植物组织培养技术流程整理.ppt
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植物组织培养ppt课件
1946年：罗士韦在菟丝子茎尖培养地观察到花的形成，为试管 受精奠定了基础
1948年：Skoog和崔真培养烟草茎段时，发现腺嘌呤或腺苷可解 除生长素对芽生长的抑制作用。
ppt精选版
42
1952-1953年：美国科学家Steward F.C. 用胡萝卜根的细胞悬浮 培养，发现单个细胞能象受精卵发育成胚一样的途径，发育成完 整植抹，证实了植物细胞全能性学说。
1952年：Morel和Martin首次报道茎尖分生组织的离体培养，获 得无病毒大丽花植株。
1954年：Muir将烟草愈伤组织置于固体培养基上，在其上放一 片滤纸，再在滤纸片上放上一 个烟草体细胞，单细胞培养成功。
1956年：Miller分离出Kinetin，Kinetin/激动素
ppt精选版
43
组织培养的奠基人
植物组织培养是由于人为控制培养条件，
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于 植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
细胞全能性的高低：
受精卵>生殖细胞>体细胞
植物细胞>动物细胞
分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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16
②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
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44
3、 迅速发展阶段（1960-1980）
1948年：Skoog和崔真培养烟草茎段时，发现腺嘌呤或腺苷可解 除生长素对芽生长的抑制作用。
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1952-1953年：美国科学家Steward F.C. 用胡萝卜根的细胞悬浮 培养，发现单个细胞能象受精卵发育成胚一样的途径，发育成完 整植抹，证实了植物细胞全能性学说。
1952年：Morel和Martin首次报道茎尖分生组织的离体培养，获 得无病毒大丽花植株。
1954年：Muir将烟草愈伤组织置于固体培养基上，在其上放一 片滤纸，再在滤纸片上放上一 个烟草体细胞，单细胞培养成功。
1956年：Miller分离出Kinetin，Kinetin/激动素
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43
组织培养的奠基人
植物组织培养是由于人为控制培养条件，
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于 植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
细胞全能性的高低：
受精卵>生殖细胞>体细胞
植物细胞>动物细胞
分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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16
②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
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3、 迅速发展阶段（1960-1980）
植物组织培养 PPT
5、移栽锻炼 将生根的苗从锥形瓶中移至草炭土或蛭石中，用玻璃罩或 塑料布保持80%以上的湿度，2-3天后打开玻璃罩逐渐降 低湿度进行锻炼，直到将罩全部打开处于自然湿度为止。
6、定植 苗健壮后移至土中培养（定植），即可长成植株并开花。
例题：右图是实验室进行植 物组织培养的一般过程。请 回答下列问题：
(3)基本过程
①愈伤组织：由离体的植物组织或细胞经 脱分化 形成的一 种 相对没有分化 的活的薄壁细胞团组成的新生组织。 ②脱分化：又叫去分化，是由_高__度__分__化___的植物组织或细胞产 生_愈__伤___组__织__的过程。 ③再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成_根__或___芽__等器官的 过程。
2、下面是宁夏农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程:
⑴请填写a～c所表示的内容。a. 脱分化 ； b. 愈伤组织 ；c. 再分化 。
⑵实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基,配制母液 时, 大量元素 、 微量元素 和有机物要浓缩5～10倍。 细胞分 ⑶该过程中a、c的启动关键在于培养基中所加 生长素 和 裂素 的浓度配比。
MS培养基中各成分的作用
植物激素和人工合成的植物激素
植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天 然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成的 激素在植物中没有相应分解它的酶，所以作用和存在的时间 长，作用效果明显。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的相互作用
诱导芽的形成 愈伤组织不分化 诱导根的形成
菊花组织培养操作步骤:
生芽 生根
消毒
无菌水
1
酒精灯火焰 封口膜
生芽
第四章植物组织培养技术
（二）丛生芽发生型(器官型)
丛生芽发生型是指使外植体携带的顶芽或 腋芽在适宜培养环境中不断发生腋芽而生根培养基中，诱导生根成苗的繁殖方法。
丛生芽发生型是大多数植物快繁的主要途 径，它不经过愈伤组织，能使无性系后代保持原 品种的特性，在生产中普遍应用。
四、移栽驯化
试管小植株的移栽驯化是试管苗从异养到自 养的转变，有一个逐渐适应过程。移栽前需对试 管植株进行高光强炼苗，使植株生长粗壮，并打 开瓶口，降低湿度，使其逐渐适应外界环境。 • 1.移栽 • 2.驯化管理
１.移栽
• 首先应洗去小植株根部附着的培养基，避免微生物 的繁殖污染，造成小苗死亡。
• 原球茎是短缩的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官， 它可以增殖，形成原球茎丛。由茎尖或腋芽外植体诱导产生原球茎，切 割原球茎进行增殖，或停止切割使其继续培养而转绿，产生毛状假根， 叶原基发育成幼叶，将其转移培养生根，形成完整植株。
II植物快繁程序
植物快繁的程序包括四个阶段： –无菌（或初代）培养的建立 –繁殖体增殖 –芽苗生根 –小植株的移栽驯化
（2）生产计划的实施 生产计划实施的步骤为：①准备繁殖材料。②合
格繁殖材料的快速增殖。 存瓶增殖总瓶数＝月计划生产苗数／每个增殖瓶月
可产苗数 月计划生产苗数＝每个操作人员每天可接苗数×月
工作日×人员数 控制试管苗生产中的增殖总瓶数，便于在一个周
期内全部更新一次培养基，使增殖材料处于不同生长 阶段的最佳状态，提高其质量。
IV 植物快繁的商业化应用
