高效液相色谱仪流动相配置操作规程
高效液相色谱仪流动相配置操作规程
高效液相色谱仪流动相配制标准操作规程1.目的
明确高效液相色谱法流动相配制过程,保证操作过程的规范性;
2.适用范围
适用于实验室高效液相色谱法流动相配制;
于清洁的带塞量筒中,加入适量纯水,振摇,待固体完全溶解后,再加纯水至规定刻度,盖上塞子,摇匀;
4.2.4若该流动相对PH值有特殊要求,根据流动相配制规定的体积比例,用酸或碱调节PH值,用PH计测定直至规定范围内;
4.3流动相抽滤
4.3.1含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分,抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥无水的;
4.3.2抽滤装置准备：将过滤器套在三角烧瓶上,用镊子夹取0.45μm的水系或有机滤膜一张,放在砂芯过滤器上注意：滤膜应将过滤面完全覆盖；再将量杯压在滤膜上,量杯边缘和过滤器的边缘对齐；用配套的夹子将过滤器和量杯接头边缘
4.6流动相配制工具清洁
4.6.1配制含水流动相用器具：先用自来水清洗一次,再用纯化水清洗3次,沥干后封口备用;
4.6.2配制不含水流动相用器具：用纯有机溶剂少量倒入已安装完毕的抽滤装置内,抽滤润洗一次,再将抽滤过的有机溶剂转入量筒内润洗量具,洗液倒入废液桶
后,待用;
4.7填写配制记录
流动相配制后,配制人员及时填写相应的配制记录;
4.8注意事项
4.8.1流动相所用溶剂应选用色谱纯、高纯水或双蒸水;。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪1流动相的配置及其注意事项
二 配置过程的注意事项 1 取瓶子的时候要记住要拿稳，由于瓶子很高，脚下要垫台 阶才能取瓶子。 2 瓶子取下后要立即用封口膜封口，防止有灰尘进入瓶中。
5 抽滤甲醇，水和冲洗液的顺序是超纯水，冲洗液和纯甲醇。因为超纯水过滤完后会有 残留，对冲洗液的影响不大，冲洗液需要用有机系滤膜，甲醇可以继续使用该滤膜。 6 抽滤完毕后用保鲜膜将各瓶封口，放到超声洗涤机里面超声30分钟，赶出液体内的 空气。
7 超声结束后，将各瓶放在高效液相色谱仪上面，记住要对号入座，甲醇瓶放在A处， 超纯水瓶放在B处，冲洗瓶放在C处，空瓶放在D处。吸液管也要仔细查看管线上的编号， 盖住各瓶，切记不要弄错。
2 打开通风橱电源，照明，抽风，由于有机相有毒，戴手套和口罩。手套不能有破洞， 有毒液体不要滴到身上。 3 取超纯水，使用纯水机制备，一定要用超纯水。制备方法参看纯水机操作手册。超纯 水要用专用的干净的玻璃容器盛装，玻璃容器不能用作其他用途。 4安装抽滤装置，抽滤有机液选择有机系滤膜，抽滤水选择水系滤膜。冲洗液也要用水 系滤膜. 滤膜要使用镊子夹取，不要用手。每次用一张即可。
??8将一切做完之后就要清洗过滤装置和使用的仪器流动相的配置和过滤装置记住不要用任何洗涤剂进行清洗只用超纯水进行淋洗冲洗还可以浸泡于装超纯水的烧杯中然后放在超声机中进行清洗
高效液相色谱仪流动相的配 置及其注意事项
以甲醇水流动相为例
一 流动相的配置过程
1 取下色谱瓶，由于没有封盖，需要用保鲜膜迅速封口，拿到通风橱。
Agilent1260高效液相色谱仪操作规程
Agilent1260高效液相色谱仪操作规程1开机前准备1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45Rm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B 中；对照品和样品溶液进样前要经0.45Rm滤膜过滤。
1.2若流动相中含有缓冲盐，则必须以每分钟2〜3滴的速度虹吸10% 的异丙醇水冲洗seal-wash,以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
2开机2.1打开电源，打开计算机，进入Windows系统，从上到下依次打开各模块电源。
2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。
2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。
2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min , A通道设到100%,单击“确定”。
2.6单击“泵”图标,出现参数设定菜单,单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge,直到管路内由溶剂瓶A到泵人口无气泡为止；切换B通道（B通道设到100%）继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
（查看柱前压力，若大于10Bar, 则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
）2.7将泵的流量设到0.5ml/min,若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%, B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min ，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
