生化制药-期末考试参考答案山东大学

山东大学，生化制药，期末考试答案一、名词解释1、核酸类药物：核酸类药物是指具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷、碱基以及它们的类似物和衍生物。

2、离心沉降系数：指单位离心力作用下粒子的沉降速度。

3、超滤：在一定压力下，使用一种特制的半透膜（不同分子量的截留膜）对混合物中不同分子进行选择性过滤而分离方法。

膜上的小分子物质可以通过，而大分子物质受阻截留在膜的表面。

4、盐析：向蛋白质溶液中加入大量盐使其达到一定浓度时，大量盐离子使水浓度相对降低，蛋白质的水化作用减弱，相互凝聚而沉淀出来，这就是盐析。

5、酶的比活力案：是指每笔克蛋白质酶单位的数目（units/mg）。

6、氨基酸输液：氨基酸输液是多种L-氨基酸按一定比例配制而成的静脉营养输注液。

此外还有依治疗要求配制的专用输液。

7、蛋白质的变性：在某些物别因素的作用下，蛋白质分子的空间构象发生改变或破坏，生物活性丧失和一些理化性质改变的现象，称为蛋白质的变性。

8、糖复合物：是由糖和其它化合物组成的复合物。

9、酶单位：又称酶活力单位，是指在一定条件下，使酶反应达到某一速度所需的酶量。

二、论述9、什么是蛋白质的沉淀？简述蛋白质沉淀的几种方法和条件答：蛋白质分子聚集而从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。

蛋白质沉淀反应是蛋白质提取、分离不可缺少的手段。

在蛋白质的沉淀反应中根据需要通过控制沉淀条件可以得到变性或不变性答的蛋白质。

蛋白质沉淀的方法：（1）中性蛋白质沉淀反应：在溶液中加入中性盐即正盐而使蛋白质沉淀的现象，称为盐析。

中性盐对于蛋白质的作用有两个方面。

低浓度的个性盐离子减少蛋白质分子之间静电引力，增加蛋白质和溶剂的相互作用力而增加溶解度，这一现象称为盐溶。

但随着中性盐浓度的增加，蛋白质表面的电荷大量被中和，最后破坏蛋白质表面的水化膜，促使蛋白质分子聚集而沉淀。

（2）有机溶剂沉淀反应：在蛋白质溶液中加入一定量的水溶性有机溶剂（如乙醇、丙酮），有机溶剂与水的相互作用使得蛋白质分子表面的水化膜厚度降低，蛋白质分子容易相互聚集而从溶液中沉淀析出。

优点在于：分辨率较盐析法高，沉淀物不必进行脱盐，可以直接挥干有机溶剂，简化操作。

但有机溶剂沉淀蛋白质有可能蛋白质变性，这取决于有机溶剂的浓度、有机溶剂与蛋白质接触的时间，以及沉淀时的温度等。

（3）加热沉淀反应：加热可以使大多数蛋白质变性沉淀，但在偏酸或偏碱的环境中加热虽然可以使蛋白质变性，却不一定沉淀。

对于热稳定的蛋白质或多肽，可以利用在杂蛋白等电点时加热的方法沉淀除去杂蛋白。

（4）金属盐沉淀反应；蛋白质比其等电点高的PH溶液中带负电荷，可与一些带正电荷的金属离形成不溶性蛋白盐复合物沉淀析出。

（5）生物碱试剂和某些酸类沉淀反应：蛋白质比其等电点低的PH溶液中带正电荷，可以于苦味酸、磷组酸、颗酸、磷钨酸、三氯醋酸、磺基水杨酸等试剂结合成不溶性复合物沉淀析出。

