鼠诺如病毒MNV-CW1感染C57BL6小鼠的特点重点
实验室常用小鼠简介(同济)汇总
基因表达基本知识
DNA一级结构上调控基因表达的元件 （基因表达盒结构）
5’-UTR promoter
enhancer 3’-UTR
enhancer promoter
UTR exon
Poly A signaling Chromosome sequence
基因敲除小鼠
基因敲除小鼠
基因修饰ES细胞的获得及囊胚注射
转基因小鼠
靶标基因表 达盒DNA
条件性基因表达小鼠
PCAG loxP A
CAT
B
MBD2 cDNA
Cre-loxP系统
pCAG-CAT-X 7100bp PacI Amp HGH PA pBR322 ori
在MBD2 CDS 两端PCR加入 PacI酶切位点 PacI PacI
loxP
PacI酶切，T4 连接酶连接
肿瘤模型
移植瘤实验：将人移植入BalB/C、祼鼠、C57BL/6、Rag1等小鼠体内。
诱导癌/肿瘤模型：使用二乙基亚硝胺 (diethy lnitrosam ine, DEN)等诱 癌剂灌胃及自由饮水，长期诱导可产生肝癌模型。
基因修饰小鼠
1、基因敲除小鼠
2、基因敲入小鼠
3、基因捕获小鼠 4、转基因小鼠 5、条件性基因表达小鼠 6、条件性基因敲除小鼠
MBD2基因敲除小鼠
A w.t. allele
1 2
b-geo
3
targeting vector
mutant allele
1 w.t. sequence Vector sequence
b-geo
3 Typing primer Typing primer exon Sequence not indicated
C57L小鼠的特点是什么？
C57L小鼠的特点是什么？
棕色系C57BR中诞生的铅色系的C57L（L=leaden）
C57L 小鼠（C57L）的诞生
1933年，Murray（J Murray）在杰克逊实验室（Jackson Laboratory）对近交系C57BR小鼠第22代（F22）进行近交筛选获得。
因此，C57L小鼠属于C57BR的一个亚系。
由于是在杰克逊实验室诞生，称为C57L/J。
C57L小鼠的特点：
•可以自发产生霍奇金氏B淋巴瘤（Hodgkin's-like Type B neoplasms），在20月龄时发生率可达25%。
•对于实验性变态反应性脑脊髓炎（allergic encephalomyelitis，EAE）高度敏感。
•多产的雌性小鼠老年时可发生垂体瘤。
•对植物凝集素（allergic encephalomyelitis）具有高反应性。
•高脂高胆固醇模型饲料可以诱导动脉粥样硬化。
•对高胆固醇饲料反应性很高，容易形成胆固醇性胆结石，特别适用于胆结石造模。
•具有年龄相关性听觉丧失。
可以作老年性耳聋的模型。
•肺对放射性高度敏感，与C57BL/6J小鼠、C3H小鼠、CBA小鼠等小鼠比较，放射性肺损伤速度快，3-4个月内引起肺炎，可能容易继发肺纤维化。
C57小鼠品系简介
C57小鼠品系简介
C57小鼠是实验动物小鼠中使用最广泛的品系之一，并不是指的某一特定的小鼠，而是指的一个亚系。
而通常有些研究者将C57BL/6简称为C57，这样的叫法是非常不准确的。
由于不同亚系的基因背景和表型有很大的差别，这样的研究论文的价值也就不敢高估了。
这一期我们就来详细的了解一下我们的实验好伴侣“C57”系小鼠的大家族！
C57小鼠是实验动物小鼠中使用最广泛的品系之一，并不是指的某一特定的小鼠，而是指的一个亚系，即C57是源于艾比·拉特洛坡（Abby Lathrop，1868～1918）的鼠种第57号母鼠与雄性鼠近交繁殖和筛选的所有亚系小鼠，例如，C57L小鼠、C57BL/6小鼠、C57BL/6J小鼠、C57BL/6N小鼠、C57BL/10小鼠、C57BR小鼠。
