细胞室无菌技术标准操作规程
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程标题：无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物实验和细胞培养的重要场所，为保证实验结果的准确性和可靠性，操作规程十分关键。
本文将详细介绍无菌实验室的操作规程，包括实验室准备、操作流程、设备消毒、个人防护和废物处理等方面。
一、实验室准备1.1 清洁实验室环境：无菌实验室应保持干净整洁，定期清洁地面、台面和设备，避免灰尘和细菌污染。
1.2 检查实验室设备：在进行实验前，要检查实验室设备是否正常运转，确保无菌实验室的各项设备都处于良好状态。
1.3 准备所需材料：提前准备好所需的培养基、试剂和实验用具，确保实验进行顺利。
二、操作流程2.1 洗手消毒：进入无菌实验室前，必须先进行手部消毒，避免将细菌带入实验室。
2.2 穿戴个人防护用具：穿戴实验服、手套、口罩和护目镜等个人防护用具，避免污染实验样品。
2.3 严格按照实验操作规程进行：在进行实验时，要按照操作规程的要求进行，避免操作失误导致实验失败。
三、设备消毒3.1 消毒实验台面：在进行实验前，要将实验台面用75%乙醇或其他消毒液擦拭消毒，避免细菌污染。
3.2 消毒实验用具：使用完实验用具后，要及时用高温或消毒液进行消毒，确保下次使用时无菌。
3.3 定期消毒实验室设备：定期对实验室设备进行消毒，保持实验室的无菌状态。
四、个人防护4.1 穿戴个人防护用具：在进行实验时，必须穿戴好实验服、手套、口罩和护目镜，避免接触细菌。
4.2 避免交叉污染：在实验过程中，要避免将实验用具和试剂带到其他实验室，避免交叉污染。
4.3 定期进行健康检查：实验人员要定期进行健康检查，确保身体健康，避免将疾病传播到实验室。
五、废物处理5.1 分装废物：在进行实验后，要将废物分类分装，避免混合造成交叉感染。
5.2 定期清理实验室废物：实验室废物要定期清理，避免细菌滋生和传播。
5.3 合理处理废物：将实验室废物交由专业机构处理，避免对环境和人体造成危害。
结论：无菌实验室操作规程十分重要，只有严格遵守规程，才能确保实验结果的准确性和可靠性。
微生物实验室无菌操作技术规范
1.目的规范无菌操作流程，减少及避免发生染菌现象出现。
2.使用范围无菌室及洁净区的操作。
3.无菌操作技术原则3.1环境要清洁，在每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗；且避免操作前进行清扫。
3.2做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。
3.3在无菌操作时，不可讲话，打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品，不可使用。
4.内容4.1.1 准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲；备齐用物（如：接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等）；核对无菌用品，接种菌种的种类、型号。
4.1.2 所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀；进入洁净区前需要经传递窗进行紫外表面消毒30min以上；4.1.3 开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上；超净台避免放入过多的物品（一般只放入当次的实验所有的物品），所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌（灭菌日期超过4天的需重新消毒）。
4.1.4 进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，使臭氧尽量排放干净。
4.1.5 除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发，不暴漏口鼻，不暴漏躯干皮肤和衣物。
4.1.6 双手要进行清洗、消毒。
4.1.7 要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。
4.1.8 在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。
4.1.9 实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员（不超过4人/间）并尽量减少人员走动。
4.1.10 所有要放入超净工作台的物品都需进过消毒液喷洒擦拭消毒。
