DEAE-纤维素使用说明书
DEAE装柱
DEAE装柱取白芍粗多糖溶于少量pH值7．2、O．02 mol／L磷酸缓冲液(PBS)中，过DEAE-Cellu1ose一52柱(2.6×50cm)。
以pH值7．2、0．02 moL／L PBS和0．5 mol／L NaHCO梯度洗脱收集，洗脱速度0．8mL／min，苯酚一硫酸法检测，收集糖峰部分得白芍多糖PA，切向过滤器浓缩脱盐(10K超滤膜)，冻干后，用AKTA Purifer 10快速纯化系统(FPLC)进一步纯化，Superdex 200(1．6×60 em)层析柱，上样量1．0 mL(15 mg／mL)，pH值7．2，0．02 mol／L PBS(含0．5 mol／L NaC1)洗脱，洗脱速度0．5 mL／min，紫外(215 nm、254 nm、280 nm)检测白芍多糖PA洗脱峰。
[白芍多糖分离纯化及性质分析]李布青将脱蛋白后的茶多糖用DEAE一纤维素柱层析，O．1 mol／LNaOH洗脱，获得较纯的茶多糖。
称所需量撒于0.5Mol/L NaOH溶液中（1g DEAE—纤维素干粉约需15倍NaOH液）,浸泡1h左右,搅拌。
抽滤（以布氏漏斗加两层滤纸或尼龙纱布抽滤）,以蒸馏水洗,再抽滤至滤液近中性为止,再将纤维素浸泡于0.5Mol/L HCl中1h,同样抽滤液至近中性。
再将纤维素浸于0.5Mol/L NaOH液中，同样处理，洗至中性。
3．平衡:将DEAE—纤维素放入0.0lMol/L pH 7.4 PB液中（即起始缓冲液）静止1h，不时搅拌，待纤维素下沉后，倾去上清液或抽滤除去洗液，如此反复几次至倾出液体的pH值与加入的PB液的pH值相近时为止。
4．装柱层析柱的选择要大小、长度适当。
一般而言，柱长和柱直径之比为10︰1～20︰1，柱的内径上下要均匀一致。
用前将层析柱在清洁液内浸泡处理24h，然后依次用常水、蒸馏水、起始缓冲液充分洗涤。
装柱时，先剪一块圆形的尼龙纱布（直径与层析柱内径一致），放入层析柱底部。
DEAE 纤维素使用说明
DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3.3 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
deae纤维素柱分离多糖流程
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材料：DEAE纤维素柱。
DEAE 纤维素使用说明
DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3.3 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
DEAE纤维素膜法凝胶回收DNA
方法：1、消化一定量DNA以收获至少loong目的片段DNA.用含有0.5ug/ml EB的适当浓,度的琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段.用手提式长波紫外灯对目的条带进行定位.EB-DNA复合物的激发会导致染料的光猝灭以及单链DNA的破坏.用302nm擅长光源取代254nm光源将会降低这两种危害.2、用锋利的刀片或剃刀在紧靠目的条带前的凝胶上切一切口,其两边比条带宽约2mm.如果需从整个琼脂糖泳道上洗脱DNA(如哺乳动物细胞基因组DNA的限制酶消化物),在凝胶上与目的泳道平行的位置做一切口,在切口处插入一长条DEAE 纤维素膜(同步骤3) ．调整凝胶的方向使DNA可以从凝胶中电泳转移至膜上.电泳结束后,取出膜,切成小片.从适当的膜段上洗脱所需大小的DNA(步骤7-11)3、戴上手套,切一块与切口等宽而比凝胶稍深(1mm)的DEAE-纤维素膜.在10mmol/LEDTA(pH8.0) 室温浸泡5min后,用0.5mol/L NaOH取代EDTA浸泡以活化DEAE-纤维素膜.再次室温5min后,用无菌水冲洗6次4、用平头慑子将切口壁撑开,将膜插入裂缝中.取出镊子,使切口闭合,小心勿留气泡.降低非目的DNA污染的概率,可以采取以下措施之一：将含有目的条带的凝胶切下,转移到凝胶另一个区域切成适当大小的小洞中.DNA条带.在目的条带的后面插入第二张膜来截留不需要的DNA.5、继续电泳(5V/cm)直至DNA条带迁移到膜上.电泳过程中,可以用手提式长波紫外灯(302nm)进行跟踪检测.继续电泳的时间尽可能短,只要DNA从凝腔中转移到膜上即可.过长时间的电泳会导致其他DNA 的交叉污染(见上文)和琼脂糖中污染物不必要的累积.6、当所有目的DNA离开凝胶被收集到膜上时,切断电流.用平头镊子从凝胶中取出膜,室温下,用5-10ml DEAE低盐缓冲液将膜漂洗一下,以除去膜上的琼脂糖.不要让膜完全干燥,否则导致DNA发生不可逆的结合.7、将膜转移到另一个微量离心管中,加足量的DEAE高盐洗脱缓冲液使膜完全被浸没.轻轻的将膜弄皱或对折,但不要压紧.盖上离心管盖,于65℃温育30min.不时地检查,不要让膜伸展到缓冲面上.8、从膜上洗脱DNA的过程中,如方案2描述的那样对凝胶成像,记录被分离出的条带.9、步骤7的液体转移到另一微量离心管,再加入足量的DEAE高盐洗脱缓冲液65℃温育15min.合并两份DEAE高盐溶液.在紫外灯下检查,确证膜上不再有可见的被EB染色的DNA痕迹.