C57母种鼠是黑色的，而在近交筛选中诞生的棕色（brown）小鼠分离培育出了C57BR。
因此，C57小鼠中，C57BR是棕色小鼠。
后来又从C57BR中进行近交筛选，得到了C57L小鼠，颜色为铅灰色。
所以，在C57小鼠中，除了C57BR和C57L两个亚系之外，其他亚系都是黑色。
C57BL6小鼠相关概述
C57BL6小鼠相关概述C57BL/6小鼠是最常用的实验动物之一，被广泛用于基因工程、药物研发、行为学研究、疾病模型建立等领域。
在科学界，C57BL/6小鼠被认为是标准的“黑色小鼠”，因为它们的毛发呈现黑色。
本文将对C57BL/6小鼠的背景资料、特点以及应用进行综述。
1.背景资料：C57BL/6小鼠最早于1921年由哈佛大学的出生研究所创造出来。
这个品系在国内外被广泛传承和使用。
C57BL/6小鼠的构建过程中特意选择了高度的近亲交配，以保证基因的稳定性和纯种性。
通过这样的处理，C57BL/6品系的基因组在几十年的选择中已经非常稳定，并且在全球范围内都具有高度的一致性。
2.特点：2.1生理特性：C57BL/6小鼠的体型中等，雄性体重大约为20-30克，雌性体重介于17-29克之间。
它们的寿命约为2-3年。
C57BL/6小鼠毛发黑色，眼睛呈深色，尾巴较长。
此外，C57BL/6小鼠的免疫系统较为发达，对病原体有较好的抵抗能力。
2.2行为特性：C57BL/6小鼠在行为学研究中被广泛应用，主要因为它们具有较好的学习和记忆能力。
C57BL/6小鼠对于空间导航任务和条件定位等任务具有较高的学习能力，对于识别新的环境和物体也有较强的能力。
此外，C57BL/6小鼠还具有一定的社会行为，如雌雄之间的交互和母仔之间的哺乳行为等。
2.3免疫特性：3.应用：3.1基因工程：3.2药物研发：3.3心血管研究：3.4肿瘤研究：总结起来，C57BL/6小鼠作为实验动物在科学研究中具有广泛的应用价值。
它们的基因组已经稳定、完全测序，并且具有较好的生理和行为特性。
因此，C57BL/6小鼠被广泛用于基因工程、药物研发、行为学研究、疾病模型建立等领域，为科学研究提供了重要的工具和平台。
实验室常用小鼠简介 (同济)
C
loxP
loxP PacI CAT MBD2
PacI
PCAG
Cre介导重组
loxP PacI MBD2
D
loxP PacI
PCAG
E
+
C A T
Tet-on表达系统
条件性基因敲除小鼠
Cre-loxP及FLP-FRT技术
Cre、FLP是重组酶，loxP、FRT是重组位点
图1: 诱导型平滑肌特异性敲除Dicer1基因的小鼠基因型。1A：Dicer1的蛋白质结 构,主要包含4个结构域，任一个结构域的缺失均能导致microRNA不能成熟；1B： 两侧包含loxP位点的Dicer基因结构图，两个同向loxP位于Dicer基因22号外显子的 两侧，该外显子对应于前一个 RNAIII结构域。在Cre重组酶的作用，可引起该外 显子的敲除。1C：他莫昔芬(tamoxifen)诱导的平滑肌特异性Cre转基因小鼠表达盒。 该表达盒包含平滑肌特异性SM22启动子，tamoxifen诱导表达的Cre重组酶基因及 SV40的poBXSB
4、诱导型系统性红斑狼疮小鼠 慢性移植物抗宿主
自身免疫性疾病模型
5、自发型类风湿性关节炎 SKG 小鼠 6、诱导型类风湿性关节炎 Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型，佐剂性关节炎( adjuvant arthritis， AA) 模型，其它诱导模型
7、诱导小鼠EAE；模拟人多发性硬化症/急性播散性脑脊髓炎。
转基因小鼠
靶标基因表 达盒DNA
条件性基因表达小鼠
PCAG loxP A
CAT
B
MBD2 cDNA
Cre-loxP系统
