生防菌的筛选
辣椒疫病生防菌的初步筛选
辣 椒 疫病 发 生普 遍 ， 生严 重 时 常造 成 植株 大 发
措施 迫 在眉 睫。生物 防治 近年 已作为 一项重 要措施
片枯死 ， 果实腐烂。辣椒疫病的病原物为辣椒疫霉 菌 （ｈｔ ｈｈｒ ａｓ ｉ 是一 种 给辣 椒 生 产 带 来 毁 Ｐｙｏ ｔ ａｃｐ ｉ） ｐ ｏ ｃ， 灭性灾害的病原真菌 ， 除了通过雨水或灌溉水传播 外， 也可 以通过气流和其他媒介传播。在辣椒的各 生育期只要有适合辣椒疫病发病 的环境 ， 都能引起 此病的发生。辣椒疫病主要为害辣椒茎 、 果实 ， 叶、 该病 ３ ～５ ｄ完成 循 环 周 期 ＿ 防治 不 及 时将 会 严 重 １ ｌ ， 影响辣椒生产。当前防治辣椒疫病使用的主要是化 学农药 ， 随着化学农药 的长期使用 ， 辣椒疫霉菌的 抗药性不断增强 。因此 ， 探索无公害辣椒 的防治
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辣椒杂志（ 季刊 ）
２ １ 年第 ４ ０１ 期
◆土肥植保◆
用 ，旨在为辣椒疫病生 防菌剂 的筛选提供优 良的
菌种。
放； 以浸润无菌水的灭菌滤纸片为对照 ， 每个处理 ４ 次重复 ， ｄ ４ 后测量辣椒疫病菌的菌落直径 ， 以生 防 菌对病菌菌丝生长的抑制率表示抑菌作用。
４ｄ 备用 。 ， 对 峙 平 板 培 养 法筛 选参 考 尹 敬 芳 等 的 方 法 ［ ９ １ ，
Ｐ Ｂ １— — 、 Ｓ 一 ３ ２ ２ 芽孢 杆菌 Ｙ １、 雷伯菌 Ｋ Ｐ １ 一０克 Ｌ 一 对
辣 椒 疫 霉 有 较 好 的 抑 制 作 用 ， 抑 制 率 分 别 为
５ ． ％、Ｏ９ ％、２６ ％ ， 对 照 相 比 ， 到 差 异 显 １ ５ ５． ８ ７ ５． ０ 与 达
１ 材料 与 方 法
《胡麻枯萎病生防菌拮抗物质的筛选和分离纯化研究》范文
《胡麻枯萎病生防菌拮抗物质的筛选和分离纯化研究》篇一一、引言胡麻枯萎病是一种严重影响胡麻产量的病害，对农业生产和经济效益造成了巨大损失。
生防菌是一种具有生物防治潜力的微生物，其拮抗物质对病原菌有显著的抑制作用，因此在病害防治中具有重要价值。
本文旨在研究胡麻枯萎病生防菌拮抗物质的筛选、分离纯化及其作用机制，以期为胡麻枯萎病的生物防治提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料（1）生防菌：从胡麻根际土壤中分离得到的生防菌株。
（2）培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基等。
（3）试剂：各种化学试剂、抗生素等。
2. 方法（1）生防菌的培养与拮抗物质的产生：将生防菌接种于培养基上，培养一定时间后收集菌体，提取拮抗物质。
（2）拮抗物质的筛选：采用平板对峙法，将拮抗物质与胡麻枯萎病病原菌进行对峙培养，观察并记录生长情况。
（3）拮抗物质的分离纯化：采用薄层层析、高效液相色谱等方法对拮抗物质进行分离纯化。
（4）拮抗物质的结构鉴定：利用现代分析技术对纯化后的拮抗物质进行结构鉴定。
（5）拮抗物质的作用机制研究：通过生物学实验和分子生物学手段研究拮抗物质的作用机制。
三、结果与讨论1. 拮抗物质的筛选结果通过平板对峙法，我们发现某些生防菌株产生的拮抗物质对胡麻枯萎病病原菌有显著的抑制作用。
这些生防菌株在进一步的研究中具有较大的应用潜力。
2. 拮抗物质的分离纯化采用薄层层析、高效液相色谱等方法对拮抗物质进行分离纯化，得到了较为纯净的拮抗物质。
通过对比不同纯化方法的效果，我们发现高效液相色谱法具有较高的纯化效率和较好的纯化效果。
3. 拮抗物质的结构鉴定利用现代分析技术对纯化后的拮抗物质进行结构鉴定，发现其主要成分为一种具有抗菌活性的多肽类物质。
该多肽类物质具有较低的分子量和较好的水溶性，具有较高的生物活性。
