HPLC法含量测定检验
HPLC法测定甲巯咪唑片的含量及含量均匀度
取本品 20 片 , 精密称定 , 研细 , 精密称取适 量 (约相当于甲巯咪唑 10 mg) , 置 50 mL 量瓶中 , 加甲醇适量 , 充分振摇使溶解并稀释至刻度 , 摇
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药物分析杂志
匀 , 滤过 , 弃去初滤液 , 精密量取续滤液 2 mL 置
10 mL 量瓶中 , 加 018 mg·mL - 1内标溶液 5 mL ,
加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 按上述色谱条件依法测
定 , 同时与药典法[1 ]进行比较 , 结果见表 1 。
表 1 样品含量测定结果 ( %)
厂家
批号
HPL C 法 ( n = 3)
药典法 ( n = 2)
A厂
980713
9914
9818
பைடு நூலகம்
A厂
981025
9616
9710
B厂
990123
9814
9815
7 含量均匀度测定 取本品 1 片 , 置 25 mL 量瓶中 , 照含量测定
项下的方法自 “加甲醇适量 , 充分振摇使溶解” 起 , 同法操作 , 结果见表 2 。
SP 8800 高效液相色谱仪 , SP 4290 积分仪 , Spectra 100 紫外检测器 。
甲巯咪唑对照品 (自己精制 , 经归一化法测 定 , 含量为 9917 %) ; 内标为邻苯二酚 (分析纯 , 上海试剂总厂) ; 甲醇 (色谱纯 , 天津四友医学生 物技术公司) 。甲巯咪唑片 (市售品 , 批号 : A 厂 980713 、981025 ; B 厂 990123 。规 格 均 为 每 片 5
含量测定,高效液相色谱法
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，可以用于含量测定。
该方法以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
高效液相色谱法具有高分离度、高灵敏度、高选择性等优点，适用于对热不稳定、难挥发、易分解的物质的分离和分析。
在含量测定中，高效液相色谱法可以用于测定药物、食品、环境样品中的成分含量。
需要注意的是，在进行含量测定时，应先进行方法学验证，以确保该方法具有足够的灵敏度、精密度和准确性。
同时，还应根据具体的样品和待测成分的性质选择合适的色谱柱、流动相和检测器等。
总之，高效液相色谱法是一种重要的分析方法，可用于含量测定，但需要经过方法学验证和选择合适的实验条件，以确保结果的准确性和可靠性。
gc法或hplc法用于含量测定时定量的依据_解释说明
gc法或hplc法用于含量测定时定量的依据解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在探讨和比较气相色谱法（GC法）和高效液相色谱法（HPLC法）在含量测定中的定量依据，并分析两种方法的优势与限制。
GC法和HPLC法是目前常用的两种分析技术，广泛应用于药物、化学品等领域中。
了解这些方法的原理、方法步骤以及应用案例对于科研人员和实验室操作者具有重要意义。
1.2 文章结构本文主要包括以下几个部分：引言部分介绍了文章的概述、目的和结构；第二、三节分别详细介绍了GC法和HPLC法在含量测定中的定量依据，包括原理介绍、方法步骤以及典型案例；第四节对GC法与HPLC法进行比较与对比分析，包括准确性和精密度比较、灵敏度和选择性比较，以及成本和操作难度比较；最后一节为结论与展望部分，总结了GC法和HPLC法在含量测定中的应用优势与限制，并对未来发展方向进行了展望。
1.3 目的本文的目的在于深入了解GC法和HPLC法在含量测定中的定量依据，探讨它们各自的优势和限制。
通过对两种方法进行比较与对比分析，可以为科研人员和实验室操作者提供选择合适分析方法的参考依据。
对GC法和HPLC法未来发展方向的探讨有助于指导相关领域的研究工作，并促进这些分析方法在实际应用中的进一步发展与创新。
2. GC法用于含量测定的定量依据2.1 原理介绍GC（气相色谱）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、制药、环境等领域。
GC法通过样品中化合物在气体载流相中的分离和检测来进行定量分析。
其原理基于化合物在不同条件下的挥发性、相对亲和力以及滞留时间差异。
在GC法中，样品首先被蒸发并转移到气相管柱中，在柱子内根据挥发性和亲和力与移动相或固定相发生相互作用，从而实现不同化合物的分离。
最后，通过检测器检测到各个成分的峰值，并根据峰面积或峰高来计算含量。
2.2 方法步骤进行GC法含量测定需要按照以下步骤进行：a) 样品制备：将待测样品准确称取，并根据需要选择适当的萃取和前处理方法，如溶解、提取或蒸馏等。
HPLC法测定生物素含量
HPLC法测定生物素含量摘要：目的：建立以hplc法测定生物素的含量。
检测方法：色谱柱为vp－ods，流动相：乙腈-磷酸-0.05%三氟乙酸(250:1:750)，检测波长：210nm，流速为1.0ml/min,进样量为20ul。
结果：生物素检测浓度的线性范围为0.05～0.30mg/ml(r=0.9999)；平均回收率为99.9%，rsd＝0.53%。
结论：本方法操作简便、精密度好、结果准确。
关键词关键词：高效液相色谱法生物素含量测定前言生物素(d-biotin)又称维生素h或辅酶r，主要作为各种羧化酶的辅助因子。
对糖、脂肪、蛋白质和核酸等代谢有重要意义，广泛应用于医疗，多维制剂及饲料添加剂等方面。
已载入美国及欧州等国药典，含量测定均采用化学滴定法。
本文建立了测定生物素的hplc法，操作简便，结果准确，速度比较快。
实验部分一、主要仪器与试剂1.仪器高效液相色谱仪：agilent 1100 chemstation 色谱工作站2.试剂乙腈( 浙江临海市浙东特种试剂厂，色谱纯)三氟乙酸(上海化学试剂厂，分析纯)磷酸（杭州化学试剂厂，分析纯）3.试验样品生物素对照品(中国药品生物制品鉴定所，含量100%，批号：1029*1-0001)。
