小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

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小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备实验目的:实验原理:

小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备实验目的:实验原理:
1.器材:解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒 温水浴箱、载玻片、酒精灯等;
2.试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 (甲醇:冰醋酸=3:1)、0.075 mol / L KCI溶 液、Giemsa染液等。
3.材料:小鼠
方法与步骤:
1.取材前3~4 h,向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。
2.腹腔内注射秋水仙素3~4小时后,断头处死小鼠。 3.取出小鼠的后肢骨,注意不要将股骨剪断,否则容易造
成骨髓细胞的流失。Fra bibliotek 4.滴加适量生理盐水进行冲洗,并仔细地将皮肤、肌肉等 组织清除干净。
5.加入适量低渗液,用剪刀将骨充分剪碎,并用吸管吹 打,使骨髓细胞全部释放出来。
6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中,加低渗液至8ml 左右,室温下静置20~30分钟,进行低渗。低渗结束后, 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定,轻轻混匀 后,离心。
15分钟,弃去染液,水洗,镜检。
结果:
作业:
绘图表示动物染色体的典型形态。 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步
骤。
7. 1200转/分,离心5分钟,弃上清,加入固定液,混匀 后,室温放置30分钟,再次离心去上清,重复固定一次, 离心后,向沉淀中加入1ml预冷的固定液,将细胞重悬。
8.取洁净冰水中预冷的载玻片,稍作倾斜,用吸管吸取一 滴上述细胞悬浮液,于载玻片上方适当高度滴在载玻片 上;
9.滴片后,将片子晾干,滴加适量Giemsa染液染色10~
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备
实验目的:
掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法,识别小鼠染 色体的数目及特点。

实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。

2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件,以保证细胞的好。

3. 学会最常用的Gimsa染色方法,使出现的幻觉具有明朗的色调,以便细胞的编号与统计。

二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞,可分化为血液成分或骨骼系统的成分。

骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常,在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处,并可为结构遗传学提供信息。

作为染色体标本制备的来源,一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一,常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本;其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少,易于研究、成熟度高等因素显得优越。

三、实验步骤1. 实验前准备工作(1)保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基,避免接触灰尘。

(2)检查各种器械的完整性,保证手段的杀菌处理。

(3)使用有缩小五倍功能的显微镜,以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。

(4)打开红外线灯,以增强视觉效果并避免光损伤。

(5)按实验方案准备各种试剂和设备。

(6)实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。

2. 骨髓细胞的采集(1)设备:小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。

(2)用70%酒精清洗瓶子的注射器,使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓,放入存储试管中。

(3)轻轻摇动骨髓,使其中的细胞与上清液充分混合均匀。

3. 细胞的处理(1)细胞浓度的调整:从建立骨髓细胞培养物开始,骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。

使用试管取出足量细胞,可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中,吸入的细胞细胞数为2×106个左右。

(2)添加培养基到细胞培养物中,以充分覆盖细胞。

(3)将板加入约为35℃,5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中,进行配队。

(4)半小时后使用显微镜检查细胞的附着,然后循环补充适量接种。

在24小时之前,每隔2小时更换于第一个。

4. Gimsa染色法(1)准备细胞标本:从培养基中取出涂片架,然后“组织培养板”模式的检测做法,将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。

动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告

动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告

动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的:
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本,并通过显微镜观察染色体的形态和数量,并了解染色体的组成和结构。

实验原理:
染色体是细胞核中最大的有组织结构,由DNA和蛋白质组成。

染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。

在有丝分裂过程中,染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。

为了制备染色体标本,需要通过细胞的裂解,释放和固定染色体,然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。

实验步骤:
1. 取出小鼠的股骨,并在无菌条件下对其进行消毒。

2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端,将骨髓剪下,加入RPMI-1640培养液中,使髓液悬浮,然后用细胞培养器将其孵育2-3天,使骨髓细胞增殖。

3. 用离心机将骨髓细胞离心,去除培养液,用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。

4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上,让其固定,然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。

5. 用显微镜观察染色体标本,记录染色体的数量和形态,并观察细胞的分裂状态。

实验结果:
制备的染色体标本在显微镜下观察。

通过对标本的观察,我们可以看到染色体形态和数量的变化,以及细胞分裂状态的变化。

同时,我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息,包括基因序列和调控因子等。

结论:
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。

观察染色体形态和数量的变化,可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。

同时,该实验也展示了染色体的重要性和组成结构,加深了对细胞生物学的理解。

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
以免差错。 4.所观察细胞处于同一有丝分裂阶段,即染色体螺
旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察细胞 周围,没有离散单个或多个染色体存在,以免影 响计数。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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四、试验步骤(continued)
6.离心:1200rpm离心5分钟后弃去上清液, 7.固定:加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀,室温下静 置20分钟,每10分钟时吹打一次。 8.离心:1200rpm离心6分钟,弃上清液。
9.离心:加1.5mL固定液,吸管吹打成细胞悬液。
一、试验目标
1. 经过小白鼠骨髓细胞染色体制备,初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 方法 2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动 物染色体数目及特点
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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二、试验原理
骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞,从这些分裂细胞 中,可观察处处于分裂中期染色体,能对一个动物染色体 形态特征、数目进行准确观察和分析。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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几个动物染色体形态特征
动物名称 染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
பைடு நூலகம்
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体

