Na+K+- ATP酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
人红细胞Na +,K +-ATP酶活性测定法及临床应用
光 径 １ｃ 以空 白转化 液调零 。Ｋ 值 法计 算 Ｈｂ ｍ，
徐 彬 （ 天津 港 口医 院检 验科 ， 津 天 ３０ ５ ） ０ ４ ６ 中图分类 号 ： ４ ６ １ ２ 文献 标 志码 ： Ｒ ４． １ Ａ 文章 编号 ：６ １７ １ （ Ｏ ７ ０ — ６ —３ １ ７～ ４ ４ ２ Ｏ ） ５０ ７０
近年 来 ， 随着 细 胞分 子 等学 科 的进 展 ， 们 已 人 认 识 到 细 胞 Ｎａ Ｋ ＡＴＰ酶 的活 性 与具 有 重 要 ， 一 生 理作用 的 Ｎａ 和 Ｋ 代 谢密 切相 关 ， 因而 该 酶 引 起 了人们 越来 越多 的关注 ｎ 。为此 ， ］ 笔者 建立 了简 便 易行 的 Ｎａ Ｋ＋ ＡＴＰ酶 活性 测定 法 ， 测定 了 ， ＿ 并 健 康人 和糖 尿病 患 者 Ｒ Ｃ膜 Ｎａ Ｋ ＡＴ Ｂ ， 一 Ｐ酶 活 性 ， 探讨 糖尿病 人该酶 活性 的变 化及 ｆ 意义 。 来 临床 １ 材 料与 方法
用 ４ Ｃ 存 的冷生 理盐 水洗 ３次 ， 保 每次均 离心弃 去
上 层 液 体 ， 压 积 Ｒ Ｃ Ｏ Ｆ ， ０ ９ｍｌ ｉ ＨＣ 取 Ｂ Ｉ Ｏ １加 ． ｓ Ｔｒ — １ 缓 冲液和 １ｇ ｄ 皂 素 １ ｌ振 荡 ， 之充分 溶血 。 ／ｌ ０ ， 使 １ ５ ２ Ｈｉ Ｎ 测 定法 测 定 血 红蛋 白： 溶血 液 ２ ．． Ｃ 取 Ｏ ｌ加 到 ５ｍｌ ， Ｈｂ转 化 液 中， 匀 ， 置 ５ｒｉ ， 混 静 ｎ 用 ａ ７３ ２ ０分光 光 度计 测 定 ５ ０ｒｆ波长 下 的 吸光 度 值 ４ ｒ ｌｌ
反 应 酶 活性 的高 低 。
１ ３ 试 剂 ．
机（ 北京 医用离 心机 厂） ④Ｂ ； ｓ型 电热三用 水 箱 （ 北 京 医疗设 备厂 ） 。
ATP检测试剂盒使用说明书北京康碧泉代理
1. Introduction
ATPLite TM is an Adenosine TriPhosphate (ATP) monitoring system based on firefly (Photinus pyralis) luciferase. This luminescence assay is the alternative to colorimetric, fluorometric and radioisotopic assays for the quantitative evaluation of proliferation and cytotoxicity of cultured mammalian cells. ATP monitoring can be used to assess the cytocidal, cytostatic and proliferative effects of a wide range of drugs, biological response modifiers and biological compounds 1,2,3,4,5,6. The major advantages of this system are high sensitivity, excellent linearity, simplicity, fast results and the lack of cell harvesting or separation steps. Furthermore, the PerkinElmer ATPLite “Constant Quanta TM ” assay system produces a long lived “glow” type signal with a half-life of greater than five hours, therefore a special luminometer with injectors is not required. The kit is ideal for use with the PerkinElmer TopCount Microplate Scintillation and Luminescence Counter and the LumiCount Microplate Reader in both 96- and 384-well microplates. The simplicity of the ATPLite assay system in a 96-well microplate is illustrated in Figure 1.
