糖尿病大鼠尿nephrin 的检测及意义(一)

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芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究王馨瑶;耿建国;高彦彬;李娇阳;周盛楠;邹大威;刘迎新【摘要】目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响.方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mmg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10g/(kg·d)灌胃,连续给药.于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况.结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P＜0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P＜0.05).结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin 的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展.【期刊名称】《环球中医药》【年(卷),期】2015(008)002【总页数】4页(P141-144)【关键词】芪卫颗粒;糖尿病肾病;足细胞;nephrin【作者】王馨瑶;耿建国;高彦彬;李娇阳;周盛楠;邹大威;刘迎新【作者单位】100069 北京,首都医科大学中医药学院;中医络病研究北京市重点实验室;100069 北京,首都医科大学中医药学院;中医络病研究北京市重点实验室;100069 北京,首都医科大学中医药学院;中医络病研究北京市重点实验室;100069 北京,首都医科大学中医药学院;100069 北京,首都医科大学中医药学院;100069 北京,首都医科大学中医药学院;100069 北京,首都医科大学中医药学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5作者单位：100069北京,首都医科大学中医药学院[王馨瑶(硕士研究生)、耿建国、高彦彬、李娇阳(硕士研究生)、周盛楠(硕士研究生)、邹大威、刘迎新(硕士研究生)];中医络病研究北京市重点实验室[王馨瑶(硕士研究生)、耿建国、高彦彬] Influence ofQiwei Granules on the expression of nephrin in podocyte of rats with diabe tic nephropathyWANGXin-yao，GENGJian-guo，GAOYan-bin，al.CapitalMedicalUniversitySchooloftraditionalChineseMedicine,Beijing 100069, ChinaCorrespondingauthor:GENGJian-guo，E-mail:gengdoctor@ sina.com.【Key words】Qiwei Granules; Diabetic nephropathy; Podocyte; Nephrin糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)多在糖尿病发病后5～10年发生，是导致终末期肾病发生的最主要病因。

Nephrin在糖尿病肾病中的表达及意义

分子发生相互作用，而在裂孔隔膜部位形成 “ 从拉链状结构 ” ３。大鼠与人类Ｎｐｒ【Ｊｅｈｉ子的氨基酸ｎ分
因。据美国糖尿病协会统计，Ｎ已成为欧美等国Ｄ家致终末期肾病的最主要原因，蛋白尿是Ｄ而Ｎ早期临床标志，白尿的发生主要取决于肾小球滤过蛋
基，Ｎｐｒ当ｅｈｉ配基结合时，ｎ与可能使其中某些酪氨酸残基发生磷酸化而起到信号传导作用，作用可该能通过Ｓｃ家族酶或蛋白激酶ｃ通路实现；外区ｒ胞
含有８个免疫球蛋白重复序列，１个间隔区域，１个 Ⅲ型纤维蛋白区域，对侧足突上伸出的Ｎｐｒ与ｅｈｉｎ
泰
山
医
学
院
学
报
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＴＳＡＩＨＡＮＭＥＤＩＣＡＬＣＯＬＧＥＶｏ．Ｎｏ３２０ＬＥ１３１．０１
Ｎｐｒ在糖尿病肾病中的表达及意义ｅｈｉｎ
刘翠珍吕学爱，
（．泰山医学院，１山东泰安２１０２７００；．泰山医学院附属泰山医院，山东泰安２１０７００）
胞黏附分子中的免疫球蛋白（ｇ超家族成员，异Ｉ）特性定位于肾小球裂孔隔膜区，其命名为Ｎｐｒ。将ｅｈｉｎＮｐｒｅｈｉｎ由胞外区、的跨膜区和一个ｃ末端的胞内短．区组成，内区含有９个具磷酸化潜能的酪氨酸残胞

