高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤

高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用,将样品中的混合物分离出来,并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前,首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确,确保色谱柱是干净的,并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质,准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤,以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源,打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化,并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统,等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡,并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中,控制样品的注射量,通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统,进行样品的分离与分析。
在此期间,流动相通过色谱柱,将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号,可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中,进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据,从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后,关闭高效液相色谱仪的电源开关,并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行,并延长其使用寿命。
总结:高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
高效液相色谱仪(Agilent1100型)操作步骤

一、开机1、开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类);把流动相放入溶剂瓶中。
A瓶:为水相;B瓶:为有机相。
2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口, 5min内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成:——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等;——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等;——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告;——中下部为动态监测信号;——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法:从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。
2、方法信息:在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。
单击OK,进入下一画面。
3、泵参数设定:进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
高效液相色谱操作流程

1. 开机自检具体操作如下:(1)打开Alliance 2695和2489的电源开关至ON,仪器开始自检;(2)仪器进行大约5分钟的自检过程,待仪器自我测试完毕后,出现画面上方的状态显示区出现Idle,表示开机测试正常。
(3)打开Empower软件,进入系统(用户名system,密码manager)2. 流动相(1)有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好),水合缓冲盐溶液要用超纯水,每48小时制备新鲜的水相流动相,尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。
(2)检查6根管子是否都在液面以下,溶剂的位置必须高于溶剂混合阀,并检查、计算溶剂的用量,不够需及时配制、添加。
洗针液的溶剂瓶应放于试验台面上,与2695仪器底部位于同一水平面上。
(3)柱塞密封垫(Seal Wash)、针以及进样器选用甲醇进行清洗,所用所有溶剂或溶液均需用0.45μm的膜过滤并超声脱气20分钟,用洁净的玻璃容器盛放,避免污染,同时玻璃容器应用超纯水清洗而不能用自来水。
3. 灌注柱塞密封清洗清洗操作步骤:(1)回到Menu画面,选择Diag,确定Seal Wash的管路放在正确的位置;(2)按Prime Sealwash,再按Start,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管,先按Halt,再按Close4. 灌注针头清洗操作步骤:回到Main画面,选择Diag,按下Prime NdlWash。
设定值为30秒,若想多洗几次,按Start Again。
5. 打开真空脱气机如液相仪管路干,可进行使用,如管路不干则按照以下步骤进行操作:按Menu/Status键,进入Status(1)画面;利用方向键将光标移至Degasser位置,按Enter;利用上下键选择模式为ON。
注意在开启除气装置时,要确认所用溶剂管路都充满溶剂;若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime操作。
6. 执行干灌注确定流动相溶剂的管子放在正确的位置,检测器(Detector)废液管及定量环(Sample Loop)的废液管是否放置于适当的废液容器中。
高效液相色谱法操作步骤

高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯,且溶剂及样品必须过膜(0.45μm)。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器,然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度,以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪:泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数,如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵,运行5分钟,主要是为了排除系统中的气泡,结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度,以固定的速率,如1mL/min左右,运行流动相,走基线,直到基线平稳。
7. 基线平稳后,在软件中设置样品的运行参数,如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中,需要及时调整和监控各项参数。
hplc高效液相色谱仪使用方法

hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器,广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。
下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。
一、仪器准备:1.检查仪器的状态,确认各个部件是否正常运行,如高压泵、进样器、检测器等。
2.开机预热:打开主机电源,按照仪器操作手册上的指示,进行仪器的预热操作。
一般要求预热时间为30分钟到1小时。
二、工作站设置:1.打开工作站软件,点击新建分析方法。
根据分析需求选择不同的方法类型,如梯度洗脱、等温洗脱等。
2.设置流动相组成:根据分析物的性质和目标,选择合适的流动相,并设置其浓度和比例。
可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。
3.设置进样器参数:选择合适的进样方式,如全自动进样、微量进样等。
设置进样量和进样速度,根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。
4.设置检测器参数:选择合适的检测器类型和波长。
一般情况下,紫外检测器是最常用的检测器,波长选择通常在200-400nm之间。
5.设置柱温:根据分析物的性质和目标,选择合适的柱温。
柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。
三、样品处理:1.样品制备:根据分析目标和方法要求,对样品进行处理,包括固相萃取、溶解、过滤等。
2.进样器设置:将样品注入进样器,确保进样量与方法要求相符。
3.进样:点击工作站软件上的进样按钮,开始进行进样。
进样过程中要确保无气泡进入柱。
四、开展分析:1.开始分析:点击工作站软件上的开始按钮,运行分析方法。
监控色谱图,观察峰的形状和分离度。
根据需要可以对分析方法进行优化,如调整流速、洗脱程序等。
2.数据处理:完成分析后,保存并导出色谱图和数据。
进行数据处理和结果分析。
五、仪器维护:1.使用完毕后,关闭泵和检测器,将柱中流动相完全排空,以免柱内残留物引起污染。
2.保养柱:每次使用后,要清洗柱和重新平衡柱。
柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。
3.保持仪器干燥和清洁:定期清洁仪器,尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件,以保证仪器的正常运行。
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项

