原核表达系统(PPT)

可选择变性或不变性条件 可选择多种灵敏的检测方法
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
QIAexpress
以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
QIAexpress
以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统
* 严谨的转录控制
* 目的蛋白能够进行C端标记
IMPACT-CN 系 统 流 程
IMPACT-TWIN 系 统
特 点
独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）
* 操作灵活——目的蛋白可在C端或N端与标记融合
* 目的蛋白产物序列不变
* 一步亲和纯化——无需另加蛋白酶去除亲和标记 * 可选择硫醇试剂或pH和温度条件诱导Intein 自身剪切
InBase(The Intein Database)
NEB’s web site: <> Technical Resource section
IMPACT-CN 系 统
特 点
独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）
* 操作灵活——目的蛋白可在C端或N端与标记融合
* 目的蛋白产物序列不变 * 一步亲和纯化——无需另加蛋白酶除亲和标记
原核表达系统
***基因公司技术讲座***
原 核 表 达 系 统 分 类
分类方式
表达调控方式
表达产物定位
分 类
组成型，诱导型
分泌型，不分泌型（细胞内、细胞膜、周质空间）
产物纯化方式
产物溶解状况
是否融合蛋白、是否一步亲和纯化
可溶、包含体、分泌型
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
钴离子高度专一地亲和HAT和其它6³His蛋白，且洗脱条 件温和，保证蛋白完整性
* pHAT-GFPuv 载体还带有荧光标记
极大的方便了表达产物的检测、定位及纯化
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
HAT Protein Expression & Purificatio 有 限 公 司
QIAexpress
以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
纯 化 流 程
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
QIAexpress
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
pMAL蛋白融合及纯化系统
特
* 表达量高，稳定可靠
经验证，75%以上的样本产量高达100mg/L
* 产物可分布细胞质或周质空间
点
分布周质空间可增强有二硫键的蛋白的折叠
* 与MBP融合可增加表达蛋白的溶解性 * 温和洗脱条件
不用去垢剂及强烈变性
* IPTG诱导的T7启动子，可实现高水平表达及严谨的表达调控
* 唯一可直接产生带N端Cys 和C端硫酯 的蛋白的表达纯化系统 纯化产物可方便地进行标记、连接及环化等操作
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
IMPACT-TWIN 系 统 流 程
Protein cyclization
----- CLONTECH-----
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
QIAexpress
以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统
* 表达量高 表达产物可占总蛋白的50%
特
点
* 严谨调控 IPTG诱导的T5启动子，可表达有毒蛋白 * 基因克隆灵活： 可选择N-端或C-端融合标记 可选择一端或两端6³His标记 * 纯化方便：一步纯化
* 产物便于纯化 N-端带有c-Myc 亲和标记和肠激酶位点
* 改造方便
载体的三个主要的功能区各配有单一酶切位点，用户可 根据需要对载体进行改造。
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
PRO Bacterial Expression System
----- CLONTECH-----
Thiol Thiol pH & temperature Thiol pH & temperature Thiol Thiol Thiol
Purification;C-terminal thioester for protein ligation Purification Purification;C-terminal thioester; defind N-terminus(e.g.Cys); protein ligation and cyclization Purification;C-terminal thioester; defind N-terminus(e.g.Cys); protein ligation and cyclization Purification;C-terminal thioester for protein ligation Purification;C-terminal thioester for protein ligation
Ë × µ á
Ô « ¿ í
