应用斐林试剂与碘液时的几点注意问题
关于斐林试剂的几点思考
关于斐林试剂的几点思考江苏省兴化中学（225700）王健［摘要］以“生物组织中的还原糖检测”实验为例，围绕斐林试剂的主要成分、作用原理及其使用方法等展开讨论，旨在帮助学生更好地完成还原糖检测的实验。
［关键词］斐林试剂；还原糖；检测［中图分类号］G633.91［文献标识码］A［文章编号］1674-6058（2019）05-0096-01人教版高中生物必修1第一章的“生物组织中的还原糖检测”实验，主要是利用斐林试剂来检测生物组织中的还原糖，实验结果中产生砖红色沉淀证明有还原糖产生。
本实验要能取得成功，需充分了解斐林试剂的相关内容。
对此，笔者有以下几点思考。
一、斐林试剂是含有Cu2+的碱性溶液人教版高中生物必修1第18页中提到，斐林试剂是由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05 g/mL的CuSO4溶液等量混合配制而成。
等量混合均匀是否意味着刚好完全反应？由反应式2NaOH+CuS04= Na2S04+Cu（OH）2↓计算可知，当完全反应时，CuS04与NaOH的质量比应该是2∶1，实际上CuS04与NaOH的质量比为1∶2，NaOH过量3倍，故推测斐林试剂是碱性溶液［1］。
又因为斐林试剂的本质是新配制的Cu（OH）2悬浊液，Cu（OH）2是弱电解质，在水溶液中存在着如下沉淀溶解平衡：Cu（OH）2（s）⇌Cu2+（aq）+2OH-（aq），故推测斐林试剂中含有Cu2+。
“斐林试剂是含有Cu2+的碱性溶液”这一说法在不少文献中出现，如人教版高中生物必修1《分子与细胞》的教师教学用书第31页提到：“班氏试剂是斐林试剂的改良（也是含有Cu2+的碱性溶液），能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化。
”王镜岩《生物化学（第三版）》上册第16页也提到：“在碱性溶液中，Cu2+是一种弱氧化剂，能将醛糖的醛基氧化成羧基。
”二、斐林试剂中NaOH溶液的作用还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖、麦芽糖）。
斐林试剂的使用方法
斐林试剂的使用方法斐林试剂是一种常用的生化试剂，在生物医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值。
正确的使用方法能够确保试剂的准确性和稳定性，从而保证实验结果的可靠性。
下面将为大家详细介绍斐林试剂的使用方法。
首先，在使用斐林试剂之前，需要仔细阅读产品说明书，了解试剂的性质、用途、储存条件、稳定性等信息。
同时，检查试剂的包装是否完好，过期的试剂不得使用。
接着，根据实验需求准备好所需的试剂和实验材料，确保实验环境的清洁和整洁。
在进行实验操作之前，需要进行必要的实验准备工作，包括校准仪器、准备实验用具等。
在使用斐林试剂时，需要严格按照产品说明书中的使用方法进行操作，避免操作失误导致实验失败。
在取用试剂时，应避免直接用手接触试剂，以免污染试剂。
使用专用的试剂枪或移液器进行取用，并避免产生气泡。
在配制试剂溶液时，需要按照产品说明书中的配制比例和方法进行操作，严格控制溶液的浓度和 pH 值。
在配制过程中，注意溶解度和稳定性，避免产生沉淀或发生分解反应。
在使用斐林试剂进行实验时，需要严格控制实验条件，包括温度、湿度、光照等因素。
避免外界环境的影响对实验结果产生干扰，确保实验的准确性和可重复性。
在实验结束后，将剩余的试剂妥善保存，避免受到污染或变质。
按照产品说明书中的要求进行试剂的处理和废弃，确保实验过程的安全和环保。
总之，正确的使用方法对斐林试剂的实验结果具有重要的影响。
只有严格按照产品说明书中的要求进行操作，才能确保实验结果的准确性和可靠性。
