标准菌珠的管理
标准菌种管理规程
标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
内容：1术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。
2.标准：2.1 检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。
2.2 检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于 2-8?C直到需要使用时。
储存期最长不超过 5 年。
2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。
微生物检验室菌种管理制度
1 目的为确保微生物检验室菌种保管安全，避免微生物检验室菌种生物安全事故的发生。
2 范围适用于微生物检验室所有工作人员及管理人员。
3 定义3.1 测试菌株：一组阳性和阴性质控菌株，只能是具有稳定的性能且有代表性的菌株。
3.2 标准菌株：直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。
按菌株特性进行分类和描述，最好来源于食品或水的菌株。
3.3 标准储备菌株：将标准菌株在检验室转一代后得到的一套完全相同的独立菌株。
3.4储备菌株:从标准储备菌株转接一代获得的培养物。
3.5 工作菌株：由储备菌株、转接一代获得的菌株。
4 标准菌株的使用和保管4.1 标准菌株需使用来自认可的国内或者国外菌种收藏机构，并有相应的标准菌株的证书。
4.2 标准菌株的使用4.2.1 标准菌株可作为日常检测质量控制、验证准确度、已知物质验证新方法、评估检验人员能力。
4.2.2 标准菌株的使用过程中，应避免外来污染，以确保标准菌株的溯源性。
4.2.3 先从冻干粉转至纯培养琼脂平板，再从纯培养琼脂平板移接至冻存管作为标准储备菌株；需做检验室中所需要关键诊断指标的确认以加以记录并予以保存，其管理记录中还应包括以下内容。
a）从原始菌种传代到工作用菌种的代数；b）菌种生长的培养基及培养条件；c）菌种菌落形态及革兰氏染色。
4.2.4 从储备菌株接种制备成工作菌株作为日常检测的质控菌株。
4.2.5 不再使用时将菌株灭活。
4.3 标准菌株的保管4.3.1 标准菌株由专人保管。
保管人负责建立标准菌株目录；目录应包括编号、菌株号、菌种名称、发行单位、购买日期、购买数量等。
4.3.2 标准菌株应做好标识后，应双人双锁保存于专用冰箱中，冻存管保存的标准储备菌株置于-20℃以下冰箱保存。
半固体、斜面等方式保存的标准菌株置于2-8℃冷藏冰箱中保存。
4.3.3 微生物检验人员每个工作日对菌种保存冰箱进行温度监控。
4.3.4 菌种不能随意转接提供给其它单位或个人，需要时须经理批准后方可提供。
实验室菌株的管理制度
实验室菌株的管理制度第一章总则第一条为规范实验室菌株的管理，保障实验室菌株的安全和合法使用，制定本制度。
第二条本制度适用于所有具有实验室菌株管理需求的实验室。
第三条实验室菌株管理的目的在于加强对实验室菌株的管理和使用，保障实验室工作人员和周围环境的安全，维护实验室科研工作的顺利开展。
第四条实验室菌株管理应遵循科学、公正、严谨、规范的原则。
第五条实验室菌株主要包括细菌、真菌、病毒等微生物生物材料。
第六条实验室菌株管理包括菌株来源获取、存放、传递、复制、鉴定、变异、保护、使用和销毁等环节。
第七条实验室菌株管理应遵循"生物安全第一"的原则，确保实验室菌株不会对实验室工作人员和周围环境造成安全风险。
第八条实验室菌株管理应遵循法律法规和相关管理规定，确保菌株的合法获取和使用。
第二章实验室菌株获取与登记第九条实验室菌株的获取应经过实验室负责人或指定人员批准，获取途径包括从合法采购渠道购买、通过国家授权的菌种服务中心获取、从其他实验室或科研单位转入等。
第十条实验室菌株获取应提供相关文献资料和菌株来源信息，并填写菌种来源登记簿进行记录。
第十一条获取的实验室菌株应及时进行分离培养，并制备冻种，保存在冻存物库中。
第十二条实验室菌株应按照标准规范的菌株命名进行分类和登记。
第十三条实验室菌株登记内容应包括菌株名称、来源、分类地点、分离日期、保存人、保存方式等信息。
第十四条实验室菌株的变异信息和相关操作应及时在登记簿中更新记录。
第十五条实验室菌株的姓名登记簿应保存完整、准确，并定期进行备份和归档。
第三章实验室菌株存放与管理第十六条实验室菌株应妥善保存，避免污染和变异。
第十七条实验室菌株应定期进行培养，保持其活力和纯度。
第十八条实验室菌株保存条件应符合各菌株种类的特性和要求，包括温度、湿度、有机溶剂、氧气浓度等。
第十九条实验室菌株的保存应使用专门的冻存设备和保存试剂，并进行定期检验和维护。
第二十条实验室菌株应加强保管，如用金属标签标注，记录存放地点、存放日期、保存人等信息。
标准菌株管理程序
标准菌株管理程序1、目的对微生物标准菌株进行有效管理，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。
2、适用范围适用于标准菌株的购置、验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等。
3、职责3.1主任：负责标准菌株购置计划的审批。
3.2技术主管：负责购置计划的审核。
3.3微生物检测室工作人员：负责标准菌株需求计划的提出盒标准菌株的配制、验收、评估、有效储存盒正确的使用。
3.4监督员：负责对标准菌株的使用进行监督。
4、工作程序4.1供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。
4.2标准菌株和验收实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚，同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。
4.3冻干标准菌株的复活4.3.1开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。
4.3.2复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明或有关技术通则）进行复活。
冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为F0代，捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。
垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。
通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。
挤压并旋转拭子，接种于初级培养板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。