植物快繁最重要的用途是进行植物的商业化生产。 世界上快繁商业化开始于上个世纪美国的兰花工 业。我国的香蕉快繁苗占全国组培苗的2/3。其次 有甘蔗、兰花、马铃薯、甘薯等。
植物组织培养(PPT)
接种针 镊子 解剖刀
二、实验基本操作技术
（一）洗涤技术
1、洗涤液 的配制
2、洗涤方法
（1）玻璃器皿洗涤 A、新购买的玻璃器皿 表面常附着有游离的
碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用 自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液 中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗， 最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃ 烘箱内烘干备用。
植物组织培养
一、实验室设置及仪器设备
（一）实验室设置 实验室是进行组培研究的主要场所，应能 满足清洗、培养基制备、储藏、无菌操作、 培养、鉴定等多方面的工作。
组织培养实验室设置的总体要求：
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
实验室 组成
基本实验室
准备室 缓冲室 无菌操作室 培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温室
4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。 试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将 金属器械在其火焰上灼烧，冷却待用。 注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。 金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不 能灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火 焰不能时间太长。
5、取流水冲洗（至少30min）过的外植体，用 一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3~4次， 放入无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无 菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。
皿 和 玻璃器皿
用 具
接种用具
培养基：湿热
外部细菌：用水冲洗→化学药剂处理 培
养
材 内部细菌 茎尖培养
料
加抗生素：青霉素、利福平
操作的空气：洗刷地板、95%酒精擦超净工作台 用化学试剂薰蒸
1、实验器具和材料的准备 2、用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及 超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意： 台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降 低灭菌效果。 3、关紫外灯、打开风机，过5-10min进入缓冲 间，以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口 罩。进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不 要下工作台）
二、实验基本操作技术
（一）洗涤技术
1、洗涤液 的配制
2、洗涤方法
（1）玻璃器皿洗涤 A、新购买的玻璃器皿 表面常附着有游离的
碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用 自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液 中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗， 最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃ 烘箱内烘干备用。
植物组织培养
一、实验室设置及仪器设备
（一）实验室设置 实验室是进行组培研究的主要场所，应能 满足清洗、培养基制备、储藏、无菌操作、 培养、鉴定等多方面的工作。
组织培养实验室设置的总体要求：
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
实验室 组成
基本实验室
准备室 缓冲室 无菌操作室 培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温室
4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。 试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将 金属器械在其火焰上灼烧，冷却待用。 注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。 金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不 能灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火 焰不能时间太长。
5、取流水冲洗（至少30min）过的外植体，用 一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗3~4次， 放入无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无 菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。
皿 和 玻璃器皿
用 具
接种用具
培养基：湿热
外部细菌：用水冲洗→化学药剂处理 培
养
材 内部细菌 茎尖培养
料
加抗生素：青霉素、利福平
操作的空气：洗刷地板、95%酒精擦超净工作台 用化学试剂薰蒸
1、实验器具和材料的准备 2、用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及 超净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意： 台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降 低灭菌效果。 3、关紫外灯、打开风机，过5-10min进入缓冲 间，以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口 罩。进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不 要下工作台）
植物组织培养技术.pptx
③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞。
人参的愈伤组织
菠萝的愈伤组织
