布鲁氏菌病原学血清学诊断
布病血清学诊断
虎红平板凝集试验
简便、快速易行， 具有较好的特异性， 有一定的敏感性， 检查牛的阳性率稍 高于绵山羊。 高于绵山羊。 该法可用于大面积 检疫。
弃掉0.5 弃掉0.5 0.5
菌液 1 2 3 4 5 6 7
0.5 0.5 0.5 0.5
结 果
试管凝集试验原理
布鲁氏菌试管凝集试验设计
单位：ml
比浊管的制备
管号 1 2 3 4 5 1:40稀释抗原 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 石炭酸 盐水 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 清亮度 100% 75% 50% 25% 0% 标记
布鲁氏菌的诊断
1：50—1：100++以上 50 1 100++以上 目前国内定1 100++，但国际定1 目前国内定1：100++，但国际定1：160++ 对半年内有菌苗接触史者，虽达1 100—1 对半年内有菌苗接触史者，虽达1：100 1： 160++， 160++，过2—4周应再次检查，效价升高1倍 4周应再次检查，效价升高1 以上方能确定，最好用补体结和试验检查。 以上方能确定，最好用补体结和试验检查。 补体结合试验1 10＋＋ ＋＋以上 补体结合试验1：10＋＋以上
评价：试管凝集试验是Wright Sample于1898年首 Wright和 评价：试管凝集试验是Wright和Sample于1898年首 先建立的， 先建立的，是布病诊断在国际上唯一的全标化 方法，使用广泛，经久不衰。特异性好， 方法，使用广泛，经久不衰。特异性好，也较 敏感，实用性强，诊断、流调、监测均适用。 敏感，实用性强，诊断、流调、监测均适用。 缺点： 缺点： — 有前带现象。 有前带现象。 — 不能区别人工免疫和自然感染。 不能区别人工免疫和自然感染。 — 产生一定的交叉反应。 产生一定的交叉反应。 — 慢，需要两天。 需要两天。
布鲁氏菌病的血清学分析与细菌学检测方法
布鲁氏菌病的血清学分析与细菌学检测方法布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的传染病，其临床症状多样化且类似于其他感染性疾病，因此需要通过血清学分析和细菌学检测方法来确诊。
本文将对布鲁氏菌病的血清学分析和细菌学检测方法进行介绍。
首先，血清学分析是布鲁氏菌病确诊的重要方法之一。
在感染布鲁氏菌后，人体会产生特异性抗体作为免疫反应的体现。
通过检测患者的血液样本中的抗体水平，可以判断是否存在布鲁氏菌感染。
常用的血清学检测方法包括鲁斯菌血凝试验（RBPT）、红细胞沉降试验（RBT）、血凝凝集试验（CFT）、鲁斯菌凝聚试验（SAT）等。
这些血清学检测方法基于对患者血清中布鲁氏菌抗体进行定性或定量检测，具有灵敏度高、特异性好的特点。
鲁斯菌血凝试验是一种常用的初筛试验，通过观察血清与鲁斯菌悬液的凝集反应来判断是否感染布鲁氏菌。
如果血清中存在布鲁氏菌抗体，凝集反应会发生，并形成凝集现象。
红细胞沉降试验和血凝凝集试验则可以更准确地测定患者血清中布鲁氏菌抗体的滴度，用于判断感染程度。
鲁斯菌凝聚试验则是一种特异性较高的试验，通过将鲁斯菌的抗原与患者血清混合，观察是否会发生凝聚反应，来确定是否感染布鲁氏菌。
除了血清学分析，细菌学检测方法也是布鲁氏菌病确诊的重要手段之一。
细菌学检测方法主要通过从患者的体液（如血液、淋巴结组织等）或粪便中分离和培养布鲁氏菌，然后进行鉴定来确诊。