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响龙海波;钟娟;魏连波;周伟东;许兆忠【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2007(023)006【摘要】目的:观察nephrin在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小球足细胞中的表达,探讨厄贝沙坦对DN肾脏保护作用的机制.方法:应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组:厄贝沙坦治疗组、模型对照组;另设正常对照组.各组分别干预8周后,观察大鼠体重、肾重、相对肾重、24 h尿蛋白定量、血糖、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯变化,利用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组化技术观察nephrin表达情况.结果:应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠24 h尿蛋白定量明显减少、肾功能改善、肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin表达量明显减少.结论:厄贝沙坦对DN肾脏的保护作用可能与其抑制足细胞nephrin表达有关.【总页数】5页(P1176-1180)【作者】龙海波;钟娟;魏连波;周伟东;许兆忠【作者单位】南方医科大学珠江医院,中西医结合肾病中心,广东,广州,510282;南方医科大学珠江医院,中西医结合肾病中心,广东,广州,510282;南方医科大学珠江医院,中西医结合肾病中心,广东,广州,510282;南方医科大学珠江医院,中西医结合肾病中心,广东,广州,510282;南方医科大学珠江医院,急诊科,广东,广州,510282【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.祛痰通络汤对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin蛋白表达的影响 [J], 王丽华;孙云松;刘先英2.黄芪多糖对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响 [J], 李志杰;张悦;刘煜敏;陆海英;李亚丽;张燕3.厄贝沙坦对早期糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响[J], 岳少姮;王艳;刘丽秋;赵娜;宋起4.中药合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响 [J], 张雯;张伟;赵娜;孔翠文;王艳5.厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin及podocin表达的影响 [J], 刘中柱;谢立民;刘艳姝;牛效清;张浩;王振;史为伍;李长红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

糖尿病大鼠尿nephrin的检测及意义

Ｍｅｓｅｅｔｆｎｅｈｒｎｉｄａｔｃｒｔｉａｕｒｍｎｓｏｐｉｎｉｂｅｉａｓｕｒｎｅａｔｌｎｉａｉｎｉｃｎｃｎｄｉｓｃｉｃｌｓｇｆａｅｉ
ＬＩＵｎｚａｇ—ｈｏ，Ｃｈｎｇａｇ，ＳＯＮＧ — ｎ，Ｓｅ—ｕｎＬｉｍｉＨＥＮｉｍｉＬ — ｎ，ＹＡＯｉＦｅ
ｎｐｒ，ｅｈｉ诱模早期（）ｎ２周即可出现，随着病程的延长，ｅｈｉｎｐｒｎ逐渐增多，８周达高峰后，ｅｈｉｎｐｒｎ的排泄又逐渐减少。中排泄，ｎｐｒ尿ｅｈｉｎ可作为糖尿病肾病的早期诊断指标之一，还将有助于监测、判断糖尿病肾病的病程进展。［关键词］糖尿病肾病；鼠；大微量白蛋白；ｎｐｆ尿ｅｈｎｉ［中图分类号］Ｒ６３５［文献标志码］Ａ［文章编号］１７ —７８（０８０６１７３２０）２—０１０１５— ３
ｒｔｍｏｅｗｒｄｃｄｂｉｇｔｐｒｏｅｌｎｅｔｎｏｒｐｏｏｉ（Ｔ）ｗｉｏｅｏｏｌｏ — ａｄｌｅｅｉｕｅｙｓｌｉｒｅｉｎａｉｃｉｆｔｔｃＳＺ，ｈｌｔｓｆｒｎｓｎｎｅｎａｔｊｏｓｅｚｎｅｈｎｍａｃｔｌｒｕｅｅｉｅｔｉｑａｄｓｇｆｃｔｃａｉｂｆｒｓｌｔｎｗｎｙｆｒｈｕｓｕｎｒｍ — ｒｏｐｗｒｎｃｅｗｔｅｕｌｏａｅｏｉｉｃｄｕｆｏｉ．Ｔｅｔｏｏｒｒａｉｏｇｊｄｈｒｅｕｏｕｉｙ

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

发展。
病。肾病大鼠肾组织足细胞ｎｅｐｈｒｉｎ的表达，减轻足细胞损伤，保护肾功能，延缓糖尿病肾病的发生
【关键词】芪卫颗粒；糖尿病肾病；足细胞；ｎｅｐｈｒｉｎ
【中图分类号】Ｒ２８５．５【文献标识码】Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４ — １７４９．２０１５．０２．００４
ｓｉｏｎｏｆｎｅｐｈｒｉｎｉｎｐｏｄｏｃｙｔｅｓｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ（ＤＮ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ１０ｎｏｒｍａｌｍａｌｅＳＤｒａｔｓ
ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｎｅｐｈｉｆｎｉｎｏｔｈｅｒｒｏｇｕｐｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｔａｋｉｎｇｏｆ
邹大威、刘迎新（硕士研究生）］；中医络病研究北京市重点实验室［王馨瑶（硕士研究生）、耿建国、高彦彬］作者简介：王馨瑶（１９８９一），女，２０１２级在读硕士研究生。研究方向：中医药防治糖尿病及其并发症。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉｎｙａｏ０４２１＠