pCAG-CAT-X 7100bp PacI Amp HGH PA pBR322 ori
C57BL6小鼠相关概述
C57BL/6小鼠相关资料汇总于宇 201613698在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。
因此，小鼠被广泛应用于种类科研实验中，其用量最大，用途最广，而在近交系中更是以C57BL/6系列小鼠应用最为广泛。
C57BL系列小鼠是1921年C.C.Little用Lathrop小鼠作近亲培育时，用No.57雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。
在C57中将毛色呈黑色的进行固定，培育成的产物。
1937年Little将维持的C57BL第六组亚系定名为C57BL/6，将第十组亚系定名为C57BL/10，继而分别维持至今。
1947年从Little引入到美国Jackson Lab.，形成C57BL/6J;1951年从Jackson Lab.引到NIH，形成C57BL/6N亚系。
六十年代到日本实验动物中央研究所，1986年自日本实验动物中央研究所引入到中科院上海实验动物中心。
2001年从美国再次引种。
C57BL/6小鼠是不仅目前应用最广泛的近交系小鼠，同时也是第一个拥有其基因组测序的小鼠，该品系小鼠外部呈黑色，产仔率：89～95％平均窝产仔数：6.98～7.48只胎间隔：28～36天离乳存活率：87～93％,其遗传学组成通常为a/a,C/C:H-2b,Mup-1b,Ig-1b,T1ab (a/B/C/D/H-2b)，临床血液生理生化数据（见下表）主要应用于肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中，同时也是临床疾病模型制备的常用材料。
血液生理参数（56日龄，雄性）参数平均数标准差红细胞计数(RBC) 10.21 1E6/μL 0.472 1E6/μL红细胞体积(MCV) 47.2 fL 0.416 fL红细胞分布宽度(RDW) 13.08 %CV 0.282 %CV红细胞压积(HCT) 48.18 % 2.256 %血红蛋白含量(MCH) 14.25 pg 0.331 pg血红蛋白浓度(MCHC) 302.0 g/L 7.542 g/L白细胞计数(WBC) 6.17 1E3/μl 1.649 1E3/μl淋巴细胞(LY)百分比86.25 % 13.507 %血小板计数(PLT) 672.2 1E3/μl 113.722 1E3/μl血小板平均容积(MPV) 1.68 fL 0.22 fL血小板分布宽度16.79 % 0.758 %血液生理参数（56日龄，雌性）参数平均数标准差红细胞计数(RBC) 9.32 1E6/μL 1.331 1E6/μL红细胞体积(MCV) 48.12 fL 2.528 fL红细胞分布宽度(RDW) 13.48 %CV 1.049 %CV红细胞压积(HCT) 44.64 % 5.201 %血红蛋白含量(MCH) 14.92 pg 0.535 pg血红蛋白浓度(MCHC) 310.5 g/L 12.903 g/L白细胞计数(WBC) 5.23 1E3/μl 1.121 1E3/μl淋巴细胞(LY)百分比96.14% 1.79 %血小板计数(PLT) 613.5 1E3/μl 136.479 1E3/μl血小板平均容积(MPV) 2.01 fL 0.409 fL血小板分布宽度17.07 % 0.715 %血液生化参数（56日龄，雄性）参数平均数标准差Ca 1.17 mmol/L 0.06 mmol/LALT 25.0 U/L 26.87 U/LALP 64.2 U/L 11.98 U/LLDH 510.23 UI 143.31 UICRE 25.53 mmol/L 1.88 mmol/LBUN 4.69 