琼脂糖凝胶电泳实验

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DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤

DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤

DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤DNA的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术,用于分析DNA 的大小和纯度,以及进行DNA分子的分离和纯化。

凝胶电泳实验可以帮助我们确定DNA样本的大小和获得纯化的DNA片段供进一步研究使用。

下面是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的原理和操作步骤。

【原理】DNA琼脂糖凝胶电泳是根据DNA分子在电场中的不同迁移速率来分离大小不同的DNA片段。

琼脂糖凝胶是一种凝胶状物质,其孔隙大小能够将DNA分子限制在一定范围内,较大的DNA分子迁移速率较慢,而较小的DNA分子迁移速率较快。

琼脂糖凝胶通常是在平均浓度为1%至2%之间的范围内制备,以便在不同大小的DNA分子之间提供适当的分辨率。

实验中,DNA样品通过切割酶或PCR等方法获得,样品经过核酸电泳缓冲液稀释,并在琼脂糖凝胶板上进行电泳。

凝胶板两侧连接电源,DNA 的带电粒子将在电场的作用下从负极迁移到正极,迁移过程中形成DNA的“条带”,条带的位置和长度反映了DNA的大小。

通常,DNA条带由荧光染料或核酸染料标记,以便在电泳结束后进行可视化。

【操作步骤】以下是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的一般操作步骤:1.制备琼脂糖凝胶板:a.准备琼脂糖粉末和核酸电泳缓冲液(通常为TAE或TBE缓冲液)。

b.按照说明书将琼脂糖粉末溶解于核酸电泳缓冲液中。

c.将溶液加热至沸腾并搅拌,使琼脂糖完全溶解。

d.将溶液倒入预先准备好的电泳仓中,插入梳子或制备好的孔板,使其凝固。

2.样品制备:a.提取DNA样品并测定其浓度。

b. 将DNA样品稀释到适当浓度,通常为10-50 ng/μL。

c. 添加适当的加载缓冲液,通常是一些染料和甘胺酸(glycine)或其他添加剂。

3.DNA加载和电泳:a.打开琼脂糖凝胶仓盖,将DNA样品负载于凝胶孔内。

b.将DNA负载区域和样品标注在电泳仓中,以便在电泳结束后可以准确识别DNA带。

c.关闭盖子,将电泳仓放入电泳设备中。

琼脂糖凝胶电泳-完整整理

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基因组分析
分子诊断
用于分离和鉴定基因组DNA片段,如限制 性片段长度多态性分析、基因突变检测等 。
用于检测和鉴定基因突变、病原微生物DNA 等,如聚合酶链式反应(PCR)产物电泳、 单链构象多态性分析等。
基因克隆
测序
用于分离和纯化目的基模板,如末端测 序、全基因组测序等。
达差异。
04 琼脂糖凝胶电泳实验问题 与解决
常见问题
条带弥散
由于点样量过多或电压过高,导致条带弥散。
条带过宽
由于凝胶浓度不合适或样品浓度过高,导致 条带过宽。
条带拖尾
样品中蛋白质降解或核酸酶污染,导致条带 拖尾。
条带不亮
由于染料浓度过低或曝光时间过短,导致条 带不亮。
问题分析
条带弥散
可能是由于点样量过多或电压过高, 导致DNA在凝胶中扩散。
琼脂糖凝胶电泳-完 整整理
目录
CONTENTS
• 琼脂糖凝胶电泳介绍 • 琼脂糖凝胶电泳实验操作 • 琼脂糖凝胶电泳结果分析 • 琼脂糖凝胶电泳实验问题与解决 •凝胶电泳的定义
01
琼脂糖凝胶电泳是指在琼脂糖凝 胶中进行的电泳技术,主要用于 分离、鉴定和纯化DNA片段。
浓度比较
通过条带亮度,比较不同 样品中目标DNA片段的浓 度。
纯度评估
根据条带的亮度与背景噪 音的比例,评估DNA片段 的纯度。
结果应用
基因克隆
01
通过琼脂糖凝胶电泳检测目的基因是否被正确克隆到载体中。
突变分析
02
利用电泳结果判断是否存在基因突变或点突变。
基因表达分析
03
通过比较不同组织或细胞系中目的基因的表达水平,分析其表
01
条带分析