4.1.11 无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用；无菌液体在取离超净台前必须密封其开口；密封的无菌液体容器在放入超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。
4.1.12 在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。
细胞培养无菌操作
细胞实验考核要点一、准备工作1、清点超净台中仪器物品（垃圾桶、饭盒中三种管、橡胶塞、蓝枪头、移液枪、电子枪、50ml离心管、镊子、剪刀、marker笔、打火机、卫生纸、6孔板、平衡50ml内含1ml离心管），合理布置台面。
2、超净台灭菌：酒精喷洒超净台面，紫外照射20min左右。
3、预热：将PBS、10%FBS、胰酶装进PE手套中，37℃预热备用。
二、实际操作1、点燃酒精灯2、从水浴锅中取出预热的三种液体，喷酒精后放入超净台，用卫生纸擦拭瓶壁酒精。
撕开三个封口膜。
瓶口在外焰烧灼烧，拧松三个瓶盖，以备用。
3、手喷酒精后，旋松并取出T25瓶。
在显微镜下观察细胞长势，若细胞密度达到了80%-90%，则可以进行传代。
注意若显微镜没有人用过，需要在载物台附近喷洒酒精后擦拭。
4、将T25拿到超净台里面。
手进入台面内需酒精喷洒消毒（后不赘述）。
打开吸泵。
5、来回灼烧吸泵铁头。
旋开T25瓶，注意灼烧瓶盖，瓶盖扣放。
铁头插上两个蓝枪头，瓶身倾斜吸去瓶中原培养基。
灼烧瓶盖和瓶口后盖盖，不要盖太紧。
6、取1ml移液枪，将T25竖起来，向未生长细胞的侧壁打入5ml PBS冲洗。
盖盖后左右上下稍移动。
将PBS吸出。
关吸泵！7、向瓶中加入500ul胰酶。
稍混合均匀。
放入培养箱中消化2min。
计时。
8、2min内需完成的操作（1）取出一个50ml离心管。
（2）烧套管：镊子在火上过一下，套管盒稍稍开一小口，用镊子取出一个套管，火上来回灼烧，然后放置在离心管架上。
（3）烧弯头吸管：从烧瓶中用镊子取出一个塞子。
弯头吸管盒稍开一小口，确定是不是塞棉花的一头。
镊子稍稍过火灼烧，开一小口，镊子夹出塞棉花一头，放下镊子，拿出吸管。
盒子放回原处。
将塞子塞入弯头吸管中。
手持塞子来回在火上灼烧，完毕后放入套管中。
9、取出培养箱中消化的细胞，显微镜及肉眼观察消化是否合适。
若在显微镜下看到细胞质壁分离呈球形，大部分细胞已经脱离瓶壁游走在视野中，肉眼观察有白色的成片细胞脱落，说明消化完成。
细胞培养无菌操作基本技术
细胞培养无菌操作基本技术细胞培养是现代生物学研究中常用的一种实验技术，能够使细胞在体外条件下生长和繁殖。
无菌操作是细胞培养过程中非常重要的一项技术手段，可以保证细胞培养环境的无菌纯净，避免细胞被外部微生物污染。
本文将介绍细胞培养中常用的无菌操作基本技术，并结合实例进行详细说明。
无菌操作基本技术主要包括以下几个方面：1.实验前准备在进行无菌操作前，首先需要准备好实验所需的培养基、培养器具和其他实验工具。
这些器具和工具需要经过高温高压灭菌处理，以确保其无菌。
此外，实验人员还需佩戴无菌手套、穿戴无菌实验服，并对实验台面进行彻底的清洁消毒，保持实验环境的无菌。
2.灭菌操作在进行无菌操作前，需要对培养器具进行灭菌处理。
常用的灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌两种。
干热灭菌是将培养器具置于高温烘箱中，持续加热若干小时，以达到灭菌目的。
湿热灭菌则是将培养器具置于高压高温的蒸汽中，进行高压灭菌。
此外，对于一些无法耐受高温高压的培养器具，还可使用化学灭菌方法，如使用过氧化氢和酒精进行消毒。
3.无菌操作技术在进行无菌操作时，需要遵循一定的操作规范。
首先，实验人员应将实验器具放入无菌工作台中，在UV灯的照射下进行灭菌处理。
然后，实验人员需要将自己的双手放入无菌手套中，并使用无菌皮培养工具进行操作。
接下来，需要准备好含有培养基的培养皿，并用无菌注射器将细胞转移到培养皿中。
在操作过程中，需要注意避免造成培养基的污染，尽量减少对培养基的接触时间，以防止细菌或其他微生物的污染。
4.维持无菌操作环境在进行细胞培养过程中，需要维持无菌操作环境。
实验人员应避免在实验台面上散落细胞培养基、细胞碎片或其他可能造成污染的物质。
细胞培养箱和无菌安全柜的门不可长时间打开，以防止空气中的微生物进入工作区域。
并且需要定期对无菌安全柜和细胞培养箱进行清洁和消毒。
同时，实验室人员需要经常进行手部清洁，并定期更换无菌手套和实验服，保持实验环境的无菌。
细胞培养中的无菌操作是进行细胞培养实验的基础，能够产生可靠的实验数据，并在细胞学研究中发挥重要作用。
无菌技术操作规程
