小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良
小鼠部分组织器官石蜡切片制作方法的改良作者：陈思怀李德龙高继业来源：《安徽农业科学》2021年第11期摘要為了克服小鼠组织器官传统石蜡切片制作方法存在组织易碎、结构不完整的缺点，对传统石蜡切片制作进行了改良。
将浸蜡前的透明步骤改为异硬脂醇与石蜡混合液处理，替代苯类透明剂制作空肠、脾脏2种器官的石蜡切片，并以切片机切片时蜡带质量和HE染色后镜下质量为切片制作效果的评定指标。
结果表明，2种器官在切片机上均能切出完整、较长的蜡带，组织块无硬化、不碎裂，展片平整;HE染色过程中不掉片，染色后光镜下细胞质与细胞核染色对比清晰，器官组织结构完整。
就脾脏和空肠而言，应用异硬脂醇与石蜡混合液替代苯类透明剂能制作出优良的石蜡切片。
关键词石蜡切片;异硬脂醇;透明剂;小鼠中图分类号 R-361.2 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）11-0094-02doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.11.025开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Improvement of Preparation Method of Paraffin Sections of Some Tissues and Organs in MiceCHEN Si-huai，LI De-long，GAO Ji-ye（College of Veterinary Medicine，Southwest University， Chongqing 402460）Abstract In order to overcome the defects of fragile tissue and incomplete structure in the traditional paraffin section preparation method of mice tissues and organs， the traditional preparation method of paraffin section was improved.Paraffin sections about jejunum and spleen were made with the mixed solution of isostearin and paraffin instead of benzene transparent agents.The quality of ribbon and microscopic observation after HE staining were selected as judgment indices .The results showed that two kinds of representative organs could be cut into long and complete wax bandes on the microtome， and flatten out with no hardening or non-fragmentation.After HE staining， the cytoplasm and nucleus were stained clearly， and the structures of organs and tissues were intact.As for jejunum and spleen，the mixture of isostearic alcohol and paraffin could be used to treat the tissues instead of benzene transparent agents to make good paraffin sections.Key words Paraffin section;Isostearic alcohol;Transparent agent;Mice小鼠作为实验动物，其组织器官在大小、质地等方面不同于成年畜禽，如小肠壁薄、肝细胞脂类丰富、脾脏小等。
病理切片制作
将各实验组的小鼠进行拉颈脱臼处死后，解剖取出肝脏置于4℃生理盐水中，
然后用薄刀片切取大小约为10 mm×10 mm×2 mm的组织块，放入10%甲醛溶液
中固定48h以上。
然后按以下程序进行切片制作：
脱水
（于50%、70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各1h，
放入95%、100%乙醇中各两次，每次40min）
透明
（先于95%酒精、二甲苯等量混合液20min，然后二
甲苯30min，须换一次二甲苯）
浸蜡
（先将各熔点石蜡进行融化，待凝固后再融化一次，以