希望大家在使用斐林试剂时能够严格遵守操作规程，做好实验准备工作，确保实验顺利进行，取得理想的实验结果。
斐林试剂甲乙两液使用方法探索
斐林试剂甲乙两液使用方法探索
斐林试剂甲乙两液是用于检测硫酸盐的试剂，其中甲液用于铵盐
的检测，乙液用于硫酸盐的检测。
以下是斐林试剂甲乙两液的使
用方法探索：
1. 甲液使用方法：
- 取一小量待测溶液，加入试管中。
- 加入甲液，滴加至溶液颜色变化停止。
- 观察溶液颜色变化，如果溶液变为深蓝色，表示存在铵盐。
2. 乙液使用方法：
- 取一小量待测溶液，加入试管中。
- 加入乙液，滴加至溶液颜色变化停止。
- 观察溶液颜色变化，如果溶液变为红褐色，表示存在硫酸盐。
需要注意的是，在使用斐林试剂甲乙两液时应遵循以下操作要点：
- 使用前应将试剂摇匀，以确保试剂均匀混合。
- 使用时应避免接触皮肤和眼睛，如果不慎接触到皮肤或眼睛，应
立即用水冲洗。
- 使用过程中要注意试管的清洁，确保溶液不受外部杂质的污染。
- 在观察结果时，要有足够的光线和背景对比，以便准确判断溶液
的颜色变化。
斐林试剂甲乙两液使用方法的探索需要根据实际情况进行试验和
观察，以找到最适合的使用条件和结果判读标准。
5.1.3 探究影响酶活性的条件高一上学期生物人教版必修一
第3课时 探究影响酶活性的条件
3、酶的作用条件较温和
细胞中几乎所有的化学反应都是由酶催 化的。酶催化特定化学反应的能力称为酶 活性。可用在一定条件下酶所催化某一化 学反应的速率表示。
若细胞生活的环境条件发生改 变，酶活性会怎样变化呢?
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验探究：影响酶活性的条件
资料一:实验证明用加酶洗衣粉时，温水的洗涤效果要比冷水好。
更强的氨苄青霉素。
1、人体胃蛋白酶的最适pH为2.0，某同学将胃蛋白酶溶液的
B pH从10.0调至2.0，此时胃蛋白酶的活性将(
)
A．不断上升 B．没有活性 C．先升后降 D．先降后升
提示：每种酶都有一个最适pH，此时活性最强，若所处的环 境过酸或过碱均会使酶分子结构遭到破坏，从而失活。胃蛋白 酶的最适pH为2.0，当其处于pH为10.0的溶液中时，已失去活 性。
3、加酶洗衣粉： 提高去污效果，减少污染
4、加酶牙膏： 可以分解残留在口腔中的细菌。
5、多酶片： 含有多种消化酶，可治疗消化不良。
整片吞服，切勿嚼碎。
6、胰蛋白酶： 可用于促进伤口愈合和溶解血凝块，还可用
于去除坏死组织，抑制污染微生物的繁殖。
7、脂肪酶： 处理废油脂，制造生物柴油。
8、青霉素酰化酶： 将易形成抗性的青霉素改造成杀菌力
以植物叶肉细胞为例，与光合作用有关的 酶在叶绿体中，与呼吸作用有关的酶在细胞质 基质和线粒体中，这样，光合作用和呼吸作用 就可以互不干扰了。
酶为生活添姿彩（酶在生活中的应用）
1、溶菌酶：
能够溶解细菌的细胞壁，具有抗菌消 炎的作用。在临床上和抗生素联用，能增 强抗生素的疗效。 2、果胶酶：
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项朱秋霖，马天兵兰州二中，兰州 730000 摘要：目的：探究高中生物试验中常见染色剂的使用方法及常见问题与注意事项方法：通过一些简单的实验验证与参考文献得出结论。
结果：验证与总结出生物试验中常见染色剂的染色原理及所遇到的染色问题的原因。