常用的细菌学检测方法有无菌抽取、培养和染色等步骤。
其中，无菌抽取是从患者体液或组织中取得标本，并采用无菌技术处理，以避免细菌污染。
接着，标本会被接种于培养基上，利用培养基中的营养物条件和条件的控制，使布鲁氏菌得以生长和繁殖。
最后，通过染色技术如格拉姆染色、新西兰染色等，可以观察和鉴定生长在培养基中的细菌是否为布鲁氏菌。
细菌学检测方法的优势在于可以直接检测布鲁氏菌的存在，并可以对感染量进行定量分析。
此外，细菌学检测还可以对分离到的菌株进行药敏试验，以确定该菌株对不同抗生素的敏感性，从而辅助临床治疗的选择。
布鲁氏菌病的实验室检查
布病简介
牛种
绵羊附睾种 Brucella
沙林鼠种
犬种
羊种 猪种
布病血清学诊断
标本的采集、保存及运输
1） 血清学诊断需要的标本类型为人及疑似动物 血清。
2） 使用负压采血管或注射器进行采集。 3） 分离到的血清存放到灭菌后的血清管内。 4） 两周内进行实验的血清可4℃冷藏保存。
• 检测试剂需使用R型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原。
• 在条件允许的情况下，建议虎红平板凝集抗原 （检测S型布鲁氏菌抗体的虎红平板凝集抗原）和 R型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原同时进行检测。
• 器材
试管凝集实验
小试管 试管架 诊断试剂
• 器材
试管凝集实验
加样枪
吸头吸头
操作方法
• 每份血清取6-8支小试管，放于试管架上。 • 血清稀释：第一管加入960ul生理盐水，其余各管
内，放到37℃温箱内培养。
运送
• 采集到的双相血培养瓶尽快送至贵州省疾病预防 控制中心布病实验室，进行培养检测，检测结果 会在一个半月内反馈至县疾控中心。
• 血培养瓶的运输，不需要冷藏，常温运输。
谢 谢！
• 每个方格内加入布病虎红平板凝集抗原30ul，备 检血清30ul。 注意：虎红平板凝集抗原使用前需充分摇匀。
• 使用牙签将两者混匀。 • 旋转摆动玻璃平板，室温5分钟之内观察结果。 • 每个平板需做阴、阳性血清对照，方法同备检血
清。
结果判断
阳性 阴阳性血清对照同时成立，本次实验成立。
阴性
• 因犬种布鲁氏菌为天然粗糙型，所以产生的血清 抗体为粗糙型布鲁氏菌血清抗体。
血清的反复冻融会引起布病抗体效价的降低 5） 检测后的血清-25℃冷冻保存。 6） 使用冷藏箱进行长距离运输。 注意：采集血清需使用红色或者黄色盖子的负压采
布氏杆菌病的血清学试验诊断方法
加 在第 ２管 内 ， 混匀， 再吸 Ｏ ． ５ ｍＬ加 入 第 ３支 试 管 内， 依次类 推 至第 ４管 ， 混匀 后 ， 吸取 ０ ． ５ ｍｌ 弃之， 如 此进 行 倍 比稀 释 ， 其 被 检血 清 稀 释 度 分别 为 １： ２ ５ 、 １： ５ ０ 、 １： １ Ｏ ０和 １：２ ０ ０ 。第 ５管 不 加 血 清 ， 第 ６管 加 １： ２ ５ 稀 释 的布 氏杆菌 阳性血 清 ０ ． ５ ｍｌ ， 第 ７管 加 １： ２ ５ 稀 释 的阴性 血清 ０ ． ５ ｍＥ。 用 ０ ． ５ 石炭酸生理盐水 ， 将 布 氏 杆 菌 试 管 凝 集 抗原进 行 １： ２ ０倍 稀 释 ， 每管加入 ０ ． ５ ｍＬ， 振 摇 均匀 ， 置于 ３ ７℃恒 温箱 中 １ ８ ～２ ４ ｈ ， 取 出后 进 行 结 果 判定 。 