定量测定基本方法
定量测定蛋白质含量的方法及原理
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蛋白质定量测定的方法
蛋白质定量测定的方法蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子，它们参与了生物体内的各种生命活动，对于维持生命活动的正常进行起着至关重要的作用。
因此，蛋白质的定量测定对于生物学研究具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质定量测定方法。
首先，比色法是一种常用的蛋白质定量测定方法。
比色法利用蛋白质与某些特定试剂反应产生颜色，然后通过比色计测定颜色的深浅来确定蛋白质的含量。
常用的试剂有布拉德福试剂、伯杰试剂等。
比色法操作简便，准确度较高，是实验室中常用的蛋白质定量方法之一。
其次，BCA法也是一种常用的蛋白质定量测定方法。
BCA法利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生还原反应生成蓝色产物，然后通过比色计测定产物的吸光度来确定蛋白质的含量。
BCA法对于含有还原剂或脂肪的样品有较好的适用性，操作简便，灵敏度高，是蛋白质定量的常用方法之一。
另外，Lowry法也是一种常用的蛋白质定量测定方法。
Lowry法利用蛋白质与铜离子和碱性试剂在碱性条件下发生还原反应，生成蓝色络合物，然后通过比色计测定络合物的吸光度来确定蛋白质的含量。
Lowry法对于蛋白质浓度较低的样品有较好的适用性，操作简便，灵敏度高，是蛋白质定量的常用方法之一。
最后，荧光法也是一种常用的蛋白质定量测定方法。
荧光法利用蛋白质与荧光素染料结合后发生荧光，然后通过荧光光度计测定荧光强度来确定蛋白质的含量。
荧光法对于蛋白质浓度较低的样品有较好的适用性，操作简便，灵敏度高，是蛋白质定量的常用方法之一。
综上所述，蛋白质定量测定是生物学研究中的重要内容，而比色法、BCA法、Lowry法和荧光法则是常用的蛋白质定量测定方法。
在实际操作中，可以根据样品的特点和实验的要求选择合适的方法进行蛋白质定量测定，以确保实验结果的准确性和可靠性。
定量测定方法有哪些
定量测定方法有哪些定量测定方法是科学研究和工程实践中常用的一种方法，用于精确测量物质的特性、参数或属性。
本文将从理论探讨和实际应用两个方面介绍一些常见的定量测定方法。
一、理论探讨1. 标准曲线法标准曲线法是一种常用的定量测定方法，通过制备一系列浓度已知的标准溶液，测定每个标准溶液的吸光度或荧光强度，并建立标准曲线。
通过测定待测溶液的吸光度或荧光强度，利用标准曲线可推算出待测溶液中物质浓度的方法。
2. 计数法计数法是一种常见的定量测定方法，适用于测定物质的粒子数目或粒子浓度。
通过统计单位体积内物质粒子个数的方法，利用统计学原理，可以推算出物质的密度或浓度，从而实现定量测定。
3. 电位法电位法是一种通过测量电位差来进行定量测定的方法，常用于测定溶液中离子的浓度。
通过电位差与离子浓度之间的关系，可以计算出待测溶液中离子浓度的方法。
二、实际应用1. 光谱法光谱法是一种常见的定量测定方法，通过测量物质对特定波长光线的吸收或发射特性来进行定量分析。
常见的光谱方法包括紫外可见吸收光谱、红外光谱、荧光光谱等。
2. 色谱法色谱法是一种通过物质在固定相和流动相之间分配的差异来进行分离和测定的方法。
常见的色谱方法包括气相色谱、液相色谱等。
通过定量测定经过色谱分离的不同组分的峰面积或峰高，可以推算出待测溶液中各组分的浓度。
3. 电化学分析法电化学分析法是一种利用电化学方法进行定量测定的方法，常应用于测定溶液中的离子浓度、氧化还原电位等。
常见的电化学方法包括电解法、极谱法、电导率测定法等。
4. 核磁共振法核磁共振法是一种基于原子核在磁场中的共振现象进行测定的方法，常用于研究物质的结构和性质。