糖尿病大鼠蛋白尿与肾脏病理及nephrin表达的相关性研究

ｇｕ（ＭｒｐＤｎ＝２）ＤａｅｓａｉｄｃｄｂｅｔｅｊｔｎｏＺ５ｇｋ．ｒａｙａｕｉ（Ａ，ｎｃｏｄｔｔｏ０．ｉｔｓｎｕｅｙｒｏａｉｅｉｆＴ０ｍ／ｇＵｉｒｌｍｎＵ）ｒａｆｔｎａｅｒｉｂｅｗｐｉｎｌｎｃｏＳｎｂｅｌｕｉｎｈａｏ
Ｌ尿糖阳性，定为糖尿病模型形成。正常组给予，确等体积的枸橼酸缓冲液一次性腹腔注射。
１３标本的采集．分别于０周、、周、２周（４周８１各周均指造模成功后的各周末）Ｎ从Ｃ组与ＤＭ组各随
ＡｓａｔｊｃｖＴｂｅｅａｕｎｒｘｒｔｎｉｄｂｔａｎｏｉｅｔａｔｒａｏｓｉｓｗｔｒａｔｓｅｂｔｃ：ｅｔｅｒＯｂｉｏｏｓｖｌｍｉｉｅｃｅｏｉｅｃｒｓａｄｔｎｓｇｔｉｅｔｎｈｉｅｌｓｒｂｕａｉｎａｉｔｖｉｅｓｌｉｐｈｎｕｉｐｔｌｉｌｈｎｅａｄｔｘｒｓｎｏｎｐｒ．ｔｏｓ４ｓｒａｅｉｄｄｉｏｃｎｏｇｏｐＮａｏｇａｃａｇｓｎｅｅｐｓｏｆｅｈｉＭｅｄ０Ｗｉａｔｗｒｄｉｔｏｔｌｒ（Ｃｎ＝２）ｄｂｔｈｏｃｈｅｉｎｈｔｒｓｅｖｅｎｒｕ０，ａｅｃｉｉ
ｉａ，ｒａｙａｕｉ，ｃａｔｆｉｙｗｉ／ｏｙｗｉＭｗｒｒｕｌｃｓｄ（ｄｅｅｕｉｒｌｍｎＣｒｄｔｅａｏｏｋｄｅｅｔｂｄｅｔｎＤｅｅｇｄａｙｉｒａｅＰ＜００）Ａｂｍｎｒｓｓｎｂｈｒｉｎｎｈｇｈｇｉａｌｎｅ．５．ｌｉｕｉｕａ

绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠nephrin、VEGF表达及肾功能的影响

绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠nephrin、VEGF表达及肾功能的影响王雁秋;黄平;邓旻【摘要】Objective To investigate the effect of gypenoside on the expressions of nephrin, vascular endothelial growth factor(VEGF) in rats with diabetic nephropathy(DN) and to explore its mechanism underlying the reduction of proteinuria and renal protection. Methods DN model was established by uninephrectomized and induced with streptozotocin, then randomly divided into model group and treatment groups (groups of high, medium, low dose of gypenoside, and valsartan group), with normal rats as control group, 8 rats in each group. After the treatment for 4 weeks, 24-hour proteinuria and clearance of creatinine(Ccr) were determined and the expression of nephrin, VEGF protein in renal tissues was examined by immunohistochemistry. Results Compared with model group, the level of 24-hour proteinuria decreased (77.04 ±16.63mg vs 110.56±46.88mg,P<0.05), the Ccr increased (1.47 ±0.24mg vs1.25±0.23mg,P<0.05), the expression of nephrin protein was upregulated(0.4250±0.02 vs 0.3388±0.22,P<0.01),and the expression of VEGF was significantly reduced (0.2588±0.03 vs 0.3521±0.01,P<0.01) in high-gypenoside group. The results of high-gypenoside group were similar to valsartan group. Conclusion Gypenoside can reduce protein-uria, improv e the renal function, and recover the expression of podocyteˊs associated proteins.%目的：观察绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病（DN）大鼠nephrin、VEGF表达的影响，探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的作用机制。