mmol/L 0.77 mmol/LTP 27.93 g/L 2.17 g/LALB 18.6 g/L 1.1 g/LTG 0.99 mmol/L 0.12 mmol/L葡萄糖 1.54 mmol/L 0.37 mmol/L 血液生化参数（56日龄，雌性）参数平均数标准差Ca 1.14 mmol/L 0.05 mmol/LALT 18.6 U/L 8.87 U/LALP 77.6 U/L 32.25 U/LLDH 635.9 UI 424.39 UICRE 36.93 mmol/L 7.86 mmol/LBUN 4.58 mmol/L 0.6 mmol/LTP 27.41 g/L 2.11 g/LALB 19.09 g/L 1.38 g/LTG 0.95 mmol/L 0.49 mmol/L葡萄糖 1.96 mmol/L 0.88 mmol/L C57BL/6小鼠应用广泛的主要原因在于其具备的特殊生物特性①乳腺肿瘤自然发生率低，化学物质难以诱发乳腺和卵巢肿瘤。
诺如病毒特点、感染表现、感染发病机制及预防措施
诺如病毒特点、感染表现、染发病机制及预防措施诺如病毒属杯状病毒属，是引起急性非细菌性胃肠炎的重要病原体之一。
诺如病毒特点其致病力强、感染剂量低，仅18-100个病毒颗粒就可导致发病。
以肠道和呼吸道传播为主，也可通过水、食品、物品接触和气溶胶等途径传播，易在封闭、半封闭场所传播，引起暴发流行；海水贝类是公认引起 NoV 感染暴发的高风险食品。
经水传播可由桶装水、市政供水、井水等其他饮用水源被污染所致。
高发时间多为冬春季节，人们常把它称为冬季呕吐病。
全人群普遍易感。
诺如病毒经粪便排泄时间长，增加二次传播风险。
在环境中可存活较长时间，对消毒剂、冷冻、加热等均不敏感; 在60 ℃环境中 30 min 具有传染性，对酸稳定，在 pH2.7酸性环境中 3 h 仍可存活。
另外诺如病毒对乙醚不敏感，4 ℃下使用 20% 乙醚处理 18～24 h 后，仍具有传染性，酒精无法使其灭活，具有较强的变异性，人类缺乏对其长期免疫与交叉保护机制。
诺如病毒的潜伏期相对较短，通常12-48小时，粪便核酸扩增法是检测诺如病毒主要方法及金标准。
诺如病毒感染表现诺如病毒感染病例的病程通常较短，症状持续时间平均为2-3天，但高龄人群和伴有基础性疾病患者恢复较慢。
诺如病毒感染发病以轻症为主，最常见症状是腹泻（水样便）和呕吐，早期频繁呕吐较为典型，其次为恶心、腹痛、头痛、发热（发热时间一般不超过3 d，发热频次不如轮状病毒高，热峰也较低）、畏寒和肌肉酸痛、电解质紊乱等。
低龄儿童仍会发展成重症，甚至死亡，新生儿感染诺如病毒后，除出现与其他年龄组儿童同样的症状和体征外，还可能发生坏死性小肠结肠炎等严重并发症。
有部分患儿会出现无热惊厥、肝功能损害、心肌损害、上消化道出血；发病时血清肌酐水平升高和血糖水平异常与预后不良相关。
在脑炎/脑病亚型中，以急性脑病伴双白发作和后期弥散降低及出血性休克和脑病综合征多见。
诺如病毒感染发病机制诺如病毒发生感染时，可以在小肠上皮细胞内复制，上皮细胞分泌功能受损，小肠消化吸收面积减小，引起消化不良和腹泻。
鼠诺如病毒概述
鼠诺如病毒概述
田胜男;刘云波
【期刊名称】《中国比较医学杂志》
【年(卷),期】2013(23)7
【摘要】实验动物的质量与动物实验能否顺利进行关系非常密切.我国要求实验用SPF级小鼠必须排除的病毒有11种,尽管如此仍然会因为动物本身携带的微生物而干扰实验结果.鼠诺如病毒就是从意外死亡的实验小鼠中分离得到,免疫缺陷小鼠感染这种病毒后发生炎症反应甚至死亡.我国关于鼠诺如病毒的报道还比较少,其致病力及对实验研究的影响尚不完全清楚,也没有明确的感染情况调查.本文重点阐述了鼠诺如病毒的发现及危害、检测情况、病原特性和国内现状,并给出建议以便更好的了解MNV并控制该病毒的传播.