然后弃去用过的膜.10、高盐洗脱液用酚：氯仿抽提一次.水相转移到另一离心管.加入0.2倍体积的10mol/L乙酸铵,2倍体积的4℃乙醇.室温放置10min.用微量离心机室温以最大转速离心10min.用70％乙醇小心洗沉淀.打开离心管几分钟,使乙醇完全挥发.再将DNA重溶到3-5ulTE(pH8.0).在沉淀以前加入10ug转移RNA.可以改善少量DNA回收的效果．但是在加入载体RNA 之前必须确定RNA不会影响DNA以后作为底物或模板的酶促反应.11、如果需要极纯的DNA(如用于小鼠受精卵的显微注射或培养细胞电穿孔照下述方法用乙醇再沉淀DNA.a．用200 ulTE(pH8.0)悬浮DNA,加入25ul 3mol／L体积的乙醇重新沉淀DNA.b．4 ℃微量离心机最大速度离心5-15min,回收DNA.c．70 ％乙醇小心漂洗沉淀.打开离心管几分钟,使乙醇完全挥发.将DNA溶于3-5 ulTE(pH8.0).12、通过凝胶电泳对DNA进行定性和定量.将少量(10-50ng) 最终制备的DNA片段与10ul TE(pH8.0)混合,加入2ul所需的凝胶载样缓冲液.加样并在适当浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳,以已知量的经用适当限制酶消化的原DNA 作为参照物标准和分子质量标准.分离的片段应该与限制酶消化产物中的相应片段同步迁移.仔细检查凝胶,看是否有弱荧光带存在.弱荧光带存在表明有DNA污染。
DEAE-纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白
05 结论与展望
研究结论
DEAE-纤维素离子交换层析是一种有效的血清白蛋白纯化方法，具有高 分辨率和高回收率的特点。
通过优化实验条件，如流速、pH值和离子强度等，可以进一步提高血清 白蛋白的纯度和产量。
DEAE-纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白的实验结果证明了该方法的 可行性和实用性，为大规模制备高纯度血清白蛋白提供了新的途径。
5. 洗脱
用不同浓度的NaCl溶液 进行洗脱，收集洗脱液。
6. 检测
用紫外可见分光光度计 和电导仪检测洗脱液中 血清白蛋白的纯度和含
量。
实验步骤
1. 准备实验试剂和仪 器。
3. 将DEAE-纤维素装 入层析柱。
2. 制备DEAE-纤维素 离子交换剂。
实验步骤
4. 用缓冲液平衡层析柱。 5. 将血清白蛋白样品加入层析柱。
实验方法
离子交换层析原理
利用DEAE-纤维素与血清白蛋白 之间的离子相互作用，通过改变 洗脱液的离子强度，将血清白蛋 白与其他杂质分离。
1. 样品处理
将血清白蛋白样品稀释至适当浓 度。
2. 装柱
将DEAE-纤维素装入层析柱中。
实验方法
3. 平衡
用缓冲液平衡层析柱。
4. 上样
将稀释后的血清白蛋白 样品加入层析柱。
分离和纯化核酸
核酸是生物遗传信息的载体，包括DNA和RNA。通过DEAE-纤维素离 子交换层析可以分离和纯化各种核酸，用于研究核酸的结构和功能以及 制备核酸制品。
03 实验材料与方法
实验材料
血清白蛋白样品
缓冲液：Tris-HCl、NaCl 等
DEAE-纤维素离子交换剂
洗脱液：不同浓度的 NaCl溶液
研究目的和意义
DEAE-52预处理
2.1 DEAE-52纤维素离子交换柱填料处理[8]2.1.1 预溶胀取DEAE-52纤维素5 g于小烧杯中，加入25 mL蒸馏水，溶胀48小时，待纤维素沉到烧杯底部且纤维素面高度不变时，倾去上层水，将下层的纤维素倒入量筒中测量其溶胀后的体积，5 g的DEAE-52溶胀后的体积约为8 mL，根据该比例确定DEAE-52所需称取的量。
2.1.2 膨胀活化称取50 gDEAE-52纤维素，置于500 mL烧杯中，加入300 mL蒸馏水浸泡至其体积不再改变。
将蒸馏水浸泡后的纤维素用双层滤纸抽滤，把水抽干后加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。
用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
将近中性纤维素加入到0.5 mol/L HCl溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。
用双层滤纸抽滤掉HCl，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
再次将纤维素加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时，用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
用蒸馏水浸泡中性的纤维素，不断搅拌，静置，待纤维素下沉后倾去上层清水，反复多次。
2.2 装柱用起始缓冲液反复冲洗已经准备好的层析柱，取一小块脱脂棉润湿后放入层析柱的底部，柱底部连接胶皮管，装上螺旋夹，关闭夹子后将柱子固定在铁架台上，像其中倒入蒸馏水排出棉花与管道中的气泡。
把蒸馏水浸泡的纤维素搅拌均匀呈糊状，像层析柱中倒入一部分纤维素，要缓慢倒入避免产生气泡，拧开下端的螺旋夹，调整流速，待到液面降至距纤维素面2 cm处关闭螺旋夹，继续倒入纤维素，同时用玻璃棒搅拌纤维素防止两次加入产生纤维素分层，重复上述步骤，将所有纤维素都填入层析柱中，最后剪一圆形滤纸片，大小与层析柱内径一致，将其放入层析柱纤维素表面上，防止上样时打乱纤维素。