2.8单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。
2.9把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/ 水或10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳定后，打开检测器等，监视基线。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
高效液相操作规程
A-10 高效液相色谱仪操作规程1、准备：流动相：按方法要求配制流动相(水相、有机相、柱塞密封垫清洗液、洗针液)，经0.45 m 微孔滤膜过滤，并超声波脱气。
样品溶液：按方法要求配制样品溶液，并以过滤或高速离心方式除去溶液中的固体微粒。
2、开机及平衡系统：2.1 打开仪器电源，仪器自检；2.25分钟；2.31-2次；2.4打开真空脫气机，执行灌注：当溶剂的管路是空时候，或不小心走干溶剂的时候，执行2.5设定流动相条件平衡色谱柱；2.63、进样：3.1装载样品盘，准备进样；3.2打开计算机，运行Empower软件：编辑仪器方法和方法组，建立方法；进入平衡系统/监视基线界面，选择相应的仪器方法，点击进入进样参数编辑界面，输入样品名称、功能、方法组等存放数据文件的Project，运行Run Samples。
4、数据处理及打印：在Empower软件中运行Channels表中打开数据，建立处理方法；用建立好的处理方法处理数据；在Result表中选择要打印的结果，选择打印格式，打印数据。
5、关机：实验结束后，退出Run sample界面，退出Empower软件，关闭检测器电源；先用5：95乙腈清洗色谱柱约30min，然后用纯乙腈清洗色谱柱约60min。
清洗灌注柱塞密封1min。
清洗灌注针头2次。
冲洗进样器。
降低流速至0，待系统压力回零后，关闭2695电源。
关闭计算机及显示器电源。
6、仪器维护：正常使用时：流动相新鲜配置，使用缓冲盐溶液必须经0.45 m微孔滤膜过滤，置换流动相时要考虑前后两种流动相可以互溶，如：甲醇——水——缓冲盐——水——甲醇，不可直接甲醇/乙腈置换到缓冲盐。
长期不使用时：各管路充满甲醇或者乙腈，防止管路内和过滤头长菌。
每月开机一次至少半个小时，查看仪器自检及各种功能是否正常。
色谱柱使用后用说明书指定的流动相冲洗至少十倍柱体积，每半年至少冲洗一次。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。
为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。
b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。
c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。
2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。
b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。
3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。
b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。
4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。
b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。
5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。
b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。
6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。
b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。
7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。
b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。
8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。
b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。
总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。
遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。
高效液相色谱仪操作规程
高效液相色谱仪操作规程1．开关机顺序●开机顺序：打开LC各单元电源－控制器电源－电脑－LC-Solution工作站，开机后能听到“哔”声。
