流式细胞仪入门手册
流式细胞仪培训手册完成版
流式细胞仪培训手册序论学习仪器的最好方法是操作仪器，然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。
本书介绍了流式细胞仪的基本知识，并从不同角度详尽阐述了各种台式机（FACScanTM，FACSortTM，FACSCaliburTM，和BD LSR）与大型机（FACS VantageTM，FACSVantageTM SE，和FACStarPLUSTM）之间的不同。
阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。
目录第1章综述 (4)第2章液流系统………………………………………………………………第3章散射光信号及荧光信号………………………………………………3.1 散射光信号………………………………………………………3.2 荧光信号…………………………………………………………3.3 荧光补偿第4章光电系统………………………………………………………………4.1 光平台……………………………………………………………4.2 光学滤片………………………………………………………4.3 信号探测器……………………………………………………4.4 阈值………………………………………………………………第5章数据分析………………………………………………………………5.1 数据采集及显示…………………………………………………5.2 设门………………………………………………………………5.3 细胞亚群的数据分析…………………………………………5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析………………………………5.5 CellQuest软件使用……………………………………………5.6 MutiSet软件使用………………………………………………5.7 Simultest软件使用……………………………………………5.8 B27软件使用…………………………………………………5.9 WinMDI软件使用…………………………………………5.10 FACSPress软件使用…………………………………………5.11 System II软件使用…………………………………………5.12 MultiCycle软件使用…………………………………………5.13 Modfit使件使用……………………………………………第6章流式基本检测项目6.1淋巴细胞亚群检测（双色、三色、四色，三种软件分析）6.2 B27的检测………………………………………………………6.3 血小板抗体检测………………………………………………6.4 网织血小板及红细胞分析……………………………………6.5 干细胞检测……………………………………………………6.6 DNA倍体分析……………………………………………………6.7 凋亡检测…………………………………………………………第7章分选6.1 分选………………………………………………………………第8章激光器及光路校正……………………………………………………7.1 激光器的工作原理………………………………………………7.2 光路校正…………………………………………………………第9章答案………………………………………………………………第一章综述流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术，通常指细胞通过激光束时在液流中的特性，即粒子的大小，密度或是内部结构，以及相对的荧光强度。
流式细胞仪培训手册(完成版)_图文
流式细胞仪培训手册序论学习仪器的最好方法是操作仪器,然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。
本书介绍了流式细胞仪的基本知识,并从不同角度详尽阐述了各种台式机(FACScanTM , FACSortTM , FACSCaliburTM ,和 BD LSR与大型机(FACS VantageTM, FACSVantageTM SE, 和 FACStarPLUSTM 之间的不同。
阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。
目录第 1章综述…………………………………………………………………… 4 第 2章液流系统………………………………………………………………第 3章散射光信号及荧光信号………………………………………………3.1 散射光信号………………………………………………………3.2 荧光信号…………………………………………………………3.3 荧光补偿第 4章光电系统………………………………………………………………4.1 光平台……………………………………………………………4.2 光学滤片………………………………………………………4.3 信号探测器……………………………………………………4.4 阈值………………………………………………………………第 5章数据分析………………………………………………………………5.1 数据采集及显示…………………………………………………5.2 