琼脂糖凝胶电泳实验报告

琼脂糖凝胶电泳实验报告

琼脂糖凝胶电泳实验报告引言琼脂糖凝胶电泳是一种重要的实验技术,广泛应用于生物学、医学、食品科学等领域。

本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的原理、实验步骤和结果分析,并探讨其在蛋白质分离与分析中的应用。

正文一、原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于电荷与尺寸的分离技术。

琼脂糖是一种天然多糖,在适当条件下能形成渗透性较小的凝胶状。

当电场施加在凝胶上时,电荷带负的样品分子会被推向正电极,电荷带正的样品分子则被推向负电极,从而实现了分离。

二、实验步骤1. 准备样品:将待分离的蛋白质样品加入一定体积的载体溶液中,混合均匀。

2. 制备琼脂糖凝胶:根据需要分离的蛋白质的大小范围选择不同浓度的琼脂糖制备凝胶。

3. 装置电泳槽:将琼脂糖凝胶放置在电泳槽中,注入足够的电泳缓冲液,以确保电泳过程中的稳定性。

4. 分析样品:将样品加入琼脂糖凝胶槽中的孔上,并施加适当电压,使样品分子在凝胶中迁移。

5. 染色与可视化:电泳结束后,可以使用染料对凝胶进行染色,以可视化待分析的蛋白质条带。

6. 结果分析:根据蛋白质条带的迁移距离和形态,进行结果的解读和分析。

三、实验结果在本次实验中,我们使用琼脂糖凝胶电泳技术分离了不同分子量的蛋白质样品。

结果显示,随着样品分子量的增大,迁移距离逐渐增加,形成了不同大小的蛋白质条带。

通过与已知分子量的标准品进行对比,我们可以确定待分析样品的分子量范围。

四、讨论与应用琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术,在蛋白质分离与分析中具有广泛的应用。