关键词：高中生物学实验染色剂显色原理注意事项The common dye staining principle and precautions in the highschool biology curriculumZhu Qiulin，Ma TianbingLanzhou NO.2 middle secondary school class8 grade2，lanzhou 730000Abstract:Objective: To explore the use of high school biology test stains and FAQs Notemethod: through some simple experiments verify references concluded.Results:Validation andsummed up a common biological test stain dyeing principle and coloring problem encountered byreason.Keywords:high school biology experiment stain color rendering principle Precautions1.常见染色剂常见的高中生物染色显色反应，其实质是化学反应或者物理反应，按照其反应本质，可分为下列几类[5]：1.1 氧化还原反应类染色剂通过氧化还原反应生成某些具有特殊颜色的物质，利用其与生物组织中某些具有还原性的物质或代谢产物进行化学反应，宏观上产生颜色变化，通过颜色变化,鉴别某些生物组织中的目标物质。
应用斐林试剂与碘液时的几点注意问题
成砖红色的氧化亚铜沉淀。
用淀粉酶分别催化淀粉和蔗糖的水解反应， 再用斐林试剂鉴定溶液中有无还原性糖生成， 就可以看出淀粉酶是否只能催化特
定的化学反应。
试剂分析： 底物用淀粉和蔗糖做对照，不但要证明淀粉酶能催化淀粉水解，还要证明淀粉酶不能催化蔗糖水解。用碘液只能检验 淀粉的存在， 从而证明淀粉酶能否催化淀粉水解， 不能证明蔗糖是否被水解， 而用斐林试剂能够检验淀粉和蔗糖到底哪一个被水 解， 还是都被水解， 进而证明淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。
子萌发时释放的 ＣＯ２ 量。 用具： 若干锥形瓶、塞子、小试管、有刻度的玻璃
管、红色酒精。 材料： 萌发的消毒过的（ 不影响种子活力） 小麦种
子、消毒过的死种子、水 过程： 略。
所谓定量实验， 是为了深入了解事物和现象的性
实验装置如图 ５ 所示。
质， 揭露各因素之间的数量关系， 确定某些因素的数
值而进行的实验。
验淀粉是否存在，有淀粉存在则水解反应没有进行， 说明此条件下酶失活； 也可以用斐林试剂来检验是否生成了还原性糖，有还原性 糖生成， 则进行了水解反应， 证明淀粉酶在此条件下具有活性。
结论： 鉴定试剂中碘液和斐林试剂都可以用。 （ 单林兰 河北省滦南县扒齿港中学 ０６３５０２）
４０
能用斐林试剂来检验是否生成了还原性糖（ 麦芽糖和葡萄糖） ，因为用斐林试剂检验还原性糖要加热而改变了前后温度的一致性。 结论： 鉴定试剂用碘液， 而不用斐林试剂。
３ 探索酸碱条件影响淀粉酶活性 实验原理： 淀粉遇碘后， 形成紫蓝色的复合物； 还原性糖能与斐林试剂发生氧化还原反应， 生成砖红色的氧化亚铜沉淀。 试剂分析： 实验证明酸性、中性、碱性条件下淀粉酶的活性的变化， 通过淀粉酶催化淀粉水解是否进行来证明。可以用碘液来检
斐林试剂的使用技巧
斐林试剂的使用技巧斐林试剂是一种常用的化学试剂，主要用于检测生物体中铁离子的含量。
下面介绍一些斐林试剂的使用技巧。
1. 准备试剂：斐林试剂是由1%的溴己烷溶液和0.1%的吖啶溶液组成的，因此需要事先准备好这两种溶液。
2. 取样：首先需要将待测样品（例如血液、植物组织等）进行提取，通常使用氯仿等溶剂进行提取。
提取过程中要注意避免将水分、金属离子等杂质带入样品中，以免影响最后的试剂反应。
3. 添加试剂：将提取得到的生物样品溶液滴加到试管中，然后向其中加入适量的斐林试剂。
一般情况下，斐林试剂的用量为样品溶液的10倍体积。
加入试剂后，要轻轻摇晃试管使试剂充分混合。
4. 观察反应：斐林试剂与铁离子形成红色或紫色络合物，反应后试管中溶液的颜色会发生变化。