同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤管。
将接种好的平板和管立即进行培养。
细菌培养温度通常为25℃或37℃。
多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。
复活后的菌株为F1代。
4.3.3将TSB生长的浓菌液吸0.5ml于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。
标准菌种管理程序
标准菌种管理程序1.目的为对微生物实验需要的标准菌株进行有效控制和规范管理，防止污染、变异、丢失或损坏，以保证溯源性和稳定性，制定本程序。
2.适用范围适用于微生物实验中标准菌种（原始标准菌种、标准储备菌株和工作菌株）的申购、验收、保管、领用、使用、传代及存储等方面。
3.职责3.1采购部负责依据采购申请规定的名称、规格、数量执行原始标准菌种申购工作；3.2微生物检测人员负责菌种的验收、菌种的领用、、及传代与保存。
3.3生物安全责任人负责批准菌种的双人双锁保管管理\领用、使用及销毁，原始标准菌种的接收工作，标准菌种采用双人双锁保管管理。
3.4生物安全责任人负责组织定期的生物安全检查活动。
4.工作程序4.1标准菌种申购本公司购买的原始标准菌种来源于美国典型菌种保藏中心（ATCC），英国典型菌种保藏中心（NCTC），中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），中国医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC），中国食品发酵工业研究所（IFFI）。
综合部依据《外部服务和供应品采购程序》实施采购工作。
菌种来源机构详见附件一：微生物菌种保藏机构名称和缩写。
4.2菌种分类4.2.1本公司保存的菌种仅包括部分致病性细菌，不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次氏体等菌种。
本公司的标准菌株除了实验所用之外，还应包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制、方法确认/证实、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和结果质量的保证等所需的菌株。
4.2.2菌种的分类根据其危险性决定（包括实验室感染的可能性，感染后发病的可能性，症状轻重及愈后情况，有无致命危险及有效的防止实验室感染方法，用一般的微生物操作方法能否防止实验室感染、我国有否此种菌种及曾否引起流行、人群免疫力等情况）。
依其危险程度的大小，我国的菌种分为四类。
第一类：实验室感染的机会多，感染后发病的可能性大，症状重并能危及生命，缺乏有效的预防方法，以及传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国内未发现或虽已发现，但无有效防治方法的烈性传染病菌种。
微生物实验用菌种管理规程(含表格)
微生物实验用菌种管理规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2.0适用范围适用于微生物实验用菌种管理，包括菌种的申购、传代、使用及销毁等。
3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南4.0职责质量控制实验室负责菌种的申购、传代、使用、销毁等工作，QA负责监控和参与OOS调查。
5.0程序5.1术语和定义5.1.1标准菌株由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心或者其他经认可的机构提供的冷冻干燥菌。
5.1.2传代菌株用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种，3代后的传代菌株在需要时可以作为工作菌株使用。
5.1.3工作菌株用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
5.1.4菌种的代将菌种接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
5.2菌种来源5.2.1标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心（CMCC）或者其他经认可的机构提供的冷冻干燥菌种。
5.2.2质量控制实验室涉及到的菌种种类、代码、保存方法及保存条件如下。
菌种名称菌种代码保存方法保存温度保存期限TSA斜面2～8℃1个月金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003冷冻干燥管-20℃1年TSA斜面2～8℃1个月铜绿假单胞菌CMCC(B)10104冷冻干燥管-20℃1年TSA斜面2～8℃1个月枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501冷冻干燥管-20℃1年SDA斜面2～8℃3个月白色念珠菌CMCC(F)98001冷冻干燥管-20℃1年SDA斜面2～8℃3个月黑曲霉菌CMCC(F)98003冷冻干燥管-20℃1年TSA斜面2～8℃1个月生孢梭菌CMCC(B)64941冷冻干燥管-20℃1年5.3菌种的申购、验收、保存5.3.1菌种的申购5.3.1.1微生物室QC依据菌种的库存及菌种的使用情况，提出采购申请，申请需明确菌种的名称，标准编号以及申购数量等信息。
菌种管理操作规程
文件制修订记录1.目的规范本中心标准菌种和野生菌种的管理。
2.范围本规程适用于标准菌种和实验过程中分离纯化的野生菌种的管理。
3.职责3.1菌种管理员：负责菌种的申购、接收、保存、分发。
3.2微生物检验员：负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
3.3科室负责人：负责指导、监督检验员和管理员对菌种的管理。
4.术语4.1标准菌种(冻干菌种)：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌种。
4.2标准储备菌种：又称传代用菌种，由标准菌种经一次传代得到的培养物，是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作菌种。
4.3工作菌种：工作菌种是指用标准菌种或标准储备菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
4.4代：菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从）。