1、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH ③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
必要条件： 一定的营养物质、激素和其他 外界条件
原理: 细胞的全能性
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞。
人参的愈伤组织
菠萝的愈伤组织
1、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH ③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
必要条件： 一定的营养物质、激素和其他 外界条件
原理: 细胞的全能性
植物细胞组织培养(PPT)
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06.10.2020
主要有:
➢ 原生质体（Protoplast）培养 ➢ 悬浮细胞培养 ➢ 组织（愈伤组织Callus、茎尖分生组织）培
养 ➢ 器官（胚，花药，子房，根和茎）培养
其中最常见的是愈伤组织培养。
06.10.2020
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植物细胞组织培养范畴：
（广义）又叫离体培养：指从植物体分离出 符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等， 通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养 以获得再生的完整植株或生产具有经济价值 的其他产品的技术。
06.10.2020
14
三、植物组织培养的生理依据
植物生长调节物质对于植物细胞组织的分化和决定具 有关键性作用。它包括：生长素类、细胞分裂素类、 赤霉素、脱落酸、乙烯等
生长素类主要用于愈伤组织的形成，体细胞胚的产生及试管 苗的生根。常用的有2,4-D、NAA、IBA、IAA等。其作用强 弱为2,4-D>NAA>IBA>IAA。
细胞分裂素类则有促进细胞的分裂与分化，延迟组织的衰老， 促进芽的产生等作用。常用的有Zip(异戊烯腺嘌呤)、KT、6BA、ZT等作用强弱顺序为。Zip>KT>6-BA>ZT。
赤霉素则有促进已分化的芽伸长生长，打破种子休眠的作用。 常用的为GA3。
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四、植物组织培养的原理
★植物细胞全能性（Cellular totipotency）： 任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成
种子培养
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06.10.2020
3. 组织或愈伤组织培养(tissue， callus culture) ：是对植物体的各部分
组织进行培养，如茎尖分生组织、形成层、 木质部、韧皮部、表皮组织、胚乳组织和薄 壁组织等等；或对由植物器官培养产生的愈 伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形 成植株.
《植物组织培养技术》课件
04 植物组织培养技术的应用实例
快速繁殖技术
快速繁殖技术是指利用植物组 织培养技术，快速、大量繁殖
植物种苗的一种方法。
该技术广泛应用于花卉、果树 、林木等植物的快速繁殖，能 够大大缩短繁殖周期，提高繁
殖系数。
快速繁殖技术还可以通过控制 培养条件，实现植物的定向繁 殖，如矮化、无病毒等。
快速繁殖技术具有高效、环保 、可重复利用等优点，是现代 农业和林业生产的重要手段之 一。
濒危植物保护与复壮是保护生 物多样性和维护生态平衡的重 要手段之一，具有深远的社会 意义和生态意义。
05 植物组织培养技术的挑战与前景
技术瓶颈与解决方案
技术瓶颈
目前植物组织培养技术面临的主要瓶颈包括培养基的优化、外植体的选择与处 理、污染控制以及基因转化效率等。
解决方案
针对这些问题，研究者们正在探索新型的培养基成分、优化外植体的选择标准 、开发新型的消毒方法以及改进基因转化技术，以期提高植物组织培养的效率 和成功率。
指任何一个植物细胞都包含该物种的 全套遗传信息，具有发育成完整个体 的潜在能力。
植物细胞全能性证明
植物细胞全能性的应用
植物组织培养技术利用植物细胞的全 能性，通过离体培养获得完整的植株 ，广泛应用于植物繁殖、品种改良、 基因工程等领域。
许多植物细胞如胡萝卜、烟草、草莓 等在适宜条件下能够发育成完整的植 株，证明了植物细胞的全能性。
技术发展趋势与展望
发展趋势
随着生物技术的不断发展，植物组织培 养技术也在不断进步和完善。未来，该 技术将更加注重与基因编辑、合成生物 学等新兴技术的结合，以实现更为精准 和高效的植物育种和种质资源保护。
VS
展望
未来，植物组织培养技术有望在农业、园 艺、林业等领域发挥更大的作用，为解决 全球粮食安全、生态恢复等问题提供有力 支持。
植物组织培养流程组图-完整版PPT课件
2
图示在适合的光照、温度 等条件下，愈伤组织便开 始分化，又可重3
图示再分化形成的试管苗，移 栽到花盆中,可以发育成完整的 植物体，产生出植物的各种组 织和器官，进而发育成一棵完 整的植株。
退 4出
图示在无菌条件下，将植物体的器官或组织片段（如芽、茎尖、 根尖或花药）切下来。本例取的是胡萝卜根部的组织片段。
1
图示离体的植物器官、组织或细 胞（如芽、茎尖、根尖或花药）， 放在适当的人工培养基上进行培 养，这些器官或组织就会进行细 胞分裂，形成新的组织。不过， 这种组织没有发生分化，只是一 团薄壁细胞，叫做愈伤组织。这 一过程称为植物细胞的脱分化， 或去分化。
图示在适合的光照、温度 等条件下，愈伤组织便开 始分化，又可重3
图示再分化形成的试管苗，移 栽到花盆中,可以发育成完整的 植物体，产生出植物的各种组 织和器官，进而发育成一棵完 整的植株。
退 4出
图示在无菌条件下，将植物体的器官或组织片段（如芽、茎尖、 根尖或花药）切下来。本例取的是胡萝卜根部的组织片段。
1
图示离体的植物器官、组织或细 胞（如芽、茎尖、根尖或花药）， 放在适当的人工培养基上进行培 养，这些器官或组织就会进行细 胞分裂，形成新的组织。不过， 这种组织没有发生分化，只是一 团薄壁细胞，叫做愈伤组织。这 一过程称为植物细胞的脱分化， 或去分化。
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课件
二、培养基的配制与灭菌
1.培养基配制
MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30
mg/L pH 6.0
1L
2.培养基灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、 纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能 开盖。
课件
三、外植体的消毒与无菌操作 1.外植体消毒
正确
错误
课件
2.无菌操作