便赶走气泡；再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ、石蜡Ⅲ透蜡各
40分钟）
包埋
（经过透蜡的组织用镊子夹出置于容器内，加入含蜂蜡
的石蜡Ⅲ，然后投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块）
切片
（已固定和修好的蜡块粘于台木并固定在切片机夹物
台上，调节切片厚度为5 μm）
展片
（切好的蜡片置于40℃水浴锅中进行充分舒展）
粘片
（滴一滴赖氨酸于清洁的玻片中央，涂抹成均匀薄层，
然后插入水浴锅中捞片，使蜡片贴附于玻片上；一昼夜
干燥后待染）
脱蜡复水
（石蜡切片经二甲苯脱蜡两次各10min，然后放入100%、
95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液和蒸馏水中各
10min）
染色
（复水后的切片按试剂盒操作说明进行染色）封片
（滴一滴中性树胶于已染组织上进行封片）显微观察。
小鼠石蜡切片实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉小鼠组织石蜡切片的制作方法。
2. 掌握石蜡切片的染色、封片等操作技巧。
3. 了解石蜡切片在病理学、生物学研究中的应用。
二、实验原理石蜡切片是一种常用的组织切片技术，通过将组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等步骤，制作出可以观察的组织切片。
石蜡切片具有切片厚薄均匀、保存时间长、染色效果好等优点，广泛应用于病理学、生物学等领域。
三、实验材料1. 实验动物：健康小鼠2. 试剂：中性甲醛固定液、酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液、伊红酒精溶液、盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、中性树胶、卡诺固定液等3. 仪器：切片机、恒温箱、蜡杯、酒精灯、解剖剪、培养皿、镊子、单面刀片、包埋盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、显微镜、温度计、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取健康小鼠组织，用中性甲醛固定液固定24小时以上。
2. 脱水：将固定好的组织从固定液中取出，依次放入70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%乙醇中，各浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中，各浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将脱水后的组织放入二甲苯中浸泡5-10分钟，重复2次。
4. 浸蜡：将透明后的组织放入石蜡中浸泡4小时，然后放入蜡I、蜡II、蜡III 中，各浸泡1小时。
5. 包埋：将浸蜡后的组织取出，放入融化的石蜡中，迅速包埋，待石蜡凝固后取出蜡块。
6. 切片：将包埋好的蜡块置于切片机上，切片厚度为4微米。
7. 水化：将切片放入水中，用镊子将切片取出，放入载玻片上。
8. 染色：将切片放入苏木精染液中染色5分钟，然后用盐酸酒精溶液分化，再放入伊红酒精溶液中复染2分钟。
9. 封片：将染好的切片用中性树胶封片，待封片干燥后即可观察。
五、实验结果通过以上步骤，成功制作出小鼠组织石蜡切片，切片厚度均匀，染色效果良好，可以观察到组织细胞的形态和结构。
六、实验讨论1. 实验过程中，脱水、透明、浸蜡等步骤是制作石蜡切片的关键环节，需要严格控制时间和温度，以保证切片质量。
27617970_制作高质量小鼠胃组织石蜡切片的方法优化
DOI:10.19694/ki.issn2095-2457.2022.19.12【摘要】目的:探讨胃组织石蜡切片制作方法及质量改进。
方法:取30只健康小鼠,小鼠随机分为对照组1,实验组2和常规组,每组各10只,进行胃组织石蜡切片制作。
实验组采用Heidenhain Susa固定液固定、四氢呋喃透明和蜡带展片法,对照组采用传统石蜡切片制作方法。
结果:实验组A、B,优质片84张(70%)、中等片36张(30%)、没有次等片和不合格片;对照组无优良等级切片,中等级切片12张(20.04%),次等级切片28张(46.71%),不合格切片20张(33.33%)。
实验组切片,结构完整,着色优于对照组。
结论:改良后的石蜡切片质量有所提高,最大限度保持与活体组织结构相近完整。
缩短实验时间,避免人为因素和其他因素,提高了石蜡切片的质量稳定性,值得推广应用。
【关键词】胃组织;石蜡切片;质量改进0引言胃（stomach）呈囊状膨大，空虚时呈收缩状态，内面可见纵行的皱襞。
