治疗性抗体
单克隆抗体药物研制的关键技术之一：抗体药物靶标筛选
白作 为 抗 体 药 物 靶 标 来研 发 抗 体 药 物 。 这 种 方 法 的缺
点 主 要 集 中在 两 方 面 ：一 是 所 能 得 到 的抗 体 药 物 靶标 的 数 量 极 其 有 限 ，并 且 这 些 靶 标 都 是 十 多年 前 就 已经 发 现 的 ：二 是 历 时 长 ，一 般 需 要 十 到 二 十 年 的 时 间 。 随着 人 类 基 因组 计 划 的完 成 和 蛋 白组 学 研 究 的开 展 ， 发 现 的 新 基 因 和 新 蛋 白 越 来 越 多 ， 人 们 从 中 看 到
克 隆 抗 体 在 疾 病 治 疗 方 面 的作 用 越 来 越 受到 人 们 的重 视 。 目前 美
国Ｆ ＤＡ 已 批 准 了 ３ 种 抗 体 治 疗 药 ２ 物 及 ７ 抗 体 融 合 蛋 白药 物 ， 其 中 种 鼠 单 抗 ３ ，嵌 合 抗 体 ６ ，人 源 化 抗 体 １ 种 ， 人 抗 体 种 种 ３ ９ ， 抗 体 融 合 蛋 白７ ， 有 １ 个 用 于 治 疗 肿 瘤 ， 另 外 种 种 ３
单 克 隆抗 体 药 物 引 导 了生 物 技 术 的 第 二 次 革 新 浪
了希 望 ，但 是 如 何 尽 快从 众 多 的 基 因 中挑 选 出可 用 来
中 国 医药 技术 经 济 与 管理 Ｉ２ １ ． ０２４
４ １
国
研 发 新 药 的 基 因 ， 如 何 选 择 最 佳 的 技 术 方 法 来 挑 选 这 些 基 因 ，如 何 在 基 因和 蛋 白功 能 尚 未 充 分 了解 之前 开 发 药 物 ，如 何 建 立 抗 体 药 物 靶 标 筛 选 和 抗 体 药物 筛 选 技 术 ， 降 低 研 发 成 本 和 风 险 ， 这 些 都 是 生 物 医 药 产 业 所 面 临 的 重 大挑 战 。
01-治疗性抗体研发的进展和关键技术
01-治疗性抗体研发的进展和关键技术治疗性抗体是一种通过靶向特定分子或细胞表面分子来治疗疾病的生物药物。
近年来，随着生物技术和基因工程技术的进步，治疗性抗体研发取得了显著的进展。
本文将介绍治疗性抗体研发的进展和关键技术。
一、治疗性抗体研发的进展治疗性抗体研发的进展主要体现在以下几个方面。
1.抗体工程技术的发展抗体工程技术是治疗性抗体研发的核心技术，它包括人源化抗体、重链抗体、单链抗体等多种技术。
人源化抗体通过将小鼠抗体人源化，使其更适合在人体内使用。
重链抗体通过只表达重链而不表达轻链来减小分子的体积，提高肿瘤渗透性。
单链抗体则通过将两个链的抗原结合位点连接成一个链来提高抗体药物的渗透性和稳定性。
2.靶向治疗策略的发展单一抗体治疗已经不能满足临床需求，因此，针对不同靶点同时应用多种治疗性抗体的组合治疗策略逐渐被采用。
此外，还出现了针对癌症干细胞、免疫抑制分子等新靶点的治疗性抗体。
3.抗体药物研发的快速发展抗体药物的研发速度逐渐提高，成功开发出多种治疗性抗体，如临床上已经应用的西妥昔单抗、曲妥珠单抗等。
此外，抗体药物的研发不仅局限于单一的治疗领域，还涉及到多种疾病的治疗。
二、治疗性抗体研发的关键技术治疗性抗体研发的关键技术是保证其临床应用效果的重要因素。
1.高通量筛选技术高通量筛选技术是寻找高活性和高亲和力的抗体的关键技术。
通过结合自动化设备和大规模结果分析，可以快速筛选出具有良好生物学活性和亲和力的抗体药物候选物。
2.重组蛋白质表达技术重组蛋白质表达技术是治疗性抗体研发的核心技术之一、通过重组DNA技术可以在大规模中表达抗体的重链和轻链，从而获得一定量的治疗性抗体。
3.稳定性改进技术抗体药物的稳定性是影响其临床应用效果的关键因素之一、因此，开发稳定性改进技术是治疗性抗体研发中的关键问题。
目前，已经出现了多种稳定性改进技术，如PEG化、Fc片段工程等。
4.靶向破坏靶标技术靶向破坏靶标技术是治疗性抗体研发的重要技术之一、通过研发针对不同分子靶标的治疗性抗体，可以实现对特定细胞或分子的靶向杀灭，从而达到治疗的目的。
抗体的基本结构和功能
抗体的基本结构和功能介绍抗体（又称免疫球蛋白）是一种由免疫细胞产生的蛋白质，广泛存在于人体的血液和组织液中。
抗体在人体的免疫系统中起着至关重要的作用，能够识别和中和病原体、调节免疫反应、参与细胞间信号传导等。
本文将详细介绍抗体的基本结构和功能，以便更好地理解免疫过程和临床应用。
一、抗体的结构1.1 Fab和Fc区域抗体由两个相同的轻链（light chain）和两个相同的重链（heavy chain）组成。
每条轻链和重链都由一系列氨基酸残基连接而成，形成抗体的基本结构。
在抗体分子中，Fab（antigen binding fragment）区域负责与抗原结合，Fc（fragment crystallizable）区域则负责与免疫细胞相互作用。
1.2 IGH和IGL基因抗体的结构由基因编码决定，人体中有数百个IGH（immunoglobulin heavy chain）和IGL（immunoglobulin light chain）基因，它们通过基因重排和突变形成多样的抗体。
IGH基因编码重链的变量（V）区域、多样（D）区域、连接（J）区域和常规（C）区域，而IGL基因编码轻链的V区域和C区域。
1.3 亲和力成熟抗体的变量区域包含了可以识别和结合抗原的亲和力决定区（CDR, complementarity-determining region）序列，这些序列的组合能够使抗体与多种抗原结合并启动免疫反应。
