2019新人教版高中生物选择性必修三第三章重点知识点归纳总结(基因工程)
高中生物选修三基因工程知识点总结
高中生物选修三基因工程知识点总结
高中生物选修三(基因工程)知识点总结如下:
1. 基因工程的基本步骤:
- 分离基因:从目标DNA序列中分离特定的基因。
- 转录:将分离得到的基因转录成RNA。
- 修饰:对转录后的基因进行修饰,使其更具表达效果。
- 克隆:用适当的载体将修饰过的基因导入目标细胞中。
- 表达:使目标细胞中导入的基因表达。
2. 基因工程的主要方法:
- 重组DNA技术:包括文库制备、扩增和筛选。
- 外源DNA片段导入技术:包括限制性内切酶消化、连接、转化、融合等。
- 自组织培养技术:包括离心、培养基选择、细胞培养等。
- 基因编辑技术:包括CRISPR/Cas9、CRISPR-Cas13a等。
3. 基因工程的应用:
- 细胞治疗:通过基因工程手段治疗一些遗传性疾病。
- 农业育种:通过基因工程技术改良作物品质和产量。
- 生物恐怖袭击防御:通过基因工程技术检测和防御生物恐怖袭击。
- 环境污染治理:通过基因工程技术处理污染物。
4. 基因工程的限制:
- 伦理和道德问题:基因工程技术可能会带来未知的伦理和道德
问题。
- 技术成本:基因工程技术相对其他技术更为复杂,成本较高。
- 技术安全:基因工程技术的安全性需要持续进行研究和维护。
5. 基因工程的安全性问题:
- 基因突变:基因工程过程中可能会引发基因突变,导致不良后果。
- 质量控制:基因工程技术的产品需要进行质量控制,以确保其质量和稳定性。
第3章 第3节 基因工程的应用 讲义【新教材】人教版(2019)高中生物选择性必修3
第3节基因工程的应用课标内容要求核心素养对接举例说明基因工程在农业、食品及医药等行业的广泛应用改善了人类的生活品质。
1.生命观念：举例说出植物基因工程、动物基因工程成果及其给人类带来的影响。
2．社会责任：展开想象的翅膀，用图画或文字创造等，畅想基因工程的未来。
一、基因工程在农牧业方面的应用1．转基因抗虫植物(1)技术方法：从某些生物中分离出具有抗虫功能的基因，将它导入作物中，培育出具有抗虫性的作物。
(2)实例：抗虫棉花、玉米、大豆、水稻和马铃薯等。
2．转基因抗病植物(1)技术方法：将来源于病毒、真菌等的抗病基因导入植物中，培育出转基因抗病植物。
(2)实例：转基因抗病毒甜椒、番木瓜和烟草等。
3．转基因抗除草剂植物(1)技术方法：将降解或抵抗某种除草剂的基因导入作物，可培育抗除草剂的作物品种。
(2)实例：转基因抗除草剂玉米、大豆、油菜和甜菜等。
4．改良植物的品质(1)技术方法：将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物中，可以提高这种氨基酸的含量。
(2)实例：转基因玉米中赖氨酸的含量比对照高30%。
5．提高动物的生长速率(1)技术方法：将外源生长激素基因导入动物体内，提高动物的生长速率。
(2)实例：转基因鲤鱼。
6．改善畜产品的品质(1)技术方法：将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组。
(2)实例：乳汁中乳糖含量大大降低的转基因奶牛。
二、基因工程在医药卫生领域的应用(1)技术方法①对微生物或动植物的细胞进行基因改造，使它们能够生产药物。
②利用乳腺生物反应器生产药物：将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过显微注射导入哺乳动物的受精卵中，培育出的转基因动物通过分泌乳汁生产所需要的药物。
③培育移植器官：在器官供体的基因组中导入某种调节因子抑制抗原决定基因的表达或设法除去抗原决定基因，然后再结合克隆技术，培育出不会引起免疫排斥反应的转基因克隆器官。
(2)实例：重组人干扰素、促红细胞生成素、抗凝血酶、血清白蛋白等。
第3章 基因工程 期末复习知识点总结【新教材】人教版高中生物选择性必修三
第3章基因工程1、什么是基因工程：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
2、基因工程的诞生（三个理论和三个技术）：基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科基础上发展起来的，正是这些学科的基础理论和相关技术的发展催生了基因工程，具体有三大理论发现和三个技术突破。
1)理论基础：DNA是遗传物质；DNA分子的双螺旋结构和半保留复制；遗传密码的通用性和遗传信息传递的方式；2)技术基础：限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割；DNA连接酶的发现与DNA片段的连接；基因工程载体的构建与应用●理论上的三大发现⑴、发现了遗传物质——DNA1944年，艾弗里（O.T.Avery）的肺炎双球菌转化实验⑵、揭示了遗传物质的分子机制：DNA分子的双螺旋结构和半保留复制1953年，沃森（J.D.Watson）和克里克（F.Crick）的DNA双螺旋结构模型、半保留复制图，获1958年诺贝尔奖。