菌种保藏中心获得的冷冻菌种为第0代（G5.程序5.1菌种的申购菌种管理员每年根据菌种的使用情况（包括临时检验需要）提出购买计划，经批准后，向菌种保藏中心购买标准菌种（冻干菌种），采购执行《服务和供应品的采购程序》。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由菌种管理员接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写《标准菌种接收记录表》，贴好标签并按照该菌适宜储存条件进行储存（储存期及储存条件见菌种说明书）。
5.3菌种的编号5.3.1标准/标准储备菌种采用字母加数字表示：英文缩写字母-来源编号-代次-传代日期-顺序号。
菌种的英文缩写字母：大肠埃希菌（E.c）、金黄色葡萄球菌（S.a）、枯草芽孢杆菌（B.s）、黑曲霉菌（A.n）、白假丝酵母（C.a）等，来源以购进方编号为准；代数用一位带有下标数字的字母表示；标准/标准储备菌种用G表示；工作菌种用W表示；如G3表示标准菌种第3代；W3表示工作用菌种第3代。
传代日期用6位数字表示：年份取最后两位数，月、日分别用两位数。
微生物检测实验室——标准菌株的管理
微生物检测实验室——标准菌株的管理标准菌株概念及其应用1.1标准菌株概念GB/T 27405-2023 试验室质量掌握规范食品微生物检测：1、标准培育物：标准菌株、标准储备菌株和工作菌株的统称。
2、标准菌株：至少定义至属或种水平的菌株。
按其特征进行分类和描述，有明确的来源。
3、标准储备菌株：标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。
4、工作菌株：由标准储备转接后获得的同种菌株。
1.2标准菌株的应用：各种国际标准、国家标准、行业标准及企业标准等的相关微生物检测，用于验收培育基(包括试剂盒)、验证方法和评估试验操作。
微生物菌种管理的相关流程2.1菌株的采集：试验室用菌种一是到国家法定机构选购，二是购买ATCC菌种，三是科研中菌种沟通。
不管是哪种来源，均统一采集。
采集中严格根据规范执行。
要求包装牢靠，采集快速，不泄不污染。
保证菌种合格和环境平安。
采集中要有菌种传代标识。
选择有资质的标准菌株的合格供应商，批标准菌株必需附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所选购的标准菌株是合格的。
2.2标准菌株和验收：试验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清晰。
同时还应记标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等状况。
2.3冻干标准菌株的复活：2..3.1开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株接收、保存记序号前面。
2.3.2复活：选择合适的培育基和培育条件（依据生产商说明或有关技术通则见附）进行复活。
菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培育基上，除非特别状况或特殊推举，一般不用液体培育基。
冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。
捏管处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。
垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。
通过挤捏压碎小球使其与液体混合，马上将拭子浸于水合液体。
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Procedure for Maintaining and Handling Reference Microorganism标准菌株的管理与控制1. Aim 目的To maintain and handle stock cultures of reference strains for quality control and performance testing purposes. This procedure will minimize the opportunity for cross contamination, mutation and alteration of typical characteristic of the reference strains.规范用于微生物实验质量控制和操作评估的标准菌株管理与使用程序，尽量减少交叉污染确保实验结果可靠与实验室安全。
2. Scope 范围The working instruction applies to maintaining and handling of reference microorganism in the microbiological laboratory本工作指引适用于微生物实验室所有标准菌株的管理与使用。
3. Reference 参考1. LI 00.703 Performance Test of Culture Media.2. Microbank Advance Microorganism Storage System Package Insert4. Contents 内容4.1 Procedure 程序1. Resuscitate the reference microorganism strains by:标准菌株的复壮a. Ensure that the appropriate liquid medium containing 0.5 – 1.0 ml (e.g. TryptoneSoya Broth or Buffer Peptone Water) is at room temperature将复壮所用的0.5-1.0ml液体培养基 (如TS或BPW)至于室温。
b. Remove the loop from the refrigerator and warm it to room temperature.将标准菌株从冰箱取出至于室温。
c. Remove the sheath from the loop aseptically.无菌操作去处菌株的包装物。
d. Put the liquid medium in the strain container or Cut off the loop shaft from thehandle using a pair of sterilized scissors into the liquid medium.无菌操作将液体培养基倒入菌株容器；或者无菌操作剪开菌株包装物，将菌株倒入液体培养基。
e. Incubate the tube in a 37°C incubator long enough just for the film to dissolvecompletely out of the loop.将试管在37°C下放置一段时间后，使菌种完全溶解到培养集中。