亲和力的形成是通过基因突变和选择过程中的变异和筛选完成的，亲和力成熟是个体免疫系统应对病原体进化的重要机制。
二、抗体的功能2.1 识别和中和病原体抗体通过其变量区域与抗原结合，从而识别和中和潜在的致病病原体。
当抗体与抗原结合时，可以阻止病原体侵入宿主细胞、中和细菌毒素、聚集病毒颗粒等。
这一过程对于防御感染和预防疾病的发生起着重要作用。
2.2 调节免疫反应抗体不仅能够识别和中和病原体，还能够调节免疫反应的进程。
抗体的研究论文
治疗性抗体的研究论文生物11001 高家鑫 10051510321 治疗性抗体技术的研究背景作为一种具有靶向性的生物大分子，单克隆抗体始终是人们关注的热点之一，被广泛用于治疗肿瘤、病毒感染和抗移植排斥等。
但鼠源单克隆抗体的临床应用受限于诱导产生人抗鼠抗体、肿瘤渗入量低、亲和力低和半衰期短等。
随着分子生物学技术的发展及其向各学科的渗透，通过基因操作技术对抗体进行改造，可使其适用于多种疾病的治疗。
抗体人源化已经成为治疗性抗体的发展趋势，同时各种抗体衍生物也不断涌现，它们从不同角度克服了抗体本身的应用局限，也为治疗人类疾病提供了利器。
本文简要介绍上述技术的基本原理、特点和治疗性抗体的研究进展。
200年前，人们将自白喉杆菌培养上清液中分离到的可溶性毒素注入马体内，发现得到的抗血清可以治疗白喉，这是第一个用抗体治疗疾病的例子。
随着免疫学和分子生物学技术的发展，以及抗体基因结构的阐明，DNA 重组技术开始被用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造，以消除抗体应用的不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备各种形式的重组抗体，标志着基因工程抗体时代的来临。
自第一个基因工程抗体———人--鼠嵌合抗体于1984 年诞生以来，新型基因工程抗体不断出现，包括人源化抗体、单价小分子抗体（Fab、单链抗体、单域抗体等）、多价小分子抗体（双链抗体、三链抗体、微型抗体等）、某些特殊类型的抗体（双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗体等）及抗体融合蛋白（免疫毒素、免疫黏连素等）等。
用于制备新型抗体的噬菌体抗体库技术成为继杂交瘤技术之后生命科学研究中又一突破性进展。
在噬菌体抗体库的基础上，近年来又发展了核糖体展示抗体库技术，利用核糖体展示技术筛选抗体的整个过程均在体外进行，不经过大肠杆菌转化步骤，因此可以构建高容量、高质量的抗体库，更易于筛选高亲和力抗体和利用体外进行的方法对抗体性状进行改造。
核糖体展示抗体库技术代表了抗体工程的未来发展趋势。
抗体疗法的治疗与应用
抗体疗法的治疗与应用抗体疗法是一种针对特定疾病的治疗方法，是通过注射或静脉输液等方式给患者提供特定抗体，以帮助患者克服疾病。
随着科技的不断进步，抗体疗法在临床中得到了广泛的应用。
一、抗体疗法的原理抗体疗法的原理就是通过提供特定的抗体来帮助患者对抗疾病。
抗体是一种具有高度特异性的蛋白质，它能够识别并结合到病人体内的外来物质，从而有特异性地清除这些病原体。
二、抗体疗法的种类抗体疗法分为单克隆抗体和多克隆抗体两种。
单克隆抗体是指针对一种特定的病原体制备的抗体。
单克隆抗体可以将病原体识别得更准确，对治疗某些疾病具有重要的作用。
多克隆抗体由多种抗体组成，它可以用于识别不同的抗原，对某些疾病的治疗也具有重要的作用。
三、抗体疗法的应用抗体疗法在临床治疗中得到了广泛的应用。
以下是抗体疗法主要应用的几个方面：1、癌症治疗。
抗体疗法在癌症治疗中具有重要作用。
依据癌细胞的表面特征，可以制备出对癌细胞特异性的抗体，通过把这些抗体注射到人体内，可保持相对高水平的药物浓度，从而杀死癌细胞。
2、感染性疾病治疗。
抗体疗法可以在感染疾病的早期接种时，促使机体产生所需的抗体，从而控制疾病的发展。
3、自身免疫疾病治疗。
自身免疫疾病是由机体自身免疫系统异常引起的疾病，抗体疗法在这种情况下可以使用对机体的免疫系统进行调节的抗体来治疗。
4、器官移植。
抗体疗法可以用于器官移植患者，通过给予抗体来预防或减轻移植物排斥反应。
四、抗体疗法的优点相对于传统的治疗方法，抗体疗法具有以下优点：1、专一性。
抗体疗法可以专门针对某些抗原，达到局部治疗的效果。
2、安全性。
抗体疗法的安全性较高，相对于药物治疗来说，抗体疗法的副作用要小得多。
3、长效性。
抗体疗法常常可以提供长效的治疗效果，减少患者再次发病的概率。
五、抗体疗法的局限性虽然抗体疗法在临床治疗中表现出许多优点，但是它也有局限性。
以下是几个常见的局限：1、生产成本较高。
抗体疗法的生产成本较高，这可能会限制它的应用范围。
治疗性单克隆抗体药物与临床检验