但蛋白质于生物碱试剂形成的复合物多为不可逆结合，因此用于制备活性蛋白质时应尽量采取较温和的条件，并加入一定量的稳定剂。

多肽由于分子较小，与生物碱试剂反应不易沉淀析出。

所以生物碱试剂常用于鉴定多肽制剂中是否含有蛋白质杂质。

向多肽溶液加入一定量的磺基水杨酸，不应出现浑浊，否则多肽纯度不合格。

10、试述糖胺聚糖的提取方法和原理正确答案：（1）非降解法：非降解法是指用水或盐溶液从动物组织中提取粘多糖的方法。

此法适用于与其他组织结构联接不牢固的粘多糖或其蛋白复合物的提取，如从玻璃体、脐带、关节泪液中提取玻答璃酸。

用本法提取的粘多糖仍结合有蛋白质，需用酶解等方法去除。

（2）降解法，分为碱处理法与酶处理法：①碱处理法：用碱处理的方法可以从组织中对粘多糖进行较完全的提取。

此法的缺点是，粘多糖分子有从裂解的一端被碱进一步降解的可能。

所以如果希望药物成分在特定的范围内保持分子完整，则不宜用此法，或尽可能地使用稀碱并避免高温。

为了避免在碱处理时可能发生的一些糖苷键的断裂，用碱提取可以在硼氢化物存在下进行，硼氢化物可使木糖残基还原为木糖醇，因而能成功地阻止进一步降解。

②酶处理法：用蛋白酶消化，是常用的从组织中释出粘多糖的方法之一。

通常选用专一性低的蛋白酶，以进行广泛的蛋白质水解。

常用的有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶、魔蛋白酶等。

从组织中释出粘多糖，有时选用含有多种酶类的混合酶更具有优越性。

如用胰酶或胰脏，它们含有胰蛋白酶、魔蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等多种酶类，不仅具有水解蛋白质的广谱性，而且还可水解脂肪使提取易于操作，水解糖原等以减轻对粘多糖的污染。

11、试述基因治疗的策略正确答案：（1）离体基因治疗：将目的基因在体外导入自体或异体来源的肿瘤细胞或其它细胞，再将这些修饰过的靶细胞转入体内。

（2）原位基因治疗：将目的基因载体直接注射或导入体内的肿瘤组织，进行局部治疗，这也是最主要的方法。

（3）体内基因治疗：将目的基因载体注射到血液系统进行全身治疗。

12、试述低分子肝素的药理作用正确LMWH主要通过亲和于AT-|和肝素辅因子Ⅱ而发挥抗血栓作用。

AT-l可抑制活化的凝血因子，包括凝血酶、凝血因子Xa、IXa、Xla和Xa，主要是抑制凝血酶和因子Xa。

LMWH作为催化答剂，可使凝血酶与AT-ll复合物以及凝血酶与因子Xa 复合物的形成速率提高约1000倍。

这种抗Xa因子作用与体内抗栓形成作用密切相关。

此外，LMWH可以促进释放纤维蛋白溶酶原激活剂案：和缩短优球蛋白溶解时间，并能促进释放脂蛋白脂酶（LPL）和肝三酰甘油脂酶（HTGL）。

LMWH皮下注射2~3h后达血浆峰浓度，半衰期约4h，比UFH长1倍.LMWH的生物利用度约90%。

而UFH仅约20%。

LMWH的这些特征，使之每日只需皮下注射1次，可作为长程预防治疗。

然而必须注意，不同方法生产的LMWH具有不同的药理特征，不同产品应作不同试验。

13、试述糖胺聚糖的纯化方法正确答案：（1）乙醇沉淀用乙醇沉淀是一种从溶液中定量回收糖胺聚糖的简单方法，由于不同性质或不问分于量的糖胺聚糖沉淀所需乙醇浓度不同，它同样也可用于样品中不同糖胺聚糖组分的分级分离。

（2）季铵化合物沉淀糖胶聚糖的聚阴离子与某些表面活性物质，如十六烷基三甲基溴化铵等能形成季铵络合物，这些络合物在低离子强度的水溶液中不溶解。

在离子强度大时，这种络合物可以解离并溶解。

不同的糖胶聚糖聚阴离于电荷密度不同，使其络合物溶解时所需盐的浓度也不同，因而可用于进行分级分离。

降低PH值以抑制羧基的电离，硫酸化粘多搪沉淀的选择性可增强。

季铵化合物除了在糖胺聚糖的分级分离中有应用价值外，还用于从组织消化液和其他溶液中回收糖胶聚糖。

由于生成的络合物溶解度低，可用于0.01%或更稀溶液中的糖胶聚糖回收。

（3）离子交换层析糖胺聚糖由于具有酸性基因如糖醛酸羧基和各种硫酸基，在溶液中以聚阴离子的形式存在，因而可用阴离子交换剂进行交换吸附。

可选用的阴离子交换树脂有D-254、Dowex1×2、DEAE-纤维素、DEAE-Sephadex A-25等。

（4）凝胶过滤分离根据糖胶聚糖分子量大小不同，可选用合适的分子筛，如葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等进行分级分离。

