酶工程复习题

酶工程复习题
一、填空题（1‘×20）
1、戊二醛，异氰酸衍生物，双偶氮联苯是酶分子修饰中分子内交联最常用的交联剂。

2、固定化对酶反应系统的影响主要有：酶构象改变，立体屏蔽，微扰效应，分配效应。

3、根据酶催化的反应性质可以将酶分为：氧化还原酶类，转移酶类，
水解酶类，裂解酶类，异构酶类，合成酶类6大类。

4、1961年，国际酶委会规定的酶活力单位为：在特定的条件下（25o C，PH及底物浓度为最适宜）__每一分钟内___,催化___1umol____的底物转化为产物的___酶量_______为一个国际单位，即1IU。

5、1960年，查柯柏（Jacob）和莫洛德（Monod）提出了操纵子学说，认为DNA分子中，与酶生物合成有关的基因有四种，即操纵基因、调节基因、__启动_______基因和____结构_ _____基因。

6、SDS-PAGE是利用蛋白的__分子量不同___进行分离，离子交换层析是利用蛋白的亲和力不同 _进行分离。

7、酶活力的测定方法可用终点法，动力学法，酶偶联测定法和电化学法。

8、决定酶催化活性的因素有两个方面，一是酶分子结构，二是反应条件
9、求Km最常用的方法是双倒数作图法。

10、可逆抑制作用可分为竞争性，反竞争性，非竞争性，混合性。

11、酶活力的测定方法可用终止反应法和连续反应法。

12、通常酶的固定化方法有交联法，包埋法，吸附法，共价结合法。

13、酶分子的体外改造包括酶的表面修饰和内部修饰。

14、模拟酶的两种类型是半合成酶和全合成酶。

15、抗体酶的制备方法有拷贝法和引入法。

16、根据酶和蛋白质在稳定性上的差异而建立的纯化方法有热变性法，酸碱变性法和表面变性法。

17、酶的生产方法有提取法，发酵法，化学合成法。

18、日本称为“酵素”的东西，中文称为__酶__,英文则为____ Enzyme ____,是库尼（Kuhne）于1878年首先使用的。

其实它存在于生物体的__细胞内__与___细胞外__。

19酶分子修饰的主要目的是改进酶的性能，即提高酶的__活力___、减少___抗原性____，增加___稳定性____。

20借助__双功能试剂___使___酶分子之间___发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方
法称为交联法。

21酶的分离纯化方法中，根据目的酶与杂质分子大小差别有__凝胶过滤_法，__超滤法__法和___超离心__法三种。

22由于各种分子形成结晶条件的不同，也由于变性的蛋白质和酶不能形成结晶，因此酶结晶既是__纯化手段__，也是___纯化标志__。

二、名词解释（3‘×7）
酶的定向固定化：使酶蛋白以有序的方式附着在载体的表面，使酶活性的损失降低到最小程度。

模拟酶：利用有机化学合成的方法合成的比酶结构简单的具有催化作用的非蛋白质分子; 抗体酶：一种具有催化作用的免疫球蛋白；
酶的抽提：
分子印迹：指将各种生物大分子从凝胶转移到一种固定基质上的过程。

离子交换层析：利用离子交换剂作为载体，这些载体在一定条件下带有一定的电荷，当带反电荷的分子通过时，由于静电引力就会被载体吸附，从而达到分离效果的方法；
生物工程酶：
膜型反应器：
酶工程：酶制剂的大规模生产和应用的技术;
酶活性中心：
酶的比活力：
固定化酶：通过物理的或化学的方法，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚于一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶发挥催化作用的酶；
酶分子修饰：通过对蛋白酶主链的剪接切割和侧链的化学修饰对酶分子进行改造
鼓泡式反应器：是利用从反应器底部通入的气体产生的大量气泡，在上升过程中起到提供反应底物和混合两种作用的一类反应器。

凝胶层析：
固定化增殖细胞：
别构酶：调节物与酶分子的调解中心结合后，引起酶分子的构象发生变化，从而改变催化中心对底物的亲和力的酶；
肽酶：
酶反应器：利用生物化学原理使酶完成催化作用的装置，为酶促反应提供合适的场所和最佳的反应条件，使底物最大限度的转化为物；
液体发酵法：以液体培养基为原料进行微生物的繁殖和产酶的方法；
诱导酶:有些酶在通常的情况下不合成或很少合成，当加入诱导物后就会大量合成的酶;
修饰酶:在体外用一定的化学方法将酶和一些试剂进行共价连接后而形成的酶；
酶回收率：指某纯化步骤后酶的总活力与该步骤前的总活力之比；
酶纯化比：指某纯化步骤后的酶的比活力与该步骤前的比活力之比；
酶的变性：指酶分子结构中的氢键.二硫键及范德华力被破坏，酶的空间结构也受到破坏，原来有序.完整的结构变成无序，松散的结构，失去原有的生理功能；
酶的失活：指酶的自身活性受损，失去了与底物结合的能力。

三、问答题（5小题，共49分）
1、举出四例，说明酶在医学上有广阔的用途。

医药用酶：a.消化用酶：α、β－淀粉酶、胰酶、胰蛋白酶
b.消炎用酶：木瓜蛋白酶、菠萝酶
c.溶纤维酶：尿酸酶、链激酶、溶栓酶
d.肿瘤用酶：L－天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶
诊断用酶：a.尿酸酶：用于检测血液和尿液中的尿酸含量
b.甘油激酶：由于检测血液中甘油三酯的含量
检测用酶：a.脱羧酶：由于检测L－赖氨酸和L－谷氨酸
b.虫荧光素酶：用于检测ATP
2、如何检查一种酶的制剂是否达到了纯的制剂？试用所学过的知识加以论述。

层析法：包括纸层析、凝胶层析、柱层析及亲和层析
电泳法：包括SDS凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法
超离心法：不同的酶分子大小不同，在重力场中具有不同的沉降系数，从而可以通过超离心方法分离目的酶与杂质酶。

免疫反应法：由于酶分子可作为一种抗原物质，而抗原与抗体之间具有专一的亲和力，故可选用目的酶的抗体与酶制剂进行免疫扩散或免疫电泳，从而判断酶的制剂是否纯净。

氨基酸序列分析法：采用特定的化学物质从酶的N末端将氨基酸残基逐个水解下来，最终可获知该酶的氨基酸序列，从而也可以判断出酶制剂是否纯净。

3、酶的催化特性
4、固定化细胞有哪些优缺点？
5、简述生物印迹酶的种类及制备过程
6、固定化酶和游离酶相比，有何优缺点？
7、酶分子修饰的方法有哪些？酶分子修饰的目的是什么？
8、简述酶的催化特点和催化机理。

9、举例说明固定化酶（细胞）的制备过程及原理。

10、简述抗体酶的制备方法及应用。

11、固定化方法有哪几种？并阐述各自的机理。

12、阐述酶工程的应用并分别举例说明。

13、对酶进行化学修饰时，应考虑哪些因素？
14、某酶的初提取液经过一次纯化后，经测定得到下列数据，试计算比活力，回收率及纯化倍数。

15、写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理。

16、填充床反应器和流化床反应器的优缺点？
17、酶固定化后性质会发生什么变化？
18、酶分离纯化的技术路线
19、常用沉淀法的种类及原理。

20、比较各类酶反应器的优缺点
21、双水相萃取、超临界流体萃取、反胶团萃取的原理。

22、电泳的基本原理是什么？电泳的种类有哪些？。