【总页数】4页(P68-71)
【作者】田胜男;刘云波
【作者单位】中国医学科学院实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,卫生部实验动物检测中心,北京,100021;中国医学科学院实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,卫生部实验动物检测中心,北京,100021
【正文语种】中文
【中图分类】R-332
【相关文献】
1.RT-PCR检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺如病毒 [J], 向丹丹;魏晓锋;胡建华;林金杏;高诚
2.鼠衰老模型的建模方法概述 [J], 孙凯;蒋伟文
3.鼠诺如病毒特性、免疫学及检测方法研究进展 [J], 高洁;贺争鸣
4.广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查 [J], 袁文;张钰;刘忠华;潘金春;王静;罗琴芳;黄韧
5.亚洲10国鼠科常见鼠种类、分布与鉴定概述 [J], 郑剑宁;周力沛;裘炯良;杨定波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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每天测量体温观察体表变化，收集粪便。感染后０
ｄ、３ ｄ、７ ｄ、７
ｄ和３０ ｄ采集血液，分离血清。感染后３
ｄ和３０ ｄ，分别处死高剂量组和低剂量组雌性
和雄性小鼠各一只，取心脏、肝脏、脾脏、胃、肾脏、食 管、小肠、大肠和肠系膜淋巴结等器官冻存于液氮 中，研究ＭＮＶ－ＣＷｌ的主要感染部位。解剖小鼠十 二指肠放人４％多聚甲醛中，用于病理切片研究。 对照组小鼠于感染后３０ ｄ处死。 １．５病毒ＲＮＡ检测
立的ＭＮＶ—ＣＷｌ感染Ｃ５７ＢＬ／６小鼠模型为ＭＮＶ感染小鼠致病机制进一步研究提供实验信息和技术
支撑。
【主题词】
鼠诺如病毒；小鼠；实验感染
基金项目：中国博士后科学基金（２０１５Ｍ５８０１４２）
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ
ＣＷＩ
ｏｆ
拷贝。
２．４小鼠组织中病毒分布情况感染后３
３０
ｄ、７ ｄ和
本研究选用的小鼠品系是Ｃ５７
ＢＬ／６。Ｃ５７ ＢＬ／
ｄ，分别处死高剂量组和低剂量组雌性和雄性小
６小鼠基因敲除后，广泛用于病原体致病机制研究。 对人类传染性疾病的研究经常借助于实验动物模 型。对鼠诺如病毒ＭＮＶ．ＣＷｌ感染Ｃ５７ＢＬ／６小鼠 的研究有利于对ＭＮＶ．ＣＷｌ致病机制进行深入 研究。 ４参考文献
２ ａｆｔｅｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ
ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｉｔ
ｍｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
ｆｕｒｔｈｅｒ
ａｎｉｍａｌ
ｍｏｄｅｌ ｏｆ ＭＮＶ．ＣＷｌ
ｗａｓ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｎｄ
ｗｉｌｌ ｐｒｏｖｉｄｅ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ．Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ ０１０１１０，Ｃｈｉｎａ（Ｗａｎｇ ＨＭ，Ｗａｎｇ Ｙ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｇａｏ Ｇｅｏｒｇｅ Ｆ．，Ｅｍａｉｌ：ｇａｏｆ＠ｉｍ．ａｃ．ｃｎ；Ｄｕａｎ Ｚｈａｏｊｕｎ，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｊｕｎｄ＠１ ２６．ｃｏｒｎ
诺如病毒（Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，ＮｏＶｓ）属于杯状病毒科
（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ），是全球急性胃肠炎散发病例
细菌感染的帮助下成功用Ｂ细胞培养成功…。缺 少成熟的体外复制体系和合适的小动物感染模型， 严重阻碍了ＮｏＶ致病机理等方面的研究。 根据基因特征，诺如病毒可分为６个基因群 （Ｇｅｎｏｇｒｏｕｐ，ＧＩ－ＧＶＩ），ＧＩ和ＧＩＩ是引起人类急性小肠。我们的研究表明主要在消化道和脾脏检 测到ＭＮＶ．ＣＷｌ。下一步研究还需要在小鼠感染 ＭＮＶ．ＣＷｌ病毒后第１天和第２天进行解剖，检测 病毒基因组负链ＲＮＡ在组织中的分布，以确定病毒 复制部位。