治疗性单克隆抗体药物与临床检验胡文杰;许萍;李天来;范建英;李海波【摘要】介绍美国上市的治疗性单克隆抗体药物说明书中有关临床检验的相关内容,以期对我国说明书的撰写和监管有所启迪.以美国FDA收录的治疗性单抗说明书为研究对象,检索其中与临床检验相关的内容.截止2016年5月30日,FDA已批准并在售的共有47种治疗性单抗.在这些药物的说明书中,均提供了与临床检验相关的信息,主要包括治疗前患者筛选所需完成的临床检验、疗效及副反应所需的临床检验以及部分药物对临床检验的干扰等3个方面的内容.美国FDA治疗性单抗说明书中均明确临床检验的相关内容,是研究药物与检验的重要信息来源.药品生产企业及药品监督部门需规范及完善药品说明书内容,为临床用药提供更多的帮助.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2016(000)007【总页数】4页(P201-204)【关键词】治疗性单克隆抗体;临床检验;FDA;药品说明书【作者】胡文杰;许萍;李天来;范建英;李海波【作者单位】江苏省南通市妇幼保健院检验科,江苏南通226018;南通市疾病预防控制中心,江苏南通226007;江苏省南通市妇幼保健院检验科,江苏南通226018;江苏省南通市妇幼保健院检验科,江苏南通226018;江苏省南通市妇幼保健院检验科,江苏南通226018【正文语种】中文【中图分类】R969.3单克隆抗体是由单一B淋巴细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。
自1976年Kohler与Milstein发明杂交瘤生产技术以来，随着分子生物学、蛋白质工程和细胞生物学等基础科学的进步，以及生物技术制药等应用科学的进步，推动了治疗性单抗的迅猛发展[1]。
1986年，美国FDA批准第一个鼠源化治疗性单抗Muromonab-CD3，用于肾移植术后的急性排斥反应[2]，此后治疗性单抗经历了鼠源单抗、人鼠嵌合单抗、人源化单抗、全人源单抗等4个发展阶段[3]。
CD20抗原及治疗性抗CD20抗体
CD20抗原及治疗性抗CD20抗体!肿瘤生物治疗杂志2oo5Mar;12(1):76～79ChinJCancerBiother'[文章编号]1007—385X(2005)01-0076-04CD20抗原及治疗性抗CD20抗体王玉刚综述;沈倍奋审阅(军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室,北京100850)[摘要]CD20是人类B淋巴细胞表面特有的标识.它高表达于所有正常B细胞和多数恶性B细胞表面,不会发生明显的内化和脱落,是治疗非霍奇金淋巴瘤(non.Hodgkin~lymphoma,NHL)理想的靶抗原.其胞外区由43个氨基酸残基组成,但组成的抗原表位却异常多样.目前,已经有多种针对CD20抗原的抗体被FDA批准上市,用于B细胞非霍奇金淋巴瘤的治疗,都显示出良好的效果.[关键词]CD20;抗原表位;抗CD20单克隆抗体[中图分类号]R392.11[文献标识码]A1免疫治疗理想的靶抗原:CD202抗CD20单克隆抗体识别的抗原表位在治疗B细胞淋巴瘤时,CD20分子是理想的靶抗原.它由297个氨基酸组成,分子量为33kD,34～36kD属于非糖基化磷蛋白"】,表达于95%以上正常或恶化的B细胞表面.它起始表达于pre—B细胞阶段,到B细胞终端分化成浆细胞时结束,一直被认为是B系细胞表面特有的标识.单核细胞,静息以及激活的T细胞,裸细胞以及非淋巴细胞都不表达CD20分子.CD20分子有4个跨膜区,氨基端和羧基端都位于细胞质膜内侧,在第三跨膜区和第四跨膜区之间,有一个由43个氨基酸残基组成的环区,构成其主要的抗原表位.CD20抗原分子比较暴露,易于接近.CD20与抗CD20抗体结合后内化现象不明显,因此细胞表面CD20分子数量并不因为与抗体结合而大量减少. CD20也不会发生明显细胞表面脱落的现象,在人体血清中无游离的CD20存在.虽然CD20的功能仍没有完全阐述清楚,但越来越多的证据表明它具有钙离子通道功能,是调节B细胞增殖,分化信号途径的组分.CD20位于细胞膜上的脂斑区(1ipidrafts).脂斑区是细胞膜上一个流动而有序的细胞膜微区,富含鞘磷脂和胆固醇,被认为是一个信号传导的平台.CD20与脂斑区Src家族的激酶成员(Lyn,Fyn和Lek)以及PAG(p75/85)相连,PAG将Csk招集到脂斑区,从而使Lyn,Fyn和Lck保持失活状态.当CD20在抗体的作用下相互靠近,发生交联甚至超交联时形成的多聚体发挥钙离子通道的功能,使细胞外钙离子流入细胞内;另外,src家族的酪氨酸蛋白激酶由于靠近而相互激活,启动信号传导途径,动员内源钙库.这两者导致细胞内钙离子浓度的升高,从而对细胞周期的~--仃A--厂,土影~响,调节细胞增殖与分化,甚至导致细胞凋亡的发生剖.早期实验结果表明,CD20细胞外43个氨基酸残基序列组成了2个相互重叠的细胞外抗原表位,一个被绝大多数抗CD20抗体所识别,另一个被具有独特激活效应的抗体1F5所识别.但是后来Polyak等发现,虽然CD20胞外区很小,但是抗CD20抗体识别的精细抗原表位却异常多样,而不是简单的分为两个抗原表位.人源CD20胞外区与鼠源CD20胞外区43个氨基酸残基中约有16氨基酸不同.他们以鼠源CD20胞外区为模板,分别将其与人源CD20胞外区序列中不同的氨基酸突变成人源CD20序列中相应的氨基酸,证实了不同抗CD20抗体所识别的抗原表位具有细微区别(表1中B～I模式).并证实了170位Ala和172位Pro在CD20胞外区抗原表位二级结构的维持上起着关键性作用,它们的改变常会导致抗体识别的抗原表位完全丧失(表1中A模式).其结果如表1所示.CD20胞外区小环不能够使之具有如此之多细微抗原表位的差异.实验结果表明CD20可以复合体的形式存在,一个CD20复合体由几个CD20分子和一个或一些附加成分组成.