生物素样品(浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：20070826，20070827，20070831)。
二、实验方法1.色谱条件高效液相色谱仪：安捷伦（agilent）1100 （lc）色谱柱：vp-ods色谱柱(4.6 mm×250mm,5um)；流动相：取乙腈250ml，加磷酸1ml，再加入0.05%三氟乙酸溶液750ml，混合均匀，过滤；检测器：紫外检测器检测波长：210nm；进样体积：20μl柱温：室温。
2.测试方法精密称取生物素样品约10mg，置于50ml容量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
另精密称取生物素对照品约10mg，置于50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。
HPLC含量测定分析方法验证中数据可接受标准讨论.
HPLC 含量测定分析方法验证中数据可接受标准讨论在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。
为规范对各种分析方法的验证要求，中国药典2005年版附录规定了分析方法验证的指导原则。
该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述。
但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求。
另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。
本文提出了在对HPLC 含量测定方法进行验证时的可接受标准，供大家讨论。
1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。
验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD ）应不大于2.0%。
2．线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。
具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范围内配制5份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。
以含量为横坐标（X ），峰面积为纵坐标（Y ），进行线性回归分析。
可接受的标准为：回归线的相关系数（R ）不得小于0.998，Y 轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。
3．精密度1）重复性配制6份相同浓度或分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。
2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
高效液相色谱外标法含量计算注意事项
高效液相色谱外标法含量计算注意事项除鉴别和有关物质检查外，HPLC法在化学药物中的应用就是含量测定了，另外在制剂的含量均匀度、溶出度、释放度检验项目中，HPLC法也发挥着越来越重要的作用，但其本质与含量测定一样，都是准确定量的测定方法，因此，含量测定也包括含量均匀度、溶出度、释放度等定量检测项目。
HPLC法应用于含量测定时哪些需要注意的问题？外标法含量计算方式有哪些注意事项是必知的？01、HPLC法应用于含量测定时需要注意的问题在建立一个新的HPLC法含量测定方法时，方法建立以及方法学验证方案需要特别考虑下述多种因素对分析结果的影响。
（1）流动相缓冲盐的pH值流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为。
见下图1，当流动相中缓冲溶液的pH为3.0时，出峰顺序为利多卡因、苯甲酰胺、酮洛芬，当流动相中缓冲溶液的pH为10.0时，三种药物的出峰顺序为酮洛芬、苯甲酰胺、利多卡因二即使是梯度洗脱，流动相中缓冲溶液的pH值仍然对药物的保留行为产生影响。
(2)色谱柱色谱柱的差异也会影响药物的保留行为，即使是柱长、内径、粒径相同的色谱柱，由于填料性质的差异，药物的保留时间、峰型有时会有较大差异。
(3)流动相组成以多元维生素制剂的含量测定为例，某制剂中含有4种维生素：烟酰胺、维生素B6、维生素B2和维生素B1。
如图2所示，当流动相中己烷磺酸钠和庚烷磺酸钠的相对比例由1:1变为4:6时，不仅各组分的保留时间、峰形有变化，甚至峰3、峰4没有实现分离。
02、含量的计算方式HPLC的定量方法可以分为内标法和外标法。
在仪器发展的初期，由于进样重复性差。
为了保证测定结果的准确采用内标法较多。
随着自动进样装置的发展，进样的重复性已经足够精密，从90年代开始，大部分的内标法已经被外标法取代。
但是，在药典制剂品种中还有一定数量的HPLC含量测定方法采用内标法。
除了尚未修订以外，以前担心的进样重复性已经不是采用内标法的原因，主要是因为药品制剂含量测定中样品回收率或样品制备方法的回收率影响，供试品溶液在萃取、离心处理或其他样品溶液制备过程中不能保证样品的完全提取，以及辅料对低含量药物的吸附作用，采用内标法可避免因供试品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。
HPLC外内标法测定含量
实验步骤