设门………………………………………………………………5.3 细胞亚群的数据分析…………………………………………5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析………………………………5.5 CellQuest软件使用……………………………………………5.6 MutiSet 软件使用………………………………………………5.7 Simultest 软件使用……………………………………………5.8 B27软件使用…………………………………………………5.9 WinMDI软件使用…………………………………………5.10 FACSPress软件使用…………………………………………5.11 System II软件使用…………………………………………5.12 MultiCycle软件使用…………………………………………5.13 Modfit使件使用……………………………………………第 6章流式基本检测项目6.1淋巴细胞亚群检测 (双色、三色、四色,三种软件分析6.2 B27的检测………………………………………………………6.3 血小板抗体检测………………………………………………6.4 网织血小板及红细胞分析……………………………………6.5 干细胞检测……………………………………………………6.6 DNA倍体分析……………………………………………………6.7 凋亡检测…………………………………………………………第 7章分选6.1 分选………………………………………………………………第 8章激光器及光路校正……………………………………………………7.1 激光器的工作原理………………………………………………7.2 光路校正…………………………………………………………第 9章答案………………………………………………………………第一章综述流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术,通常指细胞通过激光束时在液流中的特性,即粒子的大小,密度或是内部结构,以及相对的荧光强度。
流式细胞仪操作方法
一、样品制备1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。
每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。
如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。
结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。
Get清风BDFACSCalibur流式细胞仪培训手册
BD-FACSCalibur流式细胞仪培训手册BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook二、开机、关机标准操作2.1 FACS Calibur 开机1. 开启细胞仪电源。
2. 开启其它周边配备电源，如打印机及MO机。
3. 开启计算机。
4. 确认鞘流液筒有八分满的FACSFlow，确实旋紧(鞘液筒容量为4L)。
5. 将废液倒掉，并在废液筒中参加200ml 家用漂白水(废液筒容量为4L)。
6. 将减压阀方向调在加压〔Pressurize〕位置。
7. 排除液流管路与过滤器中的气泡。
8. 取下样品管，执行PRIME 功能两次。
9. 使用1ml PBS，HIGH RUN 两分钟。
10. 可开始分析样品。
2.2 FACS Calibur 关机关机前必要动作：清洗进样管和外套管，防止进样管堵塞、或有染料残留。
1. 将样品支持架左移，取2 mlFACSClean〔10%Bleach〕上样品，让仪器的真空系统抽取约 1 ml 的液体。
2. 将样品支持架回正，按HI RUN，然后让FACSClean 清洗管路10分钟。
3. 按Standby，取下样品管，执行PRIME功能两次。
4. 取2 ml dH2O，重复上述步骤1-3。
5. 注意最后只留约1 ml dH2O 在试管中。
6. 按STANDBY 五分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪〔必要动作，以保护雷射光源。
〕7. 倒掉废液，并回填200 ml漂白水。
8. 将减压阀放在「VENT 漏气」位置。
将鞘流液筒充填至八分满。
9. 退出软件“File〞→“Quit〞(如有对话选项，选择“Don‘t save〞)。
确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。
10. 关闭计算机。
“Special〞→“Shutdown〞。
三、上机分析流程建议首次试机防止进行大量试验，仅需准备以下样品。
〔1〕Negative Control〔不加任何抗体〕。
BDFACSCalibur流式细胞仪操作手册
BDFACSCalibur流式细胞仪操作⼿册B D F AC S C a l i b u r流式细胞仪FACS101Handbook本课程介绍「表⾯抗原流式分析」有关之基础⼯作原理。
