有效磷的测定(Olsen法)
Olsen法测定土壤速效磷化学脱色法
Olsen法测定土壤速效磷化学脱色法王京平(长沙土壤肥料测试中心,湖南长沙410127)摘要:通过三个实验,揭示了土壤腐殖质对Olsen法测定土壤有效磷的影响机理;研究了用化学方法氧化腐殖质脱色所用试剂可能对钼蓝法测磷的影响,确定了该法的最佳试剂用量及操作步骤。
关键词:Olsen法;土壤速效磷;高锰酸钾;化学脱色法中图分类号:S151195:O656131文献标识码:B文章编号:1006-060X(2001)05-0026-02土壤速效P的测定有多种方法。
由于Olsen法(pH815、015mol/L NaH CO3浸提法)既适合于石灰性土壤,也适合于中、酸性土壤,因此它是应用最广泛的土壤速效P测定方法。
但由于Olsen浸提剂的pH值为815,呈碱性,容易将土壤中的腐殖质溶解出来,故浸提液呈黄色或黄褐色。
目前,将浸提液颜色除去的方法是利用活性炭吸附脱色,但活性炭(即使是分析纯)中一般P含量较高,需经洗涤P后才能使用,而洗涤需较长的时间和大量的水,浪费人力、物力。
腐殖质对钼蓝法测磷有无影响;影响的机理是什么;能否用一种简单的化学方法既能将浸提液的颜色除去,又不影响下一步钼蓝法测P?本文对此进行了较细致的研究,发现用KMnO4氧化腐殖质可达到良好的脱色效果,分析结果也十分可靠。
现报道如下。
1材料与方法111主要试剂和仪器主要试剂为515mol/L(1/2H2SO4);015%高锰酸钾溶液;5%、10%抗坏血酸(Vc)水溶液;磷酸标准溶液(5mg/LP2O5);硫酸钼锑贮备液,钼酸铵浓度为1%,酒石酸锑钾浓度为0105%,酸度415mol/L (1/2H2SO4);硫酸钼锑抗显色剂:每100ml硫酸钼锑贮备液中加115gVc。
主要仪器为721型分光光度计、3cm比色杯。
112实验方法11211浸提液中腐殖质对钼锑抗测磷的影响。
称取含腐殖质较高的过1m m筛的土壤风干样品5100g,加入预先调至25?1e的015mol/LNaHCO3 (pH8.5)100ml,在恒温(25e)条件下振荡30m in后收稿日期:2001-07-12作者简介:王京平(1962)),女,湖南衡山县人,主要从事土壤测定分析工作。
土壤有效磷的测定Olsen法
测土配方施肥化验室常规指标的检测技术四土壤有效磷的测定（Olsen 法）王帅 综合信息科原理：石灰性土壤中的磷，多以磷酸一钙、磷酸二钙形态存在，用NaHCO 3溶液（pH8.5）提取土壤有效磷，由于碳酸根的同离子效应，降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。
同时碳酸氢钠碱溶液中存在着OH -、HCO -3、CO 2-3等阴离子有利于吸附态磷的交换。
在酸性土壤中因pH 提高使磷酸铝和磷酸铁（Fe-P 、Al-P ）水解而部分被提取。
在一定酸度下，浸提液中的磷与钼酸铵络合成黄色的磷钼杂多酸，用抗坏血酸将磷钼黄还原为磷钼蓝。
溶液蓝色的深浅与磷的含量成正比关系，在一定浓度范围内，服从朗伯-比尔定律。
土液比为1:20；浸提温度25℃±1℃，振荡提取时间为30min 。
步骤：计算：式中： C —测定液中P 的质量浓度，ug/mL ；V —显色体积，25mL ；D —分取倍数，浸提液体积/显色体积，50/10；m —风干试样的质量，g ；103和1000 —分别将ug 换算mg 将g 换算成kg 。
盐酸-氟化铵提取（Bray 法）适用于酸性土吸取溶液后加硼酸，摇匀，加二硝基酚指示剂，用硫酸、氨水调色至微黄色。
其他步骤与Olsen 法相同。
注意事项：1. 室温控制：浸提液温度影响较大，应在25℃±1℃；钼锑抗显色温度20-40℃，注意室温不可低于20℃。
2. 加入显色剂，产生大量CO 2,，防止溶液外溢，造成试验失败；一定要摇匀溶液，影响结果准确。
nm880CO mL 15030180mL 200)2(302mL 5mL 00.10mol/L 5.050.0mL 50.2操作，比色波长标准曲线按照显色步骤同时做空白试验上机测定摇匀慢摇，排比色管三角瓶’转，振荡机塑料瓶称样‘静置显色剂吸干过滤）碳酸氢钠浸提液（加−−→−−−−→−−−−→−−−→−−−−−−−−−−−→−−−→−g mm3.显色剂现用现配。
碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项
碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项摘要介绍了碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定石灰性和中性土壤有效磷的注意事项，以供参考。
关键词Olsen法；测定；土壤有效磷；注意事项国家农业标准中，采用碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法（Olsen法）测定石灰性土壤中（中性及酸性土可参照使用）的有效磷含量（其中操作规程以下简称规程），其中校准曲线或回归方程较易做出或求出，因此也较容易测定。
但是，要提高其测定准确性，减轻劳动量还需要注意以下几点。
（1）所用的试剂要按规程要求准确配制。
一是选用质量合格的仪器、药品、试剂、纯水，要求测定者首先对要使用的仪器进行校准，在试剂的配制中注意观察药品、试剂、纯水的颜色，发现异常要查找原因；二是精确称取或量取；三是按规程要求的步骤顺序配制，调节酸碱度。
但需要说明的是：①该规程要求的钼锑抗显色剂，称取的抗坏血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21°－22°）0.5g溶于100mL 钼锑贮备液中测定的结果，土壤有效磷含量要低于称取1.5g抗坏血酸溶于100mL 钼锑贮备液中测定的结果。
②配制磷标准贮备液的KH2PO4 要选用优级纯的，而且要经过105℃烘干2h，并冷却后再称取配制。
（2）所需试剂要按规程要求保存与使用。
钼锑贮备液要盛放于棕色瓶中，避光存放；钼锑抗显色剂要现用现配。
（3）所用的器械要反复冲洗干净，有的还要干燥。
测定中所用的（刻度、胖肚）吸管、塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶、容量瓶、瓶塞、比色皿要反复冲洗干净，塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶需烘干后再用。
（4）要严格土液比、温度、振荡频率及振荡时间。
由于这4个方面对浸提出的磷含量有至关重要影响，因此一定要严格控制。
①要严格土液比。
即风干土样准确称取2.50g（电子天平先预热30min，再校准后使用），加入的碳酸氢钠浸提剂准确量取50.00mL。
②要严格浸提温度。
可把浸提剂先放在恒温（25±1）℃的环境中，调温至（25±1）℃，再加入到称取的待测土样塑料瓶中；振荡要使用恒温水浴振荡机，先使水温调至（25±1）℃，并保持该水温振荡。
Olsen法测定土壤中有效磷的方法优化及检测研究
Olsen法测定土壤中有效磷的方法优化及检测研究张飞龙【摘要】土壤有效磷含量的测定最常用的方法是碳酸氢钠浸提—钼锑抗比色法(Olsen法).该方法测定过程中有机质对测定值影响比较大,一般采用无磷活性炭吸附的办法去除有机质的干扰.据《土壤分析技术规范》注释,测定时可建议采用紫外可见分光光度计于波长880nm处比色,此波长处对浸出的有机质已基本无吸收,浸提时可不加活性炭.本实验拟探讨这两种方法对土壤有效磷测定值的影响.实验结果表明,在紫外波长880nm处对土壤有机质背景的干扰能够有效的去除,测定值结果相较与传统的活性炭法没有显著性差异,测定过程具有准确、简单、快捷、低成本的优势.故采用紫外可见分光光度计于波长880nm处比色能够准确的测定土壤有效磷.【期刊名称】《西藏农业科技》【年(卷),期】2016(038)004【总页数】5页(P33-37)【关键词】有效磷;有机质;紫外可见分光光度计;无磷活性炭【作者】张飞龙【作者单位】西藏自治区农牧科学院农业质量标准与检测研究所西藏拉萨·850032【正文语种】中文磷是作物生长必须的大量营养元素之一，土壤有效磷的含量决定了是否继续施用磷肥的主要因素，在农业生产中一般采用土壤有效磷的指标来指导施用磷肥[1-5]。