配制溶液 – (1)流动相的配制。甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1，V／V)，减压过滤并 超声波脱气。 – (2)栀子苷对照品溶液的配制。称取10．0 mg栀子苷对照品，精密称 定质量，以甲醇溶解，转移至2mL容量瓶巾(浓度为0．4 g／L)，甲 醇定容，分别精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0 mL于 10．0 m1．容量瓶中，以流动相溶液定容，得浓度为0．004， 0．02，0．04，0．1，0．2 g／L的栀子苷对照品溶液。 – (3)栀子供试品溶液的配制。取本品粉末0．1 g，精密称定，置具塞 锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理20 min， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。 平行处理3份。
实验步骤
配制溶液 (1)流动相的配制。乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)，减压过滤并超 声波脱气。 (2)对照品溶液的配制。分别称取40 mg扑热息痛和50 mg阿司匹林，精密 称定质量，于10 mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，甲醇定容，即得 4．0 g／L的扑热息痛、5．0 g／L的阿司匹林的混合对照品溶液A。称取 50 mg的咖啡因，精密称定质量，于10 mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶 解，甲醇定容，即得5．0 g／L的咖啡因内标溶液B。分别精密移取0．1， 0．5，1．0，2．5，5．0 mL的混合对照品溶液A和1．0 mL的咖啡因内 标溶液B于25．0 mL容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，即得浓度分别 为0．016，0．08，0．16，0．4，0．8 g／L扑热息痛和0．02，0．10， 0．20，0．50，1．0 g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2 g／L的5 种混合对照品溶液。 (3)供试品溶液的配制。精密移取待测样品溶液5 mL和1．0 mL的B于25 mL的容量瓶中，溶解，混匀，以甲醇定容，并平行处理3份。
高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量实验报告
高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量实验报告实验报告：高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量一、实验目的：使用高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量。
二、实验原理：高效液相色谱法（HPLC）是一种将液相背靠液相进行分离的色谱分析方法。
在本实验中，选择一种适宜的流动相，通过进样器将待分析的芳香烃混合物注入进液相色谱柱，利用流动相与固定相之间的相互作用及芳香烃分子与固定相之间的相互作用，在柱内进行分离。
通过控制液相流速、柱温等参数，可以实现对芳香烃混合物中各组分的定性与定量分析。
三、实验仪器与试剂：1.高效液相色谱仪2.色谱柱3.样品：芳香烃混合物四、实验步骤：1.根据实验需求，配置适宜的流动相溶液。
2.打开高效液相色谱仪，进行仪器的预热和调试。
3.调节样品进样器，将待测的芳香烃混合物注入进样器中。
4.将进样器连接至HPLC仪器，进行进样。
5.根据所选取的柱类型和分离目标，调节液相流速、柱温等参数进行分离。
6.观察高效液相色谱图谱，记录各峰的保留时间。
7.参考标准溶液浓度进行定量分析。
五、实验结果与分析：[插入实验结果示例图谱]根据光谱图谱，我们可以根据各峰的保留时间与标准曲线进行定量分析。
得到芳香烃混合物中各组分的含量如下：组分1：某 mg/mL组分2：某 mg/mL......组分n：某 mg/mL六、实验结论：通过本实验，我们使用高效液相色谱法成功地对芳香烃混合物进行了定量分析。
通过分析得到的结果，我们可以得知芳香烃混合物中各组分的含量，为后续实验或实际应用提供了重要的参考数据。
七、实验心得与建议：在实验过程中，我们需要严格控制实验条件，确保获得准确可靠的实验结果。
同时，在选择流动相溶液、调节液相流速等参数时，需要根据实际情况进行合理选择。
另外，对于柱的选择也是十分重要的，不同类型的柱会对分离效果产生不同影响，需要根据分离目标进行选择。
总的来说，高效液相色谱法是一种高效、准确的分析方法，在化学、环境、生物等领域有着广泛的应用。
HPLC外内标法测定含量
测定
(1)安装C18。反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。 (2)色谱条件：C18一ODS色谱柱(5um，4．6 mm×250 mm)；流动相 比例：乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)；流动相流速：1．0 mL／ min；检测波长：273 nm。 (3)换上流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为 0．016、0．08、0．16、0．4、0．8 g／L扑热息痛和0．02、0．10、 0．20、0．50、1．0 g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2 g／L的 5种混合对照品溶液各10uL进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键 停止分析。记录各色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以对照品峰面积与 内标物峰面积之比为纵坐标(y)，以浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，进 行回归分析，求扑热息痛和阿司匹林的线性方程。 (4)采用进样器吸取供试品溶液10uL，进样，通过保留时间确定扑热息 痛、阿司匹林、咖啡因色谱峰的位置，记录扑热息痛、阿司匹林、咖啡 因色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算待测样品溶液中扑热息痛、 阿司匹林的含量。
