常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程
常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程完整
常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程完整.目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。
责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。
内容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。
常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。
2.液相色谱柱的使用及保养.2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
常用液相色谱柱使用与保养
常用液相色谱柱使用与保养液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分离和分析物质的方法，广泛应用于化学、生物化学、环境科学、食品科学等各个领域。
在液相色谱系统中，色谱柱是其中最为重要的组成部分之一，对色谱分离的效果和分析结果有着重要影响。
因此，正确的使用和保养色谱柱是保证色谱实验质量和延长色谱柱寿命的关键。
一、色谱柱的选择1.根据分析需要选择合适的色谱柱类型，如反相、离子交换、凝胶、手性等。
选用的色谱柱应能实现样品分离的目标。
2.考虑色谱柱尺寸，如柱径和柱长。
柱径越小，理论板高度越高，分离效果越好，但同时也容易增大柱后压力。
柱长则决定了分离时间，通常根据样品的复杂程度和实验要求进行选择。
3.考虑色谱柱填充物，如C18、C8、C4等反相填料。
填充物的理化性质不同，会对分离效果产生影响。
根据样品性质和分离目标选择填料。
二、使用色谱柱的注意事项1.在使用前检查色谱柱外观，确保柱壁完好无损，无裂缝或损坏。
同时检查柱头端口是否干净，无污物残留。
2.进行柱前的处理，如样品预处理和溶剂预处理，保证样品的稳定性和纯度，避免对色谱柱产生不利影响。
3.操作时避免剧烈振荡、震动或摇晃色谱柱，以免对柱填料产生机械损伤。
4.在柱温控制装置的帮助下，保持色谱柱运行温度的稳定，以确保分离结果的重复性和再现性。
三、色谱柱的保养1.使用前、使用后和中间暂停使用时需正确保管色谱柱。
使用前，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射。
使用后，将色谱柱用保护帽覆盖，防止灰尘、气体和湿气进入柱内。
中间暂停使用时，用适当的主流溶液保养柱床，避免干燥。
保养柱床时需将色谱柱倒放，使柱床保持湿润状态。
2.避免在色谱柱上溢液，以免引起柱床断裂或填料活化。
使用前，尽量将样品溶液过滤或超声处理，避免样品中存在大颗粒杂质。
3.保证洗涤液和贮存液的纯度和质量，避免因杂质和离子引起色谱柱填料的损坏。
对于需要多次使用的色谱柱，洗涤液需要选择与柱填料相容的溶剂进行洗脱。
常用液相色谱柱使用与维护保养解读
(3)对新柱正确老化处理的必要性认识：新购色谱柱出厂前均采用适 合的运载溶剂（Shipping Solvent）饱和，密封，由于运输过程周期较长， 柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。若老化方法不正确或时 间不够，极易导致色谱柱在使用较短时间后即产生分离度下降、峰形变差、 峰拖尾等柱效降低的情况。需根据色谱柱不同类型选择不同饱和与老化方法。
在新色谱柱使用几次，均正常后，运行完毕净化处理程序可简化为：用 水-有机相（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%有机 溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上→选择柱说明书中保存条件（Storage Conditions）规定的保存溶剂（Storage Solvent）冲洗10倍柱体积以上→ 封口，保存。 （9）净化完毕，若次日不再使用，可取下色谱柱，用封头螺丝密封，交色 谱柱管理人员入库保存于防尘环境下，备案。
2.2正相色谱柱（Normal –Phase Chromatography column）
目前，正相色谱分析最常用的是氨基柱与氰基柱。
2.2.1氨基柱（-NH2） 氨基柱可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。使用时需注