土壤有效磷的测定通常采用碳酸氢钠法-钼锑抗比色法( Olsen法)进行磷含量的测定，该方法是浸提土壤有效磷最经典、传统的方法。
由于该方法与作物对磷肥的反应相关性好，在我国被作为常规土壤测试方法被采用，该方法是 1954 年Olsen 等人提出的，适合弱酸性到碱性 pH 范围的土壤。
其作用原理为磷酸根与钼酸铵作用生成磷钼杂多酸，加入还原剂将其还原成磷钼杂多蓝后可用分光光度法测定其含量[6-9]。
磷钼蓝法常用的还原剂有氯化亚锡、1,2,4-胺基萘酚磺酸、硫酸联氨、抗坏血酸等[10]。
土壤有效磷的速测方法多用氯化亚锡作还原剂，氯化亚锡的灵敏度高，显色快，但颜色不稳定。
土壤有效磷的测定资料讲解
二、方法原理
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在 着OH-、HCO3-、CO32-等阴离 子，有利于吸附态磷的置换。
因此NaHCO3不仅适用于石灰 性土壤，也适应于中性和酸性 水稻土壤中速效磷的提取。
三主要仪器设备
1、可控温的往复振荡机： 本法浸提温度对测定结果影响很大。
因此必须严格控制浸提时的温度条 件，本方法要求是25±1 ℃ ，用恒 温振荡机进行提取。
3、Olsen法的影响因素
温度：
Olsen法不同温度浸提土壤有效磷的试验 结果表明：提取温度对Olsen法测定土壤有 效磷的结果影响极大，在10~30℃范围内， 有效磷测定值随温度升高而增加，温度每 升高1℃所增加的磷的平均值为0.44mg／ kg，且随着土壤含磷量不同，其影响程度 也不同。
二、 Olsen方法原理
2、指标体系
即使简单地以“高”、“中”、 “低”来分档,不同提取方法 的结果分起档来其数值相差很 远;而且同一提取方法的结果 对不同土壤,不同作物还应该 有不同的分档标准。
2、指标体系
测定方法
评价标准 低 中 高
单位：mg/kg
0.03mol/L NH4F- 0.5 mol/L 0.025mol/LHCl 法 NaHCO3法
土壤有效磷的测定
目录
一、概述 二、 Olsen方法原理 三、主要仪器设备 四、试剂 五、操作步骤 六、结果计算 七、质量控制
一、概述
土壤有效磷是土壤肥力的重要 指标之一，表明土壤的供磷水 平，可以作为判断施用磷肥的 指标，为推荐施肥提供依据。
一、概述
土壤有效磷含量只是一个相对的 指标，同一土壤用不同方法测得 的有效磷量可以相差很多，即使 用同一浸提剂，由于浸提条件如 土液比、温度、时间、振荡方法 不同其结果有很大差异，在相同 条件下测得的结果才有相互比较 的意义。
关于Olsen法测定土壤速效磷时温度校正的问题
关于Olsen法测定土壤速效磷时温度校正的问题土壤速效磷的含量是合理施用磷肥的重要依据之一。
在土壤速效磷测定的诸多方法中，Olsen法普遍得到大家的认可，有人曾建议Olsen法可作为国际标准法。
然而，Olsen法测磷对浸提剂的温度很敏感，它要求提取剂的温度要保持在25℃左右，同一个土壤在不同时期不同环境测定，磷的浸出量将随温度的起伏而出现较大的变化。
实验表明：环境温度每相差10℃可以引起37%--41%的测试误差（对常规分析）或19%--25%的测试误差（对于速测）。
近年来，人们想过很多办法来对Olsen法测磷时的温度进行校准，但是结果都有局限性。
利用空调器保持室温恒定在温差较小时虽然凑效，但室温小于10℃或更低时往往很费时，且温度往往难于稳定；如果将土壤浸提液加温至26-27℃再进行提取，不同室温下测值误差又很大；也有人通过做大批量的对比实验来确定当地的测磷温度校准系数，这种做法不仅耗时耗力，周期很长，其适用范围也很有限。
迅捷牌2001型和4001型土壤养分仪通过内部载入磷的温度校正数据库，仪器自动检测当前室温，自动校准速效磷的测定结果，操作简单快捷，适用范围广，测值准确，它消除了在农村基层或流动服务中环境温度变化带来的误差。
有效磷的测定
土壤有效磷的测定0.5molL -1NaHCO 3 浸提—钼锑抗比色法）一、实验目的土壤中有效磷的含量，随土壤类型、气候、施肥水平、灌溉、耕作栽培措施等条件的不同而异。
通过土壤有效磷的测定，有助于了解近期内土壤供应磷的情况，为合理施用磷肥及提高磷肥利用率提供依据。