⑶、确立了遗传信息的传递方式：以密码形式传递1963年，美国尼伦伯格（M.W.Nirenberg）和马太（H.Matthaei）确立了遗传信息以密码形式传递，破译了编码氨基酸的遗传密码(3个核苷酸=1个密码子=1个aa)。
●技术上的三大突破⑴、世界上第一个重组DNA实验：实现不同来源DNA的体外重组1972年斯坦福大学化学家伯格（P.Berg）借助内切酶和连接酶将猴病毒SV40的DNA 和大肠杆菌λ噬菌体的DNA在试管中连接在了一起，第一次成功地实现了DNA的体外重组。
⑵、第一个基因克隆实验：重组DNA表达实验，是世界上第一个基因工程实验1973年美国斯坦福大学医学院遗传学家科恩（S.Cohen）将体外构建的含有四环素和卡那霉素抗性基因的重组质粒导入大肠杆菌，获得了具有双抗性的大肠杆菌转化子，成功完成了第一个基因克隆实验。
人教版高中生物选择性必修第3册 第3章 基因工程 章末总结3
构建·知识网络
归纳·专题小结
典练·素养提升
对话·命题专家
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第3章 基因工程
构建·知识网络
归纳·专题小结
典练·素养提升
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第3章 基因工程
基因表达载体的构建与限制酶切割片段的判断
1．构建基因表达载体不可缺少的工具酶是限制酶和DNA连接酶。 2．选择何种限制酶取决于目的基因内部是否含有限制酶的识别序 列，以及目的基因两端和载体上的限制酶的识别序列和切割位点。解决 此类问题时要遵循以下原则：①目的基因内部含有某种限制酶的识别序 列，不能选用此种限制酶；②要在目的基因的两端和载体上切出相同的 黏性末端或平末端，以保证目的基因与载体的连接；③至少保证载体上 有一个标记基因不被破坏，以便筛选；④要确保目的基因能插入载体的 启动子与终止子之间。
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第3章 基因工程
目的基因两端和载体上还有BamHⅠ限制酶和Hind Ⅲ限制酶的识别 序列，为了防止目的基因和载体的自连接和随意连接，可以用EcoRⅠ 限 制 酶 和 BamHⅠ 限 制 酶 ， 或 EcoRⅠ 限 制 酶 和 Hind Ⅲ 限 制 酶 ， 或 BamHⅠ限制酶和Hind Ⅲ限制酶任一组合进行切割。构建好的重组质粒 在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动子是RNA聚合酶识别结合位 点。(3)根据抗原与抗体能特异性结合的特点，检测目的基因是否表达出 相应蛋白质，应采取抗原—抗体杂交技术。
新教材人教版高中生物选择性必修3第3章基因工程 学案(知识点考点汇总及配套习题)
第3章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具 ............................................................................ - 1 - 第2节基因工程的基本操作程序............................................................................ - 22 - 第3节基因工程的应用............................................................................................ - 46 - 第4节蛋白质工程的原理和应用............................................................................ - 65 -第1节重组DNA技术的基本工具必备知识·素养奠基一、基因工程的诞生和发展判一判:基于基因工程相关基础理论的突破和技术的创新,判断下列说法的正误。
1.1953年,沃森和克里克建立了DNA分子双螺旋结构模型,并用实验证明了DNA分子的半保留复制。
(×)提示:DNA分子半保留复制是梅塞尔森和斯塔尔用实验证明的。
2.1970年,在细菌体内发现了第一个限制酶,后来又发现了多种限制酶、DNA连接酶等。
(√)3.1972年,伯格首先在体外进行DNA改造,并构建了第一个体外重组DNA分子。
(√)4.1983年,科学家采用花粉管通道法培育了世界上第一例转基因烟草。
(×)提示:第一例转基因烟草是用农杆菌转化法培育的。
5.1984年,我国科学家朱作言领导的团队培育了世界上第一条转基因鱼。
(√)6.基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的。
(√)二、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”1.来源:主要来自原核生物。