ｄ小鼠血清中的核酸，利用Ｒｅａｌ．ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测
ＭＮＶ．ＣＷｌ病毒ＲＮＡ，只有在第３天检测到一只雌 性小鼠血清中ＭＮＶ—ＣＷｌ阳性，含量为１．０４×１０４
［１］
Ｃｒｅｍｏｎ Ｃ，Ｄｅ Ｇｉｏｒｇｉｏ Ｒ，Ｂａｒｂａｒａ Ｇ．Ｎｏｒｏｖｉｒｎｓ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ
鼠各一只，取心脏、肝脏、脾脏、胃、肾脏、食管、小肠、 大肠和肠系膜淋巴结等器官，提取ＲＮＡ，检测ＭＮＶ． ＣＷｌ病毒ＲＮＡ，研究ＭＮＶ．ＣＷｌ的主要感染部位。 结果表明ＭＮＶ—ＣＷｌ主要感染部位为肝脏、脾脏、 胃、食管、小肠和肠系膜淋巴结等器官。 ２．５小鼠十二指肠病理分析感染后３ ｄ处死的 小鼠，解剖十二指肠，用于病理切片分析。结果分析 与正常小鼠十二指肠组织切片相比，感染小鼠十二 指肠组织切片没有明显的病理改变。 ３讨论 ＮｏＶｓ是严重危害人类健康的重要食源性病毒， 可导致不同年龄段人群的急性病毒性腹泻。对 ＮｏＶｓ的致病机制尚不是很明确。但是ＮｏＶｓ在体外 不能增值，而ＭＮＶ却可以在传代细胞小鼠巨噬细 胞系ＲＡＷ２６４．７细胞上生长并产生细胞病变，因此 ＭＮＶ成为了ＮｏＶｓ的替代病毒进行研究。ＭＮＶ在 实验动物中广泛传播，几乎所有的实验小鼠对此病 毒易感‘６１。本研究利用ＭＮＶ—ＣＷｌ感染Ｃ５７
ｏｒａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＮＶ－ＣＷｌ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｓ ｏｆ
ｃａｎｎｏｔ
ＰＦＵ ｐｅｒ ｍｏｕｓｅ．Ａｆｔｅｒ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ．ｗｅ
ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ＲＮＡ ｉｎ ｆｅｃｅｓ．ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｏｒｇａｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００３－９２７９．２０１６．０３．００２
【摘要】
目的
探讨鼠诺如病毒（Ｍｕｒｉｎｅ ｎｏｒｏｖｉｕｒｓ，ＭＮＶ）感染Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后Ｉ临床及生物学 将ＭＮＶ—ＣＷＩ毒株以高剂量（１０４ＰＦＵ／只）和低剂量（１０２ＰＦＵ／
特征，了解ＭＮＶ的感染特点。方法
（Ｖｉｒａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ
使用病毒核酸提取试剂盒
Ｋｉｔ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ＩＩ，Ｇｅｎｅａｉｄ）提取
粪便和血清中的病毒ＲＮＡ。利用匀浆机破碎组织， 使用试剂盒（ＲＮｅａｓｙ
Ｍｉｎｉ
实验动物７只７周龄ＳＰＦ级Ｃ５７ＢＬ／６雌性
Ｋｉｔ，ＱＩＡＧＥＮ）提取组织中
小鼠和７只８周龄雄性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，购自北京维 通利华实验动物技术有限公司［ＳＣＸＫ（京）２０１２— ０００１］。动物实验在中国疾病预防控制中心实验动 物中心生物安全二级实验室中进行。并通过了中国 疾病预防控制中心病毒病预防控制所实验动物伦理 委员会的审查（批准号：２０１５１１０４００３１）。 １．２病毒 ＭＮＶ－ＣＷｌ病毒由美国华盛顿大学医 ＩＶ教授馈赠。并在
和暴发疫情的主要致病原…。ＮｏＶ变异快，环境抵 抗力强，传播途径多样，全人群普遍易感，疾病负担 严重。ＮｏＶ很难在体外复制分离，仅有文献报道在
万方数据
肠炎的两个主要基因群，ＧＩＶ也可感染人，但很少被 检出。ＧＩＩＩ、ＧＶ和ＧＶｌ分别感染牛、鼠和狗。２００３ 年Ｋａｒｓｔ等人首次从免疫缺陷小鼠（ＲＡＧ／ＳＴＡＴ一／－） 体内分离得到鼠诺如病毒（Ｍｕｒｉｎｅ
ｍｕｒｉｎｅ ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ
Ｐａｎｇ
Ｌｉｌｉ，Ｊｉｎ Ｍｉａｏ。