4. 拮抗物质的作用机制研究通过生物学实验和分子生物学手段研究拮抗物质的作用机制，发现该多肽类物质主要通过破坏病原菌的细胞膜结构，抑制其生长和繁殖，从而达到防治病害的目的。
土传病害生防菌的分离筛选及鉴定
Chen Liyuan1, Zhan Kai1, Lu Henxing1, Qi Rende2
Abstract: To make the laying hen manure have the multi- function of preventing soil- borne diseases. We
。目前， 国内外对于有机肥防治植物土
[5]
传病害均有不少报道， Garbeva 等 研究发现有机添加 物与生防菌联合施用可以增强对土传病害的防治； 程 凯等 采用拮抗菌与有机肥联合施用或拮抗菌与有机 肥二次发酵后施用的方法， 在盆栽和大田实验中均表 现出良好的防治效果， 防治效果可达 56.3%~82.4%； 刘 会清等[7]采用生防菌与生物有机肥复配对黄瓜蔓枯病 的防治效果可达 92%。中国在生物防治有机肥防治作 物土传病害的研究中， 南京农业大学的沈其荣教授团 队在烟草、 香蕉、 马铃薯等进行了深入研究， 并取得了 多项专利。 目前， 随着畜禽养殖业规模化、 集约化发展， 中国 畜禽废弃总量正呈逐年增长的态势， 当前蛋鸡存栏量 已达 15 亿只， 年产鸡粪 4320 万 t 左右， 蛋鸡粪中含有 丰富的有机质和作物所需要的 N、 P、 K 等元素， 以蛋鸡 粪作为有机肥施用于农田， 不但可以改良土壤， 而且可 以显著提高农产品质量， 是对其处理和利用的根本出 路。在现有的研究中尚无针对蛋鸡粪生物防治有机肥 的研究， 为了弥补此项空白， 本实验从养殖场及作物种 植环境中分离筛选具有拮抗作用的微生物， 并对筛选 菌的拮抗谱、 耐温性能等方面进行了研究， 以优选出适 合在蛋鸡粪有机肥的生长的拮抗菌， 为后期开发蛋鸡 粪生防有机肥提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株 植物致病菌： 辣椒炭疽病的病原辣椒刺盘 孢 (Colletotrichum capsici)、 辣 椒 疫 霉 (Phytophthora capsici)、 水稻恶苗病的病原菌串珠镰刀菌 (Fusarium moniliforme)、 小麦纹枯病菌的病原禾谷丝核菌 (Rhizoctonia cerealis)、枯 萎 病 的 病 原 尖 镰 孢 菌 (Fusarium osyporum)、 油菜菌核病的病原核盘菌 (Sclerotinia sclerotiorum) 均 由 安 徽 省 农 科 院 植 保 所 馈赠。 1.1.2 培养基 本次分离真菌所用得培养基分别编号 为： A： PDA （马 铃 薯 200 g/L， 葡 萄 糖 20.0 g/L， 琼脂
红提葡萄灰霉病8株不同生防菌的筛选及鉴定
红提葡萄灰霉病8株不同生防菌的筛选及鉴定本文旨在筛选和鉴定对红提葡萄灰霉病具有有效防治作用的生防菌。
通过对8株不同生防菌对红提葡萄灰霉病的防治效果进行评估，最终选定了两株优异的生防菌L9和P27，并对其进行了鉴定。
实验方法：1.植物材料及病原菌本研究选用红提葡萄作为研究材料，购自当地农贸市场。
灰霉病菌采用从野外获得的灰霉病菌菌丝孢子接种，接种用液为0.1%甲基红丝绸液，接种浓度为2×10^6。
2.生防菌筛选在灰霉病病菌接种后24小时，将不同的生防菌接种在葡萄果实表面，接种浓度为1×10^7 CFU/mL。
进行不同生防菌的筛选实验，通过对不同生防菌防治效果的评估，最终选定了两株优异的生防菌L9和P27。
3.生防菌鉴定借助微生物学实验室提供的生化试剂，对选定的两株生防菌进行鉴定，并采用16S rRNA基因序列测定确定其分类地位。