无菌技术操作规程《无菌技术操作规程》一、目的无菌技术操作规程的目的是为了确保无菌操作的安全性和有效性，防止细菌、病毒等微生物的污染，保证实验结果的准确性和实验人员的健康安全。
二、适用范围本规程适用于实验室、手术室等需要进行无菌操作的场所，涉及到培养基制备、细胞培养、微生物实验等工作。
三、操作程序1. 理清工作流程：在进行无菌操作前，要先明确工作流程，将需要使用的器皿、培养基等准备齐全。
2. 环境准备：无菌操作需要在无菌操作台上进行，操作台表面要进行清洁消毒，保持无菌状态。
3. 个人准备：实验人员需要穿戴合适的无菌服，戴上口罩、手套等个人防护用品。
4. 器皿处理：将需要使用的器皿在一定条件下进行高温高压灭菌处理，确保器皿的无菌状态。
5. 培养基制备：在无菌操作台上进行培养基的制备过程，确保在无菌环境下完成，防止细菌的污染。
6. 细胞培养：在严格的无菌条件下进行细胞的培养和处理，避免微生物的污染。
7. 垃圾处理：将使用过的器皿、口罩、手套等垃圾按规定的程序进行处理，防止垃圾中的微生物传播。
四、注意事项1. 每一项无菌操作都需要在无菌环境下进行，防止细菌、病毒的污染。
2. 实验人员需要接受相关的无菌操作培训，并进行定期的健康检查。
3. 无菌操作需要有专门的空间和设备，确保无菌状态的维持。
4. 严格按照规程操作，不得私自更改程序。
5. 发现操作台面或器皿出现污染时，要及时清洁消毒。
五、总结无菌技术操作规程是实验室和手术室等需要进行无菌操作的场所必须严格遵守的操作规定，只有严格按照规程操作，才能保证无菌环境的稳定和无菌操作的准确性和安全性。
在无菌操作中，实验人员需要时刻保持警惕，及时发现和处理可能的污染情况，确保无菌操作的顺利进行。
细胞无菌检测通则
细胞无菌检测通则
细胞无菌检测通则是对细胞培养或生物制品生产过程中的细胞进
行无菌检测的方法。
无菌检测是一项非常重要的工作，可以保证细胞
和生物制品的质量和稳定性。
下面是细胞无菌检测通则：
1. 实验室环境应该保持清洁，工作台、培养箱等设备应该定期
消毒，所有使用过的器材都应该及时彻底清洗和消毒。
2. 操作人员必须要有操作无菌技术的能力和意识，穿戴干净无
菌的实验衣、手套等防护用品。
3. 细胞无菌检测前，需要取样并用无菌玻璃棒将细胞涂抹于含
有适当培养基的培养皿上。
将培养皿培养在37℃的恒温培养箱中，观
察数天是否有细菌或真菌生长。
4. 如若培养后发现有细菌或真菌的存在，则该细胞不符合要求，必须抛弃，清洗培养皿并重新培养。
5. 如果实验过程中发现细胞液存在不透明、浑浊、颗粒物等状况，则需要对细胞进行离心等操作，并对细胞上清液进行无菌性检测。
通过以上细胞无菌检测通则的详细操作，可以有效保证细胞的无
菌性。
细胞实验室操作规范要求
细胞试验室操作规范要求细胞试验室是进行细胞操作的试验室，细胞培育是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必需保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。
博泰我带大家了解细胞试验室操作规范要求有哪些。
一、细胞试验室的分区1、干净区：更衣区、缓冲区、细胞制备区、细胞培育区；配液区、微生物检测区。
2、非干净区：样本接收区、免疫检测区、细胞生物学检测区、理化检测区、物料存放区；清洗消毒区、气体储存区、信息中心区、细胞储存区、档案存放区。
二、细胞试验室收集要求1、试验室负责人需提前1天接到抽血实在时间的通知，准备工作相关事宜。
工作前试验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30分钟。
2、干净室内操作人员清洁后提前20分钟穿戴无菌服帽、口罩，无菌手套等，进入干净室，做好工作前准备。
3、抽血之前由试验室专门人员穿戴整齐携带灭菌后的无孔消毒盘进入治疗室，等待抽血，认真阅读知情同意书并在知情同意书上签字。
4、将刚抽取的血液放入灭菌后的无孔消毒盘中快速送到试验室传递窗，干净室内操作人员将血液从传递窗取出运输至操作室对细胞进行收集。
5、试验结束打扫完毕后，再次将试验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌15分钟。
三、细胞试验室培育要求1、依据治疗方案确定好细胞培育计划，若是因患者自身或其它原因，需要延迟回输，适时将细胞冻存。
2、细胞培育期间，需要每天察看细胞生长状态，并适时做好相关培育工作。
在回输或冻存前需完成细胞质量掌控，对细胞进行无菌检测和细胞数量活率检测。
3、细胞培育时间大约是15天，假如发觉因细胞生长等原因需要延长培育时间，要适时通知上级领导，通常回输时间不能提前。
四、细胞试验室回输要求1、工作前试验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30分钟。
