谷氨酸合成酶(Glutamate synthase,GOGAT)试剂盒说明书
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求森美希克玛生物
规
格
:
结
构
及 试剂 1
组
成
试剂 2
/
主
要
校准品 组
成
组成 磷酸缓冲液 乙二胺四乙酸二钠 氧化型谷胱甘肽 磷酸缓冲液
NADPH Tris 缓冲液
人血清 GR 靶值浓度范围
浓度 100mmol/L
5mmol/L 3mmol/L 100mmol/L 3mmol/L 20mmol/L 50mL/L （45～70）U/L
:
产
品
储 2℃～8℃条件下避光保存，有效期为 18 个月。
存
条
件
及 有 效 期
( 体 外 诊 断 试 剂 适 用 ):
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）
型
号
、
试剂 1：1×50mL，试剂 2：1×10mL；
规
试剂 1：2×50mL，试剂 2：2×10mL； 格 试剂 1：3×50mL，试剂 2：3×10mL；
试剂 1：4×50mL，试剂 2：4×10mL；
/
试剂 1：1×25mL，试剂 2：1×5mL； 包 试剂 1：2×20mL，试剂 2：2×4mL。 装 校准品（选配）：1×1mL。Βιβλιοθήκη 成Tris 缓冲液
20mmol/L
分
质控品 :
人血清 GR 靶值浓度范围
50mL/L 水平 1：（35～60）U/L 水平 2：（90～150）U/L
校准品靶值批特异，详见说明书。质控品质控范围批特异，详见说明书。
适 用 范 围
/
用于体外定量测定人血清、血浆或红细胞中谷胱甘肽还原酶的活性。
预 期 用 途
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS)活性测定试剂盒使用说明
谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)活性测定试剂盒使用说明产品简介：GLS存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
产品内容：试剂一×1瓶，60mL，4℃保存；试剂二×1瓶，50mL，4℃保存；试剂三×1瓶，60mL，常温保存；试剂四×1瓶，12mL，常温保存；试剂五×1瓶，6mL，常温保存；试剂六×1瓶，6mL，常温避光保存。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g组织，加入0.9ml试剂一研钵中研磨均匀，于48000rpm℃离心10min，取上清，作为待测液（粗酶液）。
二、测定步骤：1、空白管：（1）蒸馏水0.05mL，加试剂一0.2mL，加试剂二0.8mL，混匀后37℃水浴1h；（2）加入试剂三1.05mL，混匀后8000rpm离心10min；取上清液1.0mL到新离心管中，加入试剂四0.23mL，混匀；（3）取0.8mL到新离心管中，依次加入试剂五0.1mL和试剂六0.1mL，混匀后等待10min，即可用于调零。
2、样品管：仅需要把蒸馏水0.05mL换成粗酶液0.05mL即可，其余同空白管。
3、实际测定只要做一个空白管，用于调零，于420nm处比色，记录吸光值，记为A。
GLS活性计算：1、酶活性单位定义：37℃下每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨。
2、计算公式：GAA（U/mg prot）＝363.1×(A－0.1301)÷蛋白质浓度（mg/mL）。
谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶检测说明书
谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR）检测是一种用于测定谷胱甘肽还原酶活性的实验方法。
谷胱甘肽还原酶是一种关键的抗氧化酶，参与谷胱甘肽（glutathione，GSH）的再生过程，从而保护细胞免受氧化损伤。
以下是一种简化的谷胱甘肽还原酶检测说明：
1.实验原理：谷胱甘肽还原酶检测主要依赖于酶促
反应的光度测定。
在此反应中，谷胱甘肽还原酶将氧化型谷胱甘肽（glutathione disulfide，GSSG）还原为还原型谷胱甘肽（GSH），同时将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADP+）。
反应过程中，NADPH的消耗可以通过其吸光度的变化来监测。
2.实验试剂：主要试剂包括缓冲液、还原型谷胱甘
肽、氧化型谷胱甘肽、NADPH、谷胱甘肽还原酶标准品等。
3.实验步骤：
a.样品处理：收集需要测定谷胱甘肽还原酶活
性的样品（如血清、组织或细胞提取物等），
并进行适当的处理和稀释。
b.反应体系建立：在96孔板中，分别加入缓冲
液、样品、GSSG和NADPH，然后添加谷胱
甘肽还原酶标准品。
c.光度测定：在340nm波长下，定时测定各孔
的吸光度变化，记录吸光度值。
d.计算结果：根据吸光度变化值，计算样品中
谷胱甘肽还原酶的活性。
4.注意事项：
a.在操作过程中，请遵循实验室安全规程，佩
戴必要的防护装备。