,介于6~7号
,介于8~9号
40
全部为近端着丝粒染色体 大小介于5~6号 大小介于19~20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒 近端着丝粒染色体 近端着丝粒染色体
10.滴片:用吸管吸收细胞悬液,滴在预冷载玻 片上,室温晾干
11.染色:10% Giemsa染液染色30分钟

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件

9.在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2~3 滴上层细胞悬液,气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度(大 于40cm),使细胞膜破裂后易于使染色体 散开,并尽量使滴片上的细胞分布均匀, 不要重叠。
10.气干,染色。 在一块洁净的玻板上,将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11.用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中,注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定,染色15 分钟。 12.染色后,轻轻揭起玻片,倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒,冲掉染液,擦干玻片标本底 面和四周,显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相,进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的:
1.初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2.了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理:
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式,是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体,对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准,对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像,并将其剪裁排列即成,或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞,或者经过各 种处理后,细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期( 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装), 然后采用常规空气干燥法制备染色体,即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌 操作。

遗传实验14、15 小鼠骨髓细胞染色体标本制备

遗传实验14、15 小鼠骨髓细胞染色体标本制备
蝉鸣 幼蝉 造句:树上响起蝉鸣。
【部编版】语文二级下册《雷雨》精 选实用 课件
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我会写
léi




yíng
户迎
hēi




chuí
压垂
【部编版】语文二级下册《雷雨》精 选实用 课件
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生字归类
雷 乌 黑压 垂 户迎 扑
毛毛雨 阵雨 雷雨 暴(bào)雨
提示:同学们可以根据自己平时的观察,然后 进行回忆,选取自己印象最深刻的雨来描述, 注意抓住典型景物来表现雨的特点。
雨前——乌云——大风——闪电、雷声
雷雨
雨中——越下越大——渐渐小了——空 气清新
认乐 真趣 观无 察穷
雨后——太阳——彩虹——池塘水满了
课文按雷雨前、雷雨中、雷雨后的顺序, 用简洁的语言,形象地描绘夏日雷雨时的景 象,展现了大自然的勃勃生机。
有位老兄脾气大,爱发怒的就属他。 发起怒来大声吼,伴着成串泪珠下。
(雷雨)
16 雷雨
雷响雨来 雨过虹出
1. 会认5个生字,会写8个生字。 2. 有感情地朗读课文,通过声音表现雷雨前后 的不同景象。背诵课文。(重点) 3. 有留心观察天气的兴趣,激发探索大自然奥 秘的兴趣。(难点)
lǎnɡ dú kè wén,zhǎochū wén
上下 结构
独体 结构
左右 结构 半包围 结构
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熟字比较 巧记
识字方法


尸 户庄 压

小鼠骨髓染色体标本的制备.

小鼠骨髓染色体标本的制备.
7、再固定:再加入固定液2-3滴,打匀。
8、制片:用滴管吸细胞悬液,从20-30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上,立即用口吹散,在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色:Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检:低倍镜下找到分散良好的分裂相后,换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理? 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的: 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后,经 固定、染色,可见到分散的染色体。
三、实验步骤:
1、取材:以颈椎脱臼法处死小鼠,取两腿股骨,剔净肌肉,擦 去附着在上面的血污,剪取两端股骨头,暴露骨髓腔,用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液,将针头插入骨髓腔上段冲洗, 用离心管接收冲洗液。
相,数一数有几条。
2、低渗处理:加KCL至2/3管,用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中,放入37℃恒温水浴锅中,静置25min。(吹打不宜过猛)
3.预固定:加入固定液5滴吹打混匀。
4.离心:2000转/分,离心5min,弃上清液,留下沉淀物。
5、固定:沿离心管壁加入固定液5ml打匀,室温下固定10min。
6、再离心:2000转/分,离心5min,弃上清液,留下沉淀物。

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备

小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。

2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中,有丝分裂旺盛,因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。

骨髓细胞具有高度的分裂活性,经秋水仙素或秋水酰胺处理后,使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤,可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。

【实验用品】1.器材:解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸,记号笔等;2.试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。