如希望进⼀步了解流式细胞技术应⽤，请⾄本公司⽹站订阅FACSinformation电⼦报。
如需要本课程⼿册，欢迎⾄本公司⽹站下载。
如需要免疫荧光染⾊⽅法，请⾄本公司⽹站下载。
⼀、BDFACSCalibur基本结构1.1仪器本体：1.电源开关：在BDFACSCalibur仪器右侧下⽅，先启动仪器本体，再打开计算机。
2.光学系统：BDFACSCalibur基本配有⼀⽀波长488nm的氩离⼦雷射以BDFACSCalibur基本型为例FSCDiode只收488nm波长散射光SSCPMT只收488nm波长散射光FL1PMT荧光光谱峰值落在绿⾊范围（波长515-545nm）FL2PMT荧光光谱峰值落在橙红⾊范围（波长564-606nm）FL3PMT荧光光谱峰值落在深红⾊范围（波长>650nm）3.仪器⾯板：仪器前⽅⾯板的右下⽅有三个流速控制键、及三个功能控制键。
流速控制：LO：样品流速：12?l/minMED：样品流速：35?l/minHI:样品流速：60?l/min功能控制：RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进⼊流动室。
（正常显⽰绿⾊；黄⾊时表⽰仪器不正常，请检查是否失压。
）STANDBY：⽆样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停⽌流动，雷射功率⾃动降低。
PRIME：去除流动室中的⽓泡，流动室施以反向压⼒，将液流从流动室冲⼊样品管，持续⼀定时间后，以鞘液回注满流动室。
PRIME结束，仪器恢复STANDBY状态。
4.储液箱抽屉：在主机左下⽅之储液箱抽屉。
可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器SheathFilter，及空⽓滤⽹Airfilter。
请注意⽓路减压阀VENTTOGGLE之位置。
鞘液筒：位于抽屉左侧，容积4升。
FACSCalibur流式细胞仪中文操作手册
5. 上樣區： 上樣區是樣本管的上樣位置。它包括三個部 分，一個是進樣針 Sample Injection Tube，將 樣本輸入流動室，還有就是支撐架 Tube Support Arm、和液滴存留系統 Droplet Containment System。 進樣針：是一根不鏽鋼管，將細胞從樣本針中吸入流動室。進樣管外有一套管， 是液滴保留系統的一部分。 支撐架：用於支撐樣本管、並負責啟動液滴存留系統。支撐架有三個位置：位於 樣本管之下的中位，樣本管左側或右側。 液滴存留系統：系統由支撐架、真空幫浦和外套 管組成。當支撐架位於左側或右側位置時，真空 幫浦就會啟動，將液體從外管吸入廢液桶內。上 樣時，須注意將支撐架位於中位，以避免過多樣 品被抽吸到廢液筒內（當支撐架位於中位，真空 幫浦停止工作）。更換樣品時，讓儀器保持 RUN 的模式，使得進樣針可以反沖；切換到 STANDBY 模式前，確保液路已沖洗徹底以免碎片沈積到流 動室中。
FACS101 Handbook Pro
-7–
4. 從 Acquire 功能表中選擇 Connect to Cytometer，建立儀器和電腦之間通訊。此時 會出現 Browser 方框。將之移至適當位置。
5. 從工具板中點擊散點圖圖示。在實驗文件的空白區點擊，拖曳對角線至適當大小， 然後放開滑鼠。此時應可以在右方看到 Inspector：Dot Plot 對話框。
FACS101 Handbook Pro
-8–
6. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Duplicate 功能，可複製一個同樣大小的散點圖，完 成後可將重製圖移至原圖右方。
7. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Select All 功能，文件中所有圖譜的四角會出現黑色 方塊，表示被選取。可在出現之 Inspector：2 Objects 方框中將 Plot Type 改成 Acquisition。 8. 因應實驗需求來修改所有圖譜中顯示之參數。第一圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FSC-H 1024、SSC-H 1024；第二圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FL1-H 1024、FL2-H 1024。 修改動作為輕擊圖譜，並在出現之 Inspector 方框依需要選擇。 FSC：細胞大小 SSC：細胞顆粒性 FL1：FITC 綠色螢光 FL2：PE 橙色螢光 FL3：PerCP 紅色螢光 儀器設定 注意：實驗數據品質，取決於最適化儀器設定。儀器設定文件不能在數據收取後再更 改，研究人員必須在第一次就使用正確的儀器設定。 儀器設定（Instrument settings），含偵測器電壓（Detector/ Amps），閾值 （Threshold），螢光補償（Compensation）等儀器條件的組合。一般而言，儀器設 定的順序為 Detector/Amps -- Threshold -- Compensation。