反应时间一般为10-15分钟，但具体时间要根据所检测的样品类型和样品中铁离子的含量来确定。
5. 测定浓度：通过光谱法或比色法，可以测定试管中溶液的吸光度或颜色深浅，从而判断样品中铁离子的浓度。
一般情况下，吸光度越高或颜色越深，说明样品中铁离子的含量越多。
6.注意事项：（1）斐林试剂对眼睛和皮肤有刺激性，使用时要戴上手套和护目镜，避免直接接触皮肤和眼睛。
（2）试剂使用后要尽快密封保存，避免阳光直射和潮湿。
（3）斐林试剂对样品的溶剂要求较高，通常需要使用无机溶剂如氯仿等进行提取。
（4）在使用斐林试剂时要控制试剂用量和反应时间，避免试剂过量或反应时间过长导致结果不准确。
总之，使用斐林试剂对生物样品中的铁离子进行检测时，需要准备好试剂和样品，合理控制试剂的用量和反应时间，注意安全操作，并根据测定结果进行相应数据分析。
人教版新教材高中常见生物药品及试剂使用注意事项总结
人教版新教材高中常见生物药品及试剂使用注意事项总结1.斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH溶液，乙液：质量浓度为0.05g/ml 的CuSO4）：将斐林试剂甲液和乙液等量混合，再将混合后的斐林试剂注入待测组织样液，50-65℃水浴加热约2min，如待测组织样液中存在还原糖，则由蓝色转为砖红色沉淀。
2.双缩脲试剂（A液：质量浓度为0.1g/ml 的NaOH，B液：质量浓度为0.01g/ml的 CuSO4）：向待测液中先注入双缩脲试剂A液1ml，摇匀，再向其中加入双缩脲试剂B液4滴，摇匀。
如待测组织样液中存在多肽或蛋白质，则由浅蓝色转为紫色。
3.质量浓度为0.01g/ml的苏丹Ⅲ染液：取在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹染液，用吸水纸吸去染液，再滴加1-2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮色。
检测脂肪，可将脂肪染成橘黄色。
4.碘液：鉴定淀粉，淀粉遇碘液变蓝。
5.健那绿（活性染色剂）：用于检测线粒体，使线粒体染色呈蓝绿色。
6.酒精：①体积分数为50%的酒精溶液：在苏丹Ⅲ染液检测脂肪实验中用于洗去浮色。
②70%的酒精溶液：用于菊花组织培养实验中对操作者双手、超净工作台台面及流水冲洗后的外植体消毒。
③体积分数为95%的酒精溶液：和质量浓度为15%的盐酸等体积混合，作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分散开来；在低温诱导植物细胞染色体数目变化实验中，用于洗去卡诺氏液。
④预冷的95%的酒精溶液：DNA不溶于酒精，尤其是不溶于体积分数为95%的预冷酒精，而细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，据此可以用于DNA的粗提取。
⑤100%的酒精溶液（无水乙醇）：用于色素的提取。
7.盐酸：①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输。
②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
③物质的量浓度为0.01mol/L的盐酸：用于影响酶活性的条件实验；用于模拟生物体维持pH 稳定实验。
④质量浓度为15%的盐酸：和体积分数为95%的酒精溶液等体积混合作为解离液，可用于解离根尖，使细胞分离开来。
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ＮａＯＨ 溶液
ＮａＯＨ 溶液
萌发的种子
等量的死种子
实验组
对照组
图 ４ 实验装置示意图
请你在上述实验的基础上设计一个实验测量种
（ ３） 在相同的条件下， 对 ３ 组呼吸作用实验释放 出的 ＣＯ２ 进行分析。