确 定血 清凝集 价 时 ， 以出 现 ＋ ＋ 以 上凝 集 现 象 的最高 稀释 度为 准 。 ＋＋ ＋ ＋ ： 试 管 底 部 有 极 明显 的伞 状 凝 集 物 ， 上 层液 体完 全清 亮透 明 ， 即ｉ ０ ０ 凝集 。 十＋ ＋ ： 试 管 底部 有 明 显 凝 集 物 ， 上 层 液 体 稍 有 混浊 ， 即７ ５ 凝集 。 ＋＋： 试 管底部有明显凝集物 ， 上 层 液 体 不 甚 透 明， 即 ５ Ｏ 凝集。 ＋： 试 管 底部 有 少 量凝 集 物 ， 上 层 液体 混 浊 ， 不
在阳、 阴性 血 清 对 照 成 立 的条 件 下 ， 方 可 对 被
：
２ ． ３ 判 定 标 准 牛、 马 和骆 驼凝 集 价 １：１ ０ ０以上 ； 猪、 山羊 、 绵
羊 和 狗 １： ５ Ｏ以 上 为 阳性 。
牛、 马 和骆驼 １： ５ ０ ； 猪、 羊等 １： ２ ５ 为 可疑 。 可疑反 应 的家畜 ， 经 ３ ～４周 ， 须 重新 采血 检验 ， 牛 和羊 ， 如果 重检 时仍 为可 疑， 即可判 定为 阳性。
800份人血标本布鲁氏菌病血清学检测结果分析
800份人血标本布鲁氏菌病血清学检测结果分析于清利,李长明,张志慧,李福林中图分类号:R516.7 文献标识码:A 文章编号:1001-1889(2010)04-0290-01布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的严重危害人民健康和畜牧业发展的人畜共患传染病,历史上该病在我国部分地区曾广泛流行。
通过几十年的综合防治,我国的布病疫情在20世纪80年代末基本得到控制。
但是进入20世纪90年代后期,布病疫情死灰复燃,某些地区疫情较为严重,既威胁着广大群众的身体健康,又影响了畜牧业发展,造成严重的经济损失[1]。
如何科学合理地采取实验室血清学检测手段,为临床医师和流行病学医师提供可以信赖的检测结果,是实验室工作者义不容辞的责任。
丰宁县疾病预防控制中心实验室自2009年1~10月对来自布病疫区流行病学调查和临床就诊病例所采集的800份人血标本均用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行了检测,结果如下。
1 材料1.1 标本从布病流行病学调查和临床就诊病例采集的静脉血液标本。
1.2 试剂与器材虎红平板凝集抗原和试管凝集抗原均由中国疾病预防控制中心传染病所提供,其他试剂与器材为实验室自备。
2 操作方法将以无菌手续采取被检者的静脉血液3m,l25 以上室温静置2h,自然析出血清,然后用虎红平板凝集试验和试管凝集试验分别检测,检测方法和结果判定,以卫生部疾病预防控制局编著的布鲁氏菌病防治手册!为准。
3 结果800份被检血清中虎红平板凝集试验阳性387份,试管凝集试验阳性363份,虎红平板凝集试验阳性但试管凝集试验阴性的35份,虎红平板凝集试验阴性作者单位:河北省丰宁满族自治县疾病预防控制中心(丰宁 068350)作者简介:于清利(1966-),男(满族),主管检验师,主要从事医学检验工作。
但试管凝集试验阳性的11份,见表1。
2种实验方法检测阳性率有显著差异( 2=12.5,P<0.05),虎红平板试验阳性率高于试管凝集试验阳性率,表明虎红平板凝集试验存在假阳性。
2布病病原学及血清学
注意事项
受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超 过10℃； 采血后应于3-4日内进行检查，因放臵时间过长可能会导致 血清效价降低； 受检血清静臵2h后再进行检查； 个别血清会出现前带现象，建议多做几个管，多采用几个稀 释度。