碧云天生物技术激酶活性检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0150S Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒 1000次 S0150MKinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒10000次产品简介：Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Luminescent Kinase Assay Kit )，是一种通过化学发光法测定激酶反应后溶液中ATP 的剩余量(最高可达10μM)来定量检测激酶活性的试剂盒。
本试剂盒也可用于检测任何消耗ATP 的酶，例如ATPase 。
本试剂盒可以检测反应体系中浓度最高为10μM 的ATP ，并在0-10μM 范围内有良好的线性关系。
对于更高浓度的ATP ，可以选购检测浓度上限为50μM 的Kinase-Lumi™增强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Plus Luminescent Kinase Assay Kit )或上限为200μM 的Kinase-Lumi™超强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Max Luminescent Kinase Assay Kit )，或者需要适当稀释后再进行检测。
另外两个试剂盒分别在0-50μM 和0-200μM 范围内有良好的线性关系。
本试剂盒应用范围广，适用于各类消耗ATP 的激酶，包括以蛋白或多肽为底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等为底物的非蛋白激酶。
本试剂盒也同样适用于检测消耗ATP 的ATPase 。
本试剂盒的检测激酶活性的原理参考图1。
激酶在反应过程中催化ATP 上的磷酸基团转移到底物的羟基上，从而使ATP 转变为ADP ，这样就可以根据ATP 的减少量来定量激酶的活性。
A095 ATP含量测定试剂盒说明书
ATP 含量测定试剂盒简化说明书一、所需仪器可见分光光度计、恒温水浴锅、漩涡混匀器 样本前处理：○ 红细胞：抗凝全血取下层压积红细胞，一般按1：4的体积比加双蒸水进行稀释，再混匀使溶血完全，制备成溶血液。
将制好的溶血液加入玻璃试管中沸水加热煮10分钟，流水冷却后，4000转离心10分钟，取出混匀抽提1分钟，取上清液待测。
○ 组织样本：称重后，剪碎，按重量体积比（W/V）1：9加入沸双蒸水，在沸水中匀浆，制成10%的匀浆液，再置于沸水浴中煮10分钟，取出混匀抽提1分钟，4000转/分离心10分钟，取上清液待测。
○ 培养细胞：先离心处理将细胞核培养上清分离，除去培养上清，得到下层沉淀细胞（一般细胞数量达到106），将收集好的细胞加入300-500μl热双蒸水，置于热水浴（90-100℃）中匀浆破碎，后将细胞悬液于沸水浴中加热10分钟，取出混匀抽提1分钟，即可用于测定。
注：混匀抽提1分钟即为漩涡混匀1分钟。
二、操作步骤：旋涡混匀，37°C 水浴30分钟试剂四：蛋白沉淀剂 50 50 50 50 充分混匀后， 4000rmp/min 离心5分钟，取上清液210ul 进行测定试剂五：显色液500500500500混匀，室温静置2分钟试剂六：终止剂 500 500 500 500室温静置5分钟，在636nm 处0.5cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。
注：在比色前比色皿用自来水洗10余次，再用蒸馏水洗4～5次，以免磷污染。
五、计算公式及举例：① 红细胞中ATP 含量计算公式：(/)0.05/BBATP mmol gHb U U mmol L S S −=××÷−−=×××÷−浓度测定管对照管标准浓度样本测定前稀释倍数血红蛋白含量（Hbg/L)标准管标准空白管 样本测定前稀释倍数血红蛋白含量（Hbg/L)② 组织中ATP 含量计算公式：(/gprot)0.05/BBATP mmol U U mmol L S S −=××÷−−=×××÷−浓度测定管对照管标准浓度样本测定前稀释倍数蛋白含量（gprot/L)标准管标准空白管 样本测定前稀释倍数蛋白含量（gprot/L)。
Elabscience ATP含量比色法测试盒说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®ATP含量比色法测试盒ATP Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K157-S产品规格：50 assays(24 samples)/100 assays(48 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计(636 nm)使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测动物组织样本中A TP的含量。
检测原理肌酸激酶催化肌酸和A TP 反应生成磷酸肌酸，通过比色法检测磷酸肌酸的含量，以此反应出A TP的含量。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计(636 nm)、水浴锅(100°C )试剂：双蒸水、生理盐水(0.9% NaCl)试剂准备①检测前，所有的试剂平衡至室温。