预测结果： 第二、三组中的 ＣＯ２ 中的 Ｏ 是 １８Ｏ。 结论： 有氧呼吸产物 ＣＯ２ 中的 Ｏ 不是来自 Ｏ２， 而 是来自 Ｈ２Ｏ 和 Ｃ６Ｈ１２Ｏ６。 2 定量实验
请你设计一个实验测量种子萌发时吸收的 Ｏ２ 量。 用具： 若干锥形瓶、塞子、小试管、有刻度的玻璃 管、红色酒精。
ＮａＯＨ 溶液种子活力） 小麦种 子、消毒过的死种子。
过程： 略。
萌发的种子
萌发的种子
实验组
对照组
图 ５ 实验装置示意图
实验装置如图 ４ 所示。
通过一系列的实验设计， 学生不但加深了对课本
请你设计一个实验验证有氧呼吸产物 ＣＯ２ 中的 Ｏ 不是来自 Ｏ２， 而是来自 Ｈ２Ｏ 和 Ｃ６Ｈ１２Ｏ６。
步 骤 ： （ １） 用 氧 的 同 位 素 １８Ｏ 分 别 标 记 Ｈ２Ｏ、 Ｃ６Ｈ１２Ｏ６ 和 Ｏ２， 使它们分别成为 Ｈ２１８Ｏ、Ｃ６Ｈ１２１８Ｏ６、１８Ｏ２。
（ ２） 然后进行 ４ 组有氧呼吸实验： 第一组向萌发 的 种 子 提 供 １８Ｏ２； 第 二 组 向 同 样 的 萌 发 的 种 子 提 供 Ｈ２１８Ｏ； 第三组向同样的萌发的种子提供 Ｃ６Ｈ１２１８Ｏ６； 第 四组作为对照。
成砖红色的氧化亚铜沉淀。
用淀粉酶分别催化淀粉和蔗糖的水解反应， 再用斐林试剂鉴定溶液中有无还原性糖生成， 就可以看出淀粉酶是否只能催化特
定的化学反应。
试剂分析： 底物用淀粉和蔗糖做对照，不但要证明淀粉酶能催化淀粉水解，还要证明淀粉酶不能催化蔗糖水解。用碘液只能检验 淀粉的存在， 从而证明淀粉酶能否催化淀粉水解， 不能证明蔗糖是否被水解， 而用斐林试剂能够检验淀粉和蔗糖到底哪一个被水 解， 还是都被水解， 进而证明淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。
实验的理解， 同时也提高他们的实验设计能力。
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教学一得
应用斐林试剂与碘液时的几点注意问题
１ 探索淀粉酶对淀粉和蔗糖水解的作用 实验原理： 淀粉和蔗糖为非还原性糖， 它们在酶的作用下， 都能水解成还原性糖， 还原性糖能与斐林试剂发生氧化还原反应， 生
验淀粉是否存在，有淀粉存在则水解反应没有进行， 说明此条件下酶失活； 也可以用斐林试剂来检验是否生成了还原性糖，有还原性 糖生成， 则进行了水解反应， 证明淀粉酶在此条件下具有活性。
结论： 鉴定试剂中碘液和斐林试剂都可以用。 （ 单林兰 河北省滦南县扒齿港中学 ０６３５０２）
４０
子萌发时释放的 ＣＯ２ 量。 用具： 若干锥形瓶、塞子、小试管、有刻度的玻璃
管、红色酒精。 材料： 萌发的消毒过的（ 不影响种子活力） 小麦种
子、消毒过的死种子、水 过程： 略。
所谓定量实验， 是为了深入了解事物和现象的性
实验装置如图 ５ 所示。
质， 揭露各因素之间的数量关系， 确定某些因素的数
值而进行的实验。
结论： 鉴定试剂用斐林试剂， 而不用碘液。 ２ 探索温度条件影响淀粉酶活性
实验原理： 淀粉遇碘后， 形成紫蓝色的复合物。淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖， 麦芽糖和葡萄糖遇碘后不形成
紫蓝色的复合物。 试剂分析： 由于实验探索在不同温度条件下淀粉酶催化淀粉的情况，实验前后应保持温度不变，要用碘液来检验淀粉的有无，不
能用斐林试剂来检验是否生成了还原性糖（ 麦芽糖和葡萄糖） ，因为用斐林试剂检验还原性糖要加热而改变了前后温度的一致性。 结论： 鉴定试剂用碘液， 而不用斐林试剂。
３ 探索酸碱条件影响淀粉酶活性 实验原理： 淀粉遇碘后， 形成紫蓝色的复合物； 还原性糖能与斐林试剂发生氧化还原反应， 生成砖红色的氧化亚铜沉淀。 试剂分析： 实验证明酸性、中性、碱性条件下淀粉酶的活性的变化， 通过淀粉酶催化淀粉水解是否进行来证明。可以用碘液来检