进食后，由于肌组织舒张，胃腔扩张，皱襞消失，可暂时贮存食物[1]。
由于胃组织结构致密层次多，有较强的柔韧性和硬度，在制作高质量的石蜡切片过程中常见腺体结构不完整，黏膜各层次间隙大组织结构不清晰，平滑肌层肌束分离以及皱襞收缩脆裂较严重等现象。
笔者在工作中通过多次试验有效解决了这些问题，通过在制片方法上进行一些改进，获得了良好的成像效果。
采用健康C57BL/6小鼠胃部组织进行实验操作（其和人类的胃在层次结构和组织学特点上都相似），Heidenhain Susa固定液固定，切片时蜡带直接展片，最后四氢呋喃透明、脱蜡，苏木素染色液和伊红染液滴染。
改进后的胃组织切片最大限度保持与活体组织相近的完整结构，核质着色均匀，制片时间缩短，值得推广，现报道如下。
1材料1.1实验动物购买健康C57BL/6小鼠30只，3月龄，体质量量收稿日期:2022-01-10※基金项目:湛江市科技攻关计划项目(2021B01121)广东医科大学科研基金立项资助(GDMUM2019035);广东医科大学校级大学生创新创业训练计划项目立项(GDMU2019204)。
石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤
石蜡切片操作流程及步骤：1、样品4℃过夜[1,2]。
2、清洗水槽及过滤网[3]。
3、打开机器开关，调节水池温度21℃、展片水池温度45℃、烘片温度55℃[4]。
4、固定包埋组织块[5]。
5、调节出水水流大小[6]。
6、调节切片厚度5um、10 um[7]。
7、将包埋组织块下调至与刀片位置同一平面，前后距离使其与刀片距离恰好接触[8]。
8、开始切片带出现完整的组织切横切面将其随水流传送至水池中[9-13]。
9、选择较好的切片，用载玻片将其从21℃水池中捞出。
每个石蜡取5-6张片子[14-15]。
10、放到展片水池中展开、载玻片编号[16]。
11、55℃烘干，无水滴后可收片。
心得体会及注意事项：1、包埋组织块冻存温度过低会冻坏，不冻存石蜡粘性大不容易切片。
2、操作期间应放入冰中储存，自备冰块。
3、水槽中石蜡会堵塞上水滤网影响出水速度。
4、展片水池水要在展片前达到预设温度。
5、要固定牢固，固定不牢切片时容易破坏样品。
6、以中间水柱恰好达到刀片位置最佳，水流过小切片不易冲下，水流过大会导致切片破坏。
7、5 um染色效果更佳，根据不同组织染色要求调节切片厚度。
8、若前后位置调节不精确可使距离稍大，随后手动摇轮慢慢靠近，每次前进距离为提前设定距离5um或10 um。
9、切片期间不出现严重的黏附，粘连，裂片，不要轻易停止，切片要匀速.10、切片过薄会迅速升温从0℃升至21℃或更高，若随意停止，石蜡黏附性增加会导致粘刀片等问题影响继续操作。
11、若一个样本操作时间过长应取下放入冰块一段时间再继续操作。
12、原则没有大问题匀速不要随意停。
13、换新刀片（刀片上有黏附石蜡会导致切片裂开，最好换至新刀片）。
14、尽量清理水池多余无用切片及碎石蜡，但是要小心不要碰坏样品切片。
15、每个载玻片取2-3个组织最佳。
16、展片不足会有褶皱影响染色结果，展片时间过长会导致组织裂开。
小鼠创伤愈合新生皮肤组织切片的制备
小鼠用 ｌ％的水 合氯醛按０ ０３ ／ ０ ．０ｍＬ
ｇ 剂量 麻醉 后 ， 在脊 拄右 侧胸 廓上方 做 一 大小 ０ ５×０５ｍ ． ．ｃ 的手 术切 Ｌｌ ， 达 筋膜 。术后 伤 口消 毒 ， ］＿ 深 ｌ 无菌 纱布 覆盖 。在 清 洁笼 内饲 养 ， 给清 洁饮水 Hale Waihona Puke 自由取 食 ， 图ｌ 尢 几 。
程。 在科 研和 教学 中经 常碰 到制 做皮肤 组织 石蜡 切片 ， 常皮 肤组 织 正
切片 的制做 并不 困难 ， 而做 好伤 口愈合后 新生 的皮肤组织 切片 并不 容 易。 为此经 过摸索探 索 出一套行之 有效 的制作小 鼠创伤 愈合新 生皮肤 组 织切片过 程 ， 方法如 下。
广东广 州
５００ ） １００
【 摘要 】 目的 探 索 有效 的小 鼠创 伤愈合 新 生皮肤 石蜡 组 织切 片制 作方 法 。方法 控 制 ｌ ｉ 织切 片制作 中关键 步骤 时 间来对比 不 ｅ组 同方 法之 间的 制 片效果 。 结果 采 用 ４ ％多聚 甲醛 中加 ｏ ｏ％戊 二醛 固定 。中性 Ｐ Ｓ 冲洗 组织切 片 １ｍｎ７％酒精过 夜 ，ｏ ０％ ．４ Ｂ液 ０ ｉ，ｏ ８％、 ｏ ， ０％ ５ 酒精脱 水各 ２ ， ｈ 无水 乙醇脱 水 ｌ ， 二 甲苯 中透 明共 Ｉｍ ｎ４ ｈ在 ｉ ，步浸蜡 法 制作 出的组 织 切 片形态完 整 ， ５ 质量较 好 。结 论 摸 索 的新方 法较一般 常规组 织切 片制作 方法不仅 节省时 间 ， 更重要 的是克服 了一般 常规方 法制作 出的新生皮肤 组织切 片组 织破 碎的 问题 ， 复性 且重
过摸 索 ， 按照第 Ⅵ组的方法 制作出的组织切 片效率最高 ， 一般组织切 较
