Waters_2695_型高效液相色谱仪操作方法
watersHPLC2695操作规程
Waters 2695 型高效液相色谱仪操作规程
1.打开电脑，再打开色谱仪和检测器电源开关，等待仪器自检。
当仪器自检完
毕后，色谱仪屏幕上的状态显示区会出现“idle”状态，此乃表示开机测试正常。
2.灌注溶剂通道，打开排液阀，按“Menu/Status” 键，进入Status→按“Direct
Function” 键，选择Dry Prime，然后按OK→按屏幕上你想dry prime的相应流路键→按continue，手动抽至溶剂流出。
3.湿灌注。
按“Direct Function” 键，选择Wet Prime，然后按OK→输入用于prime
的流速（7.5mL/min）和持续时间（6min）→按OK。
4.将样品瓶放入样品转盘内，并记录各瓶号名称。
5.双击电脑桌面上的Empower图标，输入用户名和密码，进入Empower软件控
制。
编辑项目方法和样品方法。
6.运行样品，采集数据，记录各物质的色谱峰。
记下各组分的保留时间和峰面
积。
7.使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样
针和柱塞杆密封垫，确保2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关，关闭检测器电源开关。
8.处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登记。
Waters2695操作规程
Waters2695高效液相色谱操作规程[开机程序]1. 状态检查：1）检查仪器外观是否完好2）检查各种线缆连接是否稳固，外表有无损伤痕迹3）确认环境温度在15至35℃之间4）相对湿度在20%至80%之间2．配件安装：无3. 接线要求：1）高效液相色谱主机电源2）连接电脑主机和显示器电源4. 开机步骤：1）打开电脑电源，进入windows系统2）打开高效液相色谱电源，仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。
[测试步骤]1. 进入软件1）双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。
输入用户名与密码，默认账号为“system”，密码为“manager”，点击“OK”进入Empower 工作站。
2）选择“运行样品”界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统2 编辑仪器方法和方法组1）在“运行样品”界面中，监视区单击方法组编辑向导。
2）选择新建按钮，弹出仪器方法编辑器。
3）通用编辑页面中，可设置单次输送体积，查看脱气选项，确认设置正确，选择等度或者梯度，总流量以及流动相配比等选项。
4）单击2475图标，弹出2475编辑界面，在波长模式中选择相应的波长模式，单波长或者双波长，输入所需的波长，选择相应的采样速率，一般为2点/秒。
5）点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”，退出。
6）在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步”。
7）在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择"无处理"、"无报告"），点击“下一步”。
8）输入方法组名称，单击"完成"。
3 运行方法进样1）在“运行样品”界面中，选择相应的仪器方法，点击“监视器”，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击停止按钮。
单进样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45μm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
确认流动相管线和相对应的脱气管线。
WATERS_2695操作流程
WATERS 2695仪器操作简明流程2695分离单元使用操作：1)开机自检打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”字样表示自检成功。
2)脱气（Degas）按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
3)设定柱温（可选项）在“Status（1）”界面，移动光标至“Col Htr Set”，输入目标温按Enter即可。
（可在工作站方法中设置）4)Prime Seal Wash（清洗柱塞杆）按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“Prime Seal Wsh”，“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。
5)Wet Prime在“Status（1）”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“2 Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。
将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。
6)Purge Injector（注射器排气泡及清洗）进入“Direct Function”界面后，选择“3 Purge Injector”，“OK”，默认数值为6，“OK”。
7)Prime Needle Wash（清洗注射针）进入“Diagnostics”界面，按下排功能键之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默认30秒钟，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。
注：以上4）-7）为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。
若发现注射器中有气泡，则可重复6）直至排除。
如果流动相中含有盐类，则实验结束后必须用水清洗柱塞杆（即操作4））。
Waterse2695型高效液相色谱仪操作规程
Waterse2695型高效液相色谱仪操作规程Waters e2695型高效液相色谱仪操作规程仪器组成及开机1(1 仪器组成本仪器由waters2695分离单无、2489紫外可见光检测器、2424 蒸发光散射检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。
2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
1(2 开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源(注:在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应)。
接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。
溶剂管理系统的准备2(1 流动相的脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。
