SOD及NF-κB在梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤中的作用
阻断NF-κB通路对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响
Ａ ｓｒｃ： ｊｃｖ ｏｉ ｃｔａ ｅ ｘｒｓ ｏｓ ｆ ｕｌ ｒａｔ ａｐ （ Ｆ—Ｋ ）ａｄａｏ ｔ ｉ ｉ ｌｅ ｓ ｕｔ ｅ ａｎ ｉ ｂｔａｔＯｂｅｔ ｅＴ ｎ ｓｇｔ ｔ ｐｅｓ ｎ ｃ ａｆｃ ｒ ｐ ａ Ｎ ｉ ｖ ｉ ｅｈ ｅ ｉ ｏｎ ｅ ｏｋ Ｂ Ｂ ｎ ｐｏ ｓｎ ｉ ｒ ｆ ｂｔ ｃｖ ｕｄｃ ｐ ｓ ｖ ｏｏ ｒ ｉ ｊ ｅ
Ｐ ｏｅｔ ｅｅ ｅｔ ｆ ｌｃ ｉｇｐ ｔｗ ｙｏ Ｆ—Ｋ ｎｌ ｅ ｊ ｒ ｆ ｂｔｕ ｔ ｅ ａ ｎ ｉ ａ ｒｔｃｉ ｆ ｃ ｏ ｏｋｎ ａｈ ａ ｆ ｖ ｂ Ｎ Ｂ ｏ ｖｒｉ ｕ ｙｏ ｓ ｃ ｖ ｕ ｄｃ ｒ ｔ ｉ ｎ ｏ ｒ ｉ ｊ ｅ ｓ
Ｙ ａｇ ｇｏ ， ＵＬ ｎ — ｕ‘ ｉ
Ｎ Ｆ—Ｋ Ｂ特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基 甲酸酯 （ Ｄ Ｃ） Ｐ Ｔ 对肝脏损伤的保护作用。方法 ： 将雄性 Ｓ Ｄ大鼠 ７ ２只随机分成胆总管结
扎组（ Ｄ Ｂ Ｌ组 ） 胆总 管结 扎 ＋Ｐ Ｔ 、 Ｄ Ｃ干 预 组 （ Ｄ Ｃ组 ） 假 手术 组 （ ｈｍ 组 ） 分 别 于术 后 第 ３天 、 ７天 、 ｌ 处 死 大 鼠 ， 察 ＰＴ 、 Ｓａ 。 第 第 ４天 观
Ｗ Ｎ ｈ ｎ Ａ ＧＣ ｏｇ—ｇｏ ，Ｌ ｅ ｇ ｎ ＩＪ ｎｓ ｉｎａｇ Ｖｃｔｎｌ ｃｄｍ ， ａｆ ｇ２０ ３ ，ｈｎ ；． ｅａｔｅｔｆＧｎｒｌ ｕ ｅ ， ａ Ｘ －Ｄ — ａｇ （ ．ｉ ｇｕＪ ｋｎ ｏａｉ ａ ａ ｅ ｙＮ ｎ ｎ １０ ６ Ｃ ｉ ２ Ｄｐ ｒ ｎ ｏ ｅｅａ Ｓ ｒ ｒ Ｉ ａ ａ ｏ Ａ ｉ ａ ｍ ｇｙ Ｎ ｎｎ ｕｏ ｅｔ ｌ ｏ ｉｌ Ｎ ｎｎ ￡ ｏ ｉ １ ｒｕ ， ａｆ ｇ２ １０ ，ｈ ａ３ Ｓｈ ｏ ｏ ｌ ｉ ｌ ｄｃ ｅ Ｊ ｎ ｓ ｎ ｅ ｉ ， ａｆ ｇＰ ｋｕＣｎｒ ｓ ｔ ａｊ ｇＦ Ｈ ｓ ｔ ｏｐ Ｎ ｎｎ １８ ０ Ｃ ｉ ；．ｃｏｌｆＣｉ ｃ ｉｎ ，ｉ ｇｕＵ ｉ ｒｔ ｉ ａ Ｈ ｐａ ｏ ｆ ｉ ｐａ Ｇ ｉ ｎ ｎ ａ Ｍｅ ｉ ａ ｖ ｓｙ
SOD及NF-κB在梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤中的作用
SOD及NF-κB在梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤中的作用目的：检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力及核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)在梗阻性黄疸大鼠肝脏中的表达，探讨其在梗阻性黄疸大鼠肝脏损害中的作用。
方法：采用胆总管结扎法构建梗阻性黄疸大鼠模型，检测血清总胆红素(total bilirubin，TB)、直接胆红素(direct bilirubin，DB)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)，以及肝脏组织行HE病理切片检查鉴定梗阻性黄疸大鼠模型。
肝脏组织匀浆后检测组织中总SOD和CuZn-SOD 活力，以免疫组织化学方法检测NF-κB在肝脏中的表达。
结果：胆道结扎(Bile duct ligation，BDL)组血清TB、DB及ALT明显增高(P＜0.01)；胆道结扎组肝组织中总SOD和CuZn-SOD活力较假手术组明显减低(P＜0.01)。
胆道结扎组NF-κB p65蛋白激活并出现核移位，19 d组较7 d组更加显著。
结论：脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而SOD活力的降低及NF-κB的激活，在梗阻性黄疸肝脏过氧化损害中具有重要意义。
胆道梗阻所致的梗阻性黄疸(obstructive jaundice，OJ)是外科常见疾病，可以造成全身多器官功能损害，而肝脏损害常最为显著。
脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而超氧化物歧化酶(SOD)为抗过氧化的关键酶[1]。