的 修复是 皮 肤全 层愈 合 、 上皮 化的关 键部 分 ， 细胞迁 移 则在表 再 角朊
HE染色步骤
1、用颈椎脱臼法处死小鼠，75%的酒精浸泡2-3分钟，减少毛发所造成的污染。
2、将小鼠移入超净工作台内，无菌条件下，以仰卧位固定在解剖盘上。
3、用眼科镊子夹起腹股沟中线处皮肤，用眼科剪做一横切口。
用镊子捏住切口两端的皮肤朝着小鼠的尾部和头部纵向撕开皮肤，暴露腹腔膜壁，用乙醇消毒。
4、切开腹腔壁膜，用镊子夹住脾脏，并用剪子剪去与其相连的组织。
HE染色石蜡切片制作的基本过程作者：未知来源：生物秀时间：2007-12-71、取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
2、脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。
再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
3、浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。
待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。
冷却凝固成块即成。
包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
4、切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。
切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
5、脱蜡染色：常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。
苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。
伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
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小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤
1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm 的组织块。
用先用0.85 ％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr 。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA 固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1 ，固定时间2 hr 以上，超过24hr 时可继续浸泡或转入70% 酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70% 酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化
经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：
30 % 50 % 70 % 80 % > 90 % > 95 % > 100 % （I ）100 % （n ）
组织块在各级较低浓酒精（小于70 ％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过
0.5立方厘米的组织块脱水时间为6〜12 hr,在高浓度酒精中（大于70 %）脱水时间为3 hr
左右。
组织块在无水酒精中需经过两次处理，以保证脱净水分。
由于无水酒精有使组织变脆的缺点,故在无水酒精中脱水的时间不宜过长,一般应在15〜30 min 左右。
在脱水瓶中酒
精的量与组织块之比约为50:1 。
简化步骤如下：
70% （一夜）——80% （1 hr）——90% （30 分）——95% （30 分）——100% （15 分）——酒精+ 二甲苯（15 分）——二甲苯（3 分）——石蜡+ 二甲苯（30 分）——石蜡（80 分）4．透明
透明是石蜡切片法切片前必经的一步。
其目的在于用矿物油或植物油等透明剂置换出无水酒精,以便于熔化的石蜡浸渗到组织间隙中, 故透明剂必须是能分别与石蜡和酒精相溶的。
经过透明剂处理的组织块用肉眼对光观察呈透明现象,所以这个过程称为透明。
常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯等,这些都是穿透力强易使组织变脆的透明剂, 因此透明的时间宜短,一般在20 min 即可。
透明时组织块由无水酒精中取出，先放入二甲苯和无水酒精等量混合的溶剂中1 hr 左右，然后取出放入纯二甲苯中20 min 即可。
