紫外可见分光光度计的原理与使用方法
752紫外可见分光光度计使用方法解析
752紫外可见分光光度计一、仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。
τ=I/Iolog I/Io=KCLA= KCL从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。
二、仪器的安装、使用、安装1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。
2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。
使用：仪器使用前需开机预热30min。
本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F1SD2 ▽／0％3?／100％4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。
A——吸光度（Absorbance）T——透射比（Trans）C——浓度（conc）F——斜率（Factor）(2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置）5SD键：该键具有2个功能a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。
b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。
6 ▽／0％键：该键具有2个功能a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。
b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。
而按键开始自动减1。
7 ?／100％键；该键具有2个功能a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。
紫外可见分光光度计的原理是怎样的？
紫外可见分光光度计的原理是怎样的？
紫外可见分光光度计具有灵敏度高、准确度高、选择性好、适用浓度范围广等优点，广泛地应用于化工、冶金、地质、医学、食品、制药等部门及环境监测系统。
紫外可见分光光度计的原理：
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同；
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
紫外可见分光光度计的使用方法：
（1）接好线路后，先检查各开关是否在“关”处，光路闸门放在黑点处，再将电源插头插入220V交流电源上，打开电源开关和光源开关，将光路闸门放在红点处。
（2）取出比色皿，将其中一只装空白溶液，其余三只装待测溶液，放在定位盒内，盖上暗箱盖，装溶液前比色皿用蒸馏水洗净；
并用溶液荡洗数次后，再盛至体积，池外应赶紧，若有水滴，应用镜头纸吸干，取用时用手捏住比色皿的毛玻璃面。
（3）用波长调节器调到所需的波长，将空白溶液正对光路，调光量调节器，使检
流计上光点准线对准透光率为100的位置；
拉动拉杆，使待测溶液进入光路，读取微电计标尺上的透光率，测定完毕，及时关闭光路闸门，检查电计的零点位置，保护硒光电池。
（4）紫外可见分光光度计应安放在清洁、干燥、无腐蚀气体和较暗的室内；
仪器使用完毕后应擦拭干净，各开关关闭，紫外可见分光光度计连续使用时间不应超过4h。
标签:
紫外可见分光光度计。
紫外可见分光光度计的使用课件PPT
定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于 物质对紫外可见光的吸收特性进 行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光 度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc） 计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度 计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛 应用于化学、生物学、医学、环境监 测等领域。
每次使用后记录仪器使用 情况，包括测试样品、测 试波长、测试结果等，以 便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并 确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于 稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于 正常工作状态，以及是否有硬件故 障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录 数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处 理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的 影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校 准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素 稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量， 取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干 净导致。解决方法是清洁仪器内部并 重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的 程序，释放计算机内存，或更新数据 处理软件。
UV752紫外可见分光光度计的使用
T：透光率； I：透过光强度； I0：入射光强度；
k：样品的吸光系数；
c：样品浓度；
L：吸收层厚度
二、使用方法
1、预热：打开仪器电源预热 30 分钟。 2、放样品：手持比色皿毛面，用参比（空白）或样品溶液润洗比色皿 2-3 次， 将参比（空白）或样品溶液倒入比色皿约 3/4 高度，用擦镜纸将比色皿外液体擦 干，将透光面擦拭干净，依次放入样品架，盖上样品室盖。置入样品架时，石英 比 色 皿 上 端 的 “Q” 、 玻 璃 比 色 皿 上 端 的 “G” 标 记 方 向 应 一 致 。 （ 紫 外 区 200-340nm 需使用石英比色皿，可见光区 340-1000nm 使用玻璃比色皿） 3、调波长：通过波长旋钮选择到所需波长位置。 4、选择模式：按 MODE 键切换测量值，A（吸光度）、T（透射比）、C（浓度）、 F（斜率）。指示灯亮的位置就表示切换到的位置。 5、调空白：
T 模式下：把黑体拉入光路，按【0%T】键，待显示 0.0，取出黑体； T/A 模式下：把装有参比溶液的比色皿拉入光路中，按【100%T/ABS0】键， 显示 0.0。 6、样品测量：将装有样品溶液的比色皿拉入光路中，读数即为该溶液的测量值。 7、实验结束：打开样品室盖，手持比色皿毛面并将其取出，盖上样品室盖，将 比色皿清洗干净，倒置滤纸上晾干。
UV752 紫外-可见分光光度计使用方法
一、仪器原理
物质对光的吸收具有选择性，在光的照射下产生吸收效应。不同的物质具有
不同的吸收光谱，当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减
弱的程度和物质的浓度呈一定的比例关系。在一定浓度范围内符合朗伯比尔定律：
A=lg1
紫外可见分光光度计的使用
比 值
显 示
组成：光源、单色器、样品池、检测器
1．光源： ①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区
内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用
寿命长，价格低。 钨灯——可见光区 320～2500nm
氢灯或氘灯——紫外光区 195－375nm
U3010（碘钨灯、氘灯）波长范围190-900nm
。
二 分光光度计的使用-光度法
开始
方法正
将样品放入样品池 开始测量
打印数据 开始测量
测量参数设置
在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.