它可以用于研究蛋白质的结构、功能和相互作用关系。

同时,琼脂糖凝胶电泳还可以检测蛋白质的表达水平和纯度,并在生物医药领域中寻找新药靶点、分析疾病标志物等方面起到重要作用。

然而,琼脂糖凝胶电泳也存在一些局限性,如无法分离分子量较大的蛋白质,分辨率相对较低等。

因此,研究人员在分离与分析蛋白质时还需综合考虑实验目的和样本特点,选择合适的方法和技术。

总结琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离与分析蛋白质的技术。

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳
4 Goodview有毒,切勿用手接触,更不要污染环境, 胶勿乱扔
5 紫外线照射不要太久
六 作业
➢ 画出电泳图,分析观察到的结果
3 电泳:电压3-5V/cm,约80-90V,注意电极方向 4 观察:紫外透射分析仪下观察,时间不要太久
五 注意事项
1 倒胶时把握好胶的温度,不要高于60℃ ,否则温度 太高会使制板变形
2 胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上, 不要弄坏点样孔
3 点样时枪头下伸,点样孔内不能有气泡,缓冲液不 要太多
琼脂糖凝胶电泳
一 实验目的
➢ 学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 ➢ 检测水稻总DNA的纯度与分子量 ➢ 检测PCR的结果
3 点样时枪头下伸,点样孔内不能有气泡,缓冲液不要太多 3 电泳:电压3-5V/cm,约80-90V,注意电极方向 4 Goodview有毒,切勿用手接触,更不要污染环境,胶勿乱扔 4 观察:紫外透射分析仪下观察,时间不要太久 3 电泳:电压3-5V/cm,约80-90V,注意电极方向 2 胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上,不要弄坏点样孔 3 点样时枪头下伸,点样孔内不能有气泡,缓冲液不要太多 4 Goodview有毒,切勿用手接触,更不要污染环境,胶勿乱扔 2 胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上,不要弄坏点样孔 5 紫外线照射不要太久 5μl水稻总DNA+1μ2 loading buffer=7μl 1 倒胶时把握好胶的温度,不要高于60℃ ,否则温度太高会使制板变形 5 紫外线照射不要太久 检测水稻总DNA的纯度与分子量
100ml(43;3μl loading buffer,混匀,吸取10μl 4 Goodview有毒,切勿用手接触,更不要污染环境,胶勿乱扔 4 观察:紫外透射分析仪下观察,时间不要太久 2 胶一定要凝固好才能拔梳子,方向一定要竖直向上,不要弄坏点样孔 PCR产物+3μl loading buffer,混匀,吸取10μl 3 点样时枪头下伸,点样孔内不能有气泡,缓冲液不要太多 3 电泳:电压3-5V/cm,约80-90V,注意电极方向 8g琼脂糖 三角瓶(1/3) 煮胶 溶解,冷却至60℃(不烫手),加Goodview,倒板(4-6mm),室温下充分凝固,竖直拔下梳子 5μl水稻总DNA+1μ2 loading buffer=7μl 检测水稻总DNA的纯度与分子量 10μl ⅢMark DNA(λ DNA-HindⅢ ) 4 观察:紫外透射分析仪下观察,时间不要太久 5 紫外线照射不要太久 3 电泳:电压3-5V/cm,约80-90V,注意电极方向

dna琼脂糖凝胶电泳实验报告

dna琼脂糖凝胶电泳实验报告

dna琼脂糖凝胶电泳实验报告DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告引言:DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学实验技术,用于分离和分析DNA 分子。

本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术,对DNA分子进行分离和鉴定,以便更好地了解DNA的结构和功能。

实验材料和方法:实验所需的材料包括琼脂糖凝胶、DNA标准品、DNA样品、缓冲液和电泳仪等。

首先,我们制备了琼脂糖凝胶,然后将DNA标准品和待测DNA样品与DNA加载缓冲液混合。

接下来,将混合液注入琼脂糖凝胶槽中,并进行电泳。

实验结果:经过电泳后,我们观察到琼脂糖凝胶上出现了一系列DNA条带。

根据标准品的条带迁移距离,我们可以推断出待测DNA样品的分子大小。

通过比较待测样品与标准品的条带迁移距离,我们可以进一步确定待测样品中的DNA分子的大小。

讨论:琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA分子大小的分离技术。

在琼脂糖凝胶中,DNA 分子会受到凝胶孔隙的阻碍,较大的DNA分子迁移速度较慢,而较小的DNA分子则迁移速度较快。

通过测量DNA分子的迁移距离,我们可以推断出其分子大小。

在实验中,我们使用了DNA标准品作为参照物,通过标准品的迁移距离,我们可以建立一个标准曲线,从而对待测样品中的DNA分子大小进行估计。

这种方法可以应用于DNA样品的定性和定量分析。

需要注意的是,琼脂糖凝胶电泳实验的结果受到多种因素的影响,如琼脂糖凝胶浓度、电场强度和电泳时间等。

因此,在进行实验时,我们需要控制这些因素,以确保实验结果的准确性和可靠性。

结论:通过DNA琼脂糖凝胶电泳实验,我们成功地分离和鉴定了DNA分子。

这项实验为我们进一步研究DNA的结构和功能提供了基础。

同时,琼脂糖凝胶电泳技术也广泛应用于生物医学研究、法医学和遗传学等领域,为科学研究和医学诊断提供了重要的工具和方法。

总结:DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离和鉴定技术。

通过电泳实验,我们可以分离不同大小的DNA分子,并通过测量其迁移距离来推断其分子大小。

琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法

琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法

琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法[实验原理]电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。