3.材料:65-90天健康小鼠(生技09级72人,新华09生物技术36人,生科08级75人,生技08级70人,共253人,需购小鼠110只)【方法与步骤】1.前处理取材前3~4 h,向腹腔内注射秋水仙素。

注射浓度随动物种类不同而异,一般每克体重注射2~6μg,注射总量不宜超过2 ml(例如一只体重50 g的蟾蜍,若按4μg / g注射,需注射浓度为0.1%的秋水仙素溶液0.2 ml )。

秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。

2.取骨髓细胞处死动物,用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞,并用注射器筒轻轻吹打,使细胞团块分散,静置片刻、待大组织团块沉淀后,用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中,以1000 r / min 离心5~10 min,弃去上清液。

3.低渗根据骨髓细胞液的多少,加0.075 mol / L的KCI液5~6 ml,在37℃水浴箱中或室温下低渗20~30 min。

低渗时间过长,易造成细胞破裂;时间过短,则染色体难以分散。

4.预固定低渗完毕,立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液,用吸管将细胞轻轻吹打均匀,进行预固定。

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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
【目的要求】
1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。

2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点
【基本原理】
在骨髓细胞中,有丝分裂旺盛,因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。

骨髓细胞具有高度的分裂活性,经秋水仙素或秋水酰胺处理后,使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤,可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。

【实验用品】
1.器材:解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸,记号笔等;
2.试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、0.075 mol / L KCI 溶液、Giemsa染液等。

3.材料:65-90天健康小鼠(生技09级72人,新华09生物技术36人,生科08级75人,生技08级70人,共253人,需购小鼠110只)
【方法与步骤】
1.前处理取材前3~4 h,向腹腔内注射秋水仙素。

注射浓度随动物种类不同而异,一般每克体重注射2~6μg,注射总量不宜超过2 ml(例如一只体重50 g的蟾蜍,若按4μg / g注射,需注射浓度为0.1%的秋水仙素溶液0.2 ml )。

秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。

2.取骨髓细胞处死动物,用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞,并用注射器筒轻轻吹打,使细胞团块分散,静置片刻、待大组织团块沉淀后,用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中,以1000 r / min 离心5~10 min,弃去上清液。

3.低渗根据骨髓细胞液的多少,加0.075 mol / L的KCI液5~6 ml,在37℃水浴箱中或室温下低渗20~30 min。

低渗时间过长,易造成细胞破裂;时间过短,则染色体难以分散。

4.预固定低渗完毕,立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液,用吸管将细胞轻轻吹打均匀,进行预固定。

然后以1000 r / min 离心8 min。

5.固定弃去上清液,加5~6 ml Carnoy’s液,轻轻吹打细胞,静置固定20 min。

离心弃去上清液,再加5~6 ml Carnoy’s液,固定20 min。

6.制备细胞悬液离心弃去上清液,再加少许新鲜Carnoy’s固定液,用吸管将固定后的细胞吹散,并反复吹打混匀,制成浓集的细胞悬浊液。

7.准备载玻片滴片前1~2 h,将洁净的载玻片放在0~4℃冰水中,使其表面附有一层水膜。

这样在滴片时,细胞悬液遇到载玻片上的冷水,染色体会迅速分散开来。

滴片法制备染色体标本
8.滴片取出预冷的载玻片,将其倾斜约30°放置。

吸取细胞悬液,从距离载玻片40 cm 以上高度处滴至载玻片上2~3滴;滴片后立即用嘴或洗耳球对准滴片处轻微吹气;也可用镊子夹住载玻片、在酒精灯火焰上迅速过几下(见图),这样都有助于染色体分散和展开。

9.干燥使滴片在室温下自然干燥,或在酒精灯火焰上烤干,也可用吹风机冷风吹干。

10.染色待滴片充分干燥后,用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释的Giemsa染液(Giemsa原液:缓冲液=1:10)染色30 min。

然后自来水冲洗,空气干燥。

镜检。

【结果观察】
1.在低倍镜下观察Giemsa染色后的中期分裂相形态。

2.选择分散适度不重叠染色体的分裂相,在高倍镜下进行观察。

3.观察小鼠染色体的端着丝粒的特征,识别着丝粒,染色单体,染色体,计算染色体数目,寻找雌雄小鼠之间在核型上的差别。

【作业】
交一张已染色的骨髓细胞染色体标本片,绘制图。

滩母羊促卵泡素受体FSHR基因PCR-RFLP分析
【实验目的】
1.熟悉PCR—RFLP分析技术原理及实验步骤。

2.掌握琼脂糖凝胶电泳检测方法。

3.了解PCR—RFLP在遗传病基因诊断中的作用。

【实验原理】
聚合酶链式反应(PCR)是模拟体内DNA复制条件在体外酶促合成特异DNA片段的循环反应,可使目的DNA片段得以迅速扩增。

其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置于高温(约93℃-95℃)下使之变性解链;人工合成的两个寡核苷酸引物在低温(约50℃-70℃)下分别与目的DNA片段两侧的互补序列复性结合;引物在DNA聚合酶作用(约70℃-75℃)下沿模板按5’→3’方向延伸,合成目的DNA片段的新互补链。