通过测定核磁共振信号的强度和频率，可以推算出待测物质的浓度或其他相关参数。
以上仅是一些常见的定量测定方法的简要介绍，实际应用中还有许多其他方法，如流动注射分析法、电感耦合等离子体发射光谱法等。
不同的方法适用于不同的测定对象和要求，选择合适的定量测定方法对于科学研究和工程实践具有重要意义。
蛋白质定量测定的方法
蛋白质定量测定的方法蛋白质定量测定是生物学研究中十分重要的方法。
常用的蛋白质定量测定的方法主要有以下几种：一、比浊法比浊法是一种最常用的定量法，它是通过适当改变溶液的浓度，以产生一种特定的“荧光效应”强度来实现的，其原理是以产生的特定的荧光强度和溶液中已知的蛋白质含量来反映所测溶液中蛋白质定量。
比浊法步骤：1.将样本放置在一定量光源下，调节所需的条件，获得荧光发光比较；2.使用比浊仪计算不同浓度样本的荧光强度；3.按照事先确定的标准线，实现折线法法中的拟合，获得最终定量结果。
二、放射免疫分析法放射免疫分析法应用于蛋白质定量测定，即根据反映物质的放射吸收，通过放射免疫分析试验确定溶液中蛋白质的含量。
它是借助化学反应获得放射吸收信息，再结合生物学实验，显示溶液中简单分子及复杂分子的放射衰减，最后计算蛋白质的定量结果。
放射免疫分析法步骤：1.将样本放置在放射量计中，记录和统计其放射吸收情况；2.生成受体蛋白，和未知物质特定结合，生成结合能力；3.检测特异性信号，计算放射吸收率；4.根据已知信号和放射吸收率，计算蛋白质的定量结果。
三、衍生免疫定量衍生免疫定量是一种新的蛋白质定量测定方法，它采取基因表达系统来合成蛋白质的介质，从而获取定量结果。
基于衍生免疫定量，使用适当的催化剂可以产生出特定的化学衍生物，以测量活体细胞内的蛋白质含量。
衍生免疫定量步骤：1.研究者首先调查待测样本，以确定具体的衍生物；2.通过基因工程，合成衍生物和特定的反应媒介；3.添加衍生物到待测样本中，形成一种特定的反应媒介，并用特定的定量仪器测量；4.通过收集的数据，计算蛋白质的定量结果。
总结：1.比浊法：利用产生的特定荧光强度和溶液中已知的蛋白质含量来定量蛋白质；2.放射免疫分析法：借助化学反应获得放射吸收信息，检测特异性信号，计算放射吸收率；3.衍生免疫定量：借助基因表达系统合成蛋白质介质，调查待测样本，添加衍生物，通过定量仪器测量，实现衍生免疫定量。
学习几种定量测定方法专家讲座
探究活动:
• 以1molH2体积测定为例, 用镁和足量稀硫酸反 应, 并测定H2摩尔体积。
Mg H2SO4 MgSO4 H2
Vm
V(H ) 2
n(H )
V(H ) 2
n(Mg)
V(H ) 2
m( Mg )
V (H2 )M (Mg) m( Mg )
2
M (Mg)
数据转化 : 测定镁带质量和H2体积
2.镁带中含有铝杂质；
V(排)增大, Vm偏高；
3.没有进行装置气密性检验，有漏气 4.镁带表面氧化镁没有擦除或没有除尽 5.液体量瓶刻度读数未扣去硫酸体积
V(排)偏低——Vm偏低； V(排)偏低——Vm偏低； V(排)偏高——Vm偏高；
6.硫酸量不足，镁带没有完全反应
V(排)偏低——Vm偏低
7、没有冷却到室温读数
假如把气体搜集与量体积结合起来装置设计 经过测定被气体从广口瓶中压出来水体积 来测得气体体积, 或用量气管, 使生成气 体直接通入原本装满水管中, 水被排向另一 管, 从另一管刻度可读出气体体积。以上 两种装置在读取气体体积时都应使两边水面 保持同一水平面。
学习几种定量测定方法专家讲座
第34页
保持两边压强相同
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第2页
化学定量测定:
定量测定方法: 称量、量出体积、确定温度改变数等
• 定量仪器: • 电子天平、量筒、滴定管、温度计、秒表等
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第3页