包含电解质的多孔支持介质----“胶”并把它置于静电场中。

则DNA分子将向阳极移动,这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基。

当DNA长度增加时,来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之间的比率就会降低,不同长度的DNA片段就会表现出不同的迁移率。

因而就可依据DNA分子的大小来使其分离。

该过程通过把示踪染料(Purple Loading Dye)或分子量标准参照物(Ladder)和样品(DNA&RNA)一起进行电泳而得到检测。

分子量标准参照物也可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。

琼脂糖凝胶适用于分离大小在0.2-50Kb范围内的DNA片段。

[实验用品]1.琼脂糖 1.0%1.0g琼脂糖+100ml电泳缓冲液(TAE),微波炉中火30秒至沸腾,熔化的琼脂物冷却至60℃时可加入10mg/ml溴化乙锭10μl,充分混匀,将温热的凝胶倒入已置好梳子(鉴定胶用细密点的梳子;回收胶用粗稀的梳子)的胶膜中在室温下放置30-45min后现进行电泳。

1.5%:琼脂糖1.5g。

2.电泳缓冲液50×TAE Tris 乙酸 Tris 242g 终2 mol/L乙酸57.1ml 终1mol/L0.5M EDTA200ml pH8.0 终100mmol/LdH2O 补足至1000ml使用时稀释1×TAE。

5×TBE Tris 硼酸 Tris 54g 终445mmol/L硼酸27.5g 终445mmol/L0.5M EDTA20ml pH8.0 终10mmol/LdH2O 补足至1000ml使用时稀释10倍成0.5倍如50ml贮存液+450ml水→500ml工作液。

[实验内容与方法]1.移取适量的琼脂糖(如制备1%的琼脂糖胶液就移1g的琼脂糖溶于100ml TAE缓冲液中)微波炉加热使其溶于TAE缓冲液中。

实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法

实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法

实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法实验琼脂糖凝胶电泳(Agarose gel electrophoresis)是一种常用的分离DNA和RNA分子的技术。

它基于琼脂糖凝胶电泳原理,利用琼脂糖凝胶的孔隙大小和电泳电场的力对DNA和RNA分子进行分离。

琼脂糖是一种高分子多糖,当加热溶解后冷却凝固时,形成一个多孔的凝胶网络。

这个凝胶网络中的孔隙大小是可以调控的,通过改变琼脂糖的浓度可以得到不同孔隙大小的凝胶。

1.制备琼脂糖凝胶:按照实验需要,称取适量琼脂糖加入缓冲液中,搅拌使其溶解,然后加热至溶解。

等溶液冷却至约50℃时,在一个电泳板间夹两块玻璃片或塑料片,将琼脂糖凝胶溶液倒入电泳板中,并将梳子插入凝胶中,让凝胶固化。

2.样品制备:将要检测的DNA或RNA分子提取和纯化,并用缓冲液稀释合适浓度。

添加适量的DNA荧光染料或核酸染色剂,使其在紫外光下可见。

3.样品加载:将样品加入琼脂糖凝胶的凝胶孔口中,注意不要将样品推到凝胶中。

4.电泳分离:将凝胶板放入电泳槽中,加入适量缓冲液,注意保证电泳液中缓冲液位置高于凝胶。

然后将负极电极和正极电极分别连接到电泳槽的两端,开启电源,施加适当电压使DNA或RNA分子在电场力的作用下进行电泳分离。

5.染色和可视化:电泳结束后,取出凝胶板,并用染色剂对DNA或RNA分子进行染色。

染色剂与DNA或RNA结合后,用紫外光照射凝胶,通过相应设备观察凝胶上的条带形成。

实验琼脂糖凝胶电泳的原理是基于DNA和RNA分子在电场下按照大小进行分离的特性。

在电场作用下,DNA或RNA分子荷负性被引向正极(阴极)方向移动。

琼脂糖凝胶的孔隙大小可以根据需要调控,大分子难以通过,小分子易于通过。

因此,DNA或RNA分子根据其大小不同,通过孔隙大小的限制,从而形成条带,完成了对DNA或RNA的分离。

琼脂凝胶实验报告

琼脂凝胶实验报告

实验名称:DNA琼脂糖凝胶电泳实验日期:2023年10月25日实验目的:1. 学习并掌握DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作步骤。