f. Shake the tube gently to suspend the microorganism.轻轻摇动试管形成悬浮液。
g. Inoculate several drops of the suspended microorganism using a Pasteur pipetteonto the appropriate medium (e.g. Nutrient agar slant) and streak in the usualmethod.从菌种悬浮液中接种几环到培养基平板(如营养琼脂)划线培养。
h. Incubate the plates in an appropriate atmosphere and temperature for the optimalgrowth.将接种过的平板置于合适的温度和条件下培养复壮。
2. Take a few colonies from one of the slant and streak onto the test media as per LI for eachmicroorganism.从培养过的平板或斜面上挑取几个菌落，按照相应的LI接种到选择性培养基上。
3. When the cultures are plated out, checked for correct morphology. Gram stained for cellmorphology and purity and run through the whole biochemical or confirmation tests tocheck for purity of culture strains. Record all observation on the reference culture check worksheet.将挑选出的菌落按照相应的LI进行菌种确认。
进行革兰氏染色或者镜检，并纯化后按照相应的LI进行生化试验确认。
记录下所有的现象。
4. Reference strain check as in step 3 should be done yearly or when ever a new lot ofreference strain is purchased.在每年复壮或者买入时都要进行菌种确认试验。
5. If test on culture purity is satisfactory, preserve the reference stock culture using theMicrobank Frozen Beads system as follow:菌种确认达到要求后，使用Microbank Frozen Beads标准储备菌株。
a. Take a generous inoculum (18 – 24 hours) from the reference stock and transfer tothe vial containing frozen beads and broth aseptically. Close vial tightly and invert 4– 5 times to emulsify the organism. DO NOT VORTEX.取一定量的标准菌株培养物（18-24小时），无菌操作接种到装有小珠的小瓶内并加入肉汤（BPW）。
关紧小瓶并颠倒4-5次乳化培养物。
不要剧烈摇晃，避免液体撒出。
b. The excess cryopreservative should be well aspirated leaving the inoculated beadsfree of liquid if possible. Close the vial finger tight.将多余的液体吸出。
关紧小瓶。
c. Label with permanent marker the vials as reference stock cultures with date ofpreparation.在小瓶上贴上标签，标明菌种名称和准备日期。
d. The vials are frozen (approximately -20°C) for storage in the freezer for a year.小瓶在冷冻条件下（大约-20°C）可储存一年。
e. To prepare the working cultures from the Microbank: A single bead is asepticallyremoved from the vial and rolled across the surface of a non- selective agar plate orslant or may be placed into appropriate liquid medium. After removal, beads shouldnever be returned to the vial for any reason. The vial is returned to the freezerimmediately.从Microbank中准备工作菌株：从小瓶中无菌操作取出一个小珠，接种到非选择性培养基平板或斜面，或者放入液体培养集中。
小珠从小瓶中取出后决不可以再放回。
立即将小瓶放回冷冻。
f. The inoculated plate, slant or broth is incubated at 37°C for 24 hours – 48 hours.Plate/ slant or broth should be taken out from the incubator once growth (e.g. turbid)is observed接种过的平板、斜面或者肉汤放在37°C 培养24-48小时。
一旦发现平板、斜面或者肉汤有微生物生长后立即从培养箱取出。
g. Label the plate, slant/broth with the cultures’ name, date of preparation and expirydate. Store in the refrigerator about 4°C.在平板、斜面或者肉汤上粘贴标签，注明菌种名称、准备日期和有效期。
放在冰箱大约4°C储存。
6. Issue a working culture plate/slant/broth as use frequency, usually as each week. Discardand use a new working culture if there is evidence of contamination. Working cultures can not more than 2 weeks in the refrigerator每次使用一支工作菌株，频率按照工作需要，通常为一个星期。
一旦发现菌株有污染现象后立即处理掉并使用新的工作菌株。