10.1 测定1mol气体体积
问题1:
• 测定1mol气体体积，我们需要哪些试验数据？
一、原理与方法 1. 原理
• 【试验部分】
镁条反应完后再静置3~5分钟, 使容器内温度冷却到室温, 统计
列举几种常用的蛋白质定量测定的方法
列举几种常用的蛋白质定量测定的方法常用的蛋白质定量测定方法如下：
1. Bradford法
Bradford法是一种基于蛋白质与染料之间的化学反应进行测定的方法。
该方法操作简单，灵敏度高，可用于各种类型的蛋白质含量测定。
2. BCA法
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质产生化学反应，从而生成紫色物质
的方法。
该方法适用于各种类型的蛋白质测定，具有灵敏度高、稳定
性好等特点。
3. Lowry法
Lowry法是一种基于蛋白质与染料之间的氧化还原反应进行测定的方法。
该方法操作简单，灵敏度高、稳定性好，适用于不同类型的蛋白
质含量测定。
4. UV吸光度法
UV吸光度法是一种基于蛋白质带有吸收紫外线的物理性质进行测定的
方法。
该方法操作简单、快速，并且适用于大多数类型的蛋白质测定。
5. 酰荧光素改良法
酰荧光素改良法是一种基于蛋白质分解后产生的荧光物质进行测定的
方法。
该方法灵敏度高、稳定性好，且能够测定低浓度的蛋白质。
以上是常用的蛋白质定量测定方法，不同的方法适用于不同类型的蛋
白质及其含量测定。
选择合适的方法能够提高测定的灵敏度和准确性，为后续的研究提供可靠的数据。
定量分析基本操作(共79张PPT)
1、滴定操作
38
滴定管的使用
❖ 1、用前检查：酸式滴定管，塞子涂凡士林油，检 漏(等2min)；聚四氟乙烯活塞不需涂油
❖ 2、洗涤：自来水洗净后，蒸馏水洗2～3次； ❖ 3、润洗：用少量滴定液润洗2～3次(约10mL)； ❖ 3、装液：装液到0刻度以上，赶气泡，使液面位于
0.00刻度以下；
❖ 4、滴定：连续滴加，间隙式滴加，溶液悬而不 落，半滴加入；
将称量瓶放入秤盘中央，显示的质量减少量即为试样质量。
1、4d法：也称“4乘平均偏差法”
容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不能用任何加热的办法来加速瓶中物料的溶解。
待溶液流毕，等15s后，取出移液管。
离子选择电极，流动注射法（B）；
COU
点数功能
0141 —氯化钠标准溶液的浓度（mol/L）。
容量瓶不可在烘箱中烘烤，也不能用任何加热的办法来加速瓶中物料的溶解。
加入，最后半滴加入，以防过量。
40
碱式滴定管
41
酸式滴定管
42
滴定操作姿势及读数
一般称量使用普通托盘天平即可。
水质氯化物的测定（硝酸银滴定法），要求在规定时间内完成分析方法全过程。
4乘平均偏差法仅适用于测定4-8个数据的检验分析。
预热：接通电源，预热20~30 min以获得稳定的工作温度。
运算过程中，为减少舍入误差，可多保留一位有效数字（不修约），算出结果后，再修约至应有的有效数字位数。
2
基本内容
一、天平的使用及称量操作 二、滴定分析基本操作（滴定管、容量瓶、移液管
与吸量管的使用）
三、滴定法（以水质氯化物的测定为例） 四、有效数字及运算规则
6
一、天平的使用及称量操作
正常人手部神经感觉定量的测定
正常人手部神经感觉定量的测定手部神经感觉定量的测定是临床医学中常用的一种检查手段，其主要作用是检测患者手部神经感觉是否受到损伤，以便及时进行治疗。
在手部神经感觉定量的测定中，医生会使用一些专业的工具和方法来对患者的手部神经感觉进行准确的测量和评估。
下面，我们将详细介绍一下手部神经感觉定量测定的内容和步骤。
一、手部神经感觉定量测定的意义手部神经感觉定量测定是一项非常重要的检查手段，它对于神经系统疾病的早期诊断和治疗起着非常重要的作用。