2. 通过电泳分离不同分子量的DNA片段,观察并分析实验结果。

3. 了解DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移规律,并探讨影响迁移速度的因素。

实验原理:DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术,用于分离、鉴定和定量DNA片段。

DNA分子在电场中带有负电荷,在琼脂糖凝胶的筛分作用下,根据分子大小和构型不同,迁移速度不同,从而实现分离。

溴化乙锭(EB)作为一种荧光染料,可以嵌入DNA分子中,在紫外光照射下发出橙红色荧光,便于观察DNA片段的位置和大小。

实验材料与仪器:- 仪器:电泳仪、紫外检测仪、水平电泳槽、移液器、一次性手套等。

- 试剂:琼脂糖、EB溶液、Tris-硼酸-EDTA缓冲液、加样缓冲液等。

- 材料:分子量不同的DNA片段。

实验步骤:1. 琼脂糖凝胶的制备:- 称取1g琼脂糖,加入10ml电泳缓冲液,再加入90ml蒸馏水,在电炉上加热溶解,配制成1%琼脂糖凝胶。

- 待凝胶冷却至60-70℃时,加入数滴EB溶液,混匀。

2. DNA样品的制备:- 将DNA片段用Tris-硼酸-EDTA缓冲液稀释至适当浓度。

3. 加样:- 将制备好的琼脂糖凝胶倒入电泳槽中,插入电泳梳子。

- 使用移液器将DNA样品加至凝胶孔中。

4. 电泳:- 将电泳槽放入电泳仪中,设定合适的电压和时间进行电泳。

5. 观察与分析:- 电泳完成后,取出凝胶,用紫外检测仪观察DNA片段的迁移情况。

- 比较不同分子量DNA片段的迁移速度,分析实验结果。

实验结果:- 通过电泳观察到,不同分子量的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移速度不同,分子量越小,迁移速度越快。

- EB染料嵌入DNA分子后,在紫外光照射下呈现橙红色荧光,便于观察DNA片段的位置和大小。

讨论:1. 影响DNA分子迁移速度的因素主要有:分子大小、构型、电场强度、凝胶浓度等。

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琼脂糖凝胶电泳实验技巧
核酸分子是两性解离分子,在高于其等电点的电泳缓冲液中,基其碱基不解离,而磷酸基团全部解离,核酸分子因而带负电荷,电泳时向正极迁移。

琼脂糖主要多海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰,为一种聚合链线性分了,使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质,发挥分子筛功能,使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异,从而达到分离的目的。

琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速、通过调整其使用浓度,使得分辨率达到大多实验的要求。

因此成为分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。

一、操作过程中要注意以下一些问题。

1、凝胶制作
凝胶浓度
凝胶的浓度据实验需要而变,一般在%%之间,没有用完的凝胶可以再次融化,但随着融化次数的增加,水分丢失也越多,凝胶浓度则会越来越高,导致实验结果不稳定。

补水办法:一是在容器上标记煮胶前的刻度,煮胶后补充水分到原刻度;二是在煮胶前称重,煮胶后补充水至原重量。

粗略一点的办法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值,以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。