土壤速效磷的测定中，浸提剂的选择主要是根据土壤的类型和性质测定。
浸提剂是否适用，必须通过田间试验来验证。
浸提剂的种类很多，近20 年各国渐趋于使用少数几种浸提剂，以利于测定结果的比较和交流。
我国目前使用最广学的浸提剂是0.5molL-1NaHCO3溶液（Olsen法）,测定结果与作物反应有良好的相关性［注1］，适用于石灰性土壤、中性土壤及酸性水稻土。
此外还使用0.03molL-1NH4F-0.025molL-1HCI 溶液（Bray I法）为浸提剂，适用于酸性土壤和中性土壤。
同一土壤用不同的方法测得的有效磷含量可以有很大差异，即使用同一浸提剂，而浸提时的土液比、温度、时间、振荡方式和强度等条件的变化，对测定结果也会产生很大的影响。
所以有效磷含量只是一个相对的指标。
只有用同一方法，在严格控制的相同条件下，测得的结果才有相对比较的意义。
在报告有效磷测定的结果时，必须同时说明所使用的测定方法。
二、实验原理石灰性土壤中磷主要以Ca-P（磷酸钙盐）的形态存在。
中性土壤Ca-P、Al-P （磷酸铝盐）、Fe-P（磷酸铁盐）都占有一定的比例。
0.5molL-1NaHCO3、（pH8.5）可以抑制Ca2+的活笥，使某些活性更大的与Ca结合的P浸提出来；同时，也可使比较活性的Fe-P和Al-P起水解作用而被浸出。
浸出液中磷的浓度很低，须用灵敏的钼蓝比色法测定，其原理详见土壤全磷的测定章节。
当土样含有机质较多时，会使浸出液颜色变深而影响吸光度，或在显色出现浑浊而干扰测定，此时可在浸提排荡后过滤前，向土壤悬液中加入活性碳脱色，或在分光光度计800nm 波长处测定以消除干扰。
土壤有效磷的测定方法
土壤有效磷的测定方法摘要：土壤中的有效磷是植物生长所必需的关键养分。
准确测定土壤中的有效磷含量对于农业生产和土壤管理至关重要。
本论文将介绍几种常用的土壤有效磷测定方法，以及它们的原理和应用。
引言土壤中的有效磷是植物生长所需的重要养分之一。
磷是DNA、RNA、ATP等生物分子的组成部分，对植物的生长和发育至关重要。
因此，测定土壤中的有效磷含量对于农业生产和土壤管理非常重要。
第一部分：常用的土壤有效磷测定方法1. 离子交换树脂法：这是一种常用的土壤有效磷测定方法。
它利用带电的离子交换树脂吸附土壤中的磷，并测定吸附在树脂上的磷含量。
2. Bray法：这种方法使用Bray试剂溶解土壤中的磷，然后通过比色法或光度法测定磷的浓度。
3. Olsen法：Olsen试剂与土壤中的磷反应，生成可溶性磷，然后使用比色法或光度法测定磷的浓度。
第二部分：测定方法的原理和应用1. 离子交换树脂法原理：该方法利用离子交换树脂对土壤中的磷进行吸附，并通过浸泡树脂样品后测定吸附在树脂上的磷含量。
这种方法适用于不同类型的土壤。
2. Bray法和Olsen法原理：这两种方法都基于酸性溶液与土壤中的磷反应，将磷从土壤中溶解出来。
然后，使用比色法或光度法测定磷的浓度。
这些方法适用于不同pH值的土壤。
3. 应用：这些土壤有效磷测定方法可用于评估土壤中的磷含量，指导农业生产中的磷肥施用和土壤管理决策。
它们有助于确保植物获得足够的磷以支持生长，同时减少过度施用对环境造成的不利影响。
结论准确测定土壤中的有效磷含量对于农业生产和土壤管理至关重要。
离子交换树脂法、Bray法和Olsen法是常用的土壤有效磷测定方法，它们可以适用于不同类型的土壤和不同pH值条件下。
通过这些方法，农民和土壤科学家可以更好地了解土壤中的磷含量，以制定科学的施肥计划，提高农产品产量并减少环境污染。
土壤有效磷测定
土壤有效磷测定A 碳酸氢钠提取——钼锑抗比色法（Olsen 法）1 方法提要碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以抑制Ca 2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P 盐类中的磷被浸出，也可使一定量活性Fe-P 和Al-P 盐类中的磷通过水解作用而浸出。
由于浸出液中Ca 、Fe 、Al 浓度较低，不会产生磷的再沉淀。
浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。
土壤浸出的磷量与土液比、液温、振荡时间及方式有关。
本法严格规定土液比为1：20，浸提液温度为25℃±1℃，振荡提取时间为30min 。
2 适用范围本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定；中性土壤及水稻土也可参照使用。
3 主要仪器设备3.1分光光度计或紫外－可见分光光度计；3.2恒温（25︒C ±1︒C ）往复式或旋转式振荡机，或普通振荡机及恒温室，满足180r/min ±20r/min 的振荡频率或达到相同效果；3.3塑料瓶，200mL ；3.4无磷滤纸。
4 试剂4.1 无磷活性碳粉：如所用活性碳含磷，应先用1：1盐酸溶液浸泡24h ，然后移至平板漏斗抽气过滤，用水淋洗到无Cl -为止（约4～5次），再用碳酸氢钠浸提剂浸泡24h ，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用；4.2 氢氧化钠溶液［ρ(NaOH)=100g ·L -1］：称取10g 氢氧化钠溶于100mL 水中；4.3 碳酸氢钠浸提剂［ρ(NaHCO 3)=0.50mol ·L -1，pH=8.5］称取42.0g 碳酸氢钠（NaHCO 3）溶于约950mL 水中，用100g ·L -1氢氧化钠溶液调节pH 至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1L 。
贮存于聚乙烯瓶或玻璃瓶中备用。
如贮存期超过20d ，使用时须重新校正pH ；4.4 酒石酸锑钾溶液［ρ（K(SbO)C 4H 4O 6·21H 2O ）＝5g ·L -1］：称取0.5g 酒石酸锑钾溶于水中，稀释至100mL ；4.5 钼锑贮备液：称取10.0g 钼酸铵［(NH 4)6Mo 7O 24·4H 2O ］溶于300mL 约60℃水中，冷却。
碳酸氢钠法(oslen法)测土壤速效磷
碳酸氢钠法（olsen法）测土壤速效磷一、磷标准曲线：磷标贮备液：105℃下烘两小时磷酸二氢钾0.439克加水，而后加5ml浓硫酸，定容至1L.磷标溶液配制：5ml磷标贮备液稀释至100ml即为5mg/L的磷标，现配现用。
5mg/L 的磷标准溶液0、1、2、3、4、5、6ml加到50ml的容量瓶中，加入浸提剂10ml，钼锑抗显色剂5ml，加水定容。
二、试剂配制：1.碳酸氢钠浸提剂：42g碳酸氢钠溶于约800ml水中，定容至1L。
（贮存时间不宜超过20天）2.酒石酸锑钾溶液：0.3g酒石酸锑钾溶于水中，定容至100ml。
3.钼锑贮备液：10g钼酸铵溶于300ml约60℃的水中，冷却。
取181ml的浓硫酸缓缓加入800ml水中，待冷却后注入钼酸铵溶液中。
冷却后加入100ml的3g/L 酒石酸锑钾溶液，而后加水定容至2L。
（储存在棕色瓶子）4.钼锑抗显色剂：0.5g抗坏血酸溶于100ml的钼锑贮备液中。
三、步骤称取5.XXX克过1mm筛子的土壤，加入0.5mol/L的碳酸氢钠100ml，振荡机振荡30min（振荡机速率180r/min，温度25℃左右），振荡完成后过滤。
吸取10ml滤液，于50ml容量瓶，加入钼锑抗显色剂5ml充分摇匀，排出二氧化碳后加水定容。
30min后880nm比色。
三、公式有效磷(mg/kg)= ρ*V*D*1000/（m*1000）备注：ρ是求得的磷的质量浓度（ug/ml）；V显色液体积（ml）；D分取倍数，即提取液体积/显色时分取体积；M是土样质量。
备注：速效磷测定样品测定用样品的空白调零，磷标准曲线的测定用标曲的0浓度调零。
磷标准曲线的测定用同一比色皿由低到高测定。
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土壤有效磷的测定（Olsen法）
（pH 8.5 0.5molL-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法）
一、实验目的及说明
土壤中有效磷的含量，随土壤类型、气候、施肥水平、灌溉、耕作栽培措施等条件的不同而异。