流式细胞仪中文手册
仪器操作手册本手册根据标准配置的CyFlow® Space编写而成，具体内容根据实际配置可能有所偏差，手册内容应以实际配置为准。
CyFlow Space 仪器操作手册内容CyFlow Space介绍 (4)典型分析步骤 (5)基本操作 (6)启动CyFlow Space (6)多激光测量 (7)开始检测 (8)关闭CyFlow (9)液量绝对计数（定量）----概述 (10)如何执行液量绝对计数 (12)光路几何示意图 (13)光路图标准设置----参数 (14)仪器设置 (15)参数设置对话框：脉冲信号高度、面积和宽度 (16)触发 (17)光电倍增管（PMT）电压，增益和对数放大 (18)样本进样速度 (19)阈值：L-L（低值）和U-L（高值） (20)附录 (21)安装要求 (21)仪器安装--概要 (22)仪器安装--顺序 (23)流动室精细校准 (24)流动室 (25)维护和服务 (26)运输和储存 (26)污染物处理 (26)安全使用激光器的说明 (27)CyFlow Space技术规格表 (28)Partec推荐使用体外诊断试剂IVDPartec CyFlow Space型流式细胞仪符合欧洲98/97/EC标准，已经取得欧洲CE认证。
○C2007 Partec GmbHOtto-Hahn-Str.32D-48161GermanyCyFlow® Space介绍Partec CyFlow® Space是什么？CyFlow®Space有哪些用途？本手册涉及内容？其他要用到的说明书？操作CyFlow®Space前应该具备哪些知识？Partec CyFlow®Space是一台配臵全面的桌面式/便携式流式细胞仪（FCM）。
它的特色即设计理念是可以配备3个激光光源，和1至9个光学通道（参数），通过简单地更换光学滤片或镜片可以满足任何实验的需求。
流式细胞仪使用方法说明书
流式细胞仪使用方法说明书1. 概述流式细胞仪是一种用于细胞分析和排序的先进仪器。
本方法说明书旨在向用户介绍如何正确操作流式细胞仪以及最佳的使用方法。
请用户在使用前仔细阅读本说明书并遵循相关的安全操作规程。
2. 仪器组成流式细胞仪主要由以下几个组成部分构成：- 流体传送系统：用于将样本引入仪器并排除废弃物。
- 激光系统：产生激光束以激发样本中的荧光染料。
- 光学系统：收集样本产生的荧光信号并进行检测。
- 数据分析系统：用于解析和分析收集到的数据。
3. 使用准备在进行流式细胞仪实验之前，请确保以下几个步骤已经完成：- 仪器校准：根据仪器的使用手册进行仪器校准，确保仪器工作在最佳状态。
- 样本准备：按照实验需求，对待测样本进行合适的处理，例如细胞培养、染色等。
- 试剂准备：准备好所需的荧光染料、缓冲液等试剂。
4. 仪器操作以下是流式细胞仪的一般操作步骤：- 打开仪器电源，并等待仪器启动完成。
- 将样本装入合适的样本管，并在样本管中加入适量的荧光染料或其他试剂。
- 将样本管放入仪器中的样本槽，并调整流速和其他参数。
- 启动激光系统，并调整激光强度和波长以适应实验需求。
- 开始数据采集，根据仪器界面指示收集所需数据。
- 数据分析：根据实验需要，使用相应的数据分析软件对采集到的数据进行解析和处理。
5. 安全注意事项在使用流式细胞仪时，务必注意以下安全事项：- 佩戴个人防护装备，包括实验手套和护目镜。
- 遵循实验室的生物安全规程，确保样本处理符合相关的安全要求。
- 避免直接暴露于激光束下，以免损伤眼睛和皮肤。
- 在清洁仪器时使用合适的溶剂，并按照仪器清洁的标准程序进行操作。
6. 故障排除在实际操作中，有时可能会遇到仪器故障或其他问题。
以下是一些常见问题及其排除方法：- 仪器无法启动: 检查电源连接是否正常，重启仪器。
- 数据质量差: 检查样本制备和染色的质量，调整参数和仪器校准。
- 清洗困难: 检查是否有阻塞，按照清洁程序进行清洗。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流式细胞仪入门-----导航篇二OOO年四月目录前言第1章综述第2章液流系统第3章散射光信号及荧光信号3.1 散射光信号3.2 荧光信号第4章光电系统4.1 光平台4.2 光学滤片4.3 信号探测器4.4 阀值第5章数据分析5.1 数据采集及显示5.2 设门5.3 细胞亚群的数据分析5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析第6章分选6.1 分选第7章激光器及光路校正7.1 激光器的工作原理7.2 光路校正第8章答案序论学习仪器的最好方法是操作仪器，然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。
本书介绍了流式细胞仪的基本知识，并从不同角度详尽阐述了各种台式机（FACScan TM，FACSort TM，FACSCalibur TM，和BD LSR）与大型机（FACS Vantage TM，FACSVantage TM SE，和FACStar PLUSTM）之间的不同。
阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。