如此经过n个周期,理论上扩增2n 倍,一般PCR经30-40周期后可获得百万倍以上的目的DNA。

聚合酶链式反应—限制性片段长度多态(PCR-RFLP)分析技术是在PCR技术基础上发展起来的。

DNA碱基置换正好发生在某种限制性内切酶识别位点上,使酶切位点增加或者消失,利用这一酶切性质的改变,PCR特异扩增包含碱基置换的这段DNA,经某一限制酶切割,再利用琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物,与正常比较来确定是否变异。

应用PCR-RFLP,可检测某一致病基因已知的点突变,进行直接基因诊断,也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。

本实验以滩母羊外周血DNA为模板,PCR扩增促卵泡素受体FSHR基因的306bp特异片段产物,其中包含AluⅠRFLP多态位点,经AluⅠ酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测等位片段的长度(243bp或193bp+50bp),以此为遗传标记进行连锁分析,判断滩母羊是否得到了带有缺陷FⅧ基因的染色体,从而做出间接基因诊断。

【实验用品】
1.DNA(50ng/μl)、引物Ⅰ和Ⅱ(20μΜ)、TaqDNA聚合酶(5U/μl)、10×PCR反应缓冲液、dNTP(2.5mM)、灭菌蒸馏水、液体石蜡、限制性内切酶AluⅠ(20U/μl)、10×酶切缓冲液。

07级共134人,共需要TaqDNA聚合酶(250U)、dNTP(1ml)、限制性内切酶AluⅠ250U 三支试剂。

2.2%的琼脂糖凝胶、5×TAE、6×上样缓冲液、DNA Marker、Goldview染料。

3.PCR仪、凝胶成像系统、微量加样器(5μl、20μl、200μl)、枪头(20μl、200μl)及离心管(1ml、0.5ml)、容器盒、恒温水浴箱、琼脂糖凝胶电泳装置、烧杯、保鲜膜、封口膜、微波炉、250ml三角烧瓶、透明胶带、托盘天平、台式高速离心机。

【实验步骤】
一.PCR反应
PCR反应体系20μl,其成分如下:
按以上次序,将各物质加入到一只无菌的0.5ml离心管中。

轻轻混匀后,离心5秒钟,加入一滴液体石蜡盖于反应混合液的表面,然后放入PCR仪中进行循环反应。

PCR 反应循环温度:
94℃预变性3分钟,然后进行以下循环30次
最后经72℃再充分延伸7分钟。

反应结束后置4℃冰箱保存。

二.PCR产物的AluⅠ酶切
反应体系15μl其成分如下:
PCR产物6μl
AluⅠ(10U/μl)1μl
无菌水8μl
置37℃水浴消化1小时,4℃保存。

三.琼脂糖凝胶电泳检测
1.胶板的准备
取有机玻璃内槽,洗净晾干。

取透明胶带将有机玻璃内槽的两端边缘封好(注意,将透明胶带紧贴于有机玻璃内槽的两端边上,不要留空隙)。

将有机玻璃内槽置于一水平位置,在距离底板0.5~1.0ml的位置放入梳子。

2.2%的琼脂糖凝胶的制备
称取1克琼脂糖,置于锥形瓶内,加入50ml 1×TAE,瓶口用保鲜膜封盖,在微波炉中加热直至琼脂糖全部溶解,得到2%琼脂糖凝胶液,待其冷却至65℃左右,加入2.5μl溴化乙啶贮存液(10mg/ml),使溴化乙啶终浓度为0.5μg/ml。

小心混匀并倒在有机玻璃内槽中,控制灌胶速度,使胶液缓慢展开,避免产生气泡,直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。

室温下静置1小时左右,待胶凝固完全后,轻轻拔出梳子,在胶板上即形成相互隔开的样品槽。

3.将凝胶放入电泳槽中,加入恰好没过胶面1mm深的足够电泳缓冲液,预电泳10min。

4.每份限制酶切产物取10μl,加2μl6×上样缓冲液,混匀后加入到样品孔中,以100V 电泳50分钟。

5.断电后取出凝胶,放在紫外透射仪中观察并记录PCR—RFLP结果。

【实验结果与分析】
观察并记录琼脂糖凝胶电泳分离的DNA片段长度,绘制出滩母羊各成员FSHR基因AluⅠRFLP等位片段与系谱相关图。

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