有些抗体识别的是由几个CD20分子构成的空间表位,如2H7识别的抗原表位比B1识别的抗原表位更加依赖于CD20多聚体的存在.1F5,B1和2H7都不能够通过免疫印迹的方式与CD20抗原结合,表明这些抗体识别的抗原表位是一个空间表位.3治疗性抗CD20抗体近年来,NHL发病率逐渐攀升,严重危害着人类健康.以前的治疗方法无法治愈,患者最终因淋巴瘸的复发而死亡.研究新型药物用于NHL的治疗成为一种必然趋势.抗CD20单克隆抗体是一个新的有效抑制肿瘤细胞增长中国肿瘤生物治疗杂志2oo5Max;12(1).77▲:引自文献[4];}:本列中A—I为不同的CD20模式;V本列中大写字母代表人源CD20序列,小写字母代表鼠源CD20序列,横杠代表鼠源CIY20氨基酸序列与人源CIY20氨基酸序列相同的部分;的所有列中反应强度从弱阳性(+/.)到强阳性(}H{);△:NT表明没有测试3.1Ⅱ)EC?C2B8IDEC—C2B8,又名Rituximab,商品名为美罗华,1997年由FDA批准上市.它是一个人鼠嵌合抗体,包含鼠源抗CD20单克隆抗体2B8(Ibritumomab)的可变区和人源IgG1重链及K链的恒定区,用于B细胞淋巴瘤的治疗.美罗华与其亲本抗体具有相似的亲和力和人组织反应活性,在人体内具有更长的半衰期,更小的免疫原性J,基本上不会诱发机体产生HAMA反应.由于人源Fc比鼠源Fc能更好与人源补体及效应细胞相互作用,美罗华补体介导的细胞溶解作用(CDC) 和抗体介导的细胞毒作用(ADCC)都得到了提高,从而提高了抗体的反应率,延长了反应时间.3.2ZEVAⅡN2002年2月,FDA批准了第一个放射性免疫治疗药物——zevalin.该药由IDEC制药公司生产,通用名Ibritu—momabTiuxetan.FDA批准此药用于治疗复发性或难治性低恶性度/滤泡性或转化的B细胞NHL,其中包括美罗华难治性的滤泡性NHL.该产品由小鼠IgG1一K单克隆抗体2B8 (Ibritumomab)连接同位素如Y用于肿瘤治疗.其单抗部分对CD20具有极高的特异亲和性J.Y是一个高能量的单纯释放p射线的放射性同位素(2.3MeV),约90%的能力集中在5mm以内,不仅可以杀伤与抗体接合的细胞,还可以杀伤直径范围12咖以内的恶性细胞.Y的半衰期(64h)与抗体在体内的生物半衰期一致,因此尿液中Y的很少,可以忽略不计7j.Zevalin在肿瘤部位的分布相当于在正常器官分布的850倍;正常细胞不受射线危害,对正常器官的放射性在可接受安全值之下J.不需要对病人和医务人员进行保护性隔离J.Zevalin与其天然抗体具有相似的高的抗原特异性,人组织反应性,潜伏期安全性,在体外,体内的稳定性良好.3.3BEXXAR2003年6月27日,FDA批准Bexxar(Tositumomab和I Tositumomab)用于治疗癌细胞已经或未发生转移,对美罗华有耐药性,化疗后又复发的CD20,滤泡性NHL.它由鼠源单克隆抗体——抗Bl单克隆抗体(Tositumomab,IgG2a一)与放射性同位素"I共价偶联而成."I同时释放治疗性的B射线和高穿透性的^,射线:低能量的p射线(0.6MeV)可以杀伤直径2mm以内的恶性细胞,^,射线用于精确剂量测定和生物分布研究.根据剂量测定结果可以确定针对个体的抗体用量,最大限度减少血液系统的毒性.Bexxar是第一个根据患者个体不同来确定用药剂量的抗体制剂.由于".I-tosi. tumomab和"I在体内的清除速率存在个体差异,在对病人用药之前确定个体用药量是必要的.接受Bexxar治疗的患者需要在实施放射性保护的房间内进行治疗7.1o].在对复发低恶性度转移的NHL患者的治疗中,Bexxar比其冷抗体形式(anti—B1mAb)有更高的反应率,更长的反应持续时间. 目前上市的这三种抗体都可以通过CDC,ADCC,诱导中国肿瘤生物治疗杂志2005Mar;12(1)CD20细胞发生凋亡或直接抑制恶性B细胞的增殖来发挥其治疗效果.不同的是Zevalin和Bexxar通过抗体介导放射性同位素到肿瘤部分,发挥放射性细胞毒直接杀伤肿瘤细胞,克服了放疗不能全身给药的缺点;与单纯免疫治疗相比, 表现出更强杀伤邻近肿瘤细胞的能力.多中心临床试验结果表明:目前上市的这三种抗体单独使用都获得了很好疗效.其中美罗华与化疗药物CHOP(环磷酰胺,多柔比星,长春新碱,泼尼松)联合使用治疗低恶性度或滤泡性NHL,效果要好于单独使用的效果.Bexxar与化疗药物联合使用有协同的治疗效果.Zevalin和Bexxar 用来治疗对美罗华治疗有抗性的患者有良好效果'.4治疗NHL中存在问题对美罗华治疗有反应的B细胞NHL患者中,复发患者对使用美罗华再次治疗的反应率小于50%.患者抵抗使用美罗华二次治疗的原因可能是其经过治疗之后,造成了细胞表面CD20抗原的丢失,或者亚克隆选择了CD20.的B淋巴瘤细胞.不同研究团体都发现了靶细胞表面CD20抗原丧失表达的现象.由于许多在经过抗CD20抗体治疗后复发的患者没有经过生物活检以确定肿瘤细胞下调表达CD20抗原的程度,不能够确定这种现象实际发生的频率".鉴于CD20抗原表达的变动性,Haidar等指出:在使用美罗华治疗B细胞淋巴瘤之前确定CD20分子在恶性B淋巴细胞表面表达是必要的.5展望使用抗CD20抗体治疗NHL的费用高,部分患者还发生了HAMA和HACA的反应,如何使治疗方案更加完善,还需要进一步的探索.AME一133是在美罗华基础上应用分子进化的方法构建出的人源化抗CD20抗体.