抗人可产生“完全抗体” 和“不完全抗体”。不完全抗体可与相应抗原结合， 但不出现可见反应。若将预测不完全抗体的人血清 球蛋白作为抗原，注射于另一种动物（常用家兔） 制成抗球蛋白（抗IgG、IgA、IgM）的抗体，再将 此球蛋白抗体加入到抗原与不完全抗体复合体中， 即可出现可见反应。分为两个阶段:
绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）；
犬种布氏菌（Br.canis）
2013年，我省共分离出3株布鲁氏菌，均为
羊3型；1991年以前流行优势种型为羊1、2型， 1996年后则为羊1、3型 。
陕西省是以羊型菌为主，牛、犬种布鲁氏菌 病的混合疫区，流行优势种随时间推移发生 了变化。
1.2
形态和培养特征
试管凝集试验
原理：布氏菌侵入机 体后，就会刺激机体 产生特异性抗体，其 可与相应的抗原发生 特异性结合，在电解 质的作用下，就会形 成肉眼可见的凝集反 应，也就是用已知抗 原查未知抗体。
试管凝集试验
阴性 阳性
0.5ml抗原 0.2ml血清
2.3
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5ml盐水
1.3 抵抗力
对物理因子的抵抗力
对化学因子的抵抗力
不同环境中的抵抗能力
对抗生素的敏感性
对物理因子的抵抗力 不 同 温 度 对 布 鲁 氏 菌 影 响
布鲁氏菌病血清学诊断方法及评价
论与我们 的Ｐ Ｒ Ｔ 是有高度的一致性的。并且该方法的使用不仅对 于 早期 的抗体 产 生 高敏 感 ，对 于后 期 的 治疗 中也表 现 不俗 。特别 是 在 猪 布 病 的 试 验 检疫 时 ，Ｒ Ｂ Ｐ Ｔ 得 出 的结 论 是 与 Ｓ Ａ Ｔ 有着 高 达 ９ ９ ． ４ ４ ％的概 率 的 ，这说 明对于 Ｒ Ｂ Ｐ Ｔ 的使 用是 ￣ Ｌ Ｓ Ａ Ｔ 更 优 秀的 检测
要 可分 为 三种 不 同 的试 验方 法 ，环 状 、絮状 以及 琼 脂扩 散试 验 ，
１ 试 管凝 集试验
在１ ８ ９ ６ 年 我 们 的Ｄ ｕ ｒ ｈ ａ ｍ开 始对 于 细 菌凝 集 反 应 进 行 深 入 研 究 ，试 管 凝 集 试 验 随 着 多 年 的 积 累 被 多 次 的 研 究 和 检 测 布 鲁 氏 菌 病 的参 数 。试 管 凝集 试 验 的又 被 称 为 为Ｓ Ａ Ｔ，是 被 大量 采 用 的 项 检 测 手 段 。 这 种 研 究 方 法 主要 是对 诊 断 布 病 的 一 种 试 验 方 式 。经 过 多年 的实 验 积 累 ，Ｓ Ａ Ｔ 被 不断 的采 纳 ，因为 其 试验 的稳 定 性 ，也 是 一 种高 敏 感 的一 项 选 择 。它 通 过相 关 的 实验 可 以检 测 出我 们 血 清 中 的 存 在 的抗 布 鲁 氏菌 ，一 般 主 要 表 现 为 三 个 免 疫 球 蛋 白抗 体 ，这 三 种 包 括 Ｉ ｇ Ｇ，Ｉ ｇ Ｍ以及 Ｉ ｇ Ａ。通 过 检 测这 三 项 矿 体 ，我 们 的Ｓ Ａ Ｔ 对Ｉ ｇ Ｍ 表 现 出较 强 的 敏感 性 ，在 布鲁 氏菌 病 的早 期 诊 断 中 ，我们 一 般 在 用Ｓ Ａ Ｔ 检 测 是会 进 行 多 次 的实 验 ，由 于检 测 次 数 的增 多 ，我们 可 以 发 现它 的凝 集 价 也会 急 剧 的上 升 ，这 对 于 我 们 精确 的诊 断有 着 很 大 的帮 助 ，这种 凝集 价 可 以保 持 在一 年 的 时 间 ，在 这之 后 它 会 有所 减 少 。在 Ｓ Ａ Ｔ 检 测 中 ，对 于 家 畜和 人 的 检 测 是相 一 致 的 ， 由于操 作 上 并 不 复杂 ，而 且 判 断结 果 也 比较 方 便 ，因 此 ，采 用 Ｓ Ａ Ｔ 是有 较 高 的诊 断价 值 的体 现 的 ，当然 ，我 们