第一章综述流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术，通常指细胞通过激光束时在液流中的特性，即粒子的大小，密度或是内部结构，以及相对的荧光强度。
通过光电系统记录细胞的散射光信号和荧光信号可得知细胞特性。
流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液流系统；光路系统以及电系统。
其作用如下：液流系统：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区。
光路系统：细胞由激光激发，通过光学滤片产生光信号，并传送到相应的探测器。
电系统：把光信号转换为电信号。
对于有分选装置的仪器，电系统可初始化分选条件。
在流式细胞仪中，细胞被传送到液流中的激光照射区。
任何存在于悬液中的直径为0.2-150微米的粒子或细胞都适用于流式分析。
在实际工作中，用实体组织进行流式细胞分析往往是不可能的，分析之前必须对其进行分解。
被液滴包绕的粒子称为细胞液柱，当粒子经过激光照射区时，通过激光激发产生散射光。
含有荧光的粒子就会表现出其荧光特性。
散射光和荧光由光路系统（相应的透镜，滤片和探测器）收集。
分光器和滤光片引导散射光和荧光至相应的探测器，把光信号转换为电信号。
单个粒子通过其表现出的光散射和荧光属性，通过列表模式（List mode）完成数据采集，并对样本中的细胞亚群进行分析。
图1-1 散射光和激发光信号转换成为计算机可处理的充电脉冲习题：综述1 流式细胞仪可测量细胞或粒子的哪些属性？2 大多数流式细胞仪使用何种光源？3 流式细胞仪的三大系统是什么？4 哪种类型的生物样本最适于做流式细胞分析？5 液流包绕细胞形成？6 带有荧光的细胞通过激光束时，会产生哪两种光信号？7 由粒子激发的光由收集。
8 所有流式细胞测量是在单个细胞上同时进行吗？（对错）9 在进行流式分析之前粒子必须是单个细胞悬液吗？（对错）第二章液流系统液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区，其理想状态是把细胞传送到激光束的中心。
而且在特定时间内，应该只有一个细胞或粒子通过激光束。
因此，必须在流动室内把细胞注入鞘液流。
流动室是液流系统的核心部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机称之为喷嘴。
在流动室内细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激光相交。
流动室内充满鞘液，根据层流原理，在鞘液的约束下，细胞排成单列出流动室喷嘴口，并被鞘液包绕形成细胞液柱。
这种同轴流动的设计，使得样品流和鞘液流形成的流束始终保持着一种分层鞘流的状态，这个过程称为流体聚焦。
该原理适用于所有流动室，如图2-1和2-2所示：图2-1 细胞液柱通过样品槽产生流体聚焦图2-2 细胞液柱通过喷嘴产生流体聚焦样本压力和鞘液压力是不同的，且样本压力总是大于鞘液压力。
样本压力调节器通过改变样本压力的方法控制样本流速。
台式机：单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出，粒子或细胞在流动室内与激光相交（图2-1）。
除BD LSR型台式机有样本压力细调旋钮外，大多数台式机都采用固定的样本压力（分低，中，高速）。
大型机：单个细胞悬液从喷嘴喷出后，粒子或细胞在流动室外与激光相交（图2-2）。
且样本压力连续可调。
增加样本压力就是通过加宽液柱的方法增加样本流速。
换言之，在特定时间内，允许更多细胞通过液流。
当液柱变宽时，一些流经激光束的细胞会偏离中心，光斑也会偏离理想角度，这在一定程度下是允许的。
高流速适用于定性测量，如免疫表型。
样本流变宽，细胞间距离缩短，这样在单位时间内流经激光照射区的细胞数量增加，可以快速获取数据。
低流速促使样本流变窄，单个细胞得以依次通过，这样大多数细胞可流经激光束的中心，细胞受激光照射的能量比较均一，因而低流速适用于检测分辨率要求高的实验，如DNA分析。
为确保粒子和细胞完全通过激光束，正确调节样本压力对实验操作是至关重要的。
习题：液流系统1 流式细胞仪中液流系统的作用是什么？2 细胞流经激光束时影响激光照射细胞的两个因素是什么？3 在特定时间内，应该有多少细胞流过激光束？4 单个细胞悬液在内注入。
5 鞘液环包样品并使之居中的过程称为效应。
6 什么调节器可以控制细胞液柱的宽窄？7 对于台式机，样本的固定压力是多少。
8 增加样本压力，也就是样本流速和液柱。
9 DNA研究对检测分辨率要求较高，推荐流速为多少。
10 加大流速会降低检测分辨率。
（对错）11 定性检测时可使用高流速。
（对错）第三章散射光信号和荧光信号的检测上一章我们了解到粒子或细胞是如何依次通过液柱的，本节我们首先学习激光如何照射在单个细胞上的。
3.1 散射光信号粒子折射激光产生散射光信号。
散射光不依赖任何细胞样品的制备技术（如染色），因此被称为细胞的物理特性，即细胞的大小和内部结构。