它的免疫原性更低,亲和力更高,介导ADCC的能力更强,临床应用前景更好.Da~es等人将鼠源糖基化酶基因转入到表达人鼠嵌合抗体的CHO细胞,表达出的糖基化抗体以10—20倍低的浓度就可达到与其亲本相同杀伤CD20靶细胞的效果.IMMU一106是一种改型抗体,进一步降低了鼠源性,可以通过ADCC,CDC和诱导凋亡机制来发挥其抑瘤效果.抗CD20.抗CD3双特异抗体,保持了亲本抗CD3单克隆抗体刺激PBL增殖的能力,并可以交联人的T淋巴细胞和肿瘤细胞,从而促进T淋巴细胞对瘤细胞的杀伤作用,第一次用实验结果支持双特异抗体具有用于治疗CD20的B淋巴瘤的潜能.抗CD20.抗CD89双特异抗体可以招集嗜中性粒细胞作为效应细胞去裂解CD20的肿瘤细胞.KunMa等发现:在体外,低剂量照射能够大大并稳定提高CD20抗原的表达.Huang和Roberts等则探索调动自身免疫系统的治疗方案.他们将CD20抗原与人源IgG的Fc或钥孔戚蓝蛋白相连,注入小鼠体内,诱导其产生针对自身抗原的反应"】.Hmsma等人进行了抗体定向的酶.前药治疗方案的探索.他们构建了ScFv和人B一葡萄糖苷酸酶的融合蛋白.该融合蛋白保留了其亲本抗体1H4的亲合力和结合特异性以及酶的催化活性.当融合蛋白与Daudi细胞结合后,前药显示了与其药物形式阿霉素相近的抑制肿瘤细胞增长的活性.上述这些探索都为以后治疗NHL提供了良好的思路.[参考文献][1]TedderTF,MclntyreG,SchlossmanSF.HeterogeneityintheB1(CD20)cellsulfacemoleculeexpressedbyhumanB—lymphocytes [J].Mollmmunol,1988.25(12):1321—1330.[2]DeansJP,LiH,Poly'akMJ.CD20一mediatedapoptosis:Signaling throughlipidrafts[J].Immunology,2002,107(2):176—182.[3]ShahD,LedbetterJA,PressOW.Signalingeventsinvolvedinan—ti-CD20一inducedapoptosisofmalignanthumanBcells[J].Cancer ImmunolImmunother,2000,48(12):673-683.[4]PolyakmJ,DeansJP.Alanine一170andproline一172arecriticalde—terminantsforextracellularCD20epitopes;heterogeneityinthe finespecificityofCD20monoclonalantibodiesisdefinedbyaddi—tionalrequirementsimposedbybothaminoacidsequenceandqua—ternarystructure[J].Blood,2002,99(9):3256-3262.[5]GhetieMA,BrishtH,VitettaES.Homodimembutnotmonomers ofRituxan(chimericanti—CD20)induceapoptosisinhumanB—lymphomacellsandsyrlergizewithachemotherapeuticagentandan immunotoxin[J].Blood,2001,97(5):1392—1398.[6]KrasnerC,JoyceRM.Zevalin:90yttriumlabeledanti—CD20(ibritumomabtiuxetan),anewtreatmentfornon—Hodgkinlym—phoma[J].CurtPharmBiotechnol,2001,2(4):341-349.[7]BischofDelaloyeA.Theroleofnuclearmedicineinthetreatment ofnon—Hodgkin§lymphoma(NHL)[J].LeukLymphoma,2003,44Suppl4:$29-36.[8]ChesonBD.Radioimmunotherapyofnon?Hodgkinlymphomas[J]. Blood,2003.1O1(2):391-397.[9]AlcindorT,Wit~gTE.Radioimmunotherapywith-90ibri—mmomabtiuxetanforpatientswithrelapsedCD20+B—cellnon—Hodgl(inglymphoma[J].CurrTreatOptionsOncol,2002,3(4):275-282.[1O]V oseJM.Bexxar;Novelradioimmunotherapyforthetreatmentof low—gradeandtransformedlow—gradenon—Hodgkinglymphoma[J]. Oncologist.2004,9(2):160?172.