糖尿病大鼠肾组织nephrinpodocin的表达及来氟米特对其的影响

中国药物与临床２１００年３月第ｌ０卷第３期ＣｉｅｅＲｍｅｉｓ＆Ｃｉｉ，ｒｈ２１，ｏ．０Ｎ．ｈｎｓｅｄｅｌｃＭａｃ００Ｖ１，ｏ３ｎｓ１ Nhomakorabea・
２７・５
糖尿病大鼠肾组织ｎｐｒｏｏｉｅｈｉｐｄｃｎｎ的表达及来氟米特对其的影响
Ｅｘｒｓｉｎｏｅｈｉｎｏｏｉ，ｅｆｃｓｏｅｕｏｉｅｉｔｒｅｔｏｎｒｔｔｉｂｔｓＣｐｅｓｏｆｎｐｒｎａｄｐｄｃｎｆｅｔｆｌｆｎｍｄｎｅｖｎｉｎｉａｓｗｉｄａｅｅＨＥｌｈＮＧＷｅ — ｎ
特和氯沙坦均对糖尿病大鼠肾脏损害有保护作用，机制可能是通过增加ｎｐｒ、ｏｏｉ达而实现。其ｅｈｉｐｄｃｎｎ表
【关键词】糖尿病；大鼠；Ｎｐｒ；Ｐｄｃｎｅｈｉｎｏｏｉ；来氟米特；氯沙坦
ａｄｌｓｒｎｉｉｂｔｅｈｏａｈａｓＭｅｈｄＦｒ－ｉｈｌａ－ｒｄｌｉａａｓｗｅｅｒｎｏｚｄｉｔｎｏａｔｎｄａｅｉｎｐｒｐｔｙｒｔ．ａｃｔｏｓｏｔｅｇｔｃｅｎｇａｅｍａｅＷｓｒｒｔｙｔｒａｄｍｉｅｎｏ
其表达的影响。方法
氟米特治疗组（ＥＬＦ组）氯沙坦治疗组（），Ｌ组。分别于糖尿病成模后８１、２周处死，观察２４ｈ尿微量白蛋白排泄量、素氮（Ｕ、尿ＢＮ）肌酐（Ｃ）肾脏病理组织学改变，Ｓｒ、应用免疫组织化学方法检测肾脏皮质ｎｐｒ、ｏｏｉ白ｅｈｉｐｄｃｎ蛋ｎ的表达水平。结果与Ｎ组比较，Ｄ组出现①进行性微量白蛋白尿，ＵＳｒ高（００）②肾组织内ｎｐｆ、ＢＮ、Ｃ增Ｒ．；５ｅｈｎｉ来氟米ｐｄｅｏｏｉｎ表达下调（＜．５。与Ｄ组比较，Ｐ００）各干预组（ＥＬＦ组、Ｌ组）４ｈ尿微量自蛋白排泄量、ＵＳｒ降低 ①２ＢＮ、Ｃ均（＜．）（）ｅｈｉ、ｏｏｎ表达增加（＜．）两组药物之间比较差异无统计学意义（尸０５；ｎｐｒｐｄｉ０￣ｎＰＯ０。５尸均＞．）结论００。５

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糖尿病大鼠尿nephrin 的检测及意义(一)
【摘要】目的：建立糖尿病大鼠模型，探讨糖尿病大鼠尿中nephrin的检测、动态变化及意义。

方法：SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型，正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液，动态检测各组大鼠24h尿微量白蛋白及肾功能，以Western-Blot方法动态检测尿中nephrin。

结果：正常大鼠尿中无nephrin排泄，而糖尿病大鼠尿中可检测出nephrin，诱模早期（2周）即可出现，随着病程的延长，nephrin逐渐增多，8周达高峰后，nephrin的排泄又逐渐减少。

结论：糖尿病肾病早期nephrin即可从尿中排泄，尿nephrin可作为糖尿病肾病的早期诊断指标之一，还将有助于监测、判断糖尿病肾病的病程进展。

【关键词】糖尿病肾病；大鼠；微量白蛋白;尿nephrin
〔Abstract〕Objective:Diabeticratswereinducedtoexplorethedetectionofurinarynephrinindiabeticrats,itsdyna micchangesandclinicalsignificance.Methods：SDratsweredividedinto2groups.Diabeticratsmodelwereinducedbysingleintraperitonealinjectionof streptozocin(STZ),whilethoseofnormalcontrolgroupwereinjectedwithequaldosageofcitricacidbuffe rsolution.Twentyfourhoursurinarymicroalbuminandrenalfunctionwereambulatorilymonitored,and UrinaryNephrinwasmeasuredwithWestern-Blot.Results：Thetestshowedthatnourinarynephrinwerefoundinnormalcontrolgroup,butitwasdectetedoutindia beticratsgroup,anddiscoveredattheearlystage(2weeksafterSTZinjection).Withtheextensionofcours e,urinarynephringraduallyincreased,andthengraduallydecreasedafterreachingitspeakbyweek8.Co nclusion：Thenephrincouldbeexcretedoutfromurineattheearlystageofdiabeticnephropathy.Urinarynephrinc ouldnotonlyberegardedasaspecificindexfortheearlydiagnosisofdiabeticnephropathy,butalsobeben ificialtoclinicalmonitoringandevaluatingthedegreesoftheDN.
〔Keywords〕diabeticnephropathy;rats;microalbumin;urinarynephrin
糖尿病肾病(diabetesnephropathy，DN)是糖尿病微血管病变之一，是终末期肾衰的重要原因，早期诊断和治疗可延缓其发展。