1、用75%的酒精喷洒超净工作台。 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪 镊杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置 太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。 3、关空间紫外灯，过5-10min进入缓冲间，以75%洗 手和手臂，进入接种台。
4、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。 5。、试验操作。 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。 7、收拾无菌纸、材料瓶等。
植物组织培养操作流程
§1 实验室仪器设备 §2 实验基本操作 §3 植物组织培养流程
课件
§1 实验室仪器设备
课件
课件
§2 实验基本操作
一、母液的配制 1.MS母液的配制 大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐 (100倍)、有机元素(100倍)
2.激素母液的配制 6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml； NAA浓度为0.1mg/ml
课件
接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形 态学上端露于空气中
正确Biblioteka 错误课件§3.植物组织培养流程
路 线 一
课件
路 线 二
课件
路 线 三
课件
灭 菌
身 体
难 ，
好 ，
接 种 难
学 习 好
， 用
， 品
心 都 不
质 更 需
难
好
课件
课件
注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用 手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3） 为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原 则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左 侧。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或 细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样， 培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重 复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。
消毒剂
使用浓度(%)
消毒时间 (min.)
效果
残液去除 难易
乙醇
70-75
0.1-3
好
易
新洁尔灭
10～20
5～30
好
易
氯化汞
0.1～1
2～15 最好 最难
过氧化氢 抗菌素
10～12 4～50mgl-
1
5～15 30～60
较好 较好
最易 较难
次氯酸钙/纳 9 ～ 10
5～30
好
易
课件
取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡 消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的 接种器械进行分离、切割或其他处理。
二、培养基的配制与灭菌
1.培养基配制
MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30
mg/L pH 6.0
1L
2.培养基灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、 纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能 开盖。
课件
三、外植体的消毒与无菌操作 1.外植体消毒
正确
错误
课件
2.无菌操作
1、用75%的酒精喷洒超净工作台。 2、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪 镊杀菌20min-30min。注意：台面上的用品不要放置 太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。 3、关空间紫外灯，过5-10min进入缓冲间，以75%洗 手和手臂，进入接种台。
4、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。 5。、试验操作。 6、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。 7、收拾无菌纸、材料瓶等。
植物组织培养操作流程
§1 实验室仪器设备 §2 实验基本操作 §3 植物组织培养流程
课件
§1 实验室仪器设备
课件
课件
§2 实验基本操作
一、母液的配制 1.MS母液的配制 大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐 (100倍)、有机元素(100倍)
2.激素母液的配制 6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml； NAA浓度为0.1mg/ml
课件
接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形 态学上端露于空气中
正确Biblioteka 错误课件§3.植物组织培养流程
路 线 一
课件
路 线 二
课件
路 线 三
课件
灭 菌
身 体
难 ，
好 ，
接 种 难
学 习 好
， 用
， 品
心 都 不
质 更 需
难
好
课件
课件
注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用 手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（3） 为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原 则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左 侧。（4）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或 细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样， 培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重 复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。
消毒剂
使用浓度(%)
消毒时间 (min.)
效果
残液去除 难易
乙醇
70-75
0.1-3
好
易
新洁尔灭
10～20
5～30
好
易
氯化汞
0.1～1
2～15 最好 最难
过氧化氢 抗菌素
10～12 4～50mgl-
1
5～15 30～60
较好 较好
最易 较难
次氯酸钙/纳 9 ～ 10
5～30
好
易
课件
取流水冲洗（至少5min）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡 消毒，用无菌水冲洗3-4次，放入无菌培养皿中，用无菌的 接种器械进行分离、切割或其他处理。