具体操作程序
Method:
1. 2. general: 计测量） Quantitation定量参数设置页面： Measurement测量方式选择Photometry（光度
在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择 “1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。 在concertration中键入标准浓度单位。 3. Instrument
4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称
三 注意事项
1. 2. 开机预热15分钟左右。 测定时应注意：
参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收
池，材料和规格一致。
使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触 窗口。
已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能 加热，以免引起光程长度上的改变。
3.
测量条件的选择：
选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收, 为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波 长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸 光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高.
紫外可见分光光度计的工作原理与应用 光度计工作原理
紫外可见分光光度计的工作原理与应用光度计工作原理产品原理分子的紫外可见吸取光谱是由于分子中的某些基团吸取了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸取光谱。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸取光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸取光谱曲线，可依据吸取光谱上的某些特征波优点的吸光度的高处与低处判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是依据物质的吸取光谱讨论物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。
可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
依据Lambert—Beer定律说明光的吸取与吸取层厚度成正比，比耳定律说明光的吸取与溶液浓度成正比；假相像时考虑吸取层厚度和溶液浓度对光吸取率的影响，即得朗伯—比耳定律。
即A=bc，（A为吸光度，为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度）就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸取光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。
假如没有标样，也可以和现成的标准谱图对比进行比较。
这种方法要求仪器精准，精密度高，且测定条件要相同。
试验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判定化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
产品应用在水和废水监测中的应用，对于一个水系的监测分析和综合评价，一般包括水相（溶液本身）、固相（悬浮物、底质）、生物相（水生生物）。
在水质的常规监测中，紫外可见分光光度法占有较大的比重。
由于水和废水的成分多而杂多变，待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大，在实在分析时必需选择好分析方法。
在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等；在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等；在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。
可见分光光度计原理、工作环境及使用方法
可见分光光度计原理、工作环境及使用方法一、可见分光光度计工作原理可见分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
基本原理：分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A=kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l 为透光液层厚度。
二、可见分光光度计正常工作的环境要求1、避开高温高湿环境。
请不要将仪器安装在高温高湿的环境下。
仪器必须在5℃~35℃度温度、≤85%的湿度条件下安装使用。
2、避免仪器受外界磁场干扰。
请尽量远离发出磁场、电场、高频波的电器装置。
3、远离腐蚀气体。
请不要将仪器安装在空气中氯气、盐酸气体、硫化氢气体、亚硫酸气体等腐蚀性气体超标场所。
4、仪器应放置在稳定的工作台上。
放置仪器的工作台应水平、稳定、不能有振动；仪器的风扇附近应留有足够的空间，使其排风顺畅。
5、不要与其他用电设备共用电源插座。
请为仪器单独设计一个电源插座，不要与其它用电设备共用，电源应具备保护地线。
6、不要将仪器放置在阳光直接照射的地方。