第3章基因工程(单元解读课件)高二生物(人教版2019选择性必修3)
第一节 重组 DNA技 术的基 本工具
2.引导学生在分析旧知识的基础上理解和掌握新知识 本节的内容是建立在必修1教材中酶的作用和特性，必修2教材中噬菌体侵染细菌的实验DNA的结构和复制等 相关内容的基础上的。引导学生建立新旧知识之间的联系，将有助于他们理解和掌握新知识。
3.组织好教材中的“思考·讨论”活动，帮助学生理解“分子工具”的本质特征 基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，属于微观层面，学生在日常生活中很少接触到，对此比较 陌生、难于理解。因此，在教学中要充分利用教材中的生动形象的比喻、直观的插图、模拟制作活动等帮助 学生增加感性认识。 教材“思考·讨论”中的模拟制作活动对学生理解“分子工具”的本质特征具有十分重要的作用。教材中主 要模拟的是限制酶和DNA连接酶的作用，教学时可以让活动内容更加丰富。活动的安排可以按照教材中的顺 序，在学生学习完本节内容后开展活动，以反馈检测学生对前面内容的掌握情况;也可以边讲授相关的内容, 边带领学生进行活动，通过任务驱动，让学生在活动的过程中理解工具的作用。开展活动的同时，要注意利 用好教材中的讨论题引导学生展开讨论，否则模拟活动可能会变成简单的模仿。
04 教学策略与课时安排
一、课标要求
概念5 基因工程赋予生物新的遗传特性
5.1 基因工程是一种重组DNA技术
5.1.1 概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的 5.1.2 阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具 5.1.3 阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导 入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤 5.1.4 举例说明基因工程在农牧、食品及医药等行业的广泛应用改善了人类的生活品质
第3章 第2节 基因工程的基本操作程序 讲义【新教材】人教版(2019)高中生物选择性必修3
第2节基因工程的基本操作程序课标内容要求核心素养对接阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定。
1.科学思维：结合生产实例，举例说出基因工程的基本操作程序。
2．科学探究：针对人类生产和生活的某一需求，尝试提出初步的基因工程构想，完成初步设计。
一、目的基因的筛选与获取1．目的基因(1)概念：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。
(2)实例：培养转基因抗虫棉用到的目的基因是Bt抗虫蛋白基因。
2．筛选合适的目的基因(1)较为有效的方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。
(2)实例：在培育转基因抗虫棉之前，科学家不仅掌握了Bt基因的序列信息，也对Bt基因的表达产物——Bt抗虫蛋白有了较为深入的了解。
(3)认识基因结构和功能的技术方法：DNA测序技术、遗传序列数据库、序列比对工具。
3．利用PCR获取和扩增目的基因(1)PCR的含义：PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
(2)条件：DNA模板、分别与两条模板链结合的2种引物、四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶。
(3)过程：①变性：温度上升到90 ℃以上，目的基因DNA受热变性后解为单链。
②复性：温度下降到50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
③延伸：温度上升到72 ℃左右时，溶液中四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA 聚合酶的作用下加到引物的3′端合成子链。
④重复循环多次。
(4)结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成指数形式扩增(约为2n)。
二、基因表达载体的构建1．构建基因表达载体的目的(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。
(2)使目的基因能够表达和发挥作用。
2．基因表达载体的组成[填图]3．基因表达载体的构建首先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口，然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割目的基因的DNA片段，再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处。
