分光光度计培训课件

工作环境
1、该仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃~35 ℃ 。
2、该仪器应放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈震动或持 续震动。 3、室内照明不宜太强，且避免日光直射。 4、电风扇不宜直接吹向仪器，以免影响仪器的正常使用。 5、尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 6、供给仪器的电源为220V±10%，49.5-50Hz，并须装有良好的 接地线。宜使用100W以上的稳压器，以加强仪器的抗干扰性能。 7、避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀性气体的场所使用。
内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响）。
维护方法
3、比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用擦镜纸
或干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比 色皿的透光率。有色物质污染，可用3mol/L盐酸和等体积乙醇的 混合液洗涤。 4、操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。
5、波长精度：±2nm。
6、波长重现性：0.5nm。 7、光谱带宽：6nm。
a 透过率线性精度±0.5% （T）。
b 吸光度精度±0.004A(在 0.5A处)。 13、透过率重现性：0.5%（T）。
8、杂散光：1%（T）（在360nm 处）。
722型分光光度计结构方框图
光 源
分光 系统
吸收池
检测系统
（此时试样室是打开的）。
722型分光光度计的使用操作方法
5、调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比
色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻 轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。 6、吸光度的测定 将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，
拓展-参比溶液选择
在进行光度测量时，利用参比溶液来调节仪器的零点，可以消除由于
吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差，并扣除干扰的影响。 参比溶液可根据下列情况来选择。 a 当试剂及显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比溶液。 b 显色剂为无色，而被测试液中存在其它有色离子，可用不加显色剂 的被测试液作为参比溶液。 c 显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。 d 显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组 分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其它试剂均按试液测 定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组 分的干扰。 e 改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以把此溶液 作为参比溶液消除干扰。
分光光度计的主要部件
1、光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度。
a 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm)
b 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)
2、单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。 3、棱镜:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm。 4、光栅:波长范围宽,色散均匀,分辨性能好,使用方便。
5、在不使用时不要开光源灯，如灯泡发黑（钨灯）、亮度明显
减弱或不稳定，应及时更换新灯。更换后要调节好灯丝位置。不 要用手直接接触窗口或灯泡，避免油污沾附，若不小心接触过， 要用无水乙醇擦拭。 6、放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。
典型故障及其排除方法
1、仪器不能调零。可能原因：
a 光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全 关闭。 b 透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%” 旋钮。
3、取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰
比色皿的光学表面。 4、比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛 刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸 吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。
注意事项
5、使用本仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原
理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器 的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节
c 仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风
吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。 d 电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。
典型故障及其排除方法
2、仪器不能调“100%”。可能原因：
a 光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光 源灯(尽管灯还亮)。 b 比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。 c 光电转换部分老化。解决方法：更换部件。
特征辐射被吸收的大小，来求出被测元素的含量。
722分光光度计
简介：该仪器适用于对可见光谱区域内物质的含量进行定
量分析，可广泛应用于工厂、学校、冶金、农业、食品、生 化、环保、石油化工、医疗卫生等单位的基础实验室。
用途：在近紫外和可见光谱区域内对样品物质作定性和定 量的分析，是理化实验室常用分析仪器之一。
d 电路故障。解决方法：调修电路。
典型故障及其排除方法
3、测量过程中，“100%”点经常变动。可能原因：
a 比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。 解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的 左边，上面用定位夹定位。 b 电路故障(电压、光电接收、放大电路)。解决方法：送修。
质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其
显色后再测定，故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素 较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对
照品同时操作。
拓展-基础概念
Lambert-Beer定律是吸收光度法的基本定律，表示物质对某一
单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度间的关系。
主要技术性能及规格：
1、光学系统：单光束、衍射光 栅。
2、波长范围：330~800nm.。
9、透过率测量范围：0-100% （T）。
10、吸光度测量范围：0-1.999 （A）。 11、浓度直读范围：0-2000。 12、光度精度：
3、光源：钨卤素灯12V30W。
4、接收元件：端窗式G1030光电 管。
8、关机
比色完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比
色皿座架用用软布或软纸擦净。
注意事项
1、该仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作
台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防 止灯泡灯丝发亮不稳定。 2、为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开，使光 路切断，以延长光电管的使用寿命。
物质，如果不干净，就用有机溶剂，比如酒精等溶液洗
2、选择比色皿洗涤液的原则是去污效果好，不损坏比色皿，同 时又不影响测定 3、分析常用的铬酸洗液不宜用于 洗涤比色皿，这是因为带水 的比色皿在该洗液中有时会局部发热，致使比色皿胶接面裂开而损
拓展-比色皿基础知识
坏。同时经洗液洗涤后的比色皿还很可能残存微量铬，其在紫外区
光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室 盖打开，使光路切断）。 2、选定波长 转动波长手轮，调至所需要的单色波长。 在能使空白溶液很好地调到“100%”的情
3、固定灵敏度档
况下，尽可能采用灵敏度较低的档，使用时，首先调到“1”挡，
灵敏度不够时再逐渐升高。但换挡改变灵敏度后，须重新校正“0%” 和“100%”。选好的灵敏度，实验过程中不要再变动。 4、调节T=0% 轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”，
旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。
6、长期不用时，需用将仪器使用防护罩罩住。
维护方法
1、若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新
校正“0”和“100%”点，然后再测量。 2、比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试 结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较（具体方法如下； 分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处 （石英比色杯：220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装 蒸馏水），将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射 比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围
式中：，——入射光及通过样品后的透射光强度 A——吸光度(absorbance)旧称光密度(optical density) C——样品浓度 d——光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度
拓展-基础概念
k——光被吸收的比例系数
T——透射比，即透射光强度与入射光强度之比
当浓度采用摩尔浓度时，k为摩尔吸收系数。它与吸收物质的
有吸收，因此会影响铬及其他有关元素的测定。一般主张使用过氧 化氢和 硝酸（5：1）的 混合 溶液 泡 洗，然后用水冲洗干净 4、对一般方法难以洗净的比色皿，还可以采取以下两种方法 A、先将比色皿侵入含有少量 阴离子表面活性剂的碳酸钠（20
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克/升）溶液泡洗，经水冲洗后，再于过氧化氢和硝酸（5：1）混
合溶液中侵泡半小时 B、在 通风橱中用盐酸、 水和甲醇（1：3：4）混合溶液泡洗， 一般不超过10分钟 C、比色皿不可用碱液洗涤，也不能用硬布、毛刷刷洗
分光光度计
2016年2月18日
目录
简介
A
B
722分光光度计
C
仪器故障及解决
D
拓展
简介
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长
范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下， 产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的， 各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光 通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度 和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理---比
5、吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。
a 可见光区：光学玻璃池
b 紫外区：石英池
6、检测器：利用光电效应，将光能转换成电流信号。 光电池，光电管，光电倍增管 7、指示器： a 低档仪器：刻度显示 b 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录