本实验通过构建梗阻性黄疸大鼠肝脏模型，检测梗黄大鼠肝脏总SOD活力与NF-κB p65蛋白表达，进一步明确SOD及NF-κB在梗黄大鼠肝脏损害中的作用。
1 材料与方法1.1 材料健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，120只，雌雄各半，体重200～250 g，由大连医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(辽)2002-0002。
异甘草酸镁对梗阻性黄疸肝损伤的保护机制研究
异甘草酸镁对梗阻性黄疸肝损伤的保护机制研究夏国栋;杨莉;吕沐瀚;周贤;李波【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2012(22)2【摘要】目的探讨异甘草酸镁对梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤的保护作用及机制.方法雄性SD大鼠30只随机分成3组:假手术+生理盐水组( SO+NS)、胆总管结扎+生理盐水组(BDL+NS)和胆总管结扎+异甘草酸镁治疗组( BDL+MgIG),每组30只.SO+NS组和BDL+NS组以生理盐水腹腔注射,BDL+MglG组以异甘草酸镁腹腔注射,于14d处死大鼠,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和直接胆红素(D-Bil),RT-PCR检测TNF-α mRNA的表达,免疫组织化学检测NF-κB/p65蛋白表达.结果 BDL+NS 组血清ALT、AST和D-Bil指标明显升高.相对于BDL+NS组,BDL+MgIG组血清ALT和AST明显减轻,D-Bil指标变化不明显；TNF-α mRNA和NF-κB/p65表达在梗阻性黄疸组相对于假手术组明显增强.结论异甘草酸镁可以有效降低梗阻性黄疸血清转氨酶水平,对TNF-α活性升高有明显的降低作用,对肝功能有明显的保护作用.【总页数】4页(P39-42)【作者】夏国栋;杨莉;吕沐瀚;周贤;李波【作者单位】泸州医学院第一附属医院,四川泸州646000;泸州医学院,四川泸州646000;泸州医学院第一附属医院,四川泸州646000;泸州医学院第一附属医院,四川泸州646000;泸州医学院第一附属医院,四川泸州646000【正文语种】中文【中图分类】R-332;R575【相关文献】1.异甘草酸镁对急性胰腺炎NF-κB通路的影响以及肝损伤的保护作用 [J], 易文轶;刘正金2.异甘草酸镁注射液对大鼠梗阻性黄疸肝损伤的保护作用 [J], 夏国栋;周贤;邓明明;吕沐瀚;李波3.异甘草酸镁注射液应用于急性肝损伤患者对肝功能保护作用观察 [J], 侯立朝;任利;王志鑫;张灵强;樊海宁4.梗阻性黄疸并发肝损伤机制研究概况 [J], 张喜平;黄鑫梅;沈延飞5.异甘草酸镁对原发性肝癌肝动脉化疗栓塞术后炎症反应的影响及肝损伤的保护作用 [J], 李娟; 林志芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠肝脏损伤早期NF—κB时序性表达的实验性研究
大鼠肝脏损伤早期NF—κB时序性表达的实验性研究目的研究大鼠肝脏损伤后细胞核因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）在肝脏组织中的表达变化，探讨其表达变化与损伤时间的关系。
方法采用自由落体撞击法建立大鼠肝脏损伤模型，应用免疫组织化学方法检测伤后不同时间NF-κB的表达水平，并应用图像分析系统进行分析。
结果正常组织中有少量的NF-κB阳性表达。
NF-κB在伤后0.5 h开始逐渐增高，8 h达高峰，12～24 h略有下降，但仍保持较高水平。
统计分析结果提示：各实验组与对照组及与相邻上组比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。
结论大鼠肝脏损伤后NF-κB表达持续增加，8 h达峰值，12～24 h持续高表达并出现下降趋势，其规律性表达可望用于肝脏早期损伤时间的推断。
标签：法医学；肝脏；损伤时间；NF-κB肝脏是人体最大的实质性器官，因其具有体积大、质地脆、不易移动等特点，故较易受伤，且以闭合性损伤多见。
闭合伤有时诊断不易，又常合并多脏器功能损伤，有报道称死亡率可高达10.5%～25.0%[1]。
目前对于肝脏损伤的研究主要集中在免疫性与化学性肝损伤，而对机械性肝损伤的的研究相对较少。
