2005 药典残留溶剂测定法
2005年版药典修订内容
测定法
内标法加校正因子测定杂质或主成分含量 外标法测定杂质或主成分含量 面积归一化法
标准溶液加入法测定杂质或主成分含量
GC法定量分析时测定方法的选择
采用手动进样时最好采用内标法定量 采用自动进样器时可采用外标法和内标法定量 采用顶空进样技术时可采用标准溶液加入法
当标准溶液加入法与其他定量方法不一致时应以标准溶 液加入法结果为准
附录VIIH 脂肪与脂肪油测定法
增加了过氧化值的测定
附录VIIIL 干燥失重测定法
明确了除另有规定外温度应为105℃(常压)， 60℃（恒温减压干燥，压力应在2.67KPa以下）
附录VIIIN 炽灼残渣检查法
明确了如供试品分子中含有碱金属或氟元素则 应使用铂坩埚
附录VIIIP 残留溶剂测定法
注意事项
所用溶剂、玻璃仪器必须高度洁净 温度应控制一致 溶液pH和试剂纯度对荧光强度的影响
定义 仪器与材料
附录VB 薄层色谱法
薄层板 固定相颗粒大小 展开室展开容器 显色剂 显色装置 检视装置 市售薄层板临用前应活化，聚酰胺薄膜不需活化 点样直径及点间距离 展开：单向、双向及多次 显色与检视 删去薄层扫描法
环糊精等可拆分手性化合物
有机溶剂可改善某些组分的分离效果以至可在非水溶液中进行分析
附录VG 毛细管电泳法（续）
对仪器的一般要求
毛细管 用弹性石英毛细管 直流高压电源 电极和电极槽 冲洗进样系统：压力、负压、虹吸和电动进样 检测系统 数据处理系统 定量测定采用内标法为宜 试样溶液和对照溶液粘度应保持一致 电动进样应注意电歧视现象和溶液离子强度的影响
残留溶剂的验证
我感觉应当从以下几点去做好残留溶剂检查，并应从以下几个方面睁开议论。
一、第一应学习和娴熟掌握中国药典2005年版二部附录ⅧP残留溶剂测定法的有关要求；主假如以下几点：1、色谱柱的选择，一般此刻都要选择毛细管柱，假如你们企业很有条件，那么极性和非极性的色谱柱都购置吧！我们用的是中极性的色谱柱，一般做有机溶剂残留大部分是能够了。
2、供试品溶液的制备，主假如依据供试品的溶解度来选择，同时也要考虑比较品在该溶剂中的溶解性。
一般第一选择溶剂水、DMF、DMSO，再考虑其余溶剂。
3、测定法的选择，等平和程序升温法，进样方面主要有顶空和直接进样法，这个主要依据自己实质条件来选择。
4、其余就不多说了，主要看一下该残留溶剂测定法后边的【附注】，药品中常有的残留溶剂及限度，还有相对保存时间的参照值，这个对实质做某个品种时很实用，能够提早大体知道该残留溶剂的保存时间。
二、残留溶剂检查方法的选择和考证重点1、概括药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完整去除的有机溶剂。
按有机溶剂的毒性和对环境的危害，ICH将有机溶剂分为防止使用、限制使用、低毒和毒性依照尚不足四种状况。
因残留溶剂会影响产品的安全性，故需对其进行研究。
2、残留溶剂检查方法的选择残留溶剂的测定一般采纳气相色谱法，介绍使用毛细管色谱柱-顶空进样系统，自然也能够使用一般填补柱，溶液直接进样方法。
对不宜采纳气相色谱法测定的含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采纳其余方法，如离子色谱法等。
测定残留溶剂应从以下几个方面考虑：确立被测的有机溶剂、选择适合的色谱柱、制备供试品溶液和比较品溶液、选择适合的进样方法和知足检测敏捷度要求的检测器，下边分别进行介绍：确立被测的有机溶剂依据制备工艺确立被测有机溶剂的范围。
往常应付制备工艺过程中使用的二类以上溶剂和重结晶用溶剂，以及依据工艺特色要求的其余溶剂进行残留量的研究。
建议对合成最后三步使用的三类溶剂也进行研究，这样能更好地对未知峰进行归属；对制剂过程中使用的有机溶剂也建议观察其残留状况，特别是缓、控释微丸包衣过程使用的有机溶剂更应惹起注意。
残留溶剂的控制
顶空分析的优越性
Benefits of headspace analysis
原理： principle 将含有挥发性组分的样 品置于密闭系统中，在 一定温度下使样品中的 挥发性组分在气-液或气固两相甚至气-液-固三相 中的分配达到平衡，然 后取凝聚相上端的气体 送入气相色谱仪进行分 析。
优点
为什么建立极性相反的两个色谱系统？
1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 0.0
1X 2.0 4.0 6.0
1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 0.0
logTr
logTr
1X 1.0 2.0 3.0 4.0
在非极性的SPB-1柱上，分子连接性指数1X 与GC保留值有 较好的相关性；在极性的HP-FFAP柱上，分子连接性指数 与GC保留值没有相关性。提示非极性固定液与溶质的相互 作用主要取决于非极性结构色散力的大小；在极性固定液上， 除了色散力之外，还有偶极和诱导作用 。