测定
(1)安装C18反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。 (2)色谱条件。C18一ODS色谱柱(53um，4．6 mm×250 mm)；流动相 比例：甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1)；流动相流速：1．0 mL／min；检 测波长：238 nm。 (3)换卜流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为 0．004，0．02，O．04，0．1，0．2，0．4 g／L的栀子苷对照品溶 液各10仙L进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录 栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以栀子苷进样浓度(g／L)为横 坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析。 (4)采用进样器吸取栀子样品溶液10¨L，进样，通过保留时间确定栀子 苷色谱峰的位置，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算 栀子药材中栀子苷的含量。
含量测定
-相当于标示量%的计算公式片剂：V ×F ×T/W ×平均片重/标示量×100%针剂： V ×F ×T/W/标示量（g/ml ） ×100%-以重量/片计的计算公式：V ×F ×T/W ×平均片重=重量/片例1司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g ，置碘量瓶中，加水10mL ，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L ）25 mL ，再加盐酸5 mL ，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10 mL ，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L ，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。
已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L ）17.05 mL ，空白试验消耗25.22mL ，每1mL 溴滴定液（0.05mol/L ）相当于13.01mg 的司可巴比妥钠。
计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g ，20粒胶囊内容物重2.7506 g ）？ (p.90－生成物滴定法)司可巴比妥钠的滴定度计算1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MA ×mB ×a/b ＝260.2×0.05×1/1＝13.01mg/ml 计算：(25.22－ 17.05)× 13.01×0.992× 2.7506 /0.1385× 0.1× 1000× 20例2精密量取维生素C 注射液4mL （相当于维生素C 0.2g ），加水15mL 与丙酮2mL ，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL 与淀粉指示液1mL ，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续30秒钟不退。
已知：注射液规格2mL:0.1g ，消耗0.05mol/L 碘滴定液（F=1.005）22.45mL ，维生素C 的分子量为176.12，问：♦ （1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？C ？1摩尔维生素C 与1摩尔碘相当T ＝0.05×176.12×1/1♦ （3）求本品相当于标示量的百分含量？二、光谱分析（一）、UV 法1、标准对照法（一点法）–A样/A标= C样/C标，–样品%= A样/A标×C标×F/W×100%–F=稀释倍数–W=取样量2、百分吸收系数法（A= E1%cm×C×L）–C% = A / E1%cm–样品% = A / E1%cm ×F/W– F = 稀释倍数和浓度换算因子–W = 取样量3、标准曲线法（y=bx＋a）–由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，W求出样品%。
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检测波长： nm
柱温： ℃
进样器温度： ℃
进样体积：l
□等度洗脱：
时间（min）
流动相A（%）
流动相B（%）
□梯度洗脱：
二、溶液的制备：
1、系统适用性溶液制备：
2、对照品溶液制备：
3、供试品溶液制备：
4、流动相制备：
结果：（计算表格另附）
1、系统适用性：
参数
标准规定
结果
理论塔板数（n）
分离度(R)
中国食品药品检定研究院
HPLC法含量测定检验记录
日期：
温度：
相对湿度：
检品名称：
检Hale Waihona Puke 编号：批号：生产厂家：
检验依据：
仪器信息：
名称
编号
使用前状态
使用后状态
试剂和材料：（包括标准物质信息，如标准物质的来源、批号、含量等）
操作：
一、色谱条件
工作站： 使用前状态： 使用后状态：
色谱柱：序列号：
流动相：
流速： ml/min
拖尾因子(T)
主峰面积的RSD
（连续进样针）
其它
2、计算
定量方法：
公式：
对照品：
供试品：
含量：
标准规定：
结论：
检验人：
复核人：
注：实验中需要说明的问题