[11]vanderKolkLE,Grillo—LopezAJ,BaarsJW.eta1.Treatmentof relapsedB—cellnon—Hodgkin'slymphomawithacombinationof chimericanti—CD20monoclonalantibodies(rituximab)andG—CSF:Finalrepo~onsdetyandefiqcacy[J].Leukemia,2003,17(8):1658.1664.[12]HaidarJH.ShamseddineA,SalemZ,eta1.LossofCD20expres? sioninrelapsedlymphomasafterrituximabtherapy[J].EurJHaemato1.2003,70(5):330-332.[13]ClarkeLE.BayedMG,EhmannWC,eta1.CutaneousB?celllyre? phomawithlossofCD20immunoreactivityafterrituximabtherapy [J].JCumnPathol,2003,30(7):459-462.[14]JilaniI,OBrienS,ManshuriT,eta1.Transientdown?modulation中国肿瘤生物治疗杂志2005Mar;12(1)?79?ofCD20byrituximabinpatientswithchroniclymphocyticleukemia [J].Blood,2003,102(10):3514-3520.[15]SteinR,Quz,ChenS,eta1.Characterizationofanewhumanizedanti—CD20monoclonalantibody,IMMU一106,anditsuseincombi—nationwiththehumanizedanti—CD22antibody,epratuzumab,for thetherapyofnon—hodgkinSlymphoma[J].ClinCancerRes,2004,10(8):2868—2878.[16]XiongD,XuY,LiuH,eta1.EfficientinhibitionofhumanB-cell lymphomaxenograftswithananti—CD20xanti—CD3bispecificdia—body[J].CancerLett,2002,177(1):29-39.研究简报?[文章编号]1007—385X(2005)01-0079-01[17]HuangJ,SheuJJ,WuSC,eta1.DownregulationofBcellsbyim—munizationwithafusionproteinofaselfCD'20peptideandafor-eignlgG.Fcfragment[J].hnmunolLett,2002,81(1):49—58.[18]RobertsWK,LivingstonPO,AgusDB,eta1.VaccinationwithCD20peptidesinducesabiologicallyactive.specificimmunere—sponseinmice[J].Blood,2002,99(10):3748-3755.[收稿日期]2004—07—21[修回日期]2004—10—10[本文编辑]韩丹,王莹小鼠SLC基因真核表达载体的构建及表达侯丽,赵跃然一,王来城,焦玉莲,张捷,马春燕,崔彬(1.山东大学山东省立医院科研中心,济南250021;2.山东省医学科学院基础医学研究所,济南250062)次级淋巴组织趋化因子(secondarylymphoidtissueche—mokine,SLC)是重要的CC趋化因子,对多种免疫细胞特别是T淋巴细胞,树突状细胞(dendriticcell,DC)及NK细胞具有趋化作用.研究证实,SLC通过募集T淋巴细胞,DC和NK等免疫效应细胞到肿瘤组织,促进细胞因子的释放以增强肿瘤局部非特异性免疫以及抑制肿瘤血管生成等作用,达到其显着的抗肿瘤效果,是目前肿瘤免疫治疗的理想效应分子.为了进一步探索SLC在肿瘤基因治疗中的应用,我们构建了小鼠SLC基因的真核表达载体pVAX1.mSLC,为今后开展体内基因治疗肿瘤奠定基础.重组质粒pMD.mSLC,载体pVAX1及大肠杆菌TOP10由本室保存;引物由上海博亚生物公司合成;COS-7细胞株购自中国科学院上海生化与细胞生物学研究所;限制性内切酶及T4DNA连接酶,TaqDNA聚合酶均为MBI公司产品; DMEM培养基为Hyclone公司产品;大鼠抗mSLCmAb为R&D公司产品;酶标二抗兔抗大鼠IgG.HRP购自博士德公司;RIPA细胞裂解液购自申能博彩生物科技公司;ECL(en. hancedchemiluminescence)化学发光检测试剂盒为SantaCruz 公司产品.质粒提取,酶切,连接及转化的主要方法均按常规进行.pMD.mSLC和pVAX1载体均用BamHI和XbaI双酶切,回收目的基因和载体片段,用T4DNA连接酶将目的片段定向插入到pV AX1的相应酶切位点.转化大肠杆菌TOPIO,挑取卡那霉素抗性克隆,行菌落PCR初步筛选.引物序列为:上游:5r-ATGACTCTGAGCCTCC'ITAGC.3;下游:5.1TrCCAGAC1-IGAGG'ITCCC.3,PCR扩增产物为327bp.扩增阳性菌落,抽提质粒DNA,利用HinDllI单酶切鉴定阳性重组子.细胞转染按BTXECM830电穿子L仪转染哺乳动物细胞方案将重组真核表达质粒转入COS-7细胞. 