GC method with compacted column could be used for process control in manufactures
其它色谱方法，如HPLC法测定吡啶、离子色谱法测定N-甲基吡咯烷酮 等，可作为气相色谱法的重要补充；
Some chromatographic methods such as HPLC for determining Pyridine, ion chromatography for N-Methylpyrrolidone，could be an important supplement of GC
Identical Limit with ICH
检测方法推荐采用顶空毛细管气相色谱法
残留溶剂测定的要求和测定方法
GC条件与系统适用性试验 CHP05版之二
• 以直径为0.25～0.18mm的二乙烯苯－乙基乙 烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80～ 170℃；并符合下列要求： (1) 用待测物的色谱峰计算的理论板数应大于 1000； (2) 以内标法测定时，内标物与待测物的两个 色谱峰的分离度应大于1.5； (3) 以内标法测定时，每个标准溶液进样5次， 所得待测物与内标物峰面积之比的 相对标准偏差 不大于5％；若以外标法测定,所得待测物峰面积 的相对标准偏差不大于10％。
标准溶液和供试品液的制备 CHP05版之三
•
精密称取各药品项下规定的有机溶剂和 内标物质适量，分别加入无有机物的水溶 解并配制成浓度为10.0μg/ml的标准及内标 贮备液。精密量取上述标准及内标贮备液 各0.1～1ml，加无有机物的水稀释至 10.0ml，混匀，即得。用外标法测定时只 量取标准贮备液稀释。 精密称取供试品0.1～1g,加无有机物的 水或合适的无有机物的水溶液使溶解，并 稀释至10.0ml，混匀，即得。
企标控制溶剂 DMF
实际检出 乙醇
A B C D
无
乙醇
DMF 甲醇、氯仿、甲 苯
乙醇、甲苯 无
30040701 30040702 30040703
E
041101 041102 041103
甲醇、乙醇、环 乙醇、乙醚 己烷、DMF、 DMSO
盐酸头孢他美酯残留溶剂的控制
厂家 A B C D E F G 申报生产工艺中涉及的溶剂 甲苯、二氯甲烷 甲苯、二氯甲烷 乙醇、丙酮 乙酸乙酯 实际检出的残留溶剂 异丙醇 异丙醇、石油醚 异丙醇 异丙醇
（3）确证：通常通过标准加入法已经可以确
定初步判定的残留溶剂种类的正确与否， 但对一些微量残留的一类溶剂或产品生产 工艺中未提及的溶剂，为慎重起见，可采 用气相－质谱联用或气相－红外光谱联用 技术对所检测到的残留溶剂做进一步的确 证。
溶剂残留测定法
温时柱子高温烧一段时间。
三、残留溶剂的测定方法
④ 系统适用性试验
(1)用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于 5000；填充柱的理论板数一般不低于1000。
(2)色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。拖 尾因子应≤2.0。
检测灵敏度即可； 对于沸点过高的溶剂，如N,N-二甲基甲酰胺(DMF),二甲亚砜
(DMSO),聚乙二醇等，用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样，不适宜 采用顶空法 。
三、残留溶剂的测定方法
2.溶液的制备：空白溶液，供试品溶液和对照品溶液
A. 溶解性（应重视）
供试品要能完全溶解 （特殊情况下，常温下不能溶解的能热溶解的也 行），对照品也要能完全溶解。通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可 采用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)或其他适宜溶剂。
三、残留溶剂的测定方法
B. 配制浓度的确定
① 限度检查：根据通则残留溶剂的限度规定(附表1)确定对照品溶液的浓 度；
② 定量测定：为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实 际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液色谱峰面积不宜超 过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的2倍，同时应根据实际情 况调整，并确保浓度在方法学验证的有效范围内。必要时，应重新调 整。
二、气相色谱柱的分类
