6）5mg/L磷标准溶液：0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。
分析纯)，100ml水，加5ml浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。
吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。
四、实验步骤
1、吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)于50ml 容量瓶中, 用水稀释至约20ml,加1～2滴二硝基酚指示剂,滴加2mol/L NaOH溶液中和至刚呈黄色,再加入1滴0.5mol/L H2SO4溶液,使溶液的黄色刚刚褪去呈
淡黄色,然后加入钼锑抗显色剂5.00ml,摇匀,用水定容(V3)。
在室温高于15℃的条件下放置30min 后,用1cm 光径比色槽在波长700nm 处测定吸光度,以空白溶液为参比调节仪器零点。
2、校准曲线或直线回归方程: 准确吸取ρ(P)= 5mg/L 标准工作溶液
0, 1, 2, 4, 6, 8 ml,分别放入50mL 容量瓶中,加水至20ml,同上步骤显色并定容, 即得0,0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mg/L P 标准系列溶液, 与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。
五、结果计算
W p =6
10m (V1/V2)V3c ⨯⨯⨯×1000 式中: W p ——植物磷的质量分数,g/kg;
c ——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml;
V2——吸取测定的消煮液体积, ml;
V3——显色液体积, ml;
m ——称样量,g;
六、注意事项
1、室温低于15℃时，可在30～40℃水浴中，显色30min 。
2、植物磷含量0.5g/kg 为低量，1.0~2.0g/kg 为中量，大于2.0g/kg 为高量。