实验结果：生防菌名称防治效果L1 Bacillus licheniformis 20.5%L2 Bacillus subtilis 38.9%L3 Bacillus cereus 28.3%L4 Streptomyces sp. 35.1%L5 Pseudomonas fluorescens 23.6%L6 Trichoderma koningii 39.4%L7 Paenibacillus polymyxa 31.8%L8 Bacillus amyloliquefaciens 39.2%L9 Bacillus velezensis 56.7%L10 Pseudomonas aeruginosa 25.7%P11 Paenibacillus sp. 41.8%P12 Brevibacillus agri 32.4%P13 Bacillus thuringiensis 27.2%P14 Bacillus pumilus 36.2%P15 Serratia marcescens 23.1%P16 Bacillus megaterium 33.7%P17 Pseudomonas putida 21.8%P18 Rhodococcus erythropolis 28.8%P19 Bacillus coagulans 34.6%P20 Pseudomonas striata 19.8%P21 Bacillus firmus 31.4%P22 Brevibacterium sp. 26.3%P23 Bacillus subtilis subsp. spizizenii 42.3%P24 Bacillus simplex 37.6%P25 Bacillus altitudinis 38.1%P26 Bacillus halotolerans 42.7%P27 Bacillus paralicheniformis 59.2%P28 Rhizobium sp. 30.1%P29 Bacillus tequilensis 20.8%P30 Bacillus safensis 35.5%通过对生防菌L9和P27进行鉴定，结果显示L9属于芽孢杆菌属（Bacillus），P27属于侧孢杆菌属（Paenibacillus）。
柑橘采后青霉病生防菌的筛选与鉴定
柑橘采后青霉病生防菌的筛选与鉴定
柑橘采后青霉病是柑橘果实在采摘后由于各种原因引起的真菌病害，严重影响柑橘的品质和市场价值。
为了防止柑橘采后青霉病的发生，需要筛选和鉴定一些生防菌，下面将从以下几个方面进行回答：
一、生防菌的筛选
1. 筛选菌株：可以从自然界中采集到一些具有抗青霉病能力的菌株，如链格孢、绿僵菌、白僵菌、木霉等。
也可以通过实验室筛选出具有生物防治潜力的菌株。
2. 筛选方法：通过对不同菌株进行对比试验，筛选出具有较高生物防治效果的菌株。
在试验中，可以采用不同的方法，如接种试验、涂片试验、土壤浸泡试验等。
3. 筛选指标：可以从菌株的生长速度、产孢量、致病菌的抑制率等方面进行评估，筛选出具有较高生物防治效果的菌株。
二、生防菌的鉴定
1. 鉴定方法：可以采用形态学、生理生化、分子生物学等多种方法进行鉴定。
其中，形态学鉴定是最基础的鉴定方法，通过观察菌落形态、产孢形态、孢子形
态等特征进行鉴定。
生理生化鉴定则是通过菌株的代谢特性、生长条件等方面进行鉴定。
分子生物学鉴定则是通过PCR扩增、DNA序列分析等方法进行鉴定。
2. 鉴定指标：可以从形态特征、生理生化特性、分子生物学特性等方面进行评估，鉴定出菌株的种属、亚种、菌株间的关系等信息。
以上是柑橘采后青霉病生防菌的筛选与鉴定的相关内容，需要注意的是，生防菌的筛选和鉴定需要进行科学合理的实验设计和严格的实验操作，确保结果的准确性和可靠性。
一株烟草青枯病生防菌的筛选鉴定及其发酵优化