高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一,高效液相色谱仪操作过程:1、开机操作:(1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开Bootp Server(一般启动时已打开);(2)、自上而下打开个组件电源,Bootp Server里显示有信号时(有六行字符),打开工作站(先打开On line);(3)、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(需用针捅抽),控制流量大小,以能流出的最小流量为准;(4)、注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于最低限会自动停泵,注意洗泵溶液的体积,及时加液;(5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态,及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相,必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相),正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯,以延长灯的使用寿命;3、建立色谱操作方法,注意保存为自己命名的Method,勿覆盖或删除他人的方法及实验结果;4、使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡;5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎,在更换流动相时注意保护,当发现过滤头变脏或长菌时,不可用超声洗涤,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤;6、实验结束后,一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上,再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯;7、关机时,先关闭泵、检测器等,再关闭工作站,然后关机,最后自下而上关闭色谱仪各组件,关闭洗泵溶液的开关;8、使用者须认真履行仪器使用登记制度,出现问题及时向老师报告,不要擅自拆卸仪器。
(续)1、操作过程若发现压力很小,则可能管件连接有漏,注意检查。
当出现错误警告(各组件指示灯均为红色),一般为漏液,其中一个感应器中已有溶剂,漏液故障排除后,擦干,点击On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案

高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤:1).过滤流动相,依据需要选择不同的滤膜.2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3).打开hplc工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4).进入hplc掌控界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
5).有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。
冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6).调整流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000、点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,察看基线的情况。
7).设计走样方法。
点击file,选取se—lect users and methods,可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法,点击new method。
选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,依据需要而不同。
选完后,点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2—5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading—inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。
8).进样和进样后操作。
选定走样方法,点击start。
进样,全部的样品均需过滤。
方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。
全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9).关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10).填写登记本,由负责人签字。
注意事项:11).流动相均需色谱纯度,水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12).柱子是特别脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。
13).全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14).压力不能太大,可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液,可以想象对液相的紧要程度。
高效液相色谱仪的操作流程和注意事项