②试剂二工作液的配制向试剂二中加入6 mL双蒸水，拧紧瓶盖，放入沸水中水浴使其完全溶解；使用前观察到有结晶析出，可沸水浴溶解后，放置37℃保存待用。
使用完后2-8℃保存7天。
③试剂四工作液的配制：取1.8mL双蒸水加入到试剂四中，充分溶解后放置冰盒上待用。
使用完后-20℃保存7天。
④对照工作液的配制：按试剂二工作液：试剂三：双蒸水=100：200：30的比例配制，现用现配，按需配制。
测定工作液的配制：按试剂二工作液：试剂三：试剂四工作液=100：200：30的比例配制，现用现配，按需配制。
⑤显色剂工作液配制：按试剂六：试剂七=3：1配制，37℃放置1小时，现用现配，按需配制。
ATP酶活性检测试剂盒
ATP酶活性检测试剂盒（样本无需高速离心样本无需高速离心，，可测Na+k+、Ca2+Mg2+、Ca2+、Mg2+_ATPase)说明书修订日期：2019.01.22 Cat number：KGT026Store at -20 for for 6 months℃For Research Use Only（科研专用）一、试剂盒介绍ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。
本试剂盒的测定原理是依据ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
本试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。
二、试剂组份组份名称KGT02650tests保存条件试剂A 10mL×3试剂B 10mL×1试剂C 10mL×12-8℃试剂D 粉剂×3 -20℃试剂E 粉剂×1试剂F 粉剂×12-8℃试剂G 10mL×2 RT试剂H 粉剂×3试剂I 粉剂×12-8℃试剂J：2.5 mol/L 硫酸100mL×1 RT 试剂K：10 m mol/L 标准磷储液10mL×1 2-8℃试剂D：-20℃以下保存6个月。
用时每支加双蒸水至5ml，现用现配。
余下的-20℃以下可保存一周。
试剂E：用时每支加双蒸水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。
试剂F：用时每支加双蒸水至10ml[注1]，充分加热使其完全溶解，室温保存。
试剂H：用时每瓶加双蒸水至40ml溶解，（溶解后避光4℃可保存一周）。
试剂I：用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。
0.5umol/ml标准磷工作液配制：用时将试剂K作20倍稀释: 取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。
定磷剂的配制：按双蒸水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
碱性磷酸酶活性测定试剂盒说明书
碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定步骤：1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。
ATP含量试剂盒使用说明
ATP含量试剂盒使用说明一、试剂盒的组成1.ATP酶：可催化ATP与啶酮核苷酸底物反应，产生荧光发射。
2.底物液：包含啶酮核苷酸底物、辅酶CoA、磷酸化底物和缓冲液等成分。
3.酶反应终止液：用于停止ATP酶的活性，停止荧光信号的产生。
4.荧光标准品：已知浓度的ATP溶液，用于绘制标准曲线。
5.读取缓冲液：用于在荧光分析仪上读取荧光信号。
二、使用步骤1.试剂室温平衡：将试剂盒中的所有试剂恢复到室温，并确保所有试剂充分均匀混合。
2.样品预处理：根据实验需要，选择合适的方法提取细胞或组织中的ATP，并计算样品的蛋白质含量。
3.准备标准曲线：取不同浓度的荧光标准品，并用读取缓冲液稀释到一系列已知浓度的溶液。
每个浓度至少重复3次。
将这些标准品稀释到试管中。
4.样品处理：将不同待测样品分别加入到试管中，各样品至少重复3次。
同时加入空白对照组，只加读取缓冲液而无待测样品。
5.加入试剂：将相应体积的底物液加入到每个试管中，充分混合。
立即向每个试管中加入适量的ATP酶，同时进行混合。
6.反应：将试管密封，并在37℃下孵育一段时间，一般为10-30分钟。
7.停止反应：向每个试管中加入相应体积的酶反应终止液，停止ATP酶的活性，停止荧光信号的产生。
8.读取荧光：将每个试管置于荧光分析仪上，使用适当的激发波长和发射波长对荧光信号进行测量，记录下荧光单位值。
9.绘制标准曲线：将标准曲线上的荧光单位值与标准品的ATP浓度进行对应，绘制标准曲线。
10.计算样品ATP含量：根据样品荧光单位值和标准曲线，计算出样品中的ATP含量。
三、注意事项1.所有试剂的操作应按照试剂盒说明进行，不同品牌可能有些许差异，应严格按照相应说明进行操作。
2.手术操作时应采取无菌操作，避免对样品的污染。
3.混合试剂时需充分振荡，确保试剂均匀混合。
4.在实验过程中，所有试管、吸头等实验用具应标注清楚，避免混淆和误操作。
5.反应时间会影响结果，不同实验目的可根据需要进行时间的调整，一般30分钟内可得到稳定的信号。