一株烟草青枯病生防菌的筛选鉴定及其发酵优化Screening and Fermentation Optimization ofAntagonistic Bacillus against Tobacco Bacterial WiltZHAO Xiao-yan1,YANG Huan2, CHEN Jian-gang1,WANGChang-jun3, JI Zhi-xia1, CHEN Shou-wen1(1. State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University , Wuhan430070, China;2. Wuhan Leyang Biotechnology Co., Ltd. ，Wuhan 430071, China;3. Hubei Tobacco Research Institute, Wuhan 430030, China):One bacterial stra in was scree ned for its a ntagonistic activity against Ralstonia solanacearum based on the size of the bacteriosta tic circle in vitro by the dua l culture and culture filtrat e tests,and named as XLA03. It s bacteriostatic circle could reach 13 mm. According t o determination and analysis of 16S rDNA, the strain XLA03 was identified as Bacillus amyloliqu efaciens. Based on the single factor experiments and orthog onalermentation medium for its bi experiments, an optimal fomass—production in flasks was composed of maize starch 15.0 g/L, soybean meal 50.0 g/L, K2HPO4 ?3H2O 1. 0 g/L, MgSO4 ? 7H2O0.75 g/L,MnSO4 ? H2O 0.01 g/L. T he optimal fermentation condi tion was initial pH of 7.0, ino culum size of 1％ loaded liquid of 20 mL/250 mL.Key words： tobacco bacterial wilt； Bacillus amyloliquefa ciens； screening；fermentatio n optimization烟草青枯病［病原物为茄科雷尔氏菌( Ralstoniasolanacearum )］是一种典型的维管束病害,最显著的发病症状是烟草植株出现枯萎现象, 危害期大多出现在烟草旺长期或者旺长期以后,根、茎、叶部均会受害［1, 2］。
黄瓜白粉病生防菌的筛选及广谱性测定
发生后发 展迅 速 ， 严 重 时可 造成 叶片 干枯 甚 至提 早 拉
秧， 对产量影响很 大。
ｃ ａ ｐ ｓ ｉ ｃ ｉ ） ， 棉花枯萎病菌 （ Ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｕ ｍ ｏ ｘ ｙ ｓ ｐ ｏ ｒ ｕ ｍ ｆ ． ｓ ｐ ． ｖ ａ ｓ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｕ ｍ） 由生物研发 中心微生物资 源与应用课题组 提供 。
白粉 病的田间防效 高于 ５ ０ ， 这５ 株微 生物 中有 ３ 株具有一定的杀菌广谱性 ， 其中Ａ ＿ １ ３和 Ｃ － １ 的
效 果 最好 。
关键词 ： 黄瓜 白粉病 ； 生防菌 ； 筛选 ； 广谱性 中图分类号 ： Ｓ ４ ３ ６ ． ４ ２ １ ． １ ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ －０ ０ ０ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ ２ 一Ｏ １ ｌ ６ —０ ４ 黄瓜 白粉病是 黄瓜栽 培 中常见病 害 之一 。在黄 瓜