Ｗａｎｇ Ｈｕｉｍｉｎ，Ｗａｎｇ Ｙｉｎｇ，Ｃｈｅｎ Ａｉｊｕｎ，Ｌｉ Ｈｕｉｙｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ Ｑｉｎｇ，Ｇａｏ Ｇｅｏｒｇｅ Ｆ．，Ｄｕａｎ Ｚｈａ巧ｕｎ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１０１，Ｃｈｉｎａ［Ｐａｎｇ ＬＬ（ｐｏｓｔ ｄｏｃｔｏｒ），Ｇａｏ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ＧＦ］：Ｎａｔｉｏｎａｌ
ｆｏｒ Ｖｉｒａｌ
Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｃｏｎｔｒｏｆ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ／ｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ
Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６，Ｃｈｉｎａ（Ｐａｎｇ ＬＬ，Ｊｉｎ Ｍ，Ｃｈｅｎ Ａ．，，ＬｉⅣｙ，Ｚｈａｎｇ Ｑ，Ｄｕａｎ ＺＪ）；Ｂａｓｉｃ
ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ，
鼠（包括６只雄性小鼠和６只雌性小鼠）分成两组： 高剂量组和低剂量组。将ＭＮＶ．ＣＷｌ毒株以高剂量 （１０４ＰＦＵ／只）和低剂量（１０２ＰＦＵ／只）分别灌胃到小 鼠体内；另外同等体积的ＰＢＳ灌胃到一只雄性和一 只雌性小鼠体内作为正常对照。 １．４样本处理 高剂量组和低剂量组小鼠感染后
Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ
ＲＡＷ２６４．７细胞中传代增殖，细胞病变显著，病毒经 反复冻融３次，低速离心后取上清，病毒滴度为
１０４ＴＣＩＤ５０／ｍｌ。
ＰＣＲ检
１．３动物分组和感染途径将１２只Ｃ５７ＢＬ／６小
测结果表明，高剂量组感染率达１００％，在感染后第
（
孟
图１
Ｆｉｇ．１
高剂量组 Ｈｉｇｈ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ
低剂量组
Ｌｏｗ ｄｏｓｅ ｇｒｏｕｐ
小鼠粪便检测ＭＮＶ．ＣＷｌ ＲＮＡ水平
ｄｐｉ：ｄａｙｓ
ｐｏｓｔ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｉｎ
ＲＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＮＶ・ＣＷｌ
ｆｅｃｅｓ ｏｆ Ｃ５７ ＢＬ／６
ｍｉ（‘ｅ
万方数据
空堡塞墅塑！鳖鏖题耋堂盘查！！！！生！旦箜垫鲞笙！塑
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主堡塞堕塑堕鏖瘟耋堂盘查垫！！生！旦箜ｉ！鲞筮！塑ｇ！也！！！』垦登！丛∑ｉ！！！！』！竖！！！！！∑！！：垫：塑！：！
・２６３・
．论著
鼠诺如病毒ＭＮＶ．ＣＷｌ感染Ｃ５７ ＢＬ／６小鼠的
特点
庞立丽
靳淼
王慧敏
王莹
陈爱琚
李慧颖
章青
高福
段招军
１００１０１北京，中国科学院微生物研究所［庞立丽（博士后）、高福］；１０２２０６北京，中国疾 病预防控制中心病毒病预防控制所（庞立丽、靳淼、陈爱琚、李慧颖、章青、段招军）； ０１０１１０呼和浩特，内蒙古医科大学（王慧敏、王莹） 通信作者：高福，Ｅｍａｉｌ：ｇａｏｆ＠ｉｍ．ａｃ．ｅｎ；段招军，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｊｕｎｄ＠１２６．ｃｏｎ
只）分别灌胃到Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内，建立ＭＮＶ感染小鼠模型。对感染小鼠进行体征观察和体温检 测，检测粪便和血液排毒情况、组织中病毒的分布情况以及十二指肠病理切片检查。结果 感染的
小鼠没有明显的体表变化，没有腹泻、发热等临床症状和病理改变。粪便检测感染后１—２ ｄ排毒。 在感染后第３天部分血液中检测到ＭＮＶ ＲＮＡ。主要感染部位为消化系统和脾脏。结论 本研究建
献报道１２９和ＣＤｌ小鼠感染ＭＮＶ一１
ｌ
ｄ后肝脏、脾
脏和小肠中检测到病毒ＲＮＡ，２～７ ｄ被清除¨’８｜。 这与我们的实验结果相符。ＮｏＶｓ病毒一般也是造 成急性自限性感染，以轻症为主，最常见的症状是腹 泻和呕吐，症状持续时间平均为２—３ ｄ，但高龄人群 和基础性疾病患者恢复较慢［９ ３。ＮｏＶｓ病毒复制主