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Na+K+-ATP酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号：BC0060
规格：50T/24S
产品内容：
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2支，-20℃保存。
用时每支加1mL蒸馏水，现用现配。
用不完的试剂-20℃可保存一周。
试剂四：液体2mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。
用时加入3mL双蒸水，4℃保存。
试剂六：粉剂×1瓶,4℃保存。
用时加入15mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。
试剂七：粉剂×1瓶,4℃保存。
用时加入15mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。
试剂八：液体15mL×1瓶，室温保存。
标准品：10μmol/mL标准磷贮备液1mL×1支，4℃保存。
0.5μmol/mL标准磷应用液配制：将标准品20倍稀释，即取0.1mL标准品加1.9mL蒸馏水充分混匀。
O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。
定磷剂的配制：按H
2
若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
Na+K+-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品酶液的制备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应（在EP管中加入下列试剂）
对照管测定管试剂一（μL）13090
试剂二（μL）8080
试剂三（μL）4040
试剂四（μL）40
样品（μL）200
混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴10min
试剂五（μL）5050
样品（μL）200
混匀，4000g，常温离心10min，取上清液
3定磷(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)
空白管标准管对照管测定管
0.5μmol/ml标准磷应用液（μL）100
上清液（μL）100100
蒸馏水（μL）100
定磷试剂（μL）1000100010001000混匀，40℃水浴10min，冷却至室温，在660nm处比色。
三、计算
1、血清（浆）Na+K+-ATPase活力的计算:
定义：规定每小时每毫升血清（浆）中Na+K+-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力（U/mL）=C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷V样÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
2、组织、细菌或细胞中Na+K+-ATPase活力的计算：
（1）按蛋白浓度计算：
定义：规定每小时每毫克组织蛋白中Na+K+-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力(U/mg prot)=C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷（Cpr ×V样）÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
定义：规定每小时每克组织中Na+K+-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力(U/g鲜重)=C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷(V样÷V 样总×W)÷T=7.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W
（3）按细菌或细胞总数计算：
定义：规定每小时每1万个细菌或细胞中Na+K+-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Na+K+-ATP酶活力(U/104cell)=C标准管×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V总÷(V样÷V 样总×500)÷T=0.015×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）
C标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V总：酶促反应总体积，0.5mL；V样：加入样本体积，0.2mL；V样总：加入试剂一体积，1mL；T：反应时间，1/6小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、由于每一个样都必须做对照，本试剂盒50管保证测24份Na+K+-ATP酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。
所以对测定所用试管要求严格无磷。
3、空白管和标准管只要做一管。