因此，本研究通过建立大鼠肝损伤模型，采用免疫组织化学方法动态观察大鼠肝脏损伤后不同时间NF-κB的表达变化规律，探讨其与损伤时间的相关性并评估其在法医学实践中的应用前景。
1 材料与方法1.1 主要试剂SV-0002两步法免疫组化检测试剂盒；兔抗大鼠NF-κB p65多克隆抗体（BA0610）；聚合HRP标记抗兔IgG二抗，DAB显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2 动物分组健康成年雄性SD大鼠48只，体重（250±30）g，由山西医科大学实验动物中心提供。
随机分为8组，分别为对照组、损伤后0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h组，每组6只。
绞窄性肠梗阻后肝内NF-κB活性变化及其在肝损伤中的作用研究
绞窄性肠梗阻后肝内NF-κB活性变化及其在肝损伤中的作用研究张新伟;王坤;桑敬伟【期刊名称】《中国现代普通外科进展》【年(卷),期】2011(14)6【摘要】Objective* To investigate the roles and mechanisms of nuclear factor-kappa B(NF- k B)and its downstream factors - tumor necrosis factor-Alpha(TNF-a) in acute hepatic injury result from strangulated intestinal obstruction. Method** The total of 96 male SD (Sprague-Dawley) rats were randomly and averagely divided into two groups: strangulated intestinal obstruction model group (model group) and sham-operated group (control group). The two groups further divided into four sub-groups, each has 12 rats. The rats in each sub-groups were killed on 6, 12, 24 and 48 h respectively after the models were completed, then liver tissues and 1 -2 mL of blood were taken out. Hepatic NF- k B activity and TNF- a protein content was measured with im-munohistochemical staining and image analysis in all groups. Levels of serum ALT and AST were determined at the same time. Results Levels of secrum ALT, AST in model groups were gradually increased with time after the models were completed, and reached peak at 24 h; As compared with those in control groups, the levels of secrum ALT, AST were markedly increased in model groups at each time point (P<0.05). Levels of hepatic NF- k B activity in model groups weregradually increased with time after the models were completed, and reached peak in 12 h group; Meanwhile hepatic TNF-a content were markly increased and appeared peak in 24 h group; As compared with those in control groups, except the 6 h group, the NF- k B activity and TNF-a protein content were obviously increased in model groups at each