生物人教版(2019)选择性必修3 3
基因工程在农牧业方面的应用
6.改善畜产品的品质 (1)基因：肠乳糖酶基因 (2)成果：转基因牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低， 而其他营养成分不受影响
问题2：为什么将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组能降低牛奶中的乳糖含量？ 肠乳糖酶基因在奶牛乳腺细胞中表达出乳糖酶，可以分解乳汁中的乳糖。
活动1 分析基因工程在农牧业方面的应用 问题3：转基因植物和转基因动物的制备用到的技术主要有哪些？
问题1：从环境保护角度出发，分析转基因抗虫棉与普通棉相比在害虫 防治方面的优越性。
减少了化学农药的使用量，降低了环境污染；降低了生产成本。
转基因抗虫水稻(绿色植株)与 对照(被害虫侵害的黄色植株)
转基因抗虫棉
基因工程在农牧业方面的应用
2．转基因抗病植物 (1)背景：许多栽培作物由于自身缺少抗病基因，因此用常规育种的方法很难 培育出抗病的新品种 (2)方法： 科学家将来源于某些病毒、真菌等的抗病基因导入植物中，培育出了 转基因抗病植物
(3)成果： 转基因抗病毒甜椒、番木瓜和烟草等
转基因抗病毒甜椒
基因工程在农牧业方面的应用
3．转基因抗除草剂植物 (1)背景：杂草常常危害农业生产，而大多数除草剂不仅能杀死田间杂草，还会损伤
作物，导致作物减产 (2)方法：将降解或抵抗某种除草剂的基因导入作物，可以培育出抗除草剂的作物品种 (3)成果：转基因抗除草剂玉米、大豆、油菜和甜菜等
干扰素基因 质粒
构建
重组质粒
导入
大肠杆菌 或酵母菌
培养
可大量生产干 扰素的大肠杆 菌或酵母菌
问题1：与大肠杆菌相比，用酵母菌生产人的胰岛素有什么优势？
酵母菌为真核生物，有生物膜系统，可通过内质网和高尔基体对产生的胰岛素 进行加工和修饰，从而产生有活性的胰岛素。
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第三章基因工程第一节重组DNA技术的基本工具基因工程：指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。
从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。
一、分子手术刀—限制性内切核酸酶1.全称和简称全称：_限制性内切核酸酶_简称：__限制酶_2.来源：主要是从_原核生物__中分离纯化出来的3.作用：①能够识别_双链_DNA分子的某种_特定核苷酸序列。
①使_每一条_链中_特定部位_的_磷酸二酯键__断开。
4.作用部位：_磷酸二酯键__5.识别序列：大多数限制酶的识别序列由_6_个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由_4_个、_8_个或__其他数量_的核苷酸组成。
6.切割结果：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式__黏性末端_和__平末端__。
（1）EcoR①限制酶切割EcoR①识别序列为GAATTCEcoR①切割部位为GA之间的磷酸二酯键（2）Sma①限制酶切割Sma①识别序列为CCCGGGSma①切割部位为CG之间的磷酸二酯键二、分子缝合针—DNA连接酶1.功能：将__两个DNA片段连接起来_，恢复被限制酶切开的_磷酸二酯键__。
2.种类E·coli DNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体特点只缝合黏性末端缝合黏性末端平末端作用恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键3名称作用部位作用底物作用结果限制酶磷酸二酯键DNA将DNA切成两个片段DNA连接酶磷酸二酯键DNA片段将两个DNA片段连接为一个DNA分子DNA聚合酶或热稳定DNA聚合酶磷酸二酯键脱氧核苷酸将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端DNA(水解)酶磷酸二酯键DNA将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸解旋酶碱基对之间的氢键DNA将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链RNA聚合酶磷酸二酯键核糖核苷酸将单个核糖核苷酸依次连接到单链末端三、分子运输车——载体1.作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。
2.种类：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