●关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭LC-Solution工作站－控制器－LC各单元电源2．流动相及样品的准备●流动相配制所用的有机相必须是色谱级的，所用的水必须是双重蒸馏水。
流动相必须经0.45um 的微孔滤膜过滤后方能进入LC系统。
水和有机相所用的微孔滤膜不同，有机相（如甲醇）的过滤用F膜，水用水膜。
●样品溶液亦必须用0.45um 的微孔滤膜过滤后才能进样。
3．工作站的进入及系统的开启●双击桌面上的“labsolution”图标，选择“operation”项并单击，在弹出窗口后按OK进入工作站。
●首先打开A、B泵上的排空阀（open方向旋转180度）。
然后按二泵面板上的“purge”键开始自动清洗A、B流路3分钟，然后在分析参数设置页中设置流速1ml/min，BCONC 0％，并设置合适的检测波长，柱温，停止时间。
在完成后点击“Download”将分析参数传输至主机。
●分析方法的保存：选择file－save method file as－取名保存文件●系统的启动：点击“instrument on/off”键开启系统（此时泵开始工作。
4．进样准备●观察基线及柱压，待基线平直（－5～80mv），压力稳定（0.5Mpa内）时方可进样。
5. 进样●点击助手栏中的“single start”键，弹出对话框，在对话框中输入“sample name”“method”“data file”等。
●填完后点击“start”，出现触发窗口，进样，仪器开始自动采样分析。
6. 数据文件的调用及查看●点击助手栏中的“Postrun analysis”键，打开数据处理窗口。
●打开文件搜索器，定位至数据文件所在文件夹，选择文件的类型，双击文件名即可打开数据文件（此时可以查看峰面积、保留时间等参数）。
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高效液相色谱仪流动相配制标准操作规程1.目的
明确高效液相色谱法流动相配制过程，保证操作过程的规范性。
2.适用范围
适用于实验室高效液相色谱法流动相配制。
3.职责
实验室分析人员负责按本规程进行操作。
4. 内容
4.1流动相批号的编写原则：流动相批号按配制日期编制，如批号20150609，代表2015年06月09日配制。
4.2流动相配制
4.2.1含水流动相和不含水流动相的配制所用量筒应区分开，配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒必须是干燥状态，不得有水。
4.2.2根据样品分析方法所规定的流动相体积比例配制，在清洁的带塞量筒中分别倒入相应的溶剂，若该流动相需加入适量的酸或碱，则戴上一次性手套，用专用注射器吸取规定体积的酸或碱，加入量筒，盖上塞子摇匀，振动过程应主要排气。
4.2.3含盐的缓冲液类流动相的配制应根据规定比例配制，分别秤取规定重量的盐于清洁的带塞量筒中，加入适量纯水，振摇，待固体完全溶解后，再加纯水至规定刻度，盖上塞子，摇匀。
4.2.4若该流动相对PH值有特殊要求，根据流动相配制规定的体积比例，用酸或碱调节PH值，用PH计测定直至规定范围内。
4.3流动相抽滤
4.3.1含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分，抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥无水的。
4.3.2抽滤装置准备：将过滤器套在三角烧瓶上，用镊子夹取0.45μm的水系或有机滤膜一张，放在砂芯过滤器上（注意：滤膜应将过滤面完全覆盖）；再将量杯压在滤膜上，量杯边缘和过滤器的边缘对齐；用配套的夹子将过滤器和量杯接头边缘固定（注意夹子位置应避开抽滤嘴）；将抽滤软管套在抽滤嘴上。
4.3.3抽滤：将少量配置好的流动相倒入量杯内，观察是否有漏液现象，若出现漏液须重新固定过滤器和量杯。
如未漏液则继续倒入流动相（注意不要超过量杯最大刻度线），开启真空泵抽滤。
抽滤结束先拔掉与抽滤嘴连接的真空软管，再关闭真空泵。
4.3.4脱气：将抽滤好的流动相转入流动相试剂瓶内（少量润洗一次倒入废液桶内再盛装），盖上瓶盖（瓶盖不得拧紧），常温下超声波超声15至20分钟。
4.4流动相储存及标识
流动相全部转入专用试剂瓶内后拧紧瓶盖，及时填写《流动相标签》贴于试剂瓶身中间位置，备用。
4.5流动相有限期如下：
4.6流动相配制工具清洁
4.6.1配制含水流动相用器具：先用自来水清洗一次，再用纯化水清洗3次，沥干后封口备用。
4.6.2配制不含水流动相用器具：用纯有机溶剂少量倒入已安装完毕的抽滤装置内，抽滤润洗一次，再将抽滤过的有机溶剂转入量筒内润洗量具，洗液倒入废液桶后，待用。
4.7填写配制记录
流动相配制后，配制人员及时填写相应的配制记录。
4.8注意事项
4.8.1流动相所用溶剂应选用色谱纯、高纯水或双蒸水。
4.8.2过滤流动相时应注意区分水系膜和有机滤膜使用范围，防止误用。
4.8.3配制不含水流动相的抽滤器具及存储容器应清洁干燥，不得残留水份。
4.8.4流动相严禁超过储存期限使用，经验证储存期限超过有效期流动相比例未发生变化的，须重新抽滤流动相并进行超声脱气处理后使用。
4.8.5不含有机溶剂的水系流动相每次使用前应进行刷洗，自来水冲洗干净后用纯化水润洗3次以上。