布鲁氏菌病诊断标准
布鲁氏菌病诊断标准
布鲁氏菌病诊断标准如下：
(一) 流行病学：发病前病人与家畜或畜产品，布氏菌培养物有密切接触史，或生活在疫区的居民，或与菌苗生产、使用和研究密切联系者。
(二) 临床表现：出现数日乃至数周发热，多汗，肌肉和关节酸痛，乏力兼或肝、脾、淋巴结和睾丸肿大等可疑症状及体征。
(三) 实验室检查：布病玻片或虎红平板凝集反应阳性或可疑，或皮肤过敏试验后24、48小时分别观察一次，皮肤红肿浸润范围有一次在2.0cm×2.0cm及以上(或4.0cm²以上)
(四) 分离细菌：从病人血液、骨髓、其他体液及排泄物中分离到布氏菌。
(五) 血清学检查：标准试管凝集试验(SAT)滴度为1：100及以上，对半年内有布氏菌苗接触史者，SAT滴度虽达1：100及以上，过2——4周后应再检查，滴度升高4倍及以上，或用补体结合试验(CFT)检查，CFT滴度1：10及以上;抗人免疫球蛋白试验(Coomb'S)滴度1：400及以上。
诊断疑似病例：具备(一)、(二)、(三)者。
诊断确诊病例：疑似病例加(四)或(五)中任何一项者。
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(C+CMOL％)的测定; 2．布氏菌DNA与可疑菌DNA杂交试验; 3．应用色谱技术鉴定布氏菌;
布氏菌属的种、型鉴定方法
▪ 初代分离培养对二氧化碳的需要 ▪ 硫化氢产生试验 ▪ 染料抑菌试验 ▪ 单项特异性血清A、M、R凝集试验 ▪ 粗糙型（R型）血清凝集试验（玻片、试管法） ▪ 噬菌体裂解试验 ▪ 尿素酶活性试验
生存时间（天） 25—65 21—90 14—47 20—45 60—318 120 死亡 20—50
(1)对物理因子的抵抗力
物理因子对布氏菌的影响
物理因子 湿热56℃ 湿热63℃ 湿热80℃ 湿热90℃ 湿热100℃
生存时间 物理因子 生存时间
60分钟以上 干热80℃ 60分钟以上
60
干热90℃ 60分钟以上
人间布病血清学阳性判定标准
病原分离:检出布鲁氏菌； 试管凝集试验:1:100(++)及以上为阳性； 补体结合试验:1:10 (++)及以上为阳性； 抗人球蛋白试:1:400(++)及以上为阳性；
人间布病诊断方法和判定标准
▪ 凡具备1、2和第3项中的任何一项 检查阳性即可确定为布病病人。
▪ 对已确诊的慢性布病病人和接种过 菌苗的人，应以临床症状为主要依 据，血清学试验效价高低，皮变反 应仅供参考。
皮内变态反应禁忌
▪ 既往有各种过敏史者， ▪ 支气管哮喘病者 ▪ 不可使用
评价：
▪ 此法敏感性较好，呈阳性反应的人只 表示受过布氏菌感染，不能做最后判定。
▪ 此法用于流行病学调查和大量检疫， 所以布病监测时为初诊方法，若皮变阳 性，应采血进一步做特异性抗体检测。
（2）试管凝集试验
原理：
Ag+Ab Nacl电介质 Ag-Ab
二、从牲畜材料中分离布氏菌
从牲畜流产羔检菌： 从胎衣检菌： 从阴道分泌物检菌： 尿液检菌： 乳汁检菌： 脓汁检菌： 血液培养： 脏器检菌：
我国出菌宿主及材料