手部神经感觉定量测定可以通过测量患者手部神经的传导速度和反应时间，以及对触觉、温度、震颤等感受器的反应情况进行评估，从而对患者的神经系统疾病进行定位和诊断。
二、手部神经感觉定量测定的方法1. 神经电生理检查神经电生理检查是手部神经感觉定量测定的主要方法之一。
该方法利用电极检测神经的电活动，从而测量神经电位波形和传导速度。
神经电生理检查包括多种测试方法，如神经传导速度、运动单位电位检测、肌电图检测等。
2. 点刺法检查点刺法是手部神经感觉定量测定中最常用的方法之一。
医生会使用一只尖锐的器械，在患者的手部皮肤上轻微地刺破，然后观察患者对不同触觉刺激的反应情况，如触觉、疼痛、温度、压力等。
3. 振动感测器检测医生可以使用振动感测器对患者的手部神经感觉进行检测。
在该方法中，医生会将振动感测器放置在患者的手部皮肤上，然后通过观察患者的反应来评估患者的触觉感受器的敏感度。
三、手部神经感觉定量测定的步骤1. 患者准备在手部神经感觉定量测定前，医生会让患者准备好，如拆除手部上的饰物，保持手部干燥等。
2. 定位神经医生会在患者的手部确定需要检测的神经，如尺神经、正中神经等。
3. 检测传导速度医生使用电极对患者的神经进行电生理检查，通过测量神经传导速度和反应时间来确定患者的神经功能是否正常。
4. 点刺法检查医生在患者的手部皮肤上进行点刺法检查，观察患者的反应情况，了解患者的触觉、疼痛、温度、压力等感觉器的反应情况。
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假设一组同学用盐酸滴定碳酸钠溶液，实验数
据记录如下，则测得碳酸钠物质的量为0.75×10-3
×
mol
试验次数
1
2
3
4
实验数据
C(HCl)/mol/L 0.100 V(HCl)始/mL 0.00 V(HCl)终/mL 14.98
0.100 0.10 16.24
0.100 0.20 15.20
液体
图1
图2
图3
图4
注意：①气体体积很容易受到温度和压强的影响，很难
准确的测定。
②图4量气管测气体体积读书时左右两端水位要相平
。
测气体的质量的装置如下：
空气
盐酸易挥发，伴
碱石灰
随着二氧化碳一
NaOH溶液 发生装置 浓起被硫酸进碱入石U灰型吸管碱收石，，灰
问问那题一题种21.比更.用较准以测确上气些装体？置体测气积影体响与质实测量验气，结体分果质液量漏斗的中方的法酸，应
洗干净，若不出现沉 淀则已经洗干净
先考虑洗去沉淀表
问题2.如何洗涤，选择什么样的洗面杂减涤质少剂，沉？再淀考的虑量不
沉淀是否洗干净的判断方法是为什原么则？。
方案3.滴定法
酚酞或 甲基橙
称取样品 HCl NaOH测剩余酸
过量 滴 定
或
溶解
称取样品
用标准盐酸
滴定
算出反应消耗的酸 算甲出橙基m(Na2CO3)
滴定 NaOH HCl
NaOH mol
(20mL
mL
mol
0.1000mol/L) 0.00
2×10-3
13.00
18.00 2×10-4
11.72
19.80 2×10-5
10.70
一 19.98 2×10-6
9.70
滴 20.00 0
0
7.00
20.02
2×10-6 4.30
20.20
2×10-5 3.30
定量测定的基本方法与 方案设计
思考：
❖ 已知某纯碱样品中含有NaCl杂质， 为测定样品中纯碱的质量分数，请同
学们设计三种初步实验方案？
方案1.测气体体积或质量
电子天平
称取样品a克 H+
测CO2的体积 测CO2的质量
原理：CO32-+2H+=CO2↑+H20
常见排液量气装置：测量气体的体积
条件：气 体难溶于
。
（3）如果试剂和仪器可以任选，请你对题中的甲、
乙两种实验方案进行改进，或者提出其它合理的实
验方案。
在氯化氢气体的氛围中加热并蒸干MgCl2溶液，得到
思考：若出现滴定终点判断过迟，滴入盐酸过多的 情况，我们在不更换待测液的情况下应怎样去进行补救