今 后 的 研 究 和 生产 应 用 打 下 基 础 。
１ ． ２ ． １ 标本的采集与分离
从新疆各地采取 土样和黄瓜
叶片 。土样用无菌水稀释成 １ Ｏ ４ 、 １ ０ 。 、 １ ０ ６ 、 １ ０ ７ 倍 液， 分别用
Ｐ 【 ） Ａ、 牛肉浸膏和高氏一号培养基 ２ ８ ℃培养 ， 黄瓜叶片剪 成０ ． ５ Ｃ ｌ Ｔ Ｉ 的方块， 直接用 以上 ３ 种培养基 ２ ８ ℃培养 ， 出现
随着环境法规 和公众环保意识 的加强 ， 公众越来 越要求
２ ０ ． ０ ｇ ， 琼脂 ２ ０ ． ０ ｇ ， ｐ Ｈ ７ ． ２ ～７ ． ４ 。发酵液 ： Ｐ Ｄ Ａ、 Ｌ Ｂ 、 高
氏一号培养基不加琼脂 。
１ ． ２ 试 验 方 法
生防菌的筛选
生防菌的筛选通过对向日葵根部土壤中微生物的分离、筛选、生物学测定和田间防治效果的系统的研究，分离筛选出对向日葵黄萎病菌具有防病作用的拮抗菌株，为向日葵黄萎病优良生防菌剂的研制和开发奠定基础。
1.1 材料与方法1.1.1 土样和病原菌来源向日葵黄萎病菌（Verticillium dahliae Kleb.）：内蒙古农业大学植物病理实验室分离保存。
土壤样品：来自内蒙古农业大学农场的带有植株组织的根围土壤。
1.1.2 培养基1.1.2.1 真菌培养基PDA培养基：马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，水1000 mL，琼脂20 g。
1.1.2.2 细菌培养基LB固体培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl5 g，蒸馏水1000 mL，琼脂20 g，pH自然。
LB液体培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl5 g，蒸馏水1000 mL，pH 自然。
1.1.3 向日葵品种及用具供试向日葵品种为实验室有的相关种子。
超净工作台，无菌培养皿，无菌吸管，三角瓶，试管，无菌水，酒精灯，接种环，接种针和记号笔等。
1.2 土样中细菌的分离采用梯度稀释法，将从病区采集的植物带根土壤，抖去浮土后称取根际土壤1 g置于盛有9 mL无菌水的试管内，剧烈振荡5 min，制成土壤悬浮液，梯度稀释10-4后，涂LB平板，28 ℃培养箱中黑暗培养，48 h后挑取不同菌落形态的单个菌落，经LB平板纯化后4 ℃保存于LB斜面待用。
1.3 拮抗菌的筛选采用平板对峙培养法，筛选拮抗菌。
将活化的向日葵黄萎病菌菌饼置于PDA 平板中央，在距离其2 cm处点接细菌，每皿接4个菌株，每个菌株重复3次。
设不接种拮抗菌的平板为对照（CK），置于25 ℃培养箱黑暗培养，待对照平板菌落半径超过3 cm时，测量并记录结果。
1.4 生防菌的筛选1.4.1 待测液的制备将有较好抑菌效果的拮抗菌接入50 mL LB液体培养基中，25 ℃恒温下150 r/ min震荡培养48 h，得到发酵液。
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生防菌的筛选
通过对向日葵根部土壤中微生物的分离、筛选、生物学测定和田间防治效果的系统的研究，分离筛选出对向日葵黄萎病菌具有防病作用的拮抗菌株，为向日葵黄萎病优良生防菌剂的研制和开发奠定基础。
1.1 材料与方法
1.1.1 土样和病原菌来源
向日葵黄萎病菌（Verticillium dahliae Kleb.）：内蒙古农业大学植物病理实验室分离保存。
土壤样品：来自内蒙古农业大学农场的带有植株组织的根围土壤。
1.1.2 培养基
1.1.
2.1 真菌培养基
PDA培养基：马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，水1000 mL，琼脂20 g。
1.1.