我国从人、羊、牛、猪、犬、鹿、马、骆驼等家畜及黄 羊、岩羊、黄鼠、黄胸鼠等野生动物检出布氏菌。从牧 区水塘水和羊毛中也检出过布氏菌。
3、培养特性
1.布鲁氏菌培养营养要求高：
需要各种氨基酸和各种金属离子，有的菌种需要 血清才能生长。
2.生长缓慢：一般需经4—6天，有的甚至21—30
天才能长出菌落。
3.生长所需温度：20—40℃，最适为37℃,超过 42℃则不生长。
4. C02: 绵羊附睾种菌和牛种菌的某些生物型菌需严格的 C02(5～10％)。
++++ 等于完全凝集，上层液100%清亮。 +++ 等于几乎完全凝集，上层液75%清亮。 ++ 等于显著凝集，上层液50%清亮。 + 等于有凝集出现，液体25%清亮。 - 等于无凝集，液体不清亮。 人的诊断标准：1:100++为阳性，1:50++为可疑。
评价：试管凝集试验是Wright和Sample于 1898年首先建立的，是布病诊断在国 际上唯一的全标化方法，使用广泛， 经久不衰。特异性好，也较敏感，实 用性强，诊断、流调、监测均适用。
布鲁氏菌的发展史
年份
菌名
发现人
国家
宿主
1887 1897 1914
羊种菌 牛种菌 猪种菌
Bruce
马尔他
羊
Bang
丹麦
牛
Traun
美国
猪
1953
绵羊附睾种菌
Buadle
新西兰
公绵羊
1956 1966
沙漠森林鼠种菌 犬种菌
Stoennen Carmichael
美国 美国
沙漠森林野鼠 小猎犬
（一）病原学概述
对低温和干燥有较强的抵抗力，故可用冷 冻真空干燥法保存菌种。
布氏菌在自然条件下的生存能力
自然条件 水 尘 粪 畜舍墙棚 地面 衣服 皮毛 鲜牛乳
生存时间（天） 50—120 4—120 21—72 4—150 4—150 30—80 45—120 2—550
自然条件 奶油 奶酪 冻肉 腌肉 培养基 干燥胎膜 腐败脏器 人工胃液
3 1分钟以内 甲
0.2
20分钟以上
0.2 5～7分钟 乳 酸 0.5
1分钟以内
0.5 3～5
氢氧化钾 2
3分钟
升 汞 0.05 1分钟以内 肥皂 2
20分钟以上
主要化学药品对三型菌的影响
──────────────────
化学药品名称
浓度 布鲁氏菌生存时间(分钟)
──────────────
(%) 羊型 牛型 猪型
布鲁氏菌属（Brucella) 包括6个种19个生物型。
牛种布氏菌（Br abortus) ： 1、2、3、4、5、6、7、9型 羊种布氏菌（Br melitensis) ：1、2、3型 猪种布氏菌（Br suis) ： 1、2、3、4、5型 沙漠森林野鼠种布氏菌（Br neotomae) 绵羊附睾种布氏菌（Br ovis) 犬种布氏菌 （Br canis)
缺点：
— 有前带现象。
— 不能区别人工免疫和自然感染。
— 产生一定的交叉反应。
— 慢，需要两天。
（3）、虎红平板凝集试验
(一)器材及试剂 清洁脱脂玻片或有凹型孔的玻片，0.1毫升吸 管或微量加样器、牙签或细铁丝。虎红平板 凝集抗原、被检血清。 (二)操作方法 在玻片上加0.03毫升被检血清，然后加入虎 红平板抗原0.03毫升，摇匀或用牙签混匀， 在5分钟内判定结果。判定级别同平板凝集 反应。亦可只分为(+)阳性，(-)阴性两类。
1、形 态
布鲁氏菌是一组微小的球状、球杆状、短 杆状细菌；
宽约0.3—0.5微米、长0.6—1.5微米。电 镜下见到的羊种菌为明显的球杆状、牛种 菌和猪种菌为短杆状；
6种布鲁氏菌靠形态很难区分，一般来说， 羊种菌最小，牛种菌产次之，猪种菌较大；