转染72h后,分别收集细胞和上清,按照RIPA裂解液使用说明进行操作,取细胞裂解液与经PEG8000浓缩的培养上清混合,Bradford比色法测定蛋白浓度.常规SDS-PAGE电泳,转膜,5%脱脂奶粉封闭,一抗,二抗反应后,ECL化学发光试剂盒检测蛋白表达.结果菌落PCR和}{jnDⅢ单酶切证实重组质粒pV AX1.mSLC构建成功,Westernblotting证实mSLC在转染COS-'/细胞72h后瞬时表达.次级淋巴组织趋化因子(SLC)又称为CCL21(CCchemo- kineligand21),6Ckine等,是重要的CC趋化因子成员.国外学者的研究表明,在抗肿瘤免疫中发挥重要作用的免疫细胞,包括T细胞,DC和NK细胞,膜表面均表达SLC的受体CCR7.SLC通过与CCR7结合,募集免疫活性细胞向肿瘤局部迁移,浸润,刺激它们产生IFN一,GM—CSF,IL.12等细胞因子,增强非特异性免疫,抑制肿瘤血管生成,因而具有显着的抗肿瘤作用.为研究SLC免疫基因治疗肿瘤的特异性作用, 我们成功构建了小鼠SLC基因的真核表达载体,并实现了在哺乳动物细胞中的瞬时表达,为下一步研究mSLC体内基因治疗肿瘤作用提供了实验材料和条件.[关键词]次级淋巴组织趋化因子;真核表达;COS-7细胞;电穿孑L[中图分类号]R573[文献标识码]D[收稿日期]2004—10—18[修回日期]2004—12—10[本文编辑]韩丹,王莹[基金项目]国家自然科学基金项目(30371304)资助。
肿瘤免疫治疗
肿瘤免疫治疗-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1肿瘤免疫治疗正常情况下，免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，但为了生存和生长，肿瘤细胞能够采用不同策略，使人体的免疫系统受到抑制，不能正常的杀伤肿瘤细胞，从而在抗肿瘤免疫应答的各阶段得以幸存。
[1-2]肿瘤细胞的上述特征被称为免疫逃逸，为了更好地理解肿瘤免疫的多环节、多步骤的复杂性，陈和提出了肿瘤-免疫循环的概念。
肿瘤-免疫循环分为以下七个环节：1、肿瘤抗原释放；2、肿瘤抗原呈递；3、启动和激活效应性T细胞；4、T细胞向肿瘤组织迁移；5、肿瘤组织T细胞浸润；6、T细胞识别肿瘤细胞；7、清除肿瘤细胞。
这些环节任何地方出现异常均可以导致抗肿瘤-免疫循环失效，出现免疫逃逸。
不同肿瘤可以通过不同环节的异常抑制免疫系统对肿瘤细胞的有效识别和杀伤从而产生免疫耐受，甚至促进肿瘤的发生、发展。
肿瘤免疫治疗就是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。
包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等。
近几年，肿瘤免疫治疗的好消息不断，目前已在多种肿瘤如黑色素瘤，非小细胞肺癌、肾癌和前列腺癌等实体瘤的治疗中展示出了强大的抗肿瘤活性，多个肿瘤免疫治疗药物已经获得美国FDA （Food and Drug Administration, FDA）批准临床应用。
肿瘤免疫治疗由于其卓越的疗效和创新性，在2013年被《科学》杂志评为年度最重要的科学突破[3]。
中文名肿瘤免疫治疗外文名Tumor immunotherapy目录1分类2肿瘤生物标记物分类（一）单克隆抗体类免疫检查点（immune checkpoint inhibitor）抑制剂1. PD-1/PD-L1通路与PD-1/PD-L1抑制剂抗程序性死亡蛋白1（programmed death 1, PD-1）抗体是目前研究最多，临床发展最快的一种免疫疗法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分
泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆
化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的
能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这
种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获
得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为
单克隆抗体技术。
（5）通过内影像作用模拟抗原，使疫苗更具安全性及 广泛性。
治疗性抗体的应用
（1）抗肿瘤作用(Anti-tumor) （2）抗感染作用(Anti-infection) （3）抗器官移植排斥反应(Anti-repelling （4） 抗血栓形成(Anti-formation of thrombus ) （5）解毒(Detoxicating) （6）构建抗独特型抗体疫苗(Constuction of anti-
多克隆抗体的概念 多克隆抗体产生原理 多克隆抗体制备方法流程 多克隆抗体特点
概念
在含有多种抗原决定簇的抗原刺激下，体 内多个B细胞克隆被激活并产生针对多种不 同表位的单克隆抗体，其混合物为多克隆 抗体。机体内所产生多克隆免疫血清实质 上是由多种抗体组成的混合物，又称多克 隆抗体。
特点