散射光与细胞膜，核膜以及细胞结构的折射性、颗粒性密切相关，细胞形状和表面形貌也对其产生影响。
前向角散射：前向角散射（FSC）光与被测细胞的大小和面积有关，检测的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向的散射光信号（见图3-1）。
FSC不受细胞荧光染色的影响，常用于免疫表型分析的信号处理。
侧向角散射：侧向角散射（SSC）光与被测细胞的颗粒密度和内部结构有关，对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感（见图3-1）。
SSC收集与激光束正交90度方向的散射光信号。
图3-1 细胞的光散射特性上述两种信号都是来自于激光原光束，目前采用这两个参数组合，可区分不同种类的细胞亚群，同时可获得细胞相关的重要信息，下图（图3-2）为FSC和SSC组成的二维散点图，从图中可以很容易把全血样本中淋巴细胞、单核细胞及粒细胞区分开。
图3-2 FSC、SSC二维散点图习题：散射光信号1 什么时候会发生光散射现象。
2 光散射信号与细胞的哪些特性有关。
3 与激光束方向相同的光散射称为散射。
4 FSC与细胞的哪些特性相关？5 与激光束方向呈90度角的光散射称为散射。
6 SSC与细胞的和相关。
7 和双参数的组合可区分不同种类的细胞亚群。
3.2 荧光信号荧光物质吸收符合其波长范围的光能量，内部电子受激上升到高能级。
然后受激电子迅速衰落回基态，释放过剩能量成为光子。
这种能量的转换称为荧光。
能够激发荧光物质的波长范围称为激发光谱。
因为更多的能量消耗在吸收转换而不是荧光转换中，所以发射光波长要高于激发光波长。
荧光物质的发射波长范围叫做发射光谱。
目前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器，因为488nm的激光器能够激发一种以上的荧光（详见第7章）。
光源的谱线愈接近被激发物质的激发光谱的峰值，所产生的荧光信号愈强。
FITC 的激发光谱如图3-3所示， 488nm非常接近FITC的激发光谱的峰值，所以FITC被激发时会表现出最强荧光信号，而当FITC被其波谱范围内的其它波长激发时，也会检测到荧光，但信号强度不会这么高。
图3-3 FITC、PE、PerCP、APC染料的激发光谱如果激发光波长都是488nm，而发射光波长又不是极其接近的话，我们可以同时检测两种以上的荧光。
如FITC和PE双染就符合这种条件。
这两种荧光素的发射光谱如图3-4所示。
虽然PE的激发光谱的峰值不是488nm，但也足以检测到荧光。
更重要的是，FITC的发射光波长是530nm，PE的发射光波长是570nm。
他们的发射光波长足够远，可以使用不同的检测器。
被检测到的荧光信号数量与粒子中标记上的分子数量成正比。
图3-4 FITC、PE、PerCP、APC染料的发射光谱图3-5 荧光标记抗体对细胞表面抗原的特异性结合对单克隆抗体进行荧光染色，通过分析细胞表面抗原标记确认细胞类型（见图3-5）。
在细胞的混合群体中，我们使用不同的荧光染料区分细胞亚群。
每个亚群的染色模式与FSC和SSC 数据相结合，用于识别样本中的细胞种类，并可以得到各细胞亚群的百分含量。
而且，还可以对感兴趣的细胞进行再分选。
习题：荧光信号1 当荧光物质吸收激光能量，并释放过剩能量时，会发射。
2 荧光物质能被激光激发出荧光的波长范围称为。
3 由荧光染料发射的波长称为。
4 在流式细胞仪中通常采用什么激光器。
5 能够激发FITC和PE的波长是多少。
6 流式细胞仪最常用的两种荧光素是和。
7 荧光素标记抗体用于检测。
第四章光学系统光学系统由光学激发器和光学收集器组成。
光学激发器包括激光和透镜，透镜用于形成激光束，并使之聚焦。
光学收集器则由若干透镜组成，用于收集粒子发射的光束---激光束相互作用，透镜组和滤片发送激光束至相应的光学探测器。
光平台的设计可实现以上功能。
4.1 光平台流式细胞仪的光平台提供了一个固定平面，将激光源、光学激发器和收集器控制在一个固定的位置。
因而台式机的流动室和光路是固定的，能够保证光斑和样本流自始至终保持恒定。
图4-1和图4-2分别为台式机 FACS Calibur 和 BD LSR 的光平台系统。
图4-1 台式机 FACS Calibur 光平台系统图4-2 台式机 BD LSR光平台系统在大型机中，当液流流过喷嘴时，激光束通过消色差透镜组以最佳角度和位置截取液流。
由于光斑和液流位置会发生变化，所以大型机的光路没有台式机稳定，需要每日优化。
光路不正有可能导致粒子受激光照射的能量不均一，从而被激发出的荧光强度也不相同，造成测量误差。
大型机的光平台系统见图4-3。
图4-3 大型机 FACS Vantage SE 光平台系统习题：光平台1 光平台为的激光器提供了一个固定平面。
2 保证所有细胞受到均一的光照强度的两个必要条件是什么。
3 每次使用大型机时都需要进行光路校正（对错）。
4 在台式机中，固定的能够保证激光截取的位置是不变的。
4.2 光学滤片当细胞或粒子流过激光照射区时，SSC和荧光信号很弱，需要使用光电倍增管（PMTs）收集，而FSC信号很强，由光电二极管收集即可。
所有信号经由透镜组和滤片组到达相应的检测器。