试验室内由至少2人确认所需回输的细胞和放置位置。
2、干净室内操作人员清洁后应在回输时间提前1小时穿戴好无菌服帽、口罩，无菌手套等，进入干净室，做好工作前准备。
3、若是需要取出冻存细胞，干净室外工作人员穿戴整齐将所需细胞从液氮罐取出并快速放入传递窗，干净室内操作人员立刻对细胞进行复苏。
细胞间-无菌操作要点
细胞间内操作
（用酒精消毒代替酒精灯灭菌的工作方案）
实验结束整理灭菌
环境清洁：进入细胞间前半小时，超净工作台及细胞间紫外灭菌。
试剂物品进入细胞间需酒精充分消毒。
无菌溶液进入细胞间前检查是否有沉淀、絮状物或变色，如有以上情况，禁止进入细胞间。
无菌服穿戴：隔离衣、帽子、手套、口罩穿戴整齐，(帽子遮盖全部头发、手套需套住袖口)。
物品进入超净台：试剂、培养瓶及废液缸需酒精消毒
培养箱：
1.开门前，在手套及培养箱门上喷酒精；
2.缩短开门时间；减少开门次数
3.开门时细胞间内减少走动，实验室的门应为关闭状态
超净台内(不使用酒精灯，但需严格消毒)：
1.操作区域用酒精擦拭，保持整洁、宽敞，并打开超净台风扇运转通风
2.所有试剂、耗材进入前必须喷洒酒精，并充分擦拭，避免出现死角
10.取用无菌物品须用无菌持物钳（若持物钳污染，酒精棉球消毒后使用）
11.废液缸应放在远离操作区的最右侧靠外位置(弃废液动作轻柔，棉球擦拭载物台
2.观察完毕后，关闭显微镜
分类整理用品
1.试剂开封使用完，盖好盖子，封口膜封口
2.废液缸倾倒
3.隔离衣展开放置
离开前检查：
1.超净台是否关闭、台面是否恢复原样
2.显微镜、水浴锅是否关闭
3.恒温箱门是否关紧
3.无菌持物钳等工具在使用前紫外灭菌
4.无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回。
5.手及袖口不能在无菌容器上方经过。
6.枪头盒随用随关
7.无菌容器盖的内面朝上放置于台面或拿于手中
8.任何液体（特别是培养基）洒落在器械或工作台上，应及时用酒精棉擦拭；瓶口外侧有试剂滴落，也应用酒精棉擦拭干净
细胞培养—无菌操作
细胞培养—无菌操作细胞培养是一种常见的生物技术操作，可以用来研究细胞的生理功能、细胞的增殖和分化以及生物化学反应等。
在进行细胞培养时，无菌操作至关重要，因为细胞非常容易受到外部微生物的污染，从而影响实验结果的准确性。
下面将介绍细胞培养的无菌操作步骤。
1.准备工作在进行细胞培养之前，需要准备好以下工具和试剂：-培养皿：使用符合实验要求的培养皿，常见的有培养瓶、细胞培养板等。
-培养基：根据实验需要选择适当的培养基，例如DMEM、RPMI-1640等。
-无菌操作台：无菌操作台提供一个无菌的工作环境，可以防止微生物的污染。
-显微镜：显微镜可以用来观察细胞的形态和增殖情况。
-移液器和吸头：用于移液操作，需要保持无菌。
-无菌培养液：例如乙醇、连苯三氯和消毒液等。
-消毒器材：例如灭菌器、高压蒸汽灭菌器和紫外线灭菌器等。
2.准备培养皿和培养基将培养皿放入无菌操作台的工作区域内，通过高压蒸汽灭菌器或紫外线灭菌器对培养皿进行灭菌处理，确保其表面无菌。
然后用无菌移液器加入适量的培养基到培养皿中，根据实验需要选择适当的培养基。
3.细胞接种将需要进行细胞培养的细胞按照预定的密度接种到培养皿中。
在进行细胞接种前，需要将细胞培养液中的细胞进行离心，去掉上清液，然后用适量的培养基将细胞悬浮液稀释到适当的细胞密度。
在接种细胞时需要注意，避免将培养皿的口部接触到任何表面，以免引入微生物污染。
4.细胞培养将接种好的细胞培养皿放入细胞培养箱或培养箱中进行培养，保持适当的温度和湿度。
通常将细胞培养箱设置在37摄氏度，5%二氧化碳的环境中，以模拟人体体内的条件。
在细胞培养过程中需要定期检查细胞的状态，观察细胞的形态和增殖情况。
5.细胞培养的无菌操作在培养细胞的整个过程中，需要保持无菌操作。
在进行任何操作之前，需要在无菌操作台上烧毁以杀死细菌和真菌。
接种细胞、更换培养基、观察细胞等一系列操作都需要在无菌操作台上进行，以减少细胞受到外部污染的机会。
细胞无菌操作的一般流程
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- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
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细胞室无菌技术标准操作规程
一、无菌室的灭菌
1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
超净台上滤网需每月清洗1次。
2. CO2孵箱（培养箱）灭菌：用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射。
