内质网与高尔基体ppt课件

信号序列存在的直接证据
1972年,César Milstein和他的同事用无细胞系统 研究免疫球蛋白(IgG)轻链合成时获得了信号 序列存在的直接证据, 证明Blobel等的建议是正 确的。他们用分离纯化的核糖体在无细胞体系 中用编码免疫球蛋白轻链的mRNA指导合成多 肽,发现合成的多肽比分泌到细胞外的成熟的免 疫球蛋白在N端有一段多出的肽链, 它有20个氨 基酸,他们推测,这段肽具有信号作用,使IgG得 以通过粗面内质网并继而分泌到细胞外。
4、将蛋白水解为活性物质
如将蛋白质N端或C端切除，成为有活性的物质（胰岛素C端）或将 含有多个相同氨基序列的前体水解为有活性的多肽，如神经肽。
5、参与形成溶酶体。 6、参与植物细胞壁的形成，合成纤维素和果胶质。
三、高尔基体与细胞内的膜泡运输
导肽引导蛋白进入的组织及其特点
组织
线粒体 叶绿体 核
过氧化物 酶体
由膜中蛋白质形成的孔道到达内质网内腔，随机被位
于腔表面的信号肽酶水解，由于它的引导，新生的多
肽就能够通过内质网膜进入腔内，最终被分泌到胞外。
核定位信号(nuclear localization signal, NLS)

定位信号是另一种形式的信号肽, 可位于多肽序列的
任何部分。一般含有 4～8个氨基酸, 且没有专一性, 作用是
中间膜囊（medial Golgi）
多数糖基化修饰，膜质形成，多糖合成
反面膜囊（trans Golgi，网状结构）
管网状，连接囊泡；参与蛋白质的分类与包装， 最后输出；囊泡运输
4、化学组成：
高尔基体膜含有大约60%的蛋白和40%的脂类，具有一 些和ER共同的蛋白成分。
膜脂中磷脂酰胆碱的含量介于ER和质膜之间，中性脂类 主要包括胆固醇，胆固醇酯和甘油三酯。
信号的位 置 N-端 N-端 中部
C-端
类型
氨基酸 氨基酸
碱性氨基 酸 SKL(Ser Lys Leu)
信号顺序 的长度 12～30aa ～25aa 7-9aa
3aa
导肽(leading peptide) 又称转运肽(transit peptide)或导向序列 (targeting sequence)，它是游离核糖体上合成的蛋白质的 N-端信号。 导肽是新生蛋白N-端一段大约20～80个氨基酸的肽 链, 通常带正电荷的碱性氨基酸(特别是精氨酸和赖氨酸)含量较为 丰富,如果它们被不带电荷的氨基酸取代就不起引导作用，说明 这些氨基酸对于蛋白质的定位具有重
粗面内质网的发达程度可作为
判断细胞分化程度和功能状态的一种 形态学指标。
1、粗面内质网的功能
参与蛋白质合成后的运输
①向细胞外分泌的蛋白质(或称外输蛋白),包括酶类、肽 类激素和抗体及胞外基质蛋白，这类蛋白常以分泌的 形式输送到细胞外。
②一些膜嵌蛋白、如细胞膜蛋白、内质网等膜性细胞器 膜上的膜蛋白，还有膜受体和膜抗原等。
信号肽signal peptide：
常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移（定位） 的N-末端的氨基酸序列（有时不一定在N端），至少
含有一个带正电荷的氨基酸，中部有一高度疏水区以 通过细胞膜。