意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。新购 氨基柱老化处理及使用基本程序如下： 1）若需要在正相条件下使用： ①用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲洗约50倍柱体积[备注：氨基柱出 厂保存溶剂多用正相溶剂，eg.正己烷-乙腈（99：1）]。
（12）警告：无论何时，必须保证色谱柱柱床不干涸，尤其是进样检测和柱冲洗过
程中不能让流动相长时间（30min以上）走空，否则易使色谱柱干涸且带入大量几
乎无法排出的气泡，甚至导致柱床局部塌陷或中部开裂。使用与保存时，严禁用力
液相色谱柱安全操作及保养规程
液相色谱柱安全操作及保养规程液相色谱柱是一种常见的分析仪器，在化学、生化、食品、药品、环境等领域得到广泛应用。
因为该分析仪器设备复杂、性能优越、分析精度高，所以在使用时需要注意安全操作和保养规程。
本文将从以下几个方面详细介绍：•操作前准备•操作过程注意事项•操作后的清洗和保养操作前准备在开始操作前，第一步必须检查液相色谱柱的状态，避免因使用中出现损坏等问题影响分析结果。
首先要检查柱罐和柱床是否正常。
若柱床内出现裂缝、变形或渗漏现象，柱就已损坏，不能再继续使用。
其次需要确认流量计、泵、检测器等其他连接设备是否正常，以免造成柱损坏或分析结果失真。
接下来，需要准备相关耗材和溶液，耗材包括固相保护罐、固相萃取柱、色谱柱、纯水、甲醇、乙醇、氨水等。
使用前，要确保各种溶剂都为新开封的纯溶液。
在操作前准备中，还应注意操作手套的使用。
液相色谱柱是高精度分析设备，因此在安全操作中必须佩戴手套，避免因手上油脂、灰尘或细菌等的污染而引起柱床阻塞或色谱杂质的产生。
操作手套应该选用热塑性弹性体材料制作的，手套的外表面需要干爽、无粉、不胶着。
操作手套更换频率应视实际操作情况而定，但至少要每小时更换一次，以保证色谱柱系统的稳定性。
操作过程注意事项在进行液相色谱柱分析前，必须注意以下事项：1. 注入样品时必须注意准确注入样品时必须严格按照固定的容积，并尽可能使样品溶剂与色谱柱中的溶剂相同。
如果溶剂不同，会使分析结果产生偏移和误差。
2. 溶剂配制要准确在制备溶剂时，必须准确控制各浓度和体积，防止出现误差。
为了避免混杂、污染等情况发生，液相色谱柱系统的各项操作必须迅速和准确，尽量避免无意义而又不必要的搅动和震动。
3. 流量、温度要控制恰当液相色谱柱系统，包括液相色谱泵、流量计、检测器、自动采样器等，为了得到可靠数据，必须准确和恰当地控制它们。
流量、温度、进样量等参数的不正确设置，可能会导致实验失误或者测量数据不准确。
流量控制器的精度一般设为0.1%，进样器量程要与所确定体积相吻合，保持恰当的温度，则可以避免柱床挤压和杂质的产生。
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
液相色谱系列产品安全操作及保养规程
液相色谱系列产品安全操作及保养规程前言液相色谱技术在化学、生物、医药、环境等多个领域广泛应用。
为了确保液相色谱系列产品的正常使用和维护，保证用户的人身安全和实验室的设备安全，本文整理了针对液相色谱系列产品的安全操作和保养规程，希望可以为广大用户提供参考。
安全操作规程1. 实验前准备在进行实验前，应具备相应的理论和实验知识，并对所需仪器设备进行检查和准备。
在操作前，应先仔细阅读并熟悉仪器使用说明书和技术参数，按照操作步骤正确进行实验。
2. 液相色谱柱的使用与保养2.1 柱的安装在安装柱时，应先检查柱底接头是否清洁，并在所使用的连接器上加装垫圈，以防止泄漏。
连接器的紧固力应适当，不宜过度，以免损坏柱和连接器。
2.2 使用条件使用柱时，应确保流动相符合柱的使用要求，且使用寿命未过时方可使用。
当柱使用后，需要及时停止柱内的流动相，防止样品残留及堆积。
2.3 柱的保养使用完毕后，应及时清洗柱和连接器，并用纯净水和乙醇将柱内残留液体冲洗干净，以保证柱的使用寿命和准确性。
3. 液相色谱仪的使用与保养3.1 操作前准备使用液相色谱仪之前，应先检查仪器是否连接正确，并按照使用说明书进行操作。
在操作之前，应先开机预热，并进行系统检查，以保证仪器的正常工作。
3.2 制备液相色谱流动相溶液制备液相色谱流动相溶液时，需按照操作说明书进行溶液的配制。
切忌在操作过程中直接触碰有毒腐蚀性液体或固体，并戴上适当的防护用品。
3.3 液相色谱柱的更换液相色谱柱的更换需要在安全门关闭状态下进行。
当柱更换完成之后，需要清洗柱，以保证柱内液体的完全更换，防止混杂。
3.4 保养与维护在使用过程中，应及时对仪器进行保养与维护，例如及时更换气源过滤器，检查压力表和流量计的准确性等，以保证仪器的正常工作状态和寿命。
4. 样品制备与储存4.1 样品制备在制备样品时，应遵守实验室安全规定，戴上适当的防护用品。
切勿使用有毒、易燃、易爆等危险品进行制备，并按照操作说明书进行操作，避免产生有害气体和对人体造成伤害的高温等物质。
色谱柱的使用和维护方法及操作规程
色谱柱的使用和维护方法及操作规程色谱是一种分别分析手段，分别是核心，因此担负分别作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