3. 实验前灭菌：打开紫外灯、超净台各20-30分钟。
在开紫外灯杀菌前，应确认无菌室无人后方可开紫外灯杀菌。
4. 实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
５．定期检测下列项目：钢瓶之CO2压力；CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）；无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。
6. 水槽可添加消毒剂（Zephrin 1:750），定期更换水槽的水。
二、实验人员的无菌准备
1. 肥皂洗手；
2. 穿好隔离衣，放好拖鞋；
3. 用75％酒精棉球擦净双手；
三、无菌操作的要点
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面；
2.靠近酒精灯火焰操作；
3.器皿使用前必须过火灭菌；
4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火；
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
细胞传代培养（消化法）标准操作规程
一、原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
二、材料和试剂
1. 无菌磷酸生理缓冲液(PBS)
2. 胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回温。
3. 新鲜培养基
4. 无菌吸管/离心管/培养瓶
三、操作步骤
1. 传代前准备
（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
（2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。
（4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
（5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。
（6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
（7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
（8）打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
2. 胰蛋白酶消化
（1）加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。
（2）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。
（3）吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。
3. 吹打分散细胞
（1）吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
（2）吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。
（3）平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8
分钟。
（4）弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
4. 分装稀释细胞
（1）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。
注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。
最后要做好标记。
（2）分装：将细胞悬液吸出分装至2～3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。
（3）继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。
传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。
5. 悬浮型细胞的传代
（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm 5 分钟。
（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。