查看装好的柱子上表面是否平整，柱内不能有气泡、不能分层，待一切正常加入蒸馏水平衡，流速调低，使流出溶液的pH值与加入溶液的pH值一致。
DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体
DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体该法提取IgG简便，既可小量提取，•也可大量制备。
1．批量提取法称取DEAE-纤维素（DE32或DE52）50g，置于1000ml烧杯中，•先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0•左右的磷酸盐缓冲液（PB）平衡。
将水分抽干，或用布氏滤斗（内放两层滤纸）过滤，收集湿纤维素，•以降低其离子强度。
按1ml血清加湿重5g DEAE纤维素，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。
•上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。
该法提取IgG简便，既可小量提取，•也可大量制备。
2．Tris-Cl离子交换层析法（Ion-exchange chromatography）【材料和试剂】（1）DE32或DE52纤维素。
（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5mol/L NaCl。
（3）待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
（4）1.550cm 层析柱；透析袋；紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】（1）DE52纤维素的处理：DE52经酸、碱处理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。
（2）装柱：将层析柱固定于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出口接一细塑料管并关闭出水。
将浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高时，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松开出水口螺旋夹•，控制流速1～2ml/min，同时连续加入DE52至所需高度。
待DE52完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片。
（3）平衡：松开出水口螺旋夹，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速为15•滴/min，待流出液与洗脱液之pH值达到一致时，停止平衡。
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使用说明书
一简介
DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
二、填料特征：
特点载量大，分辨率好，流速高，使用方便。
基质高度交联纤维素
配基二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附载量180mg HSA/ml
填料的颗粒大小50μm
最大流速300cm/h
pH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性各种缓冲液及盐，0.5M NaOH及醋酸，8M脲，6M盐酸胍，乙醇，异丙醇等
物理稳定性0.1M中性缓冲液中，120℃30min
保存温度+4~30℃
保存干粉,1g=3-4ml
三、应用的注意事项：
1) 色谱柱装填
1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.
2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2) 蛋白的结合
样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3) 蛋白的洗脱
这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
阶段洗脱容易放大，重复性好，如果洗脱条件好完全可以得到和线性梯度一样或者更好。
采用什么方法完全根据自己需要。
四、再生清洗
1、每次用完最好用0.5MNaOH含2M NaCl洗 5个床体积，再用水洗5个柱床体积，然后用20%乙醇保存，使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%异丙醇都含1%吐温洗5个柱床体积，最后20%的乙醇流洗5个柱床体积。
2、有机溶剂和水混合很容易产生气泡，为了避免这样情况，可以把配好的有机溶剂在室温放置过夜，再使用，这样可以避免气泡进柱子而导致柱子不能正常使用。
五、保存
在20%乙醇中，4℃下长期保存。