b.实验过程中，请保持试剂的纯净和稳定。
c.光度测定时，请确保仪器的准确性和稳定性。
γ- 谷氨酰半胱氨酸连接酶(glutamate cysteine ligase ,GCL )说明书
货号：QS1207 规格：50管/48样γ- 谷氨酰半胱氨酸连接酶（glutamate cysteine ligase ，GCL ）说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。
GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。
GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。
测定原理：在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体70mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加14mL蒸馏水充分震荡溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入蒸馏水3.5 mL充分震荡溶解。
试剂四：液体16mL×1瓶，室温保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入30mL蒸馏水，充分震荡溶解后，缓缓加入1.0mL浓硫酸（自备），边加边搅拌。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
GCL测定操作1. 分光光度计预热30min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。
GS GOGAT 的测定
提取缓冲பைடு நூலகம்：
0.05mol/LTris-HCl，pH8.0，内含2mmol/LMg2+，2mmol/L DTT，0.4mol/L蔗糖。称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）1.5295g，0.1245g MgSO4 7H2O，0.1543g DTT（二硫苏糖醇）和34.25g蔗糖，去离子水溶解后，用0.05 mol/L HCl调至pH8.0，最后定容至250ml；
反应混合液A（0.1mol/L Tris-HCl缓冲，pH7.4）：
内含80mmol/L Mg2+，20mmol/L谷氨酸钠盐，20mmol/L半胱氨酸和2mmol/L EGTA，称取3.0590g Tris，4.9795 gMgSO4 7H2O, 0.8628g谷氨酸钠盐，0.6057g半胱氨酸，0.1920gEGTA，去离子水溶解后，用0.1mol/L HCl调至pH7.4，定容至250ml；
40mmol/L ATP溶液：0.1210g ATP溶于5ml去离子水中（临用前配制）。
请问反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：
反应混合液A的成分再加入80mmol/L盐酸羟胺，pH7.4；到底是加多少体积的盐酸羟胺啊？而且盐酸羟胺是酸性的，加进去PH肯定会变化。急！
反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：
反应混合液A的成分再加入80mmol/L盐酸羟胺，pH7.4；
显色剂（0.2mol/L TCA, 0.37mol/L FeCl3和0.6mol/L HCl混合液）：
3.3176g TCA（三氯乙酸），10.1021g FeCl3 6H2O，去离子水溶解后，加5ml浓盐酸，定容至100ml；
二
三
四
五
六
七
八王月福
AMM氨测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品说明书
氨测定试剂盒（谷氨酸脱氢酶法）说明书【产品名称】通用名称：氨测定试剂盒（谷氨酸脱氢酶法）英文名称：Blood ammonia Assay Kit（AMM）【包装规格】R1：2⨯60ml 、R2：2⨯15ml ；R1：2⨯40ml 、R2：2⨯10ml；R1：1⨯40ml 、R2：1⨯10ml；R1：2⨯20ml、R2：2⨯5ml；校准品(选配):2⨯2ml(水平1:1⨯2ml;水平2:1⨯2ml)。
【预期用途】用于体外定量测定人血浆中氨的含量。
临床上主要用于肝性脑病的辅助诊断。
【检验原理】过量的α-酮戊二酸、NADH 和足量谷氨酸脱氢酶（GLDH)存在的条件下，NADH 转变成NAD+,在340nm 监测吸光度下降速率与样本中氨的含量成正比。
GLDHNH 4++α-酮戊二酸+NADH→谷氨酸+NAD ++H2O【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。
试剂R1：谷氨酸脱氢酶(GLDH)3.5KU/L、α-酮戊二酸（C 5H 6O 5）6.55mmol/L、氯化钠（NaCl）140mmol/L；试剂R2：叠氮钠（NaN 3)0.1%、还原型辅酶（NADH)1.1mmol/L；校准品：含醋酸铵的水溶液。
校准品可溯源至贝克曼血氨参考品439770，注：浓度见每批瓶标示。
不同批号试剂盒中各组分不可以互换。