DN起病隐匿，早期诊断困难，目前公认的诊断早期DN的指标是尿微量白蛋白，但也仅使DN诊断提早到依据Mogensen建议的Ⅲ期。

部分糖尿病患者当发现微量白蛋白尿时，肾脏的结构损害已很明显〔1〕。

因此不能单以尿微量白蛋白的出现来判断早期DN。

蛋白尿的发生与肾小球滤过屏障密切相关，nephrin是新近发现由足细胞表达、特异定位于肾小球足细胞裂孔隔膜的蛋白分子，参与肾小球滤过屏障的形成并维持其正常功能〔2〕。

研究表明，实验性糖尿病模型及人类蛋白尿相关的肾小球疾病均有nephrin表达的改变，且nephrin可从尿中排泄〔3〕。

而尿中nephrin排泄量增加是否可敏感反映糖尿病早期肾脏损害，目前国内尚未有报道。

本文对糖尿病大鼠尿蛋白排泄率(AER)及尿液nephrin进行动态观察，旨在探讨尿nephrin在DN中的变化规律及其对早期DN的诊断意义。

1对象与方法
1.1实验动物及分组
雄性SD大鼠76只，体质量230～280g，购自江苏大学医学院实验动物中心，血糖正常。

试验期间，室温控制在18～20℃，湿度48%，12小时交替照明，大鼠自由饮水进食，保持垫料干燥。

实验共分对照组（n=36），糖尿病组（n=40）。

对照组0周处死6只，再与糖尿病组随机分为2，4，6，8和12周5个亚组，分别于DM诱模后2，4，6，8和12周处死。

1.2糖尿病模型的建立
所有大鼠适应性喂养1周，随机取40只，禁食12h后，空腹状态下，链脲佐菌素（STZ）按55mg/kg一次性腹腔注射制备糖尿病模型，STZ临用前用枸橼酸钠缓冲液(0.1mmol/L,pH4.2)
配制。

24h后大鼠血糖开始升高，72h后剪尾采血测血糖，持续高于16.7mmol/L为DM模型建立成功〔4,5〕。

DM模型建成后，每周测血糖一次，不符合标准者弃去。

共有36只造模成功，其中有3只死亡。

正常对照组仅注射等量枸橼酸钠缓冲液(0.1mmol/L)。

全部大鼠自由饮食。

1.3标本留取
实验初，处死6只大鼠作为正常对照，并分别于注射STZ后2，4，6，8，12周末，对照组、糖尿病组随机取大鼠各6只，分别放入代谢笼中收集24h尿液，计尿液总量后离心(2000r/min,10min)，取上清液10ml，-20℃冰箱保存待测。

予0.3%戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔麻醉下，剪尾采血测血糖，腹部正中切口，心脏采血5ml，分离血清，用于生化指标测定。

1.4指标观察和测定方法
1.4.1生化指标检测采用免疫比浊法测定24h尿微量白蛋白；采用全自动生化分析仪检测血尿素氮（BUN）、血肌酐、尿肌酐，按公式Ccr=〔尿肌酐浓度（μmol/L）×每分钟尿量（ml/min）〕/〔血浆肌酐浓度（μmol/L）·体质量（kg）〕计算血清肌酐清除率。

1.4.2蛋白质印迹杂交取大鼠24h尿液离心后的上清液。

每1ml尿液样品置透析袋中用聚乙二醇8000高渗浓缩至100μl标本。

组内大鼠各取等体积离心浓缩尿液混合，将各组大鼠等体积尿混合液经12%SDS-PAGE电泳后，转移至硝酸纤维膜上，用封闭蛋白干粉封闭后，分别加入一抗（兔抗鼠nephrin，1∶200稀释，购自Sigma公司）过夜，然后加相应的辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG（武汉博士德公司）进行孵育，显色后，用凝胶成像及分析系统分析蛋白显色的光密度值（D）。

1.5统计学处理
计量资料以x±s表示,采用SPSS10.0统计软件进行分析,组间资料两两比较采用t检验。