1. 毛细管柱 除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互相使用。
(1)非极性色谱柱：固定液为100%二甲基聚硅氧烷的毛细管柱(DB-1)。 (2)极性色谱柱：固定液为聚乙二醇(PEG-20M)的毛细管柱(DB-WAX)。
2005 药典残留溶剂测定法
附录ⅧP 残留溶剂测定法药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。
药物中常见的残留溶剂及限度见附表1，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留量应符合表中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、GMP或其他基本的质量要求。
本法照气相色谱法（附录ⅤE）测定。
色谱柱1．毛细管柱除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互代使用。
（1）非极性色谱柱固定液为100％的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
（2）极性色谱柱固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。
（3）中极性色谱柱固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基亚芳基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
（4）弱极性色谱柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基亚芳基硅氧烷共聚物的毛细管柱。
2．填充柱以直径为0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。
系统适用性试验（1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数均应大于5000；填充柱法的理论板数应大于1000。
（2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻的色谱峰的分离度应大于1.5；（3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）应不大于5％；若以外标法测定，所得待测物峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于10％。
供试品溶液的制备1．顶空进样除另有规定外，精密称取供试品0.1～1g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N，N－二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。
残留溶剂的测定方法
• （2）配制浓度的确定 • 限度检查：对照品溶液浓度一般配制成要求的限度浓
度即可。 • 定量测定：对照品溶液的浓度应根据被测样品中残留
溶剂的实际浓度而定。浓度相差最好不超过两倍为宜。 必要时，应重新调整 。 • 药典上规定供试品取样量为0.1～1g，最好不超过0.5g， 取样量越大，灵敏度越高，但回收率越不容易符合要 求。
▪ 缺点：需要特定的顶空进样装置，成本较高，对沸点 较高的溶剂检测灵敏度不够，一般多应用于沸点100℃ 以下的溶剂
• 现一般采用自动顶空进样器
（2）直接进样
• 指将样品定量溶解于适当溶剂中,准确量取适量注入气 相色谱仪测定溶剂残留量的进样方法。进样体积一般 为2μL 以下。本法为通常采用的方法,适用于受热不易 分解的样品
通风的主要目的是为了置换室内的空气， 改善室内空气品质，是以建筑物内的污染物 为主要控制对象的。
根据换气方法不同可分为排风和送风。排 风是在局部地点或整个房间把不符合卫生标 准的污染空气直接或经过处理后排至室外； 送风是把新鲜或经过处理的空气送入室内。
对于为排风和送风设置的管道及设备等装 置分别称为排风系统和送风系统，统称为通 风系统。
• 2.进样方式 （1）顶空进样 • 顶空进样又分为溶液顶空和固体顶空。一般采用溶液
顶空，就是将样品溶解于适当溶剂中,置顶空瓶中保温 一定时间,使残留溶剂在两相中达到气液平衡,定量取气 体进样测定。
▪ 优点：在较低温度下进行，避免组分分解；减少溶解 样品的溶剂量和样品本身对色谱系统的干扰和污染， 缩短分析时间，增加色谱柱的寿命。
（二）.如何根据已有的方法进行残留溶剂 的检测？
• 1.根据质量标准确定实验方案
• 主要是实验条件的选择（选择测定方法，选择色谱柱、 检测器、进样器等，选择合适的检测方法）
12残留溶剂检查概要
系统适用性试验
1. 2.
3.