其中最常用的是葡聚糖凝胶，例如用SePhadex G-75分级分离低分子肝（5）超滤分离利用超滤进行分级分离也是基于糖胶聚糖分子旦大小的不同。

可根据需要，选用具有合适的分子量截留值的膜。

这种方法的优点是适用于大规模的生产，并可使存在于截留液中的糖胶聚糖得到浓缩和除去小分子杂质。

三、简答14、蛋白质的颜色反应有哪些？正确答案：（1）茚三酮反应，蛋白质和茚三酮混合加热，反应呈现蓝紫色。

（2）双缩脲反应，蛋白质在碱性溶液中可与Cu2+产生紫红色反应。

（3）酚试剂反应，在碱性条件下蛋白质分子中的酪氨酸可与酚试剂反应呈现蓝色。

15、简述有机溶剂分级沉淀的基本原理正确答案：加入有机溶剂一是降低了溶液的介电常数，使物质的溶解度降低；二是破坏了两性电解质的水化膜，从而产生沉淀。

16、稳定蛋白质胶体的因素有哪些？正确答案：稳定蛋白质腋休的因素有二：一是蛋白质表面所带相同电荷之间相互排斥，不易凝聚成团而沉淀；二是蛋白质表面形成的水化膜，它使胶体颗粒与水融治相处，又在胶体颗粒间起到隔离作案：用。

如果两个因素全部被破坏，则蛋白质将从溶液个沉淀析出。

17、简述凝胶层析法测定分子量的原理正确答案：根据公式原理，用已知分子量的标准品经凝胶层析柱分离获得不同的洗脱体积，用分子量与洗脱体积作图，将待测物质的洗脱体积从曲线图上或通过公式即可计算出分子量的大小。

（也案：可不用公式，而用语言描述）。

18、定磷法测定RNA含量的原理是什么？正确答案：此法首先必须将RNA中的磷水解成无机磷。

常用浓硫酸或过氯酸将RNA消化，使其中的磷转变成正磷酸。

正磷酸在酸性条件下于铝酸作用生成磷钼酸，后者在还原剂（如抗坏血酸、a-1，2，4-氨基素酚磺酸或氧化亚锡等）存在下，立即还原成钼蓝。

钼蓝的最大光吸收在660nm处，在一定浓度范围内，溶液在该处的光密度和磷的含量成正比，从而可通过测光吸收度，用标准曲线案：算出样品的含磷量。

根据对RNA和DNA的分析，已知前者的磷含量为9.4%，后者的为9.9%，于是可从磷含量推算出核酸的含量。

19、蛋白质结合上带正电荷的金属离子后其等电点向什么方向偏移？为什么？正确答案：蛋白质的带电质点与阳离子或阴离子结合后其pl发生偏移，结合较多的阳离子（如Mg2+、Ca2+、Zn2+等），则等电点向较高的pH值偏移。

因结合阳离子后相对的正电荷增多了，只有：pH升高后才能达到等电状态。

20、简述胆汁酸的生理功能正确答案：（1）促进脂类的消化吸收作为乳化剂，体内胆汁酸以胆盐形式存在，胆盐分子的一端是极性的羧基或磺酸基，另一端则为非极性的甾醇环，是一种乳化剂，可在脂肪和水之间形成中间单分子答层，使脂肪与水的界面张力降低，而将脂肪乳化为微粒，分散于水相中，从而增加脂肪在小肠中与脂肪酶的接触面积，使消化作用容易进行。

一部分高度乳化的脂肪微粒，可以直接由肠粘膜案：吸收。

（2）抑制胆汁中胆固醇的析出。