【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。
有效期365天。
试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定7天。
备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。
【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。
【样本要求】1、静脉采血，EDTA 抗凝血浆样本。
2、样本采集后需尽快分离，如不能做到这一点，应该将收集来的血样立即放在冰块上或放置冰箱内，并且在30分钟内离心，分离后的血浆请置于2℃～8℃并在2小时内进行测定。
GS和GOGAT酶活性测定
实验报告（修改中勿动）9月8日张青谷氨酰胺合成酶（GS）活性测定原理谷氨酰胺合成酶（GS）是植物体内氨同化的关键酶之一，在ATP和Mg2+存在下，它催化植物体内谷氨酸形成谷氨酰胺。
在反应体系中，谷氨酰胺转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，进而在酸性条件下与铁形成红色的络合物，该络合物在540nm 处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。
谷氨酰胺合成酶活性可用产生的γ─谷氨酰基异羟肟酸与铁络合物的生成量来表示，单位μm ol·mg﹣1protein·h﹣1。
也可间接用540nm处吸光值的大小来表示，单位A·mg﹣1 protein·h﹣1。
【仪器与用具】冷冻离心机；分光光度计；天平；研钵；恒温水浴；剪刀；移液管（2ml、1ml）。
【试剂】提取缓冲液：0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0，内含2mmol/L Mg2+，2mmol/L DTT，0.4mol/L蔗糖。
称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）1.5295g，0.1245g MgSO4·7H2O，0.1543g DTT（二硫苏糖醇）和34.25g蔗糖，去离子水溶解后，用0.05 mol/L HCl（0.1mol/L = 1ml 的36%~38%浓盐酸加入到100ml去离子水里）调至pH8.0，最后定容至250ml；反应混合液A（0.1mol/L Tris-HCl缓冲，pH7.4）←以加入1.6ml反应混合液A的为对照。
内含80mmol/L Mg2+，20mmol/L谷氨酸钠盐，20mmol/L半胱氨酸和2mmol/L EGTA，称取3.0590g Tris，4.9795 gMgSO4·7H2O, 0.8628g谷氨酸钠盐，0.6057g 半胱氨酸，0.1920gEGTA，去离子水溶解后，用0.1mol/L HCl调至pH7.4，定容至250ml；反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：反应混合液A的成分再加入80mmol/L盐酸羟胺，pH7.4；显色剂（0.2mol/L TCA, 0.37mol/L FeCl3和0.6mol/L HCl混合液）：3.3176g TCA（三氯乙酸），10.1021g FeCl3·6H2O，去离子水溶解后，加5ml浓盐酸，定容至100ml；40mmol/L ATP溶液：0.1210g ATP溶于5ml去离子水中（临用前配制）。
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货号：MS1801 规格：100管/96样谷氨酸合成酶（Glutamate synthase，GOGAT）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GOGAT广泛分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
测定原理：
GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂二中加入9mL试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后3h内用完）；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL样本和180μL试剂二，混匀，立即记录340nm 处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
GOGAT活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
第1页，共2页
GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.642×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=1.286×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
第2页，共2页。