当然，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
1、避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
2、应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然，流动相使用前必需经脱气和过滤处理。
3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
4、选择使用适合的流动相（尤其是pH），以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解，压力上升是需要更换预柱的信号。
5、避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
6、常常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50～75ml。
7、避开使用高粘度的溶剂作为流动相；假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在试验完毕柱子冲洗干净。
8、进样样品要提纯。
9、严格掌控进样量，不要超载。
10、每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱，好用洗脱本领强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。
当接受盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。
液相保护柱安全操作及保养规程
液相保护柱安全操作及保养规程液相保护柱是一种重要的分析仪器，承担着保护液相色谱柱和延长使用寿命的重要任务。
液相保护柱使用时需要严格遵守安全操作规程和进行定期保养，以确保其正常运行和延长使用寿命。
本文将介绍液相保护柱的安全操作规程和保养规程，旨在提高使用者的安全意识和保护仪器的维护质量。
安全操作规程1. 仪器安装液相保护柱应安装在一个干燥、通风、远离水源和化学品的地方。
在安装液相保护柱时，应确保仪器与色谱柱和检测器之间的连接正确且紧固，以避免连接处泄漏。
2. 操作前的准备在使用液相保护柱前，首先要检查保护柱的状态是否正常。
应检查保护柱是否清洁，有无损坏或磨损，保护柱内部是否存在杂质，并进行必要的清洁。
此外，还应检查保护柱的连接是否紧固，以确保其正常运行。
3. 操作过程在使用液相保护柱时，应注意以下几点：•使用液相保护柱前，应先进行洗脱，以保证样品不会粘附在柱子表面；•液相保护柱要与样品充分接触，可采用多种方法如插管或长针头等；•使用液相保护柱时不要超过其最大流量，以免影响保护柱的使用寿命；•液相保护柱使用一段时间后，应及时更换，以确保保护液相色谱柱的效果。
4. 操作后的处理在使用液相保护柱后，应立即清洗保护柱，以避免保护柱内部的杂质对色谱柱造成污染。
清洗液相保护柱的方法包括：用甲醇、乙醇或水洗，然后用纯水清洗干净并放置在自然通风处待干燥。
保养规程1. 周期性检查液相保护柱在使用一段时间后，应进行常规的检查。
检查内容包括：•检查保护柱连接处是否有泄漏；•检查保护柱是否有磨损或损坏；•检查内部填充物是否存在杂质或缺失；•检查保护柱表面是否清洁。
2. 常规维护液相保护柱在日常使用中，应做好以下几点常规维护：•定期清洗液相保护柱，以保证柱内无杂质或残留物；•定期更换液相保护柱，以确保保护柱的有效期；•定期检查保护柱连接处是否紧固；•避免液相保护柱受到高温、高压、振动或较强的机械冲击，以避免损坏保护柱。
3. 不良情况处理如果发现液相保护柱发生不良情况，如柱子表面出现损伤或污垢、柱子内部出现杂质、连接处泄漏等情况，应立即停止使用，并采取以下处理措施：•清洗和更换液相保护柱，如柱子表面出现损伤或污垢；•检查、清除杂质或更换液相保护柱，如柱子内部存在杂质；•确认连接处是否正确，如连接处泄漏，应及时紧固。
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.. .目的：规液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。
责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。
容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。
常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。
2.液相色谱柱的使用及保养.. .2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