通过土壤有效磷的测定，有助于了解近期内土壤供应磷的情况，为合理施用磷肥及提高磷肥利用率提供依据。
土壤速效磷的测定中，浸提剂的选择主要是根据土壤的类型和性质测定。
浸提剂是否适用，必须通过田间试验来验证。
浸提剂的种类很多，近20年各国渐趋于使用少数几种浸提剂，以利于测定结果的比较和交流。
我国目前使用最广学的浸提剂是0.5molL-1NaHCO3溶液（Olsen法），测定结果与作物反应有良好的相关性[1]，适用于石灰性土壤、中性土壤及酸性水稻土。
此外还使用0.03molL-1NH4F-0.025molL-1HCl溶液（Black法）为浸提剂，适用于酸性土壤和中性土壤。
同一土壤用不同的方法测得的有效磷含量可以有很大差异，即使用同一浸提剂，而浸提时的土液比、温度、时间、振荡方式和强度等条件的变化，对测定结果也会产生很大的影响。
所以有效磷含量只是一个相对的指标。
只有用同一方法，在严格控制的相同条件下，测得的结果才有相对比较的意义。
在报告有效磷测定的结果时，必须同时说明所使用的测定方法。
二、方法原理
石灰性土壤中磷主要以Ca-P（磷酸钙盐）的形态存在。
中性土壤Ca-P、Al-P（磷酸铝盐）、Fe-P（磷酸铁盐）都占有一定的比例。
0.5molL-1NaHCO3（pH8.5）可以抑制Ca2+的活性，使某些活性更大的与Ca结合的P浸提出来；同时，也可使比较活性的Fe-P和Al-P起水解作用而被浸出。
浸出液中磷的浓度很低，须用灵敏的钼蓝比色法测定，其原理详见土壤全磷的测定章节。
当土样含有机质较多时，会使浸出液颜色变深而影响吸光度，或在显色出现浑浊而干扰测定，此时可在浸提排荡后过滤前，向土壤悬液中加入活性碳脱色，或在分光光度计800nm 波长处测定以消除干扰。
三、实验仪器
研钵、20目筛子、电子天平（0.0001）、振荡器、722分光光度计、振荡器、勺子、小烧杯、容量瓶
四、试剂配制
（1）0.5mol·L-1NaHCO3(pH8.5)浸提剂42.0gNaHCO3（0.5mol 化学纯）溶于约800ml 水中，稀释至1L，用浓NaOH调节至pH8.5（用pH计测定），贮于聚乙稀瓶或玻璃瓶中，用塞塞紧。
该溶液久置因失去CO2而使pH升高，所以如贮存期超过20天，在使用前必须检查并校准pH值。
（2）无磷的活性碳粉和滤纸须做空白试验，证明无磷存在。
如含磷较多，须先用2mol·L-1HCl浸泡过液，用水冲洗多次后再用0.5mol·L-1NaHCO3浸泡过液，在布氏漏斗上抽滤，用水冲洗几次，最后用蒸馏水淋洗三次，烘干备用。
如含磷较少，则直接用0.5mol·L-1 NaHCO3处理。
（3）钼锑抗试剂（6.5mol·L-1[H+]）20.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]（分析纯）溶于300ml约60℃的水中，冷却。
另取180ml浓H2SO4（分析纯）慢慢注入约400ml水中，
搅匀，冷却。
然后将稀H 2SO 4液入钼酸铵溶液中，随时搅匀，再加入100ml 0.5% (m/v)酒石酸氧锑钾[K(SbO) C 4H 4O 6·2
1
H 2O]溶液；最后用水稀释至1升，盛于棕色瓶中，此为钼锑贮
备液。
临用前（当天）称取0.50g 抗坏血酸（分析纯）溶于100ml 钼锑贮备液中，此为钼锑抗试剂，在室温下有效期为24h ，在2~8℃冰箱中可贮存7天。
（4）磷标准储备液（Cp = 500g ·L -1） 准确称取45℃烘干4~8h 的KH 2PO 4（分析纯）2.1968g 溶于烧杯中加100ml 水溶解，缓加入5ml 浓H 2SO 4（分析纯），再全部转入1L 容量瓶中，用水定容，该贮备液可长期保存。
（5）磷标准工作液（Cp = 25g ·L -1） 准确吸取磷标准储备液50ml 于1L 容量瓶中，加入30ml 3mol ·L -1H 2SO 4，用水稀释至刻度定容摇匀，此为25磷标准液；用前再准确稀释至2.5g ·L -1,以此液配制磷标准溶液系列。
五、操作步骤 （1）称取风干土样2.00g 置于干燥的250ml 三角瓶中，加入0.5mol ·L -1NaHCO 3浸提剂40ml ，加1平勺无磷活性碳，于往复振荡机上振荡30 1min ，温度设计为25℃。