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言:高效液相色谱仪(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种重要的分析仪器,广泛应用于化学、生物、医药等领域。
掌握正确的操作流程和注意事项,对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。
下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。
一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前,需要进行一些准备工作。
首先,检查仪器是否正常工作,例如电源是否正常接通,各个模块是否连接牢固等。
其次,确保色谱柱处于良好的工作状态,即没有泄漏和堵塞等问题。
最后,根据需要,选择合适的检测器,并校准相应的参数。
二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。
首先,根据样品的性质选择合适的溶剂体系,并将样品完全溶解。
其次,为了提高分析的准确性,通常需要对样品进行预处理,例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。
最后,将样品装入进样瓶中,根据仪器的要求设定进样量。
三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。
在选择流动相时,需要考虑样品的性质以及分析的目的。
常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。
在选择后,需要准备流动相,并进行除气处理以去除气泡。
此外,还要注意流动相的质量,例如pH值、浓度等。
四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。
根据分析的目的和样品的性质,需要设置合适的参数,例如流速、温度、梯度等。
在设置前,需要根据样品性质选择合适的色谱柱,并设定相应的温度以优化分离效果。
此外,还需要根据检测器的要求设定相应的参数。
五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时,需要进行数据采集和结果分析。
首先,确保数据采集系统正常工作,并根据仪器的要求进行设定。
其次,启动数据采集并进行监控,及时记录实验过程中的各项指标。
最后,对采集的数据进行处理和分析,例如峰面积的计算、峰形的分析等。
注意事项:1. 严格按照操作流程进行操作,避免任意更改设置。
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高效液相色谱仪操作步骤:1).过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
2).对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3).打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4).进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
5).有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。
冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6).调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。
点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。
7).设计走样方法。
点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法,点击new method。
选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。
选完后,点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。
8).进样和进样后操作。
选定走样方法,点击start。
进样,所有的样品均需过滤。
方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。
全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9).关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10).填写登记本,由负责人签字。
注意事项:1).流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2).柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。
3).所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4).压力不能太大,最好不要超过2000 psi。
液相色谱法简介【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者: dujinx 正文气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果,而必须由已知标准作对照定性。
当无纯物质对照时,定性鉴定就很困难,这时需借助质谱、红外和化学法等配合。
另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。
此缺点可高效液相色谱法来克服。
在经典液相色谱的基础上,引入了气相色谱的理论与技术,在70年代初建立了高效液相色谱分析法(以HPLC表示)。
在常压下操作的液相色谱,分离一个样品往往长达几小时至几十小时,因此工作效率很低。
人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速,以缩短分离时间,但是结果失败了。
根据液相色谱理论,因为随着载液(流文档冲亿季,好礼乐相随mini ipad移动硬盘拍立得百度书包动相)流速的提高,板高则增大,所以柱效会显着降低。
随着生产技术的提高,人们制成了细小(<10μm)而高效的填充物,从而使柱效大大提高。
但是随着填充物粒度的减小,柱压降显着增大,为了得到合理的载液流速,使用了高压;输液泵,使流速达到1~10mL/min。
从而使分析一个多组分样品只需几分钟到几十分钟时间。
随着高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用,70年代以业逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。
因此人们常称它为高效液相色谱或现代液相色谱,以区别于经典液相色谱。
高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法一致。
按固定相的聚集状态不同分为液固色谱法和液液色谱法。
按分离原理不同分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。
高效液相色谱所用基本概念:保留值等色谱分析有关术语,以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致;高效液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。
因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相,则速率议程H=A+B/μ+Cμ。
式中:纵向扩散项(分子扩散项)B/μ对板高的影响与气相色谱不同,由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数Dm仅为气相色谱中的万分之一,因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计。
于是影响液相色谱的主要因素是传质项Cu。
由图14—可知,气相色谱(GC)的流动相流速u增大时,板高H显着增大(即柱效显着降低),而液相色谱(LC)的流速增大时,板高增大不显着(即柱效降低不显着)。
这说明高效液相色谱也有很高的分离效能,此外,气相色谱的载气权数种,其性质差别也不大,对分离效果影响也不大。
而液相色谱的载液种类多,性质差别也大,对分离效果影响显着。
因此流动相的选择很重要,并且在选择流动相对应注意以下几点:流动相对样品有适当的溶解度,但不与样品发生化学反应,也不与固定液互溶;流动相的纯度要高(至少分析纯)、粘度要小,以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降;流动相应与所用检测器相匹配,不应对组分检测产生干扰作用。
高效液相色谱不但具有高效、高速、高灵敏度的特点,还由于它的流动相(载液)种类比气相色谱的流动相(载气)多,因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相,从机时可提高选择性。
此外,液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。
便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。
由于高效液相色谱法具有以上特点,它适于分离、分析沸点高、热稳定性差、分子量大(大于400)的气相色谱法不能或不易分析的许多有机物和一些无机物,而这些物质占化合物总数的75~80%。
因此它已广泛用于核酸、蛋白质、氨基酸、维生素、糖类、脂类、甾类化合物、激素、生物碱、稠环芳烃、高聚物、金属螯合物、金属有机化合物以及多种无机盐类的分离和分析。
但是,高效液相色谱的固定相的分离效率、检测器的检测范围以及灵敏度等方面,目前还不如气相色谱法。
此外对于气体和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法,因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短,相辅相成。
1.分离原理凝胶色谱,又称空间排阻色谱。
它是利用某些凝胶对混合物各组分因分子量不同,其阻滞作用也不同而进行分离、分析的方法。
凝胶色谱的分离要理和其它色谱法不同,它类似于分子筛的作用,但凝胶的孔径要比分子筛大得多,一般为几百至几千埃。
色谱柱内填充具有一定大小孔穴的凝胶。
当样品进入色谱柱后,不同大小的样品分子(图14—2中以黑点表示)随流动相沿凝胶颗粒(图14—2中以空心圈表示)外部间隙和凝胶孔穴旁流过,体积在的分子因不能渗透到凝胶孔穴里而得到排阻,因此较为顺利地通过凝胶柱而较早地被流动相冲洗出来。
中等体积的分子产生部分渗透作用,小分子可渗透到凝胶孔穴里去而受阻滞,因有一个平衡过程而较晚地被流动相冲洗出来。
这样,试样组分基本上按分子大小受到不同阻滞而先后流出色谱柱,从而实现分离目的。
光凝胶色谱采用水溶液作流动相进,称为过滤凝胶色谱(HFC),而用有机溶剂为流动相时,称为凝胶渗透色谱(GPC)。
2.固定相凝胶色谱的固定相凝胶,是含有大量液体(一般是水)的柔软而富于弹性的物质,是一种经过交联而具有立柱网状结构的多聚体。
根据凝胶的交联程度和含水量的不同,分了软质、半硬质和硬质三种。
软质凝胶(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等)交联度低,膨胀度大,容量大,可压宿,不能用于高压(使用压力低于3.5kg/㎝2或更低),主要用于含水体系的常压凝胶色谱,半硬质凝胶(如苯乙烯一二乙烯基苯交联共聚凝胶),容量中等,渗透性较高,压力可用到70kg/㎝2。
适用于非水溶剂流动相;硬质凝胶(如多孔硅胶、多也玻球等),膨胀度小,不可压缩,渗透性好,可耐高压,适于高流速下操作。
3.流动相在凝胶色谱中,为提高分率效率,多采用低粘度、与样品折光指数相差大的流动相。
常用的流动相有苯、甲苯、邻二氯苯、二氯甲烷、1,2一二氯乙烷、氯仿、水等。
岛津液相色谱仪注意事项【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者:孔桂昌正文1.流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品,血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法;①以异丙醇作溶剂冲洗:②放在异丙醇中间用超声波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的PH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
以上是我参考了相关资料,并结合在安装使用液相色谱仪中的经验得出的,可能存在某些片面性,如有不当之处请多提宝贵建议。