time point (P<0.05). Conclusions Strangulating intestinal obstruction of rats could induce acute liver injury, and the extent of its damage gradually increase with time. Hepatic NF- k B is activated after strangulation intestinal obstruction, and mediates the transcription and expression of TNF-a protein, which can collectively induce subsequent liver injure after strangulation intestinal obstruction.%目的:探讨核因子-k B(NF-k B)及其下游因子肿瘤坏死因子-α (TNF-α)在绞窄性肠梗阻致急性肝损伤中的作用及机制.方法:将96只SD大鼠随机分为绞窄性肠梗阻模型组（模型组）和假手术组（对照组）.各组再随机分为4个亚组,每个亚组12只,分别于造模完成后6h、12h、24 h、48h4个时点处死,留取肝组织,采血1 ～2 mL.用免疫组织化学法测定各组肝内NF-κB活性及TNF-α蛋白含量,并测定血清ALT、AST水平.结果:模型组血清ALT、AST在造模完成后随时间逐渐升高,于24 h达高峰,与对照组相比,各时点均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组肝内NF-κB活性在造模完成后随时间逐渐升高,于12h达高峰；同时TNF-α蛋白含量也随时间逐渐升高,于24 h达高峰.与对照组相比,除6h组外,其余各时点均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:大鼠绞窄性肠梗阻发生后可致急性肝损伤,其损伤程度随时间逐渐加重；NF-κB在绞窄性肠梗阻的肝组织中被激活,并可增加TNF-α的转录表达,共同参与肝组织损伤的发生和发展.【总页数】6页(P429-434)【作者】张新伟;王坤;桑敬伟【作者单位】河南省新乡市第一人民医院普外科河南新乡 453000;河南省新乡市第一人民医院普外科河南新乡 453000;河南省安阳市人民医院骨科河南安阳455000【正文语种】中文【中图分类】R657.3【相关文献】1.NF-κB、TNF-α在腹部火器伤肠管穿透后肝损伤机制中的作用 [J], 刘江伟;李泽信;张永久;吕月涛;许永华;张东;雷涛2.NF-κB和HSP70在失血性休克肝枯否细胞中的活性变化研究 [J], 尹文;刘健;虎晓岷;熊利泽;黄杨;余厚友3.腹部火器伤肠管穿透后NF-κB在肝损伤发病机制中的作用 [J], 李泽信;王霄;薛会朝;刘江伟;张永久;冯德元4.肝内T淋巴细胞在急性肝损伤中的作用机制 [J], 张春盼;张栋5.肝损伤后成熟肝细胞和卵圆细胞在肝再生中的作用 [J], 王亚萍;孔祥平;卓丽;唐小平;高洪波;佟明华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
NF-κB 信号通路保护肝损伤作用研究进展
NF-κB ：几乎存在于所有类型的动物细胞中并参与细胞对诸多刺激的响应，这些刺激
包括应激、细胞因子、自由基、紫外线照射、氧化LDL及细菌或病毒抗原
NF-κB信号通路 核因子-kB(NFkB)抑制物(I-kB) 的激酶
细胞信号转导课程报告
Nuclear factor-kappa B (NFkB) activation signaling pathway.
细胞信号转导课程报告
NF-κ B 信号通路保护肝损 伤作用研究进展
专业： 年级： 姓名： 导师：
细胞信号转导课程报告
肝炎通常是指由多种致病 因素--如病毒、细菌、寄 生虫、化学毒物、药物、 酒精、自身免疫因素等使 肝脏细胞受到破坏，肝脏 的功能受到损害，引起身 体一系列不适症状，以及 肝功能指标的异常。 由病毒造成的肝炎能引起 肝脏细胞肿胀，是世界上 流传广泛，危害很大的传 染病之一
RelA-,IKKb- and IKKg- knockout mice die around embryonicdays 12.5–14.5
Li et al., 1999 Science
细胞信号转导课程报告
NF-kB has an important role in liver physiology and function.