如果条带要回收最好不要用回收胶。

梳板的选用
一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板。

梳齿宽厚,形成的点样孔容积较大,用于DNA片段回收实验等;相反,梳齿窄而薄,形成的点样孔容积就较小,用于PCR产物、酶切产物鉴定等。

回收的话还可以将几个齿用透明胶带粘起来,形成一个窄而长的大孔以加大点样量提高回收率。

梳板的选择主要是看上样量的多少而定。

一般来说,上样量小时尽量选择薄的梳板制胶,此时电泳条带致密清晰,便于结果分析。

另外,每次制胶时都要注意梳齿与底板的距离至少要
1mm,否则,拔梳板时易损坏凝胶孔底层,导致点样后样品渗漏。

当然,点样孔的破坏还与拔梳板的时间和方法有关,一般凝胶需冷却30min以上方可拔出梳板,应急的情况下可以将成型的凝胶块入4度冰箱中冷却15min左右,拔梳板的方法是将制胶槽放置在电泳槽中的电泳缓冲液中,然后垂直向上慢慢用力,因为有液体的润滑作用,梳板易拔出且不易损坏点样孔。

2、点样
在样品加入上样缓冲液中含有甘油或蔗糖以增加密度,使样品沉入孔底;上样缓冲液中一般还含有两种指示剂,溴酚兰和二甲苯菁,用于指示样吕的迁移过程。

上样缓冲液储存液一般为6倍(10倍),表示其浓度为工作浓度的六倍。

使用时上样缓冲液应稀释到一倍浓度。

点样方法是将移液枪基本垂直对准点样孔,用另一只手帮助固定移液枪下端,移液枪的枪头尖端进入点样孔即可将样品注入孔内。

上样量的多少根据跑胶的目的而不同,一般直接跑DNA时量最少,跑一般的分子标记适中,回收时可以都加进去。

最后根据扩增条带的大小点上适合的DNA Maker。

3、电泳
将电泳仪的正极与电泳槽的正极相连,负极与负极相连,每次电泳时都要检查一下电极方向,以免白干(新手来做时可能就有这样的情况发生)。

核酸带负电荷,从负极向正极移动。

电泳槽中电泳缓冲液与制胶用电泳缓冲液应相同,电泳缓冲液刚好浸过胶为好。

电泳缓冲液浓度太大则电流加大,凝胶发热,易使DNA降解。

电泳早所加电压一般不超过5v/cm(正负电极之间的距离,而不是凝胶的长度)。

电泳时间一般为30-60min,根据实验需要也可作适当调整。

电压增高,电泳时间缩短,核酸条带相对来说不够整齐,不够清晰;相反,电压降低,电泳时间较长,条带会相对的清晰。

另外,如果电泳后样品泳支很慢或者没移动可能是由于挡板没有拿开。

附 EB作用原理:观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。

它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。

在高离子强度的饱和溶液中,大约每个碱基插入一个溴化乙锭分子。

当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。

这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。

DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。

这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。

由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA
的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(ml)时,可以检测到少至10ng的NDA条带。

DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。

聚丙烯酰氨(PAGE)凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离。

电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。

蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。

蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视。

所以相同点就是样品都是带负电荷的,从负极向正极移动,移动的距离都和样品的分子量有关。

而且这两个电泳体系可以互相交换使用。

进行大分子蛋白质电泳时,可以考虑换用琼脂糖凝胶,因为该体系孔径大。

相反,如果需要精确到各位数碱基的DNA电泳也可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统,因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA链分开。

不同点首先是样品不同。

这个就不用多说了。

其次是结果的观察方法不同。

DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察;而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单。

还有就是胶体系的差别,DNA电泳通常是一胶跑到底,而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。

电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。

但是,区分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数,是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。

以DNA分子为例,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的,所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。

而且,DNA分子中核苷酸的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。

这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。

这在蛋白电泳中(特别是SDS-PAGE中)是一样的。

在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了。

至于为什么核酸的横着跑,蛋白竖着跑,个人认为最大的问题是蛋白制胶的过程导致的。

蛋白制胶由于使用了两种不同的凝胶系统,所以需要一个水平的分界面。

这个分界面在配胶的过程中是依靠异丙醇在重力作用下的压力下形成的。

所以,一并就竖着跑了~~
电泳是指混悬于溶液中的样品(有机的或无机的,有生命的或无生命的)电荷颗粒,在电场影响下向着与自身带相反电荷的电极移动的现象。

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