5．浸渗
浸渗过程是使包埋组织用的物质深入到所有的组织间隙中，然后再通过各种方法使这种物质凝固，而将组织材料包埋其中。
石蜡切片法和火棉胶切片法都需要浸渗过程。
石蜡切片法是将加热的石蜡渗到组织中而火棉胶切片法是使火棉胶渗到组织间隙中去。
在浸渗前要先将选好的石蜡分别以容器装好放在恒温箱中，使其杂质沉淀。
石蜡最好选用软蜡和硬蜡两种，
软蜡熔点为45〜50 C之间，硬蜡熔点为56〜58 C之间，60〜62 C的硬蜡
很少用。
冬天室温较低时多用软蜡，夏天室温较高时多用硬蜡。
浸渗应在自动恒温箱中进行。
组织块在各个蜡杯中浸蜡的时间如下：
软蜡1 30min
软蜡2 30min
硬蜡1 30 〜60min
硬蜡2 60 〜120min
这一时间不是固定不变的，应视组织块的种类及大小而相应延长或缩短浸蜡时间。
浸蜡的总时间一般为：0.5
立方厘米的组织块时间为6〜8 hr；0.2〜0.3 立方厘米的组织块时间为3〜
5 hr; 0.1〜0.2立方厘米的组织块时间为2〜3 hr。
当发现蜡杯中有灰尘或组织碎块时应使
其沉淀或过滤后再使用。
浸蜡不透包埋后会出现白色不透明部分，此时需要在浸蜡一次。
6．包埋
包埋就是将已经浸渗好的组织块包埋于浸渗剂中，石蜡包埋法如下。
浸蜡终了时，将预先预热好的和第四杯石蜡相同熔点的石蜡倒入折好的蜡槽内，然后从第四个蜡杯中取出组织块，放入蜡槽内，摆好位置，注意组织切面的摆放方向。
放好组织后可以自然冷却，也可以放入冷水中直接冷却。
7．修块和切片
取已经包埋好的蜡块，将纸盒拆下，用加热的刀片或解剖刀将其分成若干块（每块组织占一块），用解剖刀将组织块周围多余的石蜡切去，注意不要切到组织。
把有组织的蜡块修成正方形或梯形。
在进行塑型时一定要注意组织块切面的方向。
蜡块塑好后将其粘在小木块上。
注意要粘牢。
最后在木块侧面用铅笔记上组织块名称、编号。
切片时采用手摇连续切片机。
使用切片机进行切片时，将蜡块固定在切片机上，调好距离和所要求的切片厚度，然后用右手摇动手柄，即可进行切片了。
一般来讲生物切片的厚度在5〜10 微米。
对于切下的切片不要用手去取，因为体温可以使蜡片粘到手上，正确的做法是用毛笔或牙签挑取，然后放在载玻片上进行展片和粘片。
8．展片和粘片
切下的组织蜡片往往带有皱褶，所以在染色前必须进行蜡片的展片和粘片，即把切好的蜡片平整的粘在载玻片上。
展片的温度因石蜡熔点的不同而的不同，一般的56〜58 C的石蜡切
片C的温水进行展片，48〜52 C的石蜡切片用35 C的温水进行展片。
等到蜡片充分展平后，取一清洁载玻片，载玻片上涂一薄层蛋白甘油，然后在水中捞取蜡片，捞完后将蜡片摆正，放到格盘内，置38 C温箱中烘干，然后即可进行染色。
展片和粘片比较简单容易做，但是如果处理不好则无法进行染色，即使能染上色，组织切片内部的结构也往往被破坏。
9．染色和封固
采用苏木精伊红对染法（HE ）染色结果是细胞核为紫色，细胞质为粉红色；苏木精伊红染
色法整个染色过程如下：取已经干燥的切片，放于盛有二甲苯的染缸内脱蜡10min 左右，这个过程称为脱蜡。
脱完蜡后的切片即可进行染色，具体染色过程和时间如下：
(1)100 %酒精洗去二甲苯2〜5min。
(2)95 %酒精2 〜5min。
(3)90%酒精2〜5min。
(4)80%酒精2〜5min。
( 5 ) 70%酒精2〜5min 。
(6)50%酒精2〜5min。
(7)蒸馏水洗2〜5min。
(8)苏木精染液10〜20min。
( 9 )普通水洗1min 。
(10 )盐酸酒精分色数秒〜半min (70 %酒精100 mL +盐酸1 mL ),分色到切片为带粉红
色后立即取出。
( 11 )自来水冲洗数hr 。
镜检切片呈清朗的蓝色，细胞核非常明显。
(12)蒸馏水洗1min。
(13)50%酒精2〜5min。
(14)70%酒精2〜5min。
(15)80%酒精2〜5min。
(16)伊红酒精溶液对比染色2〜5min (95%酒精＋0.5g 伊红)。
(17)95%酒精2〜5min。
(18 )无水酒精I 3min。
（19 ）无水酒精n 3min 。
（20）无水酒精加等量二甲苯2min。
（21 ）二甲苯数min 到透明为止。
（22 ）自二甲苯中取出切片，放在格板内，滴少量的树胶于组织片中央。
（23）取一盖玻片，轻轻以盖玻片的一边接近载玻片，然后迅速放下盖玻片，树胶即迅速扩张到四周，校正好盖玻片方向。
将封好的切片放置在恒温箱中干燥。
最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方
法、年月日。
四、显微摄影
封片完全凝固后，放在显微镜下观察，选择较好的切片在尼康显微镜下进行拍摄，图像保存为jpg 格式文件。
五、实验结果
在观察到的小鼠肝组织中，细胞核被染为蓝色，细胞质被染为红色
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