TNFa Induces JNK1-Dependent c-FLIP Degradation
Chang et al., 2006 Cell
细胞信号转导课程报告
因此， NF-kB 通过维持c-FLIP的高水平表达，来促进肝细胞的存活以及肝脏器官的完整性。
TNFa-Induced Apoptosis Depends on Itch Activa-tion by JNK1 and cFLIPL Degradation
NF-κB在急性肝损伤大鼠卵原细胞增殖和分化中的作用及黄芩苷的调节机制的开题报告
NF-κB在急性肝损伤大鼠卵原细胞增殖和分化中的作用及黄芩苷的调节机制的开题报告导言：
急性肝损伤是一种常见的临床疾病，常常引起肝脏功能的损害及血
液生化指标的改变。
卵原细胞是肝损伤后再生的主要来源之一，其增殖
和分化对于肝再生具有重要的作用。
NF-κB是一种重要的转录因子，已被证明在卵原细胞的增殖和分化中起到关键作用。
黄芩苷是一种天然药物，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。
已有研究发现黄芩苷可以
通过调节NF-κB的活性来促进卵原细胞的增殖和分化。
因此，本研究旨
在探讨NF-κB在急性肝损伤大鼠卵原细胞增殖和分化中的作用及黄芩苷
的调节机制。
研究内容：
1.建立大鼠急性肝损伤模型，并观察卵原细胞的增殖和分化情况。
2.检测模型大鼠肝脏组织中NF-κB的活性以及其下游效应因子的表
达水平，并寻找可能的调节机制。
3.应用黄芩苷对急性肝损伤的大鼠进行治疗，并观察其对模型大鼠
肝组织中NF-κB的活性及其下游效应因子的表达水平的影响。
4.应用黄芩苷对卵原细胞进行处理，检测NF-κB的活性及其下游效
应因子的表达水平以探究其调节机制。
5.探究黄芩苷通过调节NF-κB活性促进卵原细胞增殖和分化的分子
机制。
结论：
本研究将为探究NF-κB在肝损伤后卵原细胞增殖和分化中的作用及黄芩苷的调节作用提供新的研究思路。
结果有望为肝再生和急性肝损伤的治疗提供新的靶点和新的治疗药物。
胆道梗阻肝损伤早期NF-KB活性变化的影响及意义
疫 组化 染色测定肝织 Ｎ Ｆ －Ｋ Ｂ ｐ ６ ５ 含量 。Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ测定肝脏组织 中Ｔ Ｎ Ｆ － ０ 【 ｍ Ｒ Ｎ Ａ水平。结果
Ｊ ａ 组Ａ Ｌ Ｔ 水平
明显高于 ｓ ｏ组 （ １ ４ ５ ． ７±３ ３ ． ５ ｐ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ｓ ４ ０ ． ７土７ ． ３ ｐ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ，尸＜ ０ ． Ｏ ０ １ ） ，Ｊ ａ组的 Ｔ Ｂ Ｉ Ｌ和 Ｔ Ｂ Ａ水平较 ｓ Ｏ组升 高，差异 有统 计学意义 （ Ｊ ｐ 均＜０ ． ０ ０ １ ） 。Ｊ ａ组的 Ｎ Ｆ — Ｋ Ｂ ｐ ６ ５亚基 阳性染 色率 （ １ ５ ． ５土４ ． ３ ）明显
ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ（ Ｓ Ｏ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ） ａ ｎ ｄ Ｊ ａ ｕ ｎ ｄ ｉ ｃ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ（ Ｊ ａ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ） ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｔ ｓ ｉ ｎ Ｊ ａ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ
Ｎ Ｆ － Ｋ Ｂ 在胆汁淤积早期 呈高表达状 态，其可能是调控胆 汁淤
积 性 肝损 伤 的 重 要 通 路 ， 能 为 防止 肝 损 伤 提 供 治 疗靶 点 。
［ 关键词］ 胆汁淤积症；梗阻性黄疸；肝损伤；大鼠 ［ 中图分类号］Ｒ ５ ７ ５ ［ 文献标识码］Ａ ［ 文章编号］１ ０ ０ ７ － １ ９ ５ ４ （ ２ ０ １ ３ ） 一 ０ ４ ７ ７ — ０ ３ Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｃ ｈ ｏ ｌ ｅ ｓ ｔ ａ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ｏ ｎ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ － １ ｃ Ｂ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｅ ａ ｒ ｌ ｙ ｓ ｔ ａ ｇ ｅ ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗｉ ｎ ｇ ｏ ｂ －