2(2 启动溶剂管理系统2(2(1干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status(1)”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间(一般为5分钟)，按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
2(2(2 湿启动在“Status(1)”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间(5ml/min和5min)按[OK]。
Waters2695高效液相色谱仪操作规程
Waters2695高效液相色谱仪操作规程使用Waters2695高效液相色谱仪前，请认真阅读使用说明，熟悉仪器的使用方法。
一、自检开主机和二极管阵列检测器（PADA）（或荧光检测器FD），仪器进入自检阶段。
约2分钟后PADA两个灯都亮，正常；主机自检所需时间较长，自检完后显示idle。
二、配置系统1．项目管理数据（相当于新建文件夹）名（设定后将出现在运行样品中）。
2．系统三、运行样品在采集数据项目栏中选定项目（即将此次实验数据选择存放位置）→确定出现运行样品表：分为单一与样品组进样。
1．单一进样品瓶，进样体积，运行时间）如没有可直接选用的方法组，可以在左栏通过“创建方法组”来设定使用的仪器方法（即对配置系统一步选定的主机和检测器进行参数设置）：创建方法组→选择仪器方法（新建→编辑仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中→下一步→出现“缺省方法项”对话框，点下一步→出现“命名方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相同）对话框→完成。
返回“运行样品”对话框，选方法组和仪器方法。
Notice:主机W2695的参数配置主要是针头深度设置，脱气设置，流量(4000psi)，泵模式（等度和梯度），柱温（划√）。
检测器W2699的参数配置主要是输入开始波长和结束波长（200-700nm）。
检测器W2475的参数配置：设定发射波长（λem）、激发波长（λex），增益（默认值为10太大，改为1即可）。
PADA能看到光谱图和色谱图；但是对于FD没有光谱图，在“运行样品”的右栏只出现一个图谱。
FD回零不好时按面板上的“auto zero”（FD 的其余操作可以通过软件调节）与样品组进样界面相比，多了一个进样按钮（等监视基线平稳后，按中断按钮，再按此按钮即进样分析）。
2．样品组进样左栏可以设置有关样品的信息（每一栏的设置为下拉式菜单），右栏出图，左下栏给出仪器信息，最下栏显示仪器状态。
waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法
Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法1 仪器组成及开机1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。
2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通 2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。
2 溶剂管理系统的准备2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕，光标选“ Degasser ”，按【 Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“ Continuous ”，按【 Enter 】。
2.2 启动溶剂管理系统2.2.1 干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“ Status （ 1）”屏幕下，按【 Direct Function 】，光标选“ Dry Prime ”，按【 Enter 】，显示“ Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“ Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
2.2.2 湿启动在“ Status （ 1 ）”屏幕下，光标选“ Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“ Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“ Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【 OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。
Waters2695高效液相色谱仪操作规程(初稿)
Waters2695高效液相色谱仪操作规程1开机前的准备工作1.1 检查设备电源、流路、信号连接是否完好；1.2 流动相：配制相应的流动相，经0.45μm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气1分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗；1.3 样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45μm滤膜过滤。
1.4 清洗柱塞密封垫（Seal Wash）的溶液配制：含5%-10%甲醇或乙腈的超纯水（适用于反相色谱）；1.5 洗针液（Needle Wash）的配制：50%甲醇：50%水（适用于反相缓冲溶液）；100%甲醇（适用于反相非缓冲溶液）。
2 开机平衡系统2.1开机自检打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”自检完成。
2.2脱气（Degasssger）按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status(1)”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
一般默认是开的。
2.3设定柱温及样品室温度（可选项）在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter；光标移至“Sample”,选择目标温度（4℃-40℃），按Enter。
（可在工作站方法中设置）2.4灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）在主屏幕下，按【Diag】，显示“Diagnosties”屏幕，按【Prime Seal Wash】,显示“Prime Seal Wash”屏幕，按【Start】,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按【Hart】、【Close】、【Exit】。
2.5灌洗针头清洗泵（Prime Needle Wash）在主屏幕下，按【Diag】，显示“Diagnosties”屏幕，按【Prime Ndl Wash】,显示“Prime Needle Wash”屏幕，按【Start】,30s内应见溶剂从废液排放口流出，按【Close】、【Exit】；若想要多清洗几次时，请按 Start Again。
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Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法