若老化方法不正确或时间不够，极易导致色谱柱在使用较短时间后即产生分离度下降、峰形变差、峰拖尾等柱效降低的情况。
需根据色谱柱不同类型选择不同饱和与老化方法。
2.1.1老化2.1.1.1老化前准备：准备新鲜的超纯水及色谱级乙腈或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。
2.1.1.2将色谱柱反向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3ml/min～0.6ml/min 流速冲洗20min～30min（目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）。
2.1.1.3再将色谱柱正向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3ml/min～0.6ml/min流速冲洗20min～30min（目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）。
2.1.1.4连接检测器，开启柱温达30℃～40℃，用水-有机相（90：10～95:5），以0.3ml/min～0.6ml/min流速冲洗4h以上（目的是充饱和色谱柱，去除柱空气）。
2.1.1.5老化色谱柱：用水-有机相（10：90～5:95），以0.3ml/min～0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min以水-有机相（95:5→0:100）梯度变化，以0.3ml/min～0.6ml/min流速冲洗]；再用100%有机溶剂，以0.3ml/min～0.6ml/min流速冲洗1h以上；最后用100%有机溶剂，以1ml/min 流速冲洗1h以上（不同品牌色谱柱需区别对待）。
2.1.2使用2.1.2.1相平衡过渡:根据水相-有机相的比例，首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30min左右；如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90%以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
2.1.2.2然后更换成新制并经0.45μm滤膜过滤，超声脱气后的流动相，按检测方法平衡至少1h，待基线稳定后，开始进样检测。
2.1.3维护与保养2.1.3.1新柱首次使用，在进样完成后需立即对色谱柱进行净化和有机溶剂饱和。
方法是：用水-有机相（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗1h以上；再用水-有机相（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗30min以上。
（或者采用溶剂梯度变化至100%有机相冲洗120min以上）；最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上；若流动相中有缓冲盐，建议用100%水冲洗1h 以上后，再重复上述净化程序（但个别品牌C8或C18色谱柱不耐受纯水冲洗者例外）。
2.1.3.2新色谱柱使用几次，均正常后，运行完毕净化处理程序可简化为：用水-有机相（90：.. .10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上；再用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上。
当供试品溶液中含有一定量表面活性剂，多次进样后，由于表面活性剂会在筛板及硅胶表面形成表面膜，导致峰变宽、拖尾甚至分叉。
此时，处理方法如下：将色谱柱反向连接，不接检测器，用水-乙腈（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗2h以上；再用100%乙腈，以0.6ml/min流速冲洗1h以上，然后正向连接好色谱柱，用水-乙腈（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上；再用100%乙腈，以1ml/min流速冲洗1h以上，即可恢复。
2.1.3.3净化完毕，若次日不再使用，选择柱说明书中保存条件规定的保存溶剂冲洗10倍柱体积以上，可取下色谱柱，用封头螺丝密封，交色谱柱管理人员入库保存于防尘环境下，备案。
2.1.3.4若色谱柱使用后入库保存，长时间未使用，重新使用时仍需重新饱和。
方法是：用水-有机相（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗1h以上；再用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上；然后调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30min左右；最后用流动相平衡1h以上，进样检测。