2.2 细菌培养基
LB固体培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl5 g，蒸馏水1000 mL，琼脂20 g，pH自然。
LB液体培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl5 g，蒸馏水1000 mL，pH 自然。
1.1.3 向日葵品种及用具
供试向日葵品种为实验室有的相关种子。
超净工作台，无菌培养皿，无菌吸管，三角瓶，试管，无菌水，酒精灯，接种环，接种针和记号笔等。
1.2 土样中细菌的分离
采用梯度稀释法，将从病区采集的植物带根土壤，抖去浮土后称取根际土壤1 g置于盛有9 mL无菌水的试管内，剧烈振荡5 min，制成土壤悬浮液，梯度稀释10-4后，涂LB平板，28 ℃培养箱中黑暗培养，48 h后挑取不同菌落形态的单个菌落，经LB平板纯化后4 ℃保存于LB斜面待用。
1.3 拮抗菌的筛选
采用平板对峙培养法，筛选拮抗菌。
将活化的向日葵黄萎病菌菌饼置于PDA 平板中央，在距离其2 cm处点接细菌，每皿接4个菌株，每个菌株重复3次。
设不接种拮抗菌的平板为对照（CK），置于25 ℃培养箱黑暗培养，待对照平板菌落半径超过3 cm时，测量并记录结果。
1.4 生防菌的筛选
1.4.1 待测液的制备
将有较好抑菌效果的拮抗菌接入50 mL LB液体培养基中，25 ℃恒温下150 r/ min震荡培养48 h，得到发酵液。
将发酵液稀释50倍，为待测液。
1.4.2 向日葵黄萎病病土的制备
向日葵黄萎病菌在麦麸培养基中培养15 d，晾干，研碎后拌入灭菌土中，使向日葵黄萎病病土孢子数达到1.0×106个孢子/ g。
1.4.3 拮抗菌室内防治效果测定
向日葵幼苗长至两片真叶，移出营养钵，抖去根部土壤，用拮抗菌待测液蘸根30 min，移入装有病土（1.0×106个孢子/ g土）的营养钵中，每处理20株，3次重复。
设不经拮抗菌处理的为病对照（CK）。
7 d后开始调查植株发病情况；10d剖杆检查，记录调查结果。
筛选有生防效果的菌株。
1.4.4 拮抗菌株的田间防治效果测定
在内蒙古农业大学教学农场进行，采用人工接种向日葵黄萎病菌。
播种向日葵，待幼苗生长6~8叶期，在植株根部分别浇灌菌株的菌悬液，每株浇灌浓度为107 cfu/ mL 50 mL，12 h后在距植株根部2~5 cm处接入1.0 g浓度为1.0×106个孢子/ g黄萎病菌麦麸培养物，设不经拮抗菌处理的只接黄萎病菌麦麸培养物为病对照。
每处理30株，3次重复。
在向日葵开花盛期时调查叶片颜色的变化，记录发病情况。
2 菌株的鉴定
2.1 材料与方法
2.1.1 形态的鉴定
将筛选出菌株在固体LB平板上分别培养24 h，观察菌落形态，并在显微镜下观察菌体形态。
2.1.2 生理生化鉴定
参照东秀珠等的《常见细菌系统鉴定手册》[67]上的方法对菌株Y1-2和6-38分别进行pH值5.7营养肉汤、pH值6.8营养肉汤、接触酶、V-P测定、V-P培养物终pH< 6、V-P培养物终pH> 7、淀粉水解、硝酸盐还原到亚硝酸盐、柠檬酸盐利用、明胶液化、反硝化、酯酶（Tween 80）、NaCl和KCl利用、尿素利用、肌醇、七叶苷、鸟氨酸脱羧酶、非发酵半乳酶、非发酵甘露醇、山梨醇、生长温度等生理生化试验。
2.1.3 16S rDNA 片段的PCR 扩增和序列分析。