先记录下消耗盐酸的总量，然后再用 标准NaOH溶液来滴定过量的盐酸
小结：
一·定量测定的基本方法：
❖ 1.气体法
❖ 2.沉淀法
中和滴定法
❖ 3.滴定法
氧化还原滴定 沉淀滴定
络合滴定
反滴定
与氧化还原 知识结合
常用酸碱指示剂 的变色范围
甲基橙 甲基红 酚酞
3.1 4.4
红 橙黄
4.4 6.2
红 橙黄
8.2 10.0
无色
粉红 红
pH=7恰好完全反应
指示剂的选择
pH
0.1000
mol/LHCl
滴定 NaOH
(20 mL 0.1000 mol/L)
9.7
突跃
7
（一滴）
4.3
加入盐酸的体积
0.1000mol/LHCl 滴 入 剩 余 过量HCl pH
22.00
2×10-4 2.32
40.00
2×10-3 1.48
c（H +）的 计算
突跃000
mol/LHCl
滴定 NaOH
(20 mL 0.1000 mol/L)
10.0 酚酞
9.7
8.2
7
甲基红 6.2
突跃 （一滴）
4.4 甲基橙 3.1
4.3
加入盐酸的体积
问题2.如何处理数据？
计算消耗盐酸 的量
原理： Na2CO3+2HCl=2NaCl+CO2↑+H2O 问题1.两种滴定方法如何选择指示剂？
（已知饱和CO2的水溶液的pH=3.9 ）
解析：
Na2CO3＋2HCl＝2NaCl＋CO2＋H2O 滴定的最终溶液是呈酸性的 所以只能用在 酸性范围内变色的指示计即甲基橙或红．
强酸强碱滴定的终点为中性溶液所以不论 用酚酞还是甲基橙或红都可以
组别
实验步骤
甲
①取MgCl2溶液m1 g，加热溶液蒸发到全部成为
晶体为止
②称取最后得到的固体m2 g
乙 ①取MgCl2溶液m1 g ②将NaOH溶液慢慢加到MgCl2溶液中至刚好 不再产生沉淀为止，称得用去的NaOH溶液 的质量m2 g ③过滤，称取溶液的质量为m3 g
丙 ①取MgCl2溶液m1 g ②加入NaOH溶液，估计NaOH溶液已完全过 量 ③过滤后将沉淀洗涤、烘干并灼烧，称得沉 淀质量为m2 g ④将沉淀再加热烘干灼烧，冷却后称得质量 为m3 g，且m2- m3 ‹0.1g
与KSP知 识结合
二·定量测定的方案设计思路：
测定对象 状态 实验方法 选用试剂
反应物 或生成物
气体 液体 固体
气体法 滴定法
沉淀法
仪器装置 分析评价
对点演练
3. 欲用托盘天平、过滤装置、蒸发装置、氢 氧化钠溶液等用品来测定未知浓度的 MgCl2溶液中溶质的质量分数。甲、乙、 丙三组学生各自设计了一套实验方案，试 根据表中的三套方案，回答以下问题：
（1）上述三组方案中， 甲 组方案是错误的，错误的 原因是 ？加热时MgCl2将发生水解，蒸干后得到的固体
不会是纯净的MgCl2固体
（2） 乙 组方案不够准确，其计算结果比溶液中实际
溶质的质量分数 偏高 （填偏高或偏低），出现这
种情况主要是实验方案中的第 ③ 步，因
为 滤液中的溶质沾附在滤纸和沉淀上
选硫酸还是盐酸，why？
方案2.测沉淀质量
称样品a克 BaCl2 溶解
干燥、B冷aC却O、3质称量量 应重复进行，直到
原理：CO32-+Ba2+ = BaCO3↓ 问题1.方框内包括哪些步骤
取最后一次洗涤液，
前后两次称量质量 基本恒定不变
滴过有入白滤A色g沉N→O淀3生溶洗成液涤则，未若→ 干燥→ 冷却从→明称确洗量什么入手
0.100 0.10 15.12
注意：多次测量取平均值，误差太大的组别应 舍去。
问题3.误差分析
原理：n(NaCO3)=1/2×V(HCl) ×C(HCl
待测值 确定值
变
不变
对点演练
2.在盐酸滴定碳酸钠的实验中，下列操作会引 起测定结果偏高的是（ BDEG ）
A.配置盐酸标准液时，定容俯视 B.装标准液的滴定管未用标准液润洗 C.锥形瓶洗净后留有少量水 D.标准液滴定管滴定前未驱尽气泡 E.甲基橙由黄色变为红色停止滴定 F·读数时前仰视后俯视 G·滴定终点时滴定管尖嘴处有半滴尚未滴下