必需注意流动相pH值不能超过色谱柱pH耐受围，过酸容易使键合相变态，过碱则易导致硅胶溶解柱床塌陷。
2.1.4常见故障处理与色谱柱再生2.1.4.1当色谱柱使用较长时间之后，就可能发生柱压升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等情况，这时就需要根据故障原因对色谱柱进行清堵与再生，以延长色谱柱的使用寿命。
具体原因及处理方法如下：2.1.4.2 筛板堵塞与柱头塌陷：主要现象有柱压严重升高或不稳定、色谱峰拖尾、色谱峰变宽、色谱峰分叉、秃峰等，需要进行清堵与弹性复原处理。
（此方法适合于任何类型有相同故障的色谱柱的处理，不同的是溶剂要与相应类型色谱柱匹配。
）主要处理方法如下：2.1.4.2.1一般情况下，将色谱柱反接，不接检测器，用纯水或水-有机相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.6ml/min流速冲洗约4h；再正向连接，接或不接检测器，用纯水或水-有机相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.6ml/min流速冲洗约1h；再提高流速至1.0ml/min冲洗1h，观察柱压变化。
若不凑效，则拧开柱头螺母（色谱柱进口），小心取下筛板，用5%左右的硝酸溶液超声处理20min左右，再用纯水超声20min左右。
用小勺清理掉柱进口污染的部分填料，再将用乙醇调和后的相应的硅胶装入柱入口（也可用已经报废的同类柱中的填料替代），用平面不锈钢小铲压紧填平至略高出柱管口，但量不宜太多，否则，压得太紧柱压会升高，然后装上清洗过的筛板，注意筛板安装方向必需与原装相同，最后紧固。
2.1.4.2.2冲洗与饱和：清堵紧固后，先反向连接色谱柱，不接检测器，用纯水或水-有机相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.3ml/min流速冲洗约4h；再换成甲醇以0.5ml/min流速冲洗约2h；再正向连接色谱柱，接或不接检测器，用纯水或水-有机相（多用甲醇、乙腈）（95:5）以0.3ml/min 流速冲洗约2h；再换成甲醇以0.5ml/min流速冲洗约1h；然后用甲醇或乙腈以1ml/min流速冲洗.. .约1h以上，再根据测试用流动相比例调整水-甲醇（或乙腈）比例，以1ml/min流速冲洗约1h；最后用测试用流动相平衡2h，进样测试即可。
2.1.4.2.3特殊说明：如不是特殊情况，按其他办法可行，则最好不要反冲色谱柱和拆卸筛板。
2.1.4.3柱效降低：主要特征性现象有柱压基本正常，但出现拖尾峰、秃峰、分叉峰、前延峰、峰变宽、基线漂移、理论板数降低、分离度降低等。
需要进行再生处理，具体方法如下：2.1.4.3.1一般情况下，顺接色谱柱，按如下溶剂顺序及条件冲洗：95%水-5%甲醇（或乙腈）（1.0ml/min，1h以上）；100％甲醇（1.0ml/min，1h以上）；100％乙晴（1.0ml/min，1h以上）；75％乙晴-25％异丙醇（0.5ml/min，10倍柱体积以上）；100％异丙醇（0.5ml/min，10倍柱体积以上）；100％二氯甲烷（0.5ml/min，10倍柱体积以上）；100％正己烷（0.5ml/min，10倍柱体积以上，根据实际情况可忽略）；100%异丙醇（0.5ml/min，20倍柱体积以上）；95%水-5%甲醇（或乙腈）（0.5ml/min，30min；再升至1.0ml/min，10倍柱体积以上）；检测用流动相平衡2h或至基线平稳，进样测试。
在冲洗过程中，随时关注柱压变化，确保不超过4000psi；若超出，可通过降低流速，升高柱温来调整。
2.1.4.3.2若上述方法效果不理想，可按如上溶剂顺序和条件，先反接色谱柱冲洗；再顺接色谱柱，用100%乙腈以1ml/min流速冲洗约2h；再用与流动相同比例的水-有机相以1ml/min流速冲洗约30min；最后用流动相平衡2h或至基线平稳，进样测试即可。
2.1.4.3.3特别说明：再生过程必须随时关注柱压变化，柱压过高易导致硅胶变形与开裂及键合相极性端连接顺序紊乱，同时要保证再生时间足够。
2.1.4.4当分析复杂样品时间过长，尤其是中药分析，若出现柱压正常而色谱峰形变差，分离度降低时可尝试如下方法再生2.1.4.4.1 先用5%甲醇（或乙腈）-95%水，将色谱柱反向连接，以1ml/min冲洗60min以上；再用四氢呋喃（或丙酮）以0.5ml/min冲洗60min以上（去除脂类）；再用65%甲醇（或乙腈）-35%水，以流速1ml/min冲洗60min；然后用纯甲醇或乙腈冲洗30min；接着用与流动相同比例的水；有机相以1ml/min流速冲洗约30min；最后用流动相平衡2h，进样测试即可。