7、避免灰尘多环境。
三、可见分光光度计的使用方法1、在接通电源之前，电表的指针必须位于“0”刻线上，否则应旋动电表上的校正螺丝调节到位。
2、打开比色皿室的箱盖和电源开关，使光电管在无光照射的情况下预热15分钟以上。
3、旋转波长调节器，选择测定所需的单色光波长。
选择适当的灵敏度，一般先将灵敏度旋钮至中间位置，用零点调节器调节电表指针至T值为0%处。
若不能调到，应适当增加灵敏度。
4、放入空白溶液和待测溶液，使空白溶液置于光路中，盖上比色皿室箱盖，使光电管受光，调节光量调节旋钮使电表指针在T值为100%处。
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。
常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。
c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。
色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。
现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
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235
257
313
温度 /℃
25
18.2
13.7
51.3
350 22.9
以0.001mol.L-1HClO4为参比，以1cm的石英比色皿做吸收 池，分别在235、257、313、350波长处测定相应溶液的透 射比。
紫外可见分光光度计的校准(三)
吸收池成套性检验
JJG178-96规定 ：石英吸收池：220nm、蒸馏水； 350nm、 0.001mol.L-1HClO4溶液； 玻璃吸收池：600nm、蒸馏水；
紫外可见分光光度计的特点
• 1 与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少， • 分析书读快。 • 2 灵敏度高 • 3 选择性好 • 4 精密度和准确度较高 • 5 用途广泛
紫外可见分光光度计的组成结构
பைடு நூலகம்
组成结构
光源
单色器
吸收池
检测器
信号显示系统
光源
光源：提供符合要求的入射光。 要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱， 具有足 够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。
光栅单色器 ➢ 一系列等宽、等距离的平行狭缝 ➢ 以光的衍射现象和干涉现象为基础（平面反射光栅和平面凹面光栅）
吸收池
吸收池：又叫比色皿，用于盛放待测溶液和决定透光液层 厚度的器件。
主要有石英吸收池和玻璃吸 收池两种。 在紫外区须采用石英吸收池， 可见区一般用吸收玻璃池。 主要规格0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm
紫外光源---氘灯(185-375 nm)
可见光源---钨灯(320-1000nm)
单色器
单色器：将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长 单色光的光学系统。 单色器主要由狭缝、色散元件 和透镜系统组成。 ➢ 色散元件是棱镜和反射光栅的组合 ➢ 狭缝和透镜系统控制光的方向
棱镜单色器 ➢ 利用不同波长的光在棱镜内折射 率不同将复合光色散为单色光。
相对校正法：
K2Cr2O7
用一套比色皿装待测试样的溶剂，以其中一个为参比，测定其他吸收池 的吸光度。
若吸光度为零，或相等，即可配对。
若不相等，可选最小吸光度值的作参比，测定其它的吸光度，求修正值 。
紫外可见分光光度计的日常维护，保养
对仪器工作环境的要求 稳固的工作台 温度、湿度合适
仪器保养和维护方法 仪器工作电源 光源使用注意事项 单色器使用注意事项 正确使用吸收池
打开电源开关 检验吸收池的成套性 （具体过程在后面内容中操作） 选择工作波长（按设定键，以及增加、减小按钮，进行设定）
选择测量方式（按方式键选择透射比模式与吸光度模式） 润洗比色皿，依次装入参比溶液和测量溶液 参比溶液于光路中，透射比模式下同时调0和100% 在吸光度模式下，测定测量溶液的吸光度
紫外可见分光光度计的常见故障排除
紫外可见分光光度计的常见故障排除
注意事项：手执两侧的毛面，盛放液体高度四分之三。
检测器
检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号。 常用的检测器有光电池、光电管及光电倍增管。
光电池
光电管
光电倍增管
信号显示系统
信号显示器
以检流计或微安表指示仪表 数字显示和自动记录型装置
紫外可见分光光度计的操作步骤
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
目录
• 紫外可见分光光度计的原理 • 紫外可见分光光度计的组成结构 • 紫外可见分光光度计的操作步骤 • 紫外可见分光光度计的校准 • 紫外可见分光光度计的日常维护，保养 • 紫外可见分光光度计的常见故障排除
紫外可见分光光度计的原理
• 它是利用物质的分子或离子对某一波长 • 范围的光吸收作用，对物质进行定性分析， • 定量分析及结构分析，所依据的光谱 • 是分子或离子吸收入射光中特定波长的光 • 而产生的吸收光谱。 • 按照所吸收光的波长区域不同，分为 • 紫外分光光度法和可见光光度法，合称 • 为紫外-可见分光光度法
紫外可见分光光度计的校准（一）
波长准确度的准确检查
同学们根据教师的要求用白纸片遮住光路，改变波长从750nm到 400nm，观察白纸片中颜色的变化。
谱钕滤光片吸收曲线
苯蒸汽的吸收曲线
紫外可见分光光度计的校准（二）
透射比正确度的检验
WK2Cr2O7 0.006000 % 的溶液的透射比
波长 /nm