毛细管柱n>5000；填充柱n>1000。 R>1.5。 外标法：A对的RSD≤10% ；内标法 :A对/A内的RSD ≤ 5% 。
测定法
第一法：毛细管柱顶空进样等温法
当需要检查的有机溶剂数量不多，并极性差异较小时。
第二法：毛细管柱顶空进样系统程序升 温法
当需要检查的有机溶剂数量较多，并极性差异较大时。
对照品溶液的制备 色谱条件:选择、优化 测定方法 计算方法 顶空进样器条件：选择、 优化
第四类溶剂 （尚无足够毒理学资料）
1，1－二乙氧基丙烷、 1，1－二甲氧基甲烷、 2，2－二甲氧基丙烷、 异辛醇、异丙醚、 甲基异丙基酮、甲基四氢呋喃 、 石油醚、三氯乙酸。
仪器
气相色谱仪 色谱柱：可采用填充柱，也可采用毛 细管柱。 检测器：通常使用FID，对含卤素的残 留溶剂如三氯甲烷等，采用ECD易得到 高的灵敏度。 顶空进样器
3.466
10
min
1.312
pA 400
2.092
顶空进样
300
0 1 2 3 4 5
3.210
100
1.098
200
1.562
min
供试品溶液和对照品溶液的制备
供试品溶液的制备
顶空进样： 精密称取供试品0.1— 1g。 溶剂：水；DMF,DMSO。 浓度：根据供试品和待 测溶剂的溶解度确定。
计算法
限度检查：峰面积直接比较 内标法:A样/A内≯ A对/A内 外标法： A样≯ A对 定量测定：按内标法或外标法公式计 算各残留溶剂的量。
DA中残留溶剂检查
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附录ⅧP 残留溶剂测定法
药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。
药物中常见的残留溶剂及限度见附表1，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留量应符合表中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、GMP或其他基本的质量要求。
本法照气相色谱法（附录ⅤE）测定。
色谱柱
1．毛细管柱除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互代使用。
（1）非极性色谱柱固定液为100％的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
（2）极性色谱柱固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。
（3）中极性色谱柱固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基亚芳基聚硅氧烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷，（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。
（4）弱极性色谱柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基亚芳基硅氧烷共聚物的毛细管柱。
2．填充柱以直径为0.25～0.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。
系统适用性试验
（1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数均应大于5000；填充柱法的理论板数应大于1000。
（2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻的色谱峰的分离度应大于1.5；
（3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）应不大于5％；若以外标法测定，所得待测物峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于10％。
供试品溶液的制备
1．顶空进样除另有规定外，精密称取供试品0.1～1g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N，N－二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。
根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，浓度满足系统定量测定的需要。
2．溶液直接进样精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据品种正文中残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度满足系统定量测定的需要。
对照品溶液的制备
精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。
若为限度实验，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。
必要时，应重新调整供试品溶液和对照品溶液的浓度。
测定法
第一法毛细管柱顶空进样等温法
当需要检查的有机溶剂数量不多，并极性差异较小时，可采用此法。
色谱条件柱温一般为40～100℃；常以氮气为载气，流速为每分钟1.0～2.0ml；顶空瓶加热温度为70～85℃，顶空瓶加热时间30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID 检测器，温度为250℃。
测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。
第二法毛细管柱顶空进样系统程序升温法
当需要检查的有机溶剂数量较多并极性差异较大时，可采用此法。
色谱条件如为非极性色谱系统，柱温一般先在30℃维持7分钟，再以8℃/min的速度升至120℃，维持15
分钟；如为极性色谱系统，柱温一般先在60℃维持6分钟；再以8℃/min的升温速率升至100℃，维持20 分钟；以氮气为载气，流速为2.0ml/min；顶空瓶温度70～85℃，顶空时间30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID检测器，温度为250℃。
具体到单个药品的残留溶剂检查时，可根据该品种项下的残留溶剂组成调整程序升温速率。
测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。
第三法溶液直接进样法
可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。
测定法取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于3次，每次2μl，测定待测峰的峰面积。
计算法
（1）限度实验：以内标法测定时，计算单位重量样品中的色谱峰面积与内标峰面积之比；供试品溶液所得的峰面积比的平均值不得大于由对照品溶液所得的峰面积比的平均值。
以外标法测定时，供试品溶液所得的单位重量中样品待测物峰的平均面积不得大于由标准溶液所得的待测物峰的平均峰面积。
（2）定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。
【附注】
（1）除另有规定外，顶空条件的选择
A．应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空温度。
对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。
B．顶空时间一般为30～45分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡。
顶空时间通常不宜过长，如超过60分钟，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。
C．对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。
（2）定量方法的验证当采用顶空色谱系统测定时，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应。
由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。
当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。
（3）干扰峰的排除供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。
干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同（共出峰）；或热降解产物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。
当测定的有机溶剂残留量超出限度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除干扰作用的存在。
对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对相同样品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果的方法。
如二者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。
对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。
（4）含氮碱性化合物的测定普通气相色谱的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低。
当采用顶空进行系统测定此类化合物时，应采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路；或采用溶液直接进样法测定。
供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易汽化。
通常采用弱极性的色谱柱或经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。
对不宜采用气相色谱法测定含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其他方法如离子色谱法等测定。
（5）检测器的选择对含卤素元素的残留溶剂如氯仿等，采用ECD检测器，易得到高的灵敏度。
（6）由于不同的实验室在测定同一药品时可能采用了不同的实验方法，当测定结果处于合格不合格边缘时，以采用内标及标准加入法为准。
（7）甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用顶空进样方式测定。
②药品生产企业在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报告。
0.32mm×0.52μm）测定的结果。
②本表所列数据仅作参考。