3.作为载体需具备的条件①_有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中__；②_能在细胞中进行自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制_；③_常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选_；④_对受体细胞无害_。
探究.实践：DNA的粗提取与鉴定1.提取思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在的差异，选用适当的物理或化学方法对他们进行提取。
2.提取原理：①DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质；②DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。
3.鉴定原理：在一定温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。
4.比较DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同溶解规律 2 mol/L NaCl溶液0.14 mol/L NaCl溶液DNA溶解析出5．DNA 粗提取中的注意事项（1）本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞 无细胞核(无DNA)。
可选用鸡血细胞作材料。
（2）加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫。
加入酒精 和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA 分子的断裂，导致DNA 分子不能形成絮状沉淀 。
（3）二苯胺试剂要现配现用 ，否则会影响鉴定的效果。
（4）提取植物细胞的DNA 时，加入的洗涤剂能溶解细胞膜 ，有利于DNA 的释放；加入食盐(主要成分是NaCl)的目的是溶解DNA 。
（5）在DNA 进一步提纯时，选用冷却的95%的酒精 的作用是溶解杂质和析出DNA 。
第二节 基因工程的基本操作程序一、目的基因的筛选与获取 （一）目的基因的筛选与获取 1.目的基因概念在基因工程的设计和操作中，用于__改变受体细胞性状__或__获得预期表达产物_等的基因就是目的基因（根据不同的需要，目的基因是不同的，主要是指__编码蛋白质的基因___）。
2.筛选目的基因的方法（1）从相关的__已知结构__和__功能清晰__的基因中进行筛选。
（2）获取方法⎩⎪⎨⎪⎧从基因文库中获取利用PCR 技术扩增通过化学方法人工合成3.利用PCR 获取和扩增目的基因（1）PCR 的概：PCR 是__聚合酶链式反应__的缩写，是一项根据_DNA 半保留复制_的原理，在_体外_提供参与DNA 复制的__各种组分__与_反应条件_，对_目的基因的核苷酸序列_进行__大量复制__的技术。
①全称：__聚合酶链式反应___ ②原理：___DNA 半保留复制___③操作环境：__体外（PCR 扩增仪/PCR 仪）___④目的：__对目的基因的核苷酸序列进行大量复制___ ⑤优点：___可以在短时间内大量扩增目的基因___ （2）DNA 体内复制的条件参与的组分在DNA 复制中的作用DNA 母链 提供DNA 复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成DNA 子链的原料 解旋酶 打开DNA 双链 DNA 聚合酶 催化合成DNA 子链引物使DNA 聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸注：引物是一小段能与_DNA 母链__的一段碱基序列__互补配对_的_短单链核酸__。
注：复制的原料实为dNTP （dATP、dTTP、dCTP、dGTP），同时水解产生能量为合成DNA 子链提供能量，因此体系中不需要添加ATP 。
（4）过程目的基因DNA__受热变性__后_解为单链_，_引物与单链相应_互补序列_结合；然后以__单链DNA__为模板在_DNA聚合酶_作用下进行_延伸__，即将4种_脱氧核苷酸__加到__引物的3’__，如此__重复循环多次__，每次循环一般可以分为_变性、复性和延伸_三步。
注：拓展：DNA复制的相关计算1.子代DNA分子总数：_2n_ 个；2.第n代产生的DNA数：_2n-1_个；3.子代DNA脱氧核苷酸链总数= _2n+1_条4.第n代产生的DNA链数：_2n_条①n代后，DNA分子有_2n_个②n代后，DNA链有_2n+1_条③第____代出现完整的目的基因④n代后，含引物的DNA分子有_2n__个⑤n代后，共消耗_2n+1-2_个引物⑥第n代复制，消耗了_2n_个引物⑦n代后，完整的目的基因有_2n-2n_个4.获取目的基因的其他方法（1）构建基因文库来获取目的基因：将含有某种生物不同基因的许多DNA 片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。