¿ Ó ö Â inteinÔ Ù º ¸ Ô « Ë ó » ø Î Á À Ð ¼ à µ Ã Ë × Ï Ô © Ã ¼ ¾ µ Ã µ °³ °Ã µ Ç Ù ¹ Î ¶ Ê Ç ¥ ³ ÷ ¾ µ Ã Ã µ °³ °¼ À ¶ Ê µ Ã intein² º Ì ª ,Ò º É Æ Ô Ù pH7µ Ã Ë ó » ø Î Á À Ð ¼ à À í Ò º Í ¨ º ¸ Ô « Ë ó » ø MBP´ Ø ¼ õ Ç Ù ¹ Î µ °³ °Ü Ç ¼ à Ï Ô ,Ë × Ò ì ¼ µ ¹ Î Amylose aTcÓ ë Tet³ ¶ ¶ ò Í ï ¼ µ ¹ Î ,µ ð× ¾ PLtet0-1 ò ¶ Å ¯ ³ Ó Ì ¾ µ ¼ ± ´ ,¶ Ô Ò Ö Ö Å Ô ¨ » ø · ó Â ò · Ï
以6×His标记和 Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
SUMMARY
í ±´ ï Î µ Ì ³
IMPACT-CN System
µ ð¾ × ¼ ²É ¼
T7 promoterÓ Õ µ » ± í ´ ï
´ ¾ º ¯ ¼ ²É ¼
• pMAL-C2: 无信号顺序，融 合蛋白产物定位于细胞质中 • pMAL-P2: 含信号顺序，融 合蛋白分泌表达于细胞周质
PRO Bacterial Expression System
----- CLONTECH-----
特
* 严谨调控，高水平诱导表达
点
新型的杂合启动子和操纵子，低背景，高表达，调控精 确，可用于有毒或抑制生长的蛋白表达。
CBD-inteinÇ Ù ¹ Î Ó Ù Ã ¾ µ à µ °° ³N¶ Ê º î C¶ Ê ,¾ È ¼ © CBD-inteinÇ Ù ¹ Î Ó Ù Ã ¾ µ à µ °³ °N¶ Ê º î á Ó ± Ù Æ ³Ì ¹ ´ ¾ º ¯ ² ¢ ² Ö ¿ ë à ¾ µ à µ °³ °¾ ´ Å ² C¶ Ê ,Í Þ Ï ¶ µ °³ °· Â Æ Ï » ´ ¾ È ¼ © Ç Ù ¹ Î ¶ Ê Ç ¥ ³ ÷ È Ô ¾ Ù Ã ¾ µ à µ °³ °Ã µ À ¼ ¶ Ê » Ó È Î CBDIMPACT-TWIN Sys ª È Ì Î ª È Ì Î inteinÇ Ù ¹ Î Í ï ,² Ö ± ð Ó Â pH¹ Ì thiolÎ ´ Ì Ð pMAL Protein Fusion & Ptac Å ò ¶ ¯ ³ Ó Ó Õ µ » ± í ´ ï ¾ È Ç Ü ¾ È Â ÷ Ä ´ Ð õ Í ï ² ò À ¾ · ß ´ ï 100 mg, ² ò Í ï ² Ö N¶ Ê Ç Ù ¹ Î MBP,± á Ó Ù ´ ¾ º ¯ Purification Kit ò Í ² ï » Î ² · ° ö Ö É ¹ Ì Ö Ü Ö É ¾ Õ » â ,Ó Ï µ °³ °· Â Æ Ï Í º µ á È ³ ¾ ÷ Ç ¥ N¶ Ê Ç Ù ¹ Î Í ï PROTet Bacterial PLtet0-1Å ò ¶ ¯ ³ Ó Ð Î ¼ ðµ ð¾ × Õ µ Ó » ² ò Í ï ¾ È ´ ï 2500± ¶ ,± í ´ ï À ¾ · ß ´ ï ³ Ü µ ° Í Þ Expression System anhydrotetracuclineµ ð¾ × ³Ã ° µ 10% PROLar Bacterial Plac/ara-1Å ò ¶ ¯ ³ Ó · ó Ð Î ¼ ð Ó ¹ Ô Ì Å ò ¶ ¯ ³ Ó Ë µ ¸ § · ó Æ ¾ µ à ± í ´ ï Ã Ü À ¦ , Í Þ Expression Vectors à µ µ ð× ¾ ó Ð · Î · ñ µ ð× ¾ HAT Protein Expression EKÍ º µ á ¾ È ¸ § EnterkinaseÆ Ï ³ ÷ N¶ Ê Ç Ù ¹ Î PlacÅ ò ¶ ¯ ³ Ó , IPTGÓ Õ µ » ± í ï ´ N¶ Ê His-Tag & Purification System °³ µ ° QIAexpress Type IV Kit ¾ ´ Æ ï µ à T5Å ò ¶ ¯ ³ Ó , 2· ô lac í ´ ± ï À ¾ · ß ´ ï ³ Ü µ °³ °Ã µ 50%, ± á Ó Ù ´ ¾ º ¯ , &QIAexpress Type ATG Kit ² Ø ³ Ý ³ Ó Ï î À Ï Ó Â Ó Ù Ò Ö Ö Å T5 Î ¼ Ð ðÌ Ï µ ð× ¾ ¾ È Ò Ô ± í ´ ï Ó Ï ¶ ½ µ °³ °, Ë µ ¸ § N/C¶ Ê His-Tag IPTGÓ Õ µ » ± í ´ ï õ pREP 4µ ´ à ½ ò Ö ê Ó Â Ó Ù · ó Ð Î ¼ ðí ±´ ï . ATG Kit MCSµ à N¶ Ê Æ °õ ´ ATG cis-Repress pQE Vector Set ´ õ cis-laclq º ñ Ò î , · ó ¾ Æ ª È Ì Î Ð Î ¼ ðÌ Ï µ ð× ¾ ¾ È Ò Ô ± í ´ ï Ó Ï ¶ ½ µ °³ °, N¶ Ê His-Tag Ö Ö Ò Å T5,· ó Ð Î ¼ ðð µ × ¾ Þ Ï Í ¶ pREP4 pQE-100 DoubleTag Vector Set ª È Ì Î N¶ Ê His-Tag ª È Ì Î ,C¶ Ê ´ õ Tag-100 epitope