信号肽假说认为，编码分泌蛋白的mRNA在翻译
是首先合成的是N末端带有疏水氨基酸残基的信号肽，
它被内质网膜上的受体识别并与之相结合。信号肽经
膜结合核糖体体的蛋白质合成与转运
2、滑面内质网的功能
（1）脂类的合成
食
血
磷
物
脂
中
和
的
胆
脂
固
肪
液
醇
肾上腺皮质细胞、睾丸间质细胞 和卵巢黄体细胞滑面内质网也很 发达，含有合成胆固醇的全套酶 系和使胆固醇转化为皮质激素（ 如肾上腺激素、雄性激素和雌性 激素）的酶类。此外,皮脂腺细胞 也分泌脂肪性物质,它亦有发达的 滑面内质网。
高尔基体对蛋白质的分类，依据的是蛋白质上的信号肽或信号斑。
分选：每一类蛋白质都有特异的标识（溶酶体中的酶带有M6P, 6-磷酸 甘露醇）；分选主要与蛋白质有关，分选和转运的信息存在于基因本 身。
3、进行膜的转化功能
高尔基体的膜无论是厚度还是在化学组成上都处于内质网和质膜之 间，因此高尔基体在进行着膜转化的功能，在内质网上合成的新膜转移 至高尔基体后，经过修饰和加工，形成运输泡与质膜融合，使新形成的 膜整合到质膜上。
高尔基体
3，化学反应：
嗜锇反应（形成面） 焦磷酸硫胺素酶反应（成熟面的1－2层膜） 胞嘧啶单核苷酸酶反应（膜囊状，管状结构） 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸酶（NADP酶）反应 （中间几层）
顺面膜囊（forming face, cis Golgi）
接受内质网新合成的物质，分类后转入中间膜囊， 小部分返回（驻留蛋白）；丝氨酸O-连接的糖基化， 跨膜蛋白胞质侧的酰基化
为了研究内质网上合成的蛋白质是否进入了内质网的 腔, Colvin Redman 和 David Sabatini用分离的RER小 泡(微粒体)进行无细胞系统的蛋白质合成, 证明了膜结 合核糖体上合成的蛋白质进入了微粒体的腔。
为什么有些核糖体合成蛋白质时不同内质网结 合,有些正在合成蛋白质的核糖体要同内质网 结合,并将合成的蛋白质插入内质网?对此,美国 洛克菲勒大学的 Günter Blobel、David Sabatini 和Bernhard Dobberstein 等于1971年 提出两点建议: ①分泌蛋白的N-端含有一段特别的信号序列 (signal sequence),可将多肽和核糖体引导到ER 膜上; ②多肽通过ER膜上的水性通道进入ER的腔中, 并推测多肽是在合成的同时转移的。
三、内质网的类型
1、粗面内质网 (rough endoplasmic reticulum,RER)
2、滑面内质网 （smooth endoplasmic reticulum,SER)
微粒体(microsome) 在细胞匀浆和差速离心过程中获得 的由破碎的内质网自我融合形成的近似球形的膜囊泡 状结构,在体外实验中,具有蛋白质合成、蛋白质糖基化 和脂类合成等内质网的基本功能。
要作用。这些氨基酸分散于不带电荷的氨基酸序列之间。转运肽
序列中不含有或基本不含有带负电荷的酸性氨基酸，并且有形成 两性α螺旋的倾向。转运肽的这种特征性的结构有利于穿过线粒 体的双层膜。不同的转运肽之间没有同源性，说明导肽的序列与 识别的特异性有关，而与二级或高级结构无太大关系。
导肽运送蛋白质时具有以下特点:①需要受体; ②消耗ATP; ③需 要分子伴侣; ④要电化学梯度驱动; ⑤要信号肽酶切除信号肽;⑥ 通过接触点进入;⑦非折叠形式运输。
信号肽酶蛋白二硫异构酶
作用部位 腔中 腔中 腔中 胞质溶胶 胞质溶胶 胞质溶胶 胞质溶胶 胞质溶胶 胞质溶胶和腔中 胞质溶胶 胞质溶胶 胞质溶胶 胞质溶胶
腔中腔中
在光面内质网膜中合成磷脂酰胆碱
（2）糖原的合成与分解 （肝细胞）
在肝细胞中糖原颗粒的分布常与滑面 内质网紧密伴随。在滑面内质网膜上 含有葡萄糖-6-磷酸酶,在肝细胞,它可 以催化由细胞质基质中肝糖原降解所 产生的葡萄糖-6-磷酸,使之分解为磷 酸与葡萄糖,然后葡萄糖进入内质网 腔再被释放到血液中。
内质网
一、内质网的化学组成
由脂类和蛋白质构成。内质网膜含丰 富的磷脂酰胆碱，而鞘磷脂含量很 少。内质网膜含的蛋白质含量比细 胞膜高。
内质网膜具有大量的酶，其中葡萄糖 －6－磷酸酶是内质网的标志酶。
二、内质网的结构
内质网是由单位 膜围成的一些 形状大小不同 的小管、小泡 及扁囊ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ结构, 相互连接形成 一个连续的网 状膜系统
（5）水和电解质代谢（胃底腺
壁细胞 ）
细胞膜内陷而形成细胞分泌小管。在 分泌小管的周围可见很多管泡状的滑 面内质网。这些滑面内质网能将血浆 中的CL－传递到细胞内分泌小管的膜 上,CL－可与胞质中由碳酸解离的H+ 在 膜上结合而产生HCL,排出细胞外。
（6）胆汁的生成 （肝细胞）
胆红素原系非溶性颗粒,它们自血液入肝 细胞内,经滑面内质网上的葡萄糖醛酸转 移酶的作用,成为水溶性的结合胆红素,而 利于排出细胞外,进入毛细胆管形成胆汁 。
微粒体上检测到的光面内质网上存在的酶类
催化类型 碳水化合物代谢 脂代谢
与药物脱毒相关的氧化酶
蛋白质的加工
酶 葡萄糖6-磷酸酶 β-葡糖醛酸酶 葡糖醛酸转移酶 糖基转移酶 脂肪酸CoA连接酶 磷脂醛磷酸酶 胆固醇羟基化酶 转磷酸胆碱酶 磷脂转位酶 细胞色素P-450 NADPH-细胞色素P-450还原酶 细胞色素 b5 NADH-细胞色素b5还原酶
③需要与其它细胞组分严格隔离的蛋白质，如溶酶体蛋 白等。
④一些需要进行复杂修饰的蛋白质。 一些蛋白合成后,需进入内质网腔进行糖基化,形成糖蛋白,
然后转运至相应的部位
信号序列的发现和证实
微粒体实验
在George Palade用离心技术分离到有核糖体结合的微 粒体,即发现膜结合核糖体(membrane-bounded ribosome)之后, 科学家推测:膜结合核糖体合成的蛋白 质首先要进入内质网的腔,然后通过选择性的分泌过程 输出到细胞外,而游离核糖体上合成的蛋白质则留在细 胞内使用。
帮助亲核蛋白进入细胞核。入核信号与导肽的区别在于:
①由含水的核孔通道来鉴别; ②入核信号是蛋白质的永久
性部分,在引导入核过程中,并不被切除, 可以反复使用, 有
利于细胞分裂后核蛋白重新入核。

有多种类型的核定位信号，这些信号都具有一个带正
在高尔基体上还可以将一至多个氨基聚糖链通过木糖安装在核心蛋白的丝 氨酸残基上，形成蛋白聚糖。这类蛋白有些被分泌到细胞外形成细胞外基质 或粘液层，有些锚定在膜上。
内质网和高尔基体中与糖基化和寡糖加工有关的酶都是整合膜蛋白。
寡糖在内质网和高尔基体上的合成