优点 ： • 在体外“永久”地存活并传代 • 用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗 体。适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 • 可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗
制备方法流程
用抗原免疫小鼠，刺激机体诱生抗原
特异性B细胞。取该免疫小鼠脾细胞 （含有B细胞）与非分泌性小鼠骨髓瘤 细胞在PEG作用下进行细胞融合。由 于哺乳类细胞的DNA合成分为从头 （donovo)合成和补救（salvage）合成 两条途径，加入HAT选择培养基后， 未融合的骨髓瘤细胞死亡，未融合的B 细胞因不能在体外长期培养也发生死
治疗性抗体的概述
◆ 1890年Behring和北里柴三郎发现了可特 异中和外毒素的血清组合白喉抗毒素。
◆ 20世纪70年代德国学者Konler和英国学者 Milstein研制了杂交瘤单克隆抗体（mAb）。
◆ 抗体被认为是理想的癌症和传染病的治疗 分子。
治疗性抗体的概述
然而，鼠源mAb作为异源性蛋白在人体内 的应用受到了限制： 如：（1）可诱导鼠抗人抗体的生成
idiotype vaccine) （7）在自身免疫性疾病及变态反应性疾病中的应用（apply
to immunity disease and abnormality reaction）
治疗性抗体
◆多克隆抗体 ◆单克隆抗体 ◆嵌合抗体 ◆人源化抗体
多克隆抗体（polyclonal antibody）
封闭、破坏靶细胞或靶分子。
抗体的治疗机制
（3）竞争性抑制作用/拮抗作用(Competitive inhibition)
与体内产生或体外进入的物质结合，阻止其与靶分子 作用产生毒性损害。
（4）抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（Ab dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC） 及补体依赖性细胞溶解作用（Complementarity dependent cytolysis, CDC）。
亡，只有融合后形成的杂交瘤细胞可
在HAT选择培养基中存活和繁殖，其 既有骨髓瘤细胞大量扩张和永生的特
性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异 性抗体的能力。由于每个杂交瘤细胞
由一个B细胞融合而成，而每个B细胞 克隆仅识别一种抗原表位，故经筛选
和克隆后的杂交瘤细胞仅能合成及分
泌一种均一的抗体，即为单克隆抗体
₤ 单克隆抗体产生原理
₤ 单克隆抗体制备方法流程
₤ 单克隆抗体特点
概念
高度均质性的特异性抗体，由一个识别单 一抗原表位的B细胞克隆所分泌。一般来自杂
交瘤细胞。
原理
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具
有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能
力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生
（2）鼠源性抗体Fc段不能有效地发挥人源 性Fc段的功能
（3)鼠源性抗体的生物半衰期很短。
抗体的治疗机制 （Cure mechanism of Ab）
（1）中和作用(Neutrilization) 用于感染性疾病，使病原体或其产生的毒
素丧失致病力。 （2）示踪或导向作用（Tracer or
targeted effect） 使与其相连的功能性分子特异性地激活或
治疗性抗体——多克隆抗体， 单克隆抗体，嵌合抗体，人源化抗 体有何异同？（设计和制备原理， 临床使用的优缺点）现在上市各类 抗体有哪些？我国在这方面的差距
在哪？
治疗性抗体
——第四小组：王志雨 王玉凤 朱睿 田梦 史颖忻 张莉 李尚林 王胜
关键词：
治疗性抗体 多克隆抗体 单克隆抗体 嵌合抗体 人源化抗体 应用 差距 上市 情况
原理
初次反应的抗体持续时间较短，亲和力也较低。 机体初次接触抗原后，激发体液免疫应答反应。在巨噬细
胞和Th细胞的作用下，B细胞被激活，增殖分化为浆细胞 和记忆B细胞。浆细胞产生特异性抗体。由于初次反应时， 只有少量对该抗原特异的免疫活性细胞被诱导 而增生分 化为浆细胞。随着抗原的消耗，抑制T细胞的激活和循环 抗体的反馈抑制作用，浆细胞减少，抗体浓度 很快下降。
特点
优点：作用全面，具有中和抗原、免疫调 理、介导补体依赖的细胞毒作用（CDC）、 ADCC等重要作用，来源广泛，制备容易。
缺点：特异性不高易发生交叉反应，也不 易大量制备，从而应用受限。
目录
单克隆抗体（monoclonal antibody; McAb; mAb ）
₤ 单克隆主要是高亲和力的IgG。 机体再次受同一抗原刺激后，对该抗原特
异性的记忆B细胞迅速增殖分化为浆细胞， 产生特异性抗体。Th的记忆细胞也加快反 应的进行，在抗原作用1到2天后，抗体浓度 迅速上升。抗体合成率为初次反应的几倍 到几十倍。
制备流程
纯化的抗原→与弗氏佐剂一起充分乳化→ 注射动物体内（剂量，次数，途径等均要 适宜）→测定效价（如效价高，则不必加 强免疫）→1周后经动脉放血→分离血清→ 纯化抗血清备用