立即用无磷干滤纸过滤到干燥的50ml 烧杯瓶中。
（2）在浸提土样的当天，吸取滤出液5.00ml 放入干燥的25ml 容量瓶中，加2,4-二硝基酚2~3滴，此时溶液显黄色。
用3或6mol ·L -1H 2SO 4、0.5mol ·L -1H 2SO 4、1mol ·L -1NaOH 调色至刚好无色为止。
再加入2.5ml 钼锑抗显色剂，慢慢摇动，使CO 2逸出。
再加入蒸馏水定容，充分摇匀，显色30min 。
用1cm 光径比色管在700nm 波长处测读吸光度，以空白溶液（5.00ml 0.5mol ·L -1NaHCO 3溶液代替土壤滤出液，同上处理）为参比液，调节分光光度计的零点。
（3）校准曲线 在测定土样的同时，准确吸取2.5g ·L -1磷标准工作溶液0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml ，分别放入25ml 容量瓶中，加水5~10ml, 再加2,4-二硝基酚指示剂2~3滴，用H 2SO 4及NaOH 调节酸度至刚好无色或浅黄色。
再加钼锑抗试剂2.5ml ，定容至刻度，摇匀显色，即得磷标液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg ·L -1。
然后同待测液一样进行比色，绘成标准曲线。
六、结果计算 土壤有效磷（P ），mg ·kg -1 = 显色液Cp *显色液体积*分取倍数/ 土样质量
式中 Cp ——从校准曲求得土壤滤出液中磷的浓度，mg ·L -1P 显色液体积------25ml 注释： （1）用0.5mol ·L -1NaHCO 3浸提—钼锑抗比色法测定结果的评价标准如下：
土壤有效P(mg ·kg -1) < 5 5~10 > 10 土壤有效P 供应标准 低（缺磷） 中等（边缘值） 高（不缺磷）
七、数据处理
绘制标准曲线：
得出公式：y=1.9575x+0.0198
2
组别空白样品1 样品2 样品3 样品4
吸光度0.003 0.031 0.034 0.040 0.037
实际吸光度0 0.028 0.031 0.037 0.034
显色液Cp，mg·L=y=（吸光度-空白）*05031-0.0082
土壤有效磷P，mg·kg-1 = 显色液Cp *显色液体积*分取倍数/ 土样质量
代入数据得显色液Cp，mg·L-1：
样品1：y = 0.075mg/L
样品2：y = 0.080mg/L
样品3：y = 0.092mg/L
样品4：y = 0.086mg/L
各样品土壤有效磷（P）含量为：
样品1 P1 = 0.075 * 25 * （40 / 5）/ 2 mg/㎏=7.46 mg/㎏
样品2 P2 = 0.080 * 25* （40 / 5）/ 2 mg/㎏=8.05mg/㎏
样品3 P3 = 0.092 * 25 * （40 / 5）/ 2 mg/㎏=9.22mg/㎏
样品4 P4 = 0..086 * 25 * （40 / 5）/ 2 mg/㎏=8.64mg/㎏
八、结果分析
（1）从实验的结果来看，四个重复样品的有效磷值相互间有点偏差，造成的原因有多种：第一，有可能是吸取滤出液时取出的量有误差，不完全相等，造成偏差；
第二，有可能是定容50ml时，定容不准确造成偏差；
第三，有可能是测量时润洗比色皿，没有润洗干净，造成偏差；
第四，可能是分光光度计测量不准确，造成的偏差；
但从最终结果来看，d = [|6.70 - 8.05| + |7.90 - 8.05| + |9.10 - 8.05| + |8.50 - 8.05| ] / 4 =0.75
dr = 0.75 / 8.05 * 100% = 9.31%
结果的相对平均偏差较大，因此所测的结果不足以作为土样的有效磷值。
（2）根据用0.5molL-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法测定结果的评价标准，所测得的结果（土壤有效磷）处于5~10mg/Kg之间，因此土壤的有效磷处于中等标准（边缘值）。
假如所测的结果为准确值，则所测的土样的有效磷量少，不利于磷的种植、生长。