①基因组文库：包含一种生物所有的基因。
②部分基因文库：只包含一种生物一部分基因，如cDNA文库。
（2）利用化学方法人工合成：用DNA合成仪，要获取的基因比较小，核苷酸序列又已知，不需要模板。
（二）基因表达载体的构建（核心）1.基因表达载体的组成基因表达载体必须包括_目的基因_、__标记基因_、_启动子_、_终止子_等（若需要能完成自主复制，还应有_复制原点_）。
（1）启动子①本质：一段有特殊序列结构的_DNA_片段。
②位置：位于基因的_上游_，紧挨__转录的起始位点__。
③功能：__RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA___。
④特殊类型：_诱导型启动子___。
⑤诱导型启动子的特点：__当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达__。
（2）终止子①本质：一段有特殊序列结构的_DNA__片段。
②位置：位于基因的_下游_。
③功能：__使转录在所需要的地方停下来__。
注：启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比比较项目启动子终止子起始密码子终止密码子本质DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻的碱基mRNA上三个相邻的碱基位置目的基因上游目的基因下游mRNA首端mRNA尾端功能RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA使转录在所需要的地方停下来翻译的起始信号（编码氨基酸）翻译的结束信号（不编码氨基酸）（3）标记基因①作用：_便于重组DNA分子的筛选_①常见类型：抗生素抗性基因、荧光蛋白基因等（4）基因表达载体的构建过程载体（质粒）含有目的基因的DNA片段同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割DNA连接酶带有黏性末端（或平末端）的切口带有相同黏性末端（或平末端）的目的基因片段（三）将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞—花粉管通道法（1）操作方式①用__微量注射器_将__含目的基因的DNA溶液_直接注入_子房_中。
①在_植物受粉后_的一定时间内，_剪去柱头_，将__DNA溶液___滴加在_花粉管通道__上，使目的基因借助_花柱切面__进入_胚囊_。
（2）受体细胞：_受精卵__。
2.将目的基因导入植物细胞—农杆菌转化法（1）转化：__目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程__。
（2）农杆菌特点：①能在自然条件下侵染__双子叶植物_和_裸子植物__，而对大多数__单子叶植物_没有侵染能力。
①农杆菌细胞内含有__Ti质粒_，当它侵染植物细胞后，能将_Ti质粒_上的_T-DNA_（可转移的DNA ）转移_到被侵染的细胞，并且将其__整合到该细胞的染色体DNA上__。
（3）农杆菌转化法的过程：将目的基因插入_Ti质粒的T-DNA__中，通过农杆菌的_转化_作用，就可以使目的基因_进入植物细胞_，并___整合到受体细胞的染色体DNA上__，使目的基因能够_维持稳定和表达__。
3.将目的基因导入动物细胞—显微注射法1.受体细胞：_受精卵_2.过程：4.将目的基因导入微生物细胞—Ca2+处理法重组DNA分子（重组质粒）构建基因表达载体并提纯利用显微注射将表达载体注入动物的受精早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物（1）受体细胞：常用__原核生物__作为受体细胞，其中以__大肠杆菌_最广泛 （2）原核生物的优点：_繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少、易于培养__（3）Ca2+处理法（感受态细胞法）的一般过程：（四）目的基因的检测与鉴定检测目的检测方法判断标准 目的基因是否插入转基因生物的DNA DNA 分子杂交技术 是否出现杂交带 目的基因是否转录出了mRNA 分子杂交技术 是否出现杂交带 目的基因是否翻译出蛋白质 抗原—抗体杂交技术 是否出现杂交带 个体水平的检测如抗虫、抗病的接种实验是否表现出相应的特性1.DNA 片段的电泳鉴定（1）实验原理：DNA 分子具有可解离的基团，在一定的pH 下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。
带电粒子在电场作用下，向与其携带电荷相反 的电极移动。
（2）影响DNA 分子的迁移率的因素：DNA 的分子大小，DNA 分子的构象，凝胶的浓度。