布鲁氏菌没有鞭毛，不形成芽胞和夹膜。
2、染 色
布氏菌侵入机体后，就会刺激 机体产生特异性抗体，这种抗 体可与相应抗原（布氏菌体） 发生特异性结合，在电介质作 用下，就会形成肉眼可见的凝 集反应，我们就是用已知抗原 查未知抗体。
试管凝集反应步骤 1、加入倍比稀释受检血清0.5ml 2、加入1：10稀释布氏菌抗原0.5ml 37度24小时观察结果
评价
▪ 简便、快速易行，具有较好的特异性， ▪ 有一定的敏感性，检查牛的阳性率稍
高于绵山羊。
▪ 该法可用于大面积检疫。
（4）、补体结合试验(CFT)
原理
受检系统 1.仅有抗体
指示系统
红细胞
抗体
补体
2.仅有抗原
抗原
溶血素 红细胞
补体
3.抗原抗体反应
符合率
BSL－2：实验室设施 (二级屏障)
人间布病诊断方法和判定标准
1、流行病学接触史： 密切接触家畜、野生动物、畜产品、 布鲁氏菌培养物等或生活在疫区内的居民。 2、临床症状和体征:应排除其他疑似疾病。 3、实验检查：病原分离
试管凝集试验 补体结合试验 抗人球蛋白试验 参考：（皮内变态反应试验、虎红平板凝集试验）
器材及试剂：
布氏菌素、酒精棉球，1ml注射器，测量尺
皮内变态反应操作方法
1.每次注射前必须详细询问职业、健康情况曾否
接种过布氏菌活菌苗等。 2.前臂掌侧中部皮肤用75%酒精棉球消毒，待干
后，用1ml注射器皮内注射0.1ml。 3.判定反应时间：注射后24、48h各观察一次
（以48H结果为准）。 4.判定反应标准：阳性反应局部红肿达2x2cm或
同时配置比浊管便于结果判定
稀 试管凝集反应（SAT）示意图(1) 释 血 清
稀释度
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
1:25 1:50 1:100 1:200 1
1:20稀释抗原 生理盐 清亮度 水
标记
1
0.00
1.00
采用何种方法、 取何种材料、 何种培养基 实验室条件
布氏菌的分离培养
一、从可疑病人分离布氏菌 血培养： 30天未培养出菌，可定位阴性 。 骨髓培养：抽取骨髓（接种双相培养基） 尿培养： 其他病原材料培养:乳、脑脊液、关节液
和滑囊液分离布氏菌，参照血培养观察 结果，15天不长菌定为阴性
100%
++++
2
0.25
0.75
75%
+++
3
0.50
0.50
50%
++
4
0.75
0.25
25%
+
5
1.00
0.00
0%
-
每次试验须作三种对照
▪ 阴性血清对照 ▪ 阳性血清对照 ▪ 抗原对照
结果判定： 根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反应程 度（滴度），特别是50%清亮度（++）对判 定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。
布鲁氏菌病原学、血清学诊断
丽水市疾病预防控制中心 兰进权
主要内容：
1、布鲁氏菌病原学； 2、布鲁氏菌诊断标准； 3、布鲁氏菌血清学实验的几种方法。
（一）布氏菌概述
1887年英国医生布鲁氏首先从死于“马尔他热”的英 国士兵脾脏中分离出羊种布氏菌后，布鲁氏菌属 （Brucella)，包括6个种19个生物型。 羊种布氏菌（Br melitensis) 牛种布氏菌（Br abortus) 猪种布氏菌（Br suis) 沙漠森林野鼠种布氏菌（Br neotomae) 绵羊附睾种布氏菌（Br ovis) 犬种布氏菌（Br canis)