1 仪器组成及开机
1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。
2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通2695 分离单元后，约20s 仪器开始自检，约1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。
2 溶剂管理系统的准备
2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status 】，进入“Status （1 ）”屏幕，光标选“Degasser ”，按【Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“Continuous ”，按【Enter 】。
2.2 启动溶剂管理系统
2.2.1 干启动，当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status （1 ）”屏幕下，按【Direct Function 】，光标选“Dry Prime ”，按【Enter 】，显示“Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
2.2.2 湿启动在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。
2.2.3 平衡真空脱气机在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成，按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”，按【Enter 】，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，输入0.000mL/min 和10min. ，按【OK 】。
待限定时间结束后，按【Abort Prime 】。
3 样品管理系统的准备
3.1 冲洗自动进样器在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。
按【Direct Function 】，光标选“PurgeInjector ”，按【Enter 】，显示“Purge Injector ”屏幕，输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”，光标下移“Compression Check ”，按任意数字键，按【OK 】。
3.2 冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnositcs ”屏幕，按【Prime Ndl Wash 】，显示“Prime Needle Wash ”屏幕，按【Start 】，30s 内应见溶剂从废液排放口流出。
按【Close】、【Exit 】。
3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnosities ”屏幕，按Prime Seal Wash ，显示“Prime Seal Wash ”屏幕，按【Start 】，待排放口有水流出，按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。
3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。
4 编辑分析方法及执行样品分析表
在主屏幕下，按【Develop Methods 】，显示“Methods ”屏幕。
4.1 编辑分析方法
4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下，按【New 】、【Separation Methods 】，输入方法名，按【Enter 】，显示分离方法屏幕，该屏幕共有6 页，通过按【Next 】或【Prev 】切换。
如需设定梯度，在第（ 1 ）页按【Gradient 】，输入后按【Exit 】；如需设定色谱柱的温度，在第（ 4 ）页输入后按【Exit 】；在第（6 ）页设定检测器的种类，光标选“Absorbance Detector ”，按【Enter 】，光标选“48 6﹨2487 ”，按Abs （1 ）图标，设定检测波长，按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。
4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下，光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标，按【Edit 】，编辑\ 改各种分析参数，按【Exit 】、【Save 】。
4.2 编辑执行样品分析表
4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下，按【New 】、【Sample Set 】，输入样品组名，按【Enter 】，显示方法组屏幕，在样品组表中输入待分析样品的信息。
在“Vial ”中输入样品放置的位
置；在“Function ”中光标选择“Sandard ”或“Sample”；在“Method ”中选择已建立的方法；在“inj ”中输入进样的次数；在“μL ”中输入进样的体积；在“min ”中输入运行时间。
按【Exit 】、【Save 】。
4.2.2 编辑已建立的样品组在“Methods ”屏幕下，光标选欲编辑﹨修改的方法组的图标，按【Edit 】，编辑﹨修改待分析样品的信息，按【Exit 】、【Save 】。
5 运行样品
5.1 在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Method ”，按【Enter 】，选已建立的分离方法；光标选“Flow ”，输入流速，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。
5.2 在主屏幕下，按【Run Samples 】，光标选已建立的样品组，按【Run 】、【Satrt 】。
6 报告打印
在主屏幕下，按【Config 】，显示“Configuration ”屏幕，按【Reports 】，在“Report Options ”对话框中选择欲输出到打印机或软盘的信息，按【OK 】、【Exit 】。
7 关机
7.1 使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫，确保2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关。
7.2 数据采集完毕后，关闭检测器电源开关。
7.3 处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登记。
附注：
（1 ）2695 分离单元除用上述的系统控制模式外，还可设置非交互模式和色谱工作
站控制模式，详见仪器使用说明书。
（2 ）色谱管理工作站
①配置安装了数据处理软件的计算机。
②数据处理如果使用Waters 的Millennium 色谱管理工作站控制2695分离单元分析测定样品，当工作站采集数据时，2695分离单元屏幕上方的标题区出现“Remote”。
色谱管理工作站的基本操作步骤为：设置一个含有2695 分离单元的色谱系统，建立一个含有2695 分离单元的仪器方法，用已获得的仪器方法建立一个方法组，用已建立的方法组运行样品，处理并打印出色谱运行所得到的数据。