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SOD及NF-κB在梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤中的作用【摘要】目的：检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，sod)活力及核因子-κb(nuclear factor-κb， nf-κb)在梗阻性黄疸大鼠肝脏中的表达，探讨其在梗阻性黄疸大鼠肝脏损害中的作用。
方法：采用胆总管结扎法构建梗阻性黄疸大鼠模型，检测血清总胆红素(total bilirubin， tb)、直接胆红素(direct bilirubin，db)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase， alt)，以及肝脏组织行he病理切片检查鉴定梗阻性黄疸大鼠模型。
肝脏组织匀浆后检测组织中总sod和cuzn-sod活力，以免疫组织化学方法检测nf-κb在肝脏中的表达。
结果：胆道结扎(bile duct ligation， bdl)组血清tb、db及alt明显增高(p<0.01)；胆道结扎组肝组织中总sod和cuzn-sod活力较假手术组明显减低(p<0.01)。
胆道结扎组nf-κb p65蛋白激活并出现核移位，19 d组较7 d组更加显著。
结论：脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而sod活力的降低及nf-κb的激活，在梗阻性黄疸肝脏过氧化损害中具有重要意义。
【关键词】超氧化物歧化酶；核因子-κb；梗阻性黄疸；肝脏roles of sod and nf-κb in liver injury of obstructive jaundice in rats/xu hai-bo， gong peng.//medical innovation of china，2012，9(12)：003-005【abstract】 objective： to determine the activities of sodand the expression of nuclear factor-κb(nf-κb) in rats with obstructive jaundice induced by bile duct ligation(bdl)， and elucidate the mechanisms of hepatic injury due to obstructive jaundice. methods： the animal model of obstructive jaundice in rats were made to be bile duct ligation. all rats were sacrificed on the 7th day and 19th day after bdl. the blood and liver tissue samples were obtained. total bilirubin(tb)，direct bilirubin(db)， alanine aminotransferase(alt) in serum were detected and liver tissue he pathology section were evaluated. sod enzyme activity was detected by sod kit. the detection of activation of nf-kb was performed by an immunohistochemical method. results： in bdl animals serum，tb， db， and alt significantly increased compared with the sham group (p<0.01). by he pathology section， we observed that in the bdl group， in liver significant damage signs occurred ， and the change on 19th day after bdl was more obvious. the activities of normal sod and cuzn-sod decreased compared to the sham group(p<0.01)， and the decrease on 19th day after bdl was more significant. in bdl group， nf-κbp65 activation and nuclear displacement response， on 19th day after bdl， were more significant. conclusion： oxidative stress probably plays an important role in liver injuryinduced by obstructive jaundice. down-regulated expression of sod and nf-κbp65 activation may be the important molecule mechanism in liver damage of obstructive jaundice.【key words】 superoxide dismutase； nuclear factor-κb；obstructive jaundice； liverfirst-author’s address： second affiliated hospital of soochow university， suzhou 215004， chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.12.002胆道梗阻所致的梗阻性黄疸(obstructive jaundice， oj)是外科常见疾病，可以造成全身多器官功能损害，而肝脏损害常最为显著。
脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而超氧化物歧化酶(sod)为抗过氧化的关键酶[1]。
本实验通过构建梗阻性黄疸大鼠肝脏模型，检测梗黄大鼠肝脏总sod活力与nf-κ b p65蛋白表达，进一步明确sod及nf-κb在梗黄大鼠肝脏损害中的作用。
1 材料与方法1.1 材料健康sprague-dawley(sd)大鼠，120只，雌雄各半，体重200～250 g，由大连医科大学实验动物中心提供，许可证号scxk(辽)2002-0002。
随机分为四组，手术(bdl)7 d组、假手术(sham)7 d组、手术(bdl)19 d组、假手术(sham)19 d组，每组30只。
1.2 胆道梗阻大鼠模型的建立、标本取材采用胆总管结扎法构建胆道梗阻大鼠模型，于建模术后第7 d和19 d处死，无菌收集血液，液氮低温保存肝脏，部分新鲜组织块福尔马林液固定。
1.3 方法所有免疫组化切片均采用奥林巴斯显微照相系统(10×40倍)在完全同样的拍摄条件下摄片，并采用image-pro plus图像分析系统强度标准化校正后，选定aoi(area of interest)，分析测定iod(integrated optical density)累积光密度及area两参数并计算阳性表达平均光密度。
1.3.1 sod活力测定肝组织块在冰生理盐水中漂洗、拭干，称重0.25 g剪碎。
加入预冷的组织块重量9倍的生理盐水，手工匀浆上下转动研磨8 min，使组织匀浆化。
低温低速离心机3000 g左右离心15 min，取上清液，按1：9比例用蒸馏水稀释，制备成l%的肝组织匀浆液。
按照说明书操作方法进行测定。
1.3.2 肝脏组织切片he染色及免疫组化染色取10%福尔马林固定的肝脏组织，常规石蜡包埋、切片。
he染色切片观察记录肝脏组织的形态学变化，免疫组化染色抗nf-κ b p65多克隆抗体一抗稀释浓度为1：200，采用sp三步法染色。
1.4 试剂与仪器总胆红素及直接胆红素检测试剂盒购自浙江伊利康生物技术公司，nf-κbp65小鼠抗大鼠多克隆抗体购自santa-cruz公司，兔抗小鼠二抗购自迈新生物公司，sod测试盒购自南京建成生物研究所。
总胆红素及直接胆红素检测采用beckman lx-20全自动化生化分析仪。
1.5 统计学处理使用pems 3.1软件进行统计分析，计量资料以(x±s)表示，采用t检验，p<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 模型大体及肝脏组织切片he染色病理改变观察术后7 d及19 d，解剖大鼠见胆总管近肝侧呈囊状扩张，管内充满胆汁，肝脏呈黄褐色，弥漫性肿大，其中19 d组大鼠可见大量黄色腹水。
肝脏组织常规he病理切片光镜下见bdl 7 d组可见肝内胆管广泛扩张、肝细胞肿胀、大量空泡变性；汇管区有可见少量纤维组织及新生胆管增生。
bdl 19 d组可见汇管区周围大片肝细胞变性、坏死，炎性细胞浸润，肝小叶较正常组织形态紊乱，且见小胆管、毛细血管以及纤维结缔组织增生向肝小叶内扩展。
2.2 血清生化检测结果 bdl 7 d组和19 d组血清tb、db及alt 水平均明显高于sham组(p<0.01)，bdl 19 d组与bdl 7 d组比较，tb、db及alt有所下降(p<0.05或p<0.01)，但仍处于较高水平。
见表1。
*与sham组比较，p<0.01；△p<0.05，#p<0.01，与bdl 7 d组比较2.3 胆道梗阻大鼠肝脏中总sod及cuzn-sod活力检测结果 bdl7 d组和bdl 19 d组与sham组比较显著减弱(p<0.01)，与bdl 7 d 组相比，bdl 19 d组降低更加明显，两组酶活性比较差异具有统计学意义(p<0.01)。
见表2。
*与sham组比较，p<0.01；△与bdl 7 d组比较，p<0.012.4 每张切片随机选取5个视野，在显微成像系统下(10×40倍)摄片，所有照片使用image-pro plus图像处理软件计阳性表达的平均光密度。
sham组肝组织nf-κbp65蛋白未表达，或表达呈弱阳性，仅见少量细胞胞浆呈淡黄色，未见胞核着色。
bdl 7 d组见胞浆中染色增强呈棕黄色，并可见胞核着色，与sham组相比差异有统计学意义(p<0.01)，19 d组较7 d组着色显著增强(p<0.01)，阳性细胞数增多。
见表3。
*与sham组比较，p<0.01；△与bdl 7 